本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測(cè)，具體涉及一種綠茶品種可視化判別方法。

背景技術(shù)：

1、綠茶是世界上最受歡迎的飲料之一，具有抗氧化、抗炎、保護(hù)心血管和抗肥胖等生理功能。綠茶作為一種“非發(fā)酵”茶，經(jīng)過較少的加工步驟，可以最大程度的保留新鮮茶葉的原始多酚類化合物，由于綠茶品種眾多，質(zhì)量參差不齊，缺乏嚴(yán)格的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)綠茶快速鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)是消費(fèi)者的當(dāng)務(wù)之急。因此，準(zhǔn)確識(shí)別綠茶的品種和等級(jí)具有重要意義。

2、傳統(tǒng)綠茶品種和等級(jí)判別方法多依靠人工感官審評(píng)，該方法簡(jiǎn)單快速，但結(jié)果易受環(huán)境、審評(píng)人員身心狀態(tài)等多方面因素的干擾和影響，并且存在一定的主觀性。目前已發(fā)展了高效液相色譜法(hplc)、液相色譜-質(zhì)譜法(lc-ms)、氣相色譜-質(zhì)譜法(gc-ms)和超高效液相色譜-高分辨率質(zhì)譜法(uplc-hrms)、電子鼻/舌和光譜法等來用于茶葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)，這些大型儀器方法成本高、操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，只能局限于實(shí)驗(yàn)室中，無法被廣大人民群眾接受，難以普及開來。

3、因此，進(jìn)一步建立一種靈敏度高、特異性好、成本低廉并可快速便捷識(shí)別綠茶品種的方法，具有極大現(xiàn)實(shí)意義的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題和不足，提供一種綠茶品種可視化判別方法，納米金擬過氧化物酶(gsh-aunps)分解h2o2產(chǎn)生羥基自由基(·oh)從而氧化tmb，生成藍(lán)色氧化產(chǎn)物(oxtmb)。綠茶中含有的茶多酚等抗氧化活性物質(zhì)，通過對(duì)·oh的清除效果以及對(duì)oxtmb的還原作用而抑制tmb的氧化。由于不同品種綠茶的抗氧化活性不同，導(dǎo)致傳感體系發(fā)生不同的顏色變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同品種綠茶的準(zhǔn)確鑒別；該方法工藝簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保、成本低廉、容易普及、可投入工業(yè)化生產(chǎn)，適合推廣應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

3、一種綠茶品種可視化判別方法，包括以下步驟：

4、將不同品種綠茶樣品的茶多酚提取液與gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系混合均勻，靜置反應(yīng)，采集所得檢測(cè)體系基于gsh-aunps-h2o2-tmb傳感的可視化圖像，利用不同品種的綠茶樣品的顏色響應(yīng)存在色差，根據(jù)待測(cè)綠茶樣品的茶多酚提取液反應(yīng)后所得檢測(cè)體系的顏色，實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)綠茶品種的可視化判別。其中，gsh-aunps表示谷胱甘肽修飾的納米金，tmb為四甲基聯(lián)苯胺。

5、上述方案中，所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系包括緩沖液和gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液，gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液中含有g(shù)sh-aunps、h2o2和tmb溶液。所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液中各溶液的添加次序?yàn)槿芤撼尸F(xiàn)的先后順序。所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液的制備方法包括：將gsh-aunps、h2o2溶液混合反應(yīng)2-3min，最后加入tmb溶液，反應(yīng)8-10min。

6、上述方案中，所述靜置反應(yīng)的時(shí)間為15-18min。

7、上述方案中，所得檢測(cè)體系的ph為3.6-3.8；所得檢測(cè)體系中g(shù)sh-aunps的濃度為(0.79-1.79)×10-5mol/l；所得檢測(cè)體系中h2o2的濃度為0.3-0.35mol/l；所得檢測(cè)體系中tmb的濃度為0.9-1.5mmol/l；所述檢測(cè)體系中綠茶成分的含量以提取液制備過程中引入的綠茶生藥計(jì)為0.09-0.15mg生藥/ml。

8、優(yōu)選的，所得檢測(cè)體系中g(shù)sh-aunps的濃度為1.20×10-5mol/l；所得檢測(cè)體系中h2o2的濃度為0.326mol/l；所得檢測(cè)體系中tmb的濃度為1.0mmol/l。

9、上述方案中，所述綠茶品種的可視化識(shí)別方法中，采用肉眼觀察或拍攝設(shè)備的手段獲取顏色信息，比對(duì)得到不同品種綠茶的可視化識(shí)別圖譜庫。

