本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，特別涉及一種固相萃取-液相色譜聯(lián)用篩查液體藥物中酸性藥物的方法。

背景技術(shù)：

固液萃取(solidliquidextraction，sle)是一個包括液相和固相的物理萃取過程，萃取過程中當樣品通過固相柱時，分析物吸附在固體填料表面，其它樣品組分則通過柱子分析物可用適當溶劑洗脫下來，從而達到分離和凈化的目的。固相萃取是一種樣品前的處理技術(shù)，在樣品處理中的作用分為兩種：一是凈化，二是富集，這兩種作用可以同時存在。自發(fā)展于上世紀70年代以來，在實驗室中的應用越來越廣泛。固相萃取技術(shù)具有很多優(yōu)點：設(shè)備簡單，體積小，易于攜帶，完全可以做到在現(xiàn)場一邊采樣，一邊進行前處理；更快的樣品制備速度；更高和更穩(wěn)定的回收率，減少樣品轉(zhuǎn)移的損失和破壞；有效濃縮富集痕量物質(zhì)；易于自動化和標準化流程操作。

cn105424829a公開了一種水體的沉積物中多種酸性藥物的檢測方法。所述檢測方法包括：沉積物前處理、超聲提取、使用固相萃取小柱富集目標抗生素、使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測。此方法適用于水體中的幾種非甾體抗炎藥物的分離，不適合于乳狀液類樣品，存在的問題是部分目標產(chǎn)物的分離度不好、部分目標產(chǎn)物峰形不好，整體上出峰時間較晚，需要較長的測試時間。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述問題，本發(fā)明提出了一種固相萃取-液相色譜聯(lián)用篩查液體藥物中酸性藥物的方法。適用于乳狀液樣品，同時檢測多種成分，分離度高，出峰時間早，回收率高。

本發(fā)明的固相萃取-液相色譜聯(lián)用篩查液體藥物中酸性藥物的方法，具體如下：

一種固相萃取-液相色譜聯(lián)用篩查液體藥物中酸性藥物的方法，包括以下步驟：

標準樣品的制備，配制美洛昔康、酮洛芬、吲哚美辛、雙氯酚酸、吉非羅齊單一和混合標準品；

測試樣品的預處理，樣品中加入無水氯化鈣和乙腈/磷酸容液進行提取，分離得到上清液；

固相萃取柱凈化，所述上清液以氧化鋁和硅藻土混合填料的固相萃取柱處理，得到測試樣；

高效液相色譜檢測，檢測所述單一和混合標準品及所述測試樣。

優(yōu)選的，所述樣品為乳狀液。

優(yōu)選的，所述樣品中加入無水氯化鈣的量為0.1-0.3g/ml，所述樣品中加入乙腈/磷酸容液的量為1-2ml/ml，乙腈/磷酸容液的體積比為50:1-150:1。

優(yōu)選的，所述樣品中加入無水氯化鈣的量為0.2g/ml，所述樣品中加入乙腈/磷酸容液的量為1.5ml/ml，乙腈/磷酸容液的體積比為100:1。

優(yōu)選的，所述的氧化鋁和硅藻土混合填料的固相萃取柱中，氧化鋁為中性氧化鋁，硅藻土為弗羅里硅藻土，氧化鋁和硅藻土的重量比為1:2。

優(yōu)選的，所述中性氧化鋁的粒徑為50-150μm，所述弗羅里硅藻土的粒徑為150-250μm。

優(yōu)選的，制備所述氧化鋁和硅藻土混合填料的固相萃取柱時，把氧化鋁和硅藻土按比例混合，加入10倍重量體積的甲醇，在攪拌的同時把氧化鋁和硅藻土的甲醇混合液填裝入玻璃層析柱。

