本申請(qǐng)是分案申請(qǐng)，其原申請(qǐng)的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮閜ct/us2012/062430，國(guó)際申請(qǐng)日為2012年10月29日，中國(guó)國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?01280065165.6，進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段的進(jìn)入日為2014年06月27日，發(fā)明名稱(chēng)為“抗α-共核蛋白抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途”。電子遞交的序列表的引用與本申請(qǐng)一起提交的ascii文本文件(名稱(chēng)：sequencelistingpct_ascii.txt；大小：5,199字節(jié)；以及創(chuàng)建日期：2012年10月18日)中的電子遞交的序列表的內(nèi)容以引用的方式整體并入本文。背景公開(kāi)領(lǐng)域本公開(kāi)涉及抗α-共核蛋白(synuclein)抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途。確切來(lái)說(shuō)，本公開(kāi)涉及在向測(cè)試受試者施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后評(píng)價(jià)血漿或腦脊髓液(csf)中的α-共核蛋白的水平的方法，所述抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合具有足夠活性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或腦至csf的α-共核蛋白的凈流出。公開(kāi)背景哺乳動(dòng)物腦通過(guò)定位于腦毛細(xì)管和軟蛛網(wǎng)膜下的膜的血腦屏障(bbb)和定位于絨毛膜叢的血液-腦脊髓液(csf)屏障而與血液分開(kāi)。α-共核蛋白在非病理?xiàng)l件下在腦中相對(duì)豐富。它是主要存在于胞質(zhì)溶膠中的天然未折疊蛋白。它通過(guò)增加從突觸前末梢釋放的遞質(zhì)而在突觸傳遞和突觸可塑性中起重要作用。(liu等,emboj23:4506–4516(2004))。α-共核蛋白的突變與早期發(fā)作的帕金森氏病的罕見(jiàn)家族情況相關(guān)，并且α-共核蛋白從它的可溶形式轉(zhuǎn)變成聚集的不可溶形式是神經(jīng)變性病癥(如帕金森氏病、路易體癡呆(dlb)以及若干其它神經(jīng)變性疾患)發(fā)病的重要事件之一。(dawson等,science302:819–822(2003)；bennett等,pharmacolther.105:311–331(2005)；george,jm.,genomebiol.3(1):reviews3002.1–reviews3002.6(2002))。另外，已經(jīng)在帕金森氏病患者的腦脊髓液(csf)和血清中發(fā)現(xiàn)單體α-共核蛋白和低聚體α-共核蛋白，因?yàn)楹苊黠@α-共核蛋白和甚至它的聚集的種類(lèi)可以穿過(guò)血腦屏障。(el-agnaf等,fasebj.20:419–425(2006)；tokuda等,biochembiophysrescommun.349:162–166(2006)；lee等,jneuraltransm.113:1435–1439(2006)；mollenhauer等,expneurol.213:315–325(2008)；el-agnaf等,fasebj.17:1945–1947(2003)；li等,expneurol204:583–588(2007)。對(duì)帕金森氏病的小鼠模型的免疫研究示出抵抗α-共核蛋白的小鼠單克隆抗體可以減少細(xì)胞內(nèi)α-共核蛋白聚集體的積聚(masliah等,neuron,46:857–868(2005)；masliah等,plosone,6(4):e19338(2011)支持了中和神經(jīng)毒性聚集體而不會(huì)干擾單體α-共核蛋白的有益功能的抗體可以是有用的治療劑的想法。然而，鑒于它們的非人來(lái)源，基于鼠的抗體在人中的治療用途和診斷用途會(huì)通過(guò)人抗小鼠抗體(hama)反應(yīng)受阻。因此，存在對(duì)開(kāi)發(fā)一種用于評(píng)價(jià)患者腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法的需要。簡(jiǎn)述一個(gè)實(shí)施方案涉及一種診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括：(a)在向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后，在指定時(shí)間間隔下測(cè)定從測(cè)試受試者獲得的血漿樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。還公開(kāi)了一種診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括：(a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者向測(cè)試受試者外周施用抗體并且在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從受試者獲得血漿樣品；(c)測(cè)定血漿樣品中的α-共核蛋白的水平；(d)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。進(jìn)一步公開(kāi)了一種診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括：(a)向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；(b)在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從測(cè)試受試者獲得血漿樣品，并且遞交樣品用于確定α-共核蛋白的水平；(c)將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。進(jìn)一步公開(kāi)了如本文所描述的方法，其進(jìn)一步包括將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之前從測(cè)試受試者獲得的血漿樣品比較。在具體實(shí)施方案中，以上描述的方法中的參比標(biāo)準(zhǔn)包括在一個(gè)或多個(gè)對(duì)照受試者中的α-共核蛋白的測(cè)量的水平，其中對(duì)照受試者包括正常的健康個(gè)體和具有各種嚴(yán)重性的共核蛋白病的個(gè)體。