10、優(yōu)選的，所述拍攝手段進(jìn)一步在led燈照射條件下拍攝。

11、上述方案中，所述的綠茶品種可視化識(shí)別方法具體包括以下步驟：

12、1)獲取不同品種的待測(cè)綠茶樣品的提取液；

13、2)將gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系分別與待測(cè)綠茶提取液混合，靜置反應(yīng)，采集所得檢測(cè)體系基于gsh-aunps-h2o2-tmb傳感的可視化圖像；

14、3)根據(jù)可視化圖像與綠茶品種之間的聯(lián)系，建立基于綠茶品種的可視化識(shí)別模型庫，實(shí)現(xiàn)不同品種綠茶產(chǎn)品的識(shí)別。

15、上述方案中，所述可視化識(shí)別模型庫的建立方法包括：根據(jù)不同品種綠茶樣品所得可視化圖像，提取其rgb值，構(gòu)建不同品種綠茶樣品對(duì)應(yīng)的比色卡。

16、上述方案中，所述比色卡中對(duì)應(yīng)的綠茶樣品的品種呈深藍(lán)綠色到無色的不同的變化。

17、上述方案中，所述gsh-aunps的制備方法包括如下步驟：將谷胱甘肽(gsh)加入到haucl4溶液中，在室溫下避光攪拌均勻，然后加入新鮮配置的冰凍nabh4溶液，繼續(xù)在室溫下避光劇烈攪拌，得到發(fā)紅光的黃色澄清溶液，高速離心后取上清液過微孔濾膜去除不溶性雜質(zhì)后得到谷胱甘肽修飾的納米金溶液。

18、上述方案中，所述谷胱甘肽(gsh)、haucl4、nabh4的摩爾比為1:(0.57～0.77):(0.0010～0.0012)。

19、上述方案中，所得gsh-aunps溶液的濃度為(0.79-1.79)×10-3mol/l。

20、上述方案中，所述離心速率為10000-12000rpm，時(shí)間為15-25min；所得上清液用0.22μm的微孔濾膜過濾。

21、上述方案中，所述提取液采用超聲醇提工藝，采用的提取溶劑為50-70vol％的甲醇水溶液。

22、上述方案中，所述超聲醇提工藝條件包括：綠茶經(jīng)粉碎研磨過50-200目篩得綠茶粉末，按照0.1g:9-11ml的料液比將綠茶粉末和50-70vol％的甲醇水溶液混合，35-40℃超聲提取0.3-0.5小時(shí)，得粗提液，再將所得粗提液在4000-5000rpm條件下離心5-15min，取上清液過0.22μm的微孔濾膜，即得綠茶提取液。

23、上述方案中，所述待測(cè)綠茶的品種包括洞庭碧螺春(dt-blc)、開化龍頂(khld)、黃山毛峰(hs-mf)、信陽毛尖(xy-mj)、都勻毛尖(dy-mj)、六安瓜片(lagp)或竹葉青(zyq)。

24、上述方案中，利用96孔板用于檢測(cè)綠茶品種，具體如下：用移液槍分別精準(zhǔn)量取醋酸鹽緩沖液、gsh-aunps、h2o2、tmb溶液和不同品種的綠茶提取液，并按照前述溶液先后順序加入96孔板中孵育25-30分鐘；后在led燈下，使用數(shù)碼相機(jī)(型號(hào)為尼康d3300)拍攝不同綠茶反應(yīng)后的照片，與此同時(shí)可通過肉眼判斷綠茶品種。

25、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

26、1)本發(fā)明利用gsh-aunps分解h2o2產(chǎn)生羥基自由基(·oh)從而氧化tmb，生成藍(lán)色氧化產(chǎn)物(oxtmb)，綠茶中茶多酚等有效成分對(duì)·oh的清除效果以及對(duì)oxtmb的還原作用而抑制tmb的氧化。由于不同品種綠茶的抗氧化活性不同，導(dǎo)致傳感體系發(fā)生不同的顏色變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同品種綠茶的準(zhǔn)確鑒別。

27、2)本發(fā)明通過谷胱甘肽(gsh)對(duì)aunps進(jìn)行修飾，可以進(jìn)一步提高其生物相容性和穩(wěn)定性。gsh-aunps不僅保留了aunps的基本催化特性，還因?yàn)間sh的存在，增加了對(duì)生物分子的親和性，使得它們?cè)趥鞲兄芯哂懈蟮臐摿ΑM酶活性較現(xiàn)有報(bào)道的一些納米酶以及天然過氧化物酶相比，活性較好。

28、3)本發(fā)明所述識(shí)別方法與傳統(tǒng)基于色譜的檢測(cè)方法相比，具有穩(wěn)定性更高、響應(yīng)更快速、操作更簡(jiǎn)便、裝置更便攜等優(yōu)勢(shì)，可滿足普通群眾的使用需求，具有廣闊的應(yīng)用前景，可投入工業(yè)化生產(chǎn)。