優(yōu)選的，填裝氧化鋁和硅藻土的甲醇混合液之前還有壓填玻璃棉和填裝無水氯化鈣的步驟；在填裝氧化鋁和硅藻土的甲醇混合液之后還有填裝無水氯化鈣的步驟。

優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測測試樣的色譜柱為hypersilodsc18柱，流動相a為去離子水，流動相b為乙腈:5％的四甲基氫氧化銨:水(400-600:10:1000)，并用磷酸調(diào)ph至3.5，流動相a和流動相b的體積比為20:80，流動相流速為1-2ml/min。

優(yōu)選的，所述流動相b為乙腈:5％的四甲基氫氧化銨:水(500:10:1000)，流動相流速為1.5ml/min。

具體實施方式

為詳細說明本發(fā)明之技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所達成目的及功效，以下茲例舉實施例詳予說明。

實施例1

一種固相萃取-液相色譜聯(lián)用篩查液體藥物中酸性藥物的方法，包括以下步驟：

標準樣品的制備，配制美洛昔康、酮洛芬、吲哚美辛、雙氯酚酸、吉非羅齊的單一和混合標準品；通過二極管陣列檢測器全波段掃描，確定各物質(zhì)的檢測波長；測定標準曲線。

測試樣品的預處理，乳狀液樣品中加入無水氯化鈣和乙腈/磷酸容液分離；取5ml乳狀液樣品，加入無水氯化鈣的量0.5g，加入體積比為50:1乙腈/磷酸溶液量為5ml進行提取，離心得到上清液。

自制固相萃取柱，

取0.5g50-150μm的中性氧化鋁，加入1.0g150-250μm的弗羅里硅藻土，加入15ml甲醇，攪拌，備用；

取10×0.8cmi.d.的玻璃層析柱，先壓填玻璃棉，然后填裝無水氯化鈣0.5g，再在攪拌的同時把氧化鋁和硅藻土的甲醇混合液，最會填裝無水氯化鈣0.5g。

固相萃取柱凈化，自制固相萃取柱用5ml甲醇活化2次，上樣，再用甲醇洗脫，洗脫液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1ml，離心，得到上清液，膜過濾，上液相色譜。

高效液相色譜檢測，色譜柱為hypersilodsc18柱，流動相a為去離子水，流動相b為乙腈:5％的四甲基氫氧化銨:水(400:10:1000)，并用磷酸調(diào)ph至3.5，流動相a和流動相b的體積比為20:80，流動相流速為1ml/min。

所述色譜柱的柱溫為30℃。

二極管陣列檢測器全波段掃描。

進樣體積為10μl。

實施例2

與實施例1的不同之處在于，取5ml乳狀液樣品，加入無水氯化鈣的量1.5g，加入體積比為150:1乙腈/磷酸溶液量為10ml進行提取，離心得到上清液。流動相b為乙腈:5％的四甲基氫氧化銨:水(600:10:1000)，流動相流速為2ml/min。

實施例3

與實施例1的不同之處在于，與實施例1的不同之處在于，取5ml乳狀液樣品，加入無水氯化鈣的量1.0g，加入體積比為100:1乙腈/磷酸溶液量為7.5ml進行提取，離心得到上清液。流動相b為乙腈:5％的四甲基氫氧化銨:水(500:10:1000)，流動相流速為1.5ml/min。

實驗例1各個實施例的比較

取美洛昔康、酮洛芬、吲哚美辛、雙氯酚酸、吉非羅齊的市售脂肪乳劑，以實施例1-3的方法進行含量測定，分離結(jié)果如表1，回收率和標準偏差結(jié)果如表2。

各組分的保留時間和拖尾因子比較理想，分離度高，出峰時間早，回收率高。表明本發(fā)明的方法適合同時檢測乳狀液樣品中的這幾種成分。

表1本發(fā)明三個實施例的分離結(jié)果

表2本發(fā)明三個實施例的方法回收率和標準偏差結(jié)果

綜上所述，僅為本發(fā)明之較佳實施例，不以此限定本發(fā)明的保護范圍，凡依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆為本發(fā)明專利涵蓋的范圍之內(nèi)。