進(jìn)一步公開(kāi)了一種追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出；并且其中受試者的血漿中的α-共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關(guān)。在具體實(shí)施方案中，以上描述的方法進(jìn)一步包括在額外的外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿中的α-共核蛋白的水平，從而繪制受試者的腦中的α-共核蛋白水平隨時(shí)間變化的曲線圖。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中方法涉及通過(guò)在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定的時(shí)間間隔下測(cè)定從測(cè)試受試者獲得的csf樣品中的α-共核蛋白的水平來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出，并且其中csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其進(jìn)一步包括將csf樣品中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之前從測(cè)試受試者獲得的csf樣品比較。一些實(shí)施方案包括追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平的方法，所述方法包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的csf樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出；并且其中受試者的csf中的α-共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關(guān)。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地與包含vh和vl的參比抗體相同的α-共核蛋白表位結(jié)合，其中vh包含seqidno:2并且vl包含seqidno:3。在一些實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制包含vh和vl的參比抗體與α-共核蛋白結(jié)合，其中vh包含seqidno:2并且vl包含seqidno:3。進(jìn)一步提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，其中vh包含seqidno:4的互補(bǔ)決定區(qū)-1(vhcdr1)氨基酸序列。還提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vh包含seqidno:5的互補(bǔ)決定區(qū)-2(vhcdr2)氨基酸序列。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vh包含seqidno:6的互補(bǔ)決定區(qū)-3(vhcdr3)氨基酸序列。還提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vl包含seqidno:7的互補(bǔ)決定區(qū)-1(vlcdr1)氨基酸序列。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vl包含seqidno:8的互補(bǔ)決定區(qū)-2(vlcdr2)氨基酸序列。還公開(kāi)了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vl包含seqidno:9的互補(bǔ)決定區(qū)-3(vlcdr3)氨基酸序列。進(jìn)一步提供了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vh包含seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3氨基酸序列。還公開(kāi)了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vl包含seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3氨基酸序列。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含vh和vl，其中vh包含seqidno:5、seqidno:6和seqidno:7的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3氨基酸序列，并且vl包含seqidno:7、seqidno:8和seqidno:9的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3氨基酸序列。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含seqidno:2的vh氨基酸序列和seqidno:3的vl氨基酸序列。還公開(kāi)了如本文所描述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈fv片段(scfv)、f(ab')片段、f(ab)片段或f(ab')2片段。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中施用是通過(guò)靜脈內(nèi)注射抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是人的。其它實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中指定的時(shí)間間隔是小于一周、或小于或等于24小時(shí)、或小于或等于3小時(shí)。某些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中共核蛋白疾病選自由以下組成的組：帕金森氏病(pd)、帕金森氏病癡呆(pdd)、路易體癡呆(dlb)、阿爾茨海默氏病的路易體變體(lbvad)、多系統(tǒng)萎縮癥(msa)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、具有1型腦鐵積聚的神經(jīng)變性(nbia-i)、阿爾茨海默氏病、皮克病、小兒泛發(fā)型神經(jīng)軸索營(yíng)養(yǎng)不良(哈-斯二氏疾病)、肌萎縮性側(cè)索硬化、創(chuàng)傷性腦損傷以及唐氏綜合癥。附圖簡(jiǎn)述圖1(a至b)：當(dāng)在過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中12f4抗體施用時(shí)的劑量依賴(lài)型人α-共核蛋白血漿脈沖。圖2：人α-共核蛋白血漿脈沖的時(shí)程和血漿12f4抗體濃度。