本發(fā)明屬于測定水果防腐保鮮劑殘留量技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有國標(biāo)中未見專門針對蔬菜水果中防腐保鮮劑同時(shí)檢測的方法，而且單一成分檢測多為液相或氣相色譜法，檢出限較高，無參考檢測方法。其中腐霉利、百菌清、異菌脲等參數(shù)很少用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：目前單一成分檢測多為液相或氣相色譜法，檢出限較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法包括以下步驟：

步驟一，取新鮮水果，用粉碎機(jī)粉碎混勻，密封冷凍保存；

步驟二，稱取已粉碎的試樣于50ml離心管中，加入含1％乙酸的乙腈溶液，勻漿后，取上清液于固相萃取試劑盒，渦旋振蕩，靜置，離心，所得上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，上機(jī)測定；

步驟三，試樣液經(jīng)lc-ms/ms分析，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

進(jìn)一步，所述步驟一中密封冷凍-20℃保存。

進(jìn)一步，所述步驟二中稱取已粉碎的試樣10.0g于50ml離心管中，加入10ml含1％乙酸的乙腈溶液，勻漿2min后，取上清液于固相萃取試劑盒，渦旋振蕩1min，靜置10min，于10000r/min速率下離心5min。

進(jìn)一步，所述步驟三中l(wèi)c-ms/ms的色譜和質(zhì)譜條件為：

色譜柱：watersacquityuplcbehc18柱；流速：0.2ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μl；流動相：a相:乙腈；b相：0.1％甲酸溶液；洗脫程序：0～2.0min，10％a；2.0～12.0min，5％～70％a；12.0～14.0min，70％～5％a；14.0～18.0min，5％a；

電噴霧離子源；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測；毛細(xì)管電壓：3.0kv(+)；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣溫度：500℃；脫溶劑氣流量：1000l/h；錐孔氣流量：50l/h；碰撞氣流速：2.5l/h。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法測定的水果。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法測定的葡萄。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及積極效果為：本發(fā)明利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(hplc-ms/ms)分析技術(shù)，對水果中咪鮮胺、多菌靈、甲基硫菌靈、噻菌靈、異菌脲、抑霉唑、苯菌靈、腐霉利、百菌清、嘧霉胺等十種防腐保鮮劑殘留量分析方法進(jìn)行研究，采用quechers方法萃取凈化，樣品前處理方法操作簡單，能夠滿足水果中十種保鮮劑殘留同時(shí)檢測的要求。

本發(fā)明建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(uplc-ms/ms)法同時(shí)測定葡萄中咪鮮胺、多菌靈、甲基硫菌靈、噻菌靈、異菌脲、抑霉唑、苯菌靈、腐霉利、百菌清、嘧霉胺等10種防腐保鮮劑殘留方法。樣品用quechers方法處理，經(jīng)acquityuplcbehc18色譜柱分離，乙睛-0.1％甲酸為流動相梯度洗脫，于uplc-ms/ms儀多反應(yīng)監(jiān)測(mrm)模式檢測，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，十種防腐保鮮劑在各自濃度范圍內(nèi)線性良好(r>0.99)，在3個(gè)加標(biāo)水平下，回收率為80.2％-110％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于6.3％。十種防腐保鮮劑的檢出限(s/n>3)為0.11-1.12μg/kg。該方法操作簡便，靈敏度高，準(zhǔn)確可靠，適用于葡萄中十種防腐保鮮劑殘留量的同時(shí)測定。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法流程圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細(xì)的描述。

如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水果防腐保鮮劑殘留量的方法包括以下步驟：

s101：取新鮮水果，用粉碎機(jī)粉碎混勻，密封冷凍(-20℃)保存；

s102：稱取已粉碎的試樣10.0g(精確至0.01g)于50ml離心管中，加入10ml含1％乙酸的乙腈溶液(v/v)，勻漿2min后，取上清液于固相萃取試劑盒，渦旋振蕩1min，靜置10min，于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，上機(jī)測定；

s103：試樣液經(jīng)lc-ms/ms分析，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)對本發(fā)明的應(yīng)用效果作詳細(xì)的描述。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

watersxevotq-ms超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國waters公司)；milli-q超純水器(美國millipore公司)；高速離心機(jī)(德國sigma公司)；渦旋混合器(德國ika公司)。

乙腈(色譜純，德國merck公司)；甲酸(色譜純，美國tedia公司)；安捷倫分散固相萃取試劑盒(dispersivespe15ml,fruitsandveg,en，美國agilent公司)；實(shí)驗(yàn)用水milli-q系統(tǒng)純化水。

十種植物生長調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品：咪鮮胺、多菌靈、甲基硫菌靈、噻菌靈、異菌脲、抑霉唑、苯菌靈、腐霉利、百菌清、嘧霉胺(純度均≥98％，德國dr.ehrenstorfergmbh公司)。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精密稱取十種植物生長調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品各10.0mg，用甲醇溶解并定容至50.00ml。此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.20mg/ml，儲存于棕色玻璃瓶中，-20℃下避光保存。作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

精密吸取十種標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲醇稀釋并定容。其中咪鮮胺、多菌靈、噻菌靈、異菌脲、抑霉唑、嘧霉胺的濃度為500ng/ml，腐霉利、甲基硫菌靈、苯菌靈和百菌清的濃度為5.0μg/ml。-20℃下避光保存。

1.3色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：watersacquityuplcbehc18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流速：0.2ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μl；流動相：a相:乙腈；b相：0.1％甲酸溶液；洗脫程序：0～2.0min，10％a；2.0～12.0min，5％～70％a；12.0～14.0min，70％～5％a；14.0～18.0min，5％a。

電噴霧離子源(esi+)；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(mrm)；毛細(xì)管電壓：3.0kv(+)；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣(n2)溫度：500℃；脫溶劑氣流量：1000l/h；錐孔氣流量：50l/h；碰撞氣(ar)流速：2.5l/h。

在正離子監(jiān)測模式下，分別對毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、碰撞能量和選擇離子等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，選取碰撞后所得豐度較高的兩個(gè)子離子作為特征離子。十種植物保鮮劑的質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

1.4樣品前處理

取新鮮葡萄，用粉碎機(jī)粉碎混勻，密封冷凍(-20℃)保存。

稱取已粉碎的試樣10.0g(精確至0.01g)于50ml離心管中，加入10ml含1％乙酸的乙腈溶液(v/v)，勻漿2min后，取上清液于固相萃取試劑盒，渦旋振蕩1min，靜置10min，于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾后，上機(jī)測定。

試樣液經(jīng)lc-ms/ms分析，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

表110種防腐保鮮劑質(zhì)譜采集參數(shù)

*定量離子

*quantitativeion

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。