圖3(a至c)：急性高劑量12f4抗體治療過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠減少了腦人α-共核蛋白水平。圖4(a至c)：人α-共核蛋白血漿水平顯著地反映了12f4抗體注射后的腦α-共核蛋白水平。圖5(a至c)：通過(guò)elisa確定了血漿人α-共核蛋白(a)和嵌合12f4抗體水平(b)。(c)在用嵌合12f4抗體慢性治療過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠六個(gè)月之后，在血漿α-共核蛋白水平與腦α-共核蛋白水平之間存在顯著相關(guān)性。圖6：當(dāng)在食蟹猴中12f4施用時(shí)，α-共核蛋白腦脊髓液(csf)脈沖和csf/血清124f比率在0.1％附近。圖7：轉(zhuǎn)基因α-共核蛋白小鼠中的體內(nèi)微量透析示出當(dāng)12f4施用時(shí)腦組織間隙流體(isf)α-共核蛋白下降。詳述i.定義應(yīng)該注意術(shù)語(yǔ)“一個(gè)(a)”或“一種(an)”實(shí)體是指一個(gè)或多個(gè)所述實(shí)體；例如“一種抗α-共核蛋白抗體”理解為代表與α-共核蛋白特異性結(jié)合的一種或多種抗體。因此，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”(或“一種”)、“一個(gè)或多個(gè)”以及“至少一個(gè)”可以在本文中互換使用。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“共核蛋白疾病(synucleinopathicdiseases)”或“共核蛋白病(synucleinopathies)”是共有主要由神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的選擇性易損群體中的不可溶α-共核蛋白蛋白質(zhì)的聚集體組成的共同病理?yè)p傷的神經(jīng)變性病癥的不同組。這些病癥包括帕金森氏病(pd)、帕金森氏病癡呆(pdd)、路易體癡呆(dlb)、阿爾茨海默氏病的路易體變體(lbvad)、多系統(tǒng)萎縮癥(msa)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、具有1型腦鐵積聚的神經(jīng)變性(nbia-i)、阿爾茨海默氏病、皮克病、小兒泛發(fā)型神經(jīng)軸索營(yíng)養(yǎng)不良(哈-斯二氏疾病)、肌萎縮性側(cè)索硬化、創(chuàng)傷性腦損傷以及唐氏綜合癥。臨床上，取決于損傷的分布，它們的特征為運(yùn)動(dòng)、認(rèn)知、行為以及自主功能的慢性衰退和漸進(jìn)性衰退。除非另外說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“病癥”、“疾病(disease)”和“疾患(illness)”在本文中互換使用。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合分子”或“抗原結(jié)合分子”是指特異性結(jié)合抗原決定簇的分子這個(gè)它最廣泛的意思?？乖Y(jié)合分子的非限制性實(shí)例是保留抗原特異性結(jié)合的抗體及其片段以及與α-共核蛋白結(jié)合的其它非抗體分子，所述其它非抗體分子包括但不限于激素、受體、配體、主要組織相容性復(fù)合體(mhc)分子、陪伴分子如熱休克蛋白(hsp)以及細(xì)胞-細(xì)胞粘合分子如鈣粘蛋白、整合素、c型凝集素和免疫球蛋白(ig)超家族的成員。因此，僅為了清楚起見(jiàn)并且不限制本公開(kāi)的范圍，針對(duì)代表用于開(kāi)發(fā)治療劑和診斷劑的結(jié)合分子的抗體和抗體樣分子討論大多數(shù)以下實(shí)施方案。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含抗體分子的至少一個(gè)重鏈或輕鏈cdr。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含來(lái)自一個(gè)或多個(gè)抗體分子的至少兩個(gè)cdr。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含來(lái)自一個(gè)或多個(gè)抗體分子的至少三個(gè)cdr。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含來(lái)自一個(gè)或多個(gè)抗體分子的至少四個(gè)cdr。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含來(lái)自一個(gè)或多個(gè)抗體分子的至少五個(gè)cdr。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所公開(kāi)的結(jié)合分子包含來(lái)自一個(gè)或多個(gè)抗體分子的至少六個(gè)cdr。本文公開(kāi)了一種診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括向受試者施用抗α-共核蛋白結(jié)合分子，例如抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。除非確切是指全尺寸的抗體如天然存在的抗體，否則術(shù)語(yǔ)“抗α-共核蛋白抗體”涵蓋全尺寸的抗體以及所述抗體的抗原結(jié)合片段、變體、類(lèi)似物或衍生物，例如天然存在的抗體或以類(lèi)似于抗體分子的方式結(jié)合抗原的免疫球蛋白分子或工程化的抗體分子或片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”和“免疫球蛋白”在本文中互換使用?？贵w或免疫球蛋白至少包含重鏈的可變結(jié)構(gòu)域，并且通常至少包含重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域。脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中的基本免疫球蛋白結(jié)構(gòu)是相對(duì)好理解的。參見(jiàn)，例如harlow等(1988)antibodies:alaboratorymanual(第2版；coldspringharborlaboratorypress)。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“免疫球蛋白”包括可以被生物化學(xué)區(qū)別的各種廣泛類(lèi)別的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)重鏈被分類(lèi)為γ(gamma)、μ(mu)、α(alpha)、δ(delta)或ε(epsilon)(γ、μ、α、δ、ε)，在它們之中具有一些子類(lèi)別(例如，γ1至γ4)。這個(gè)鏈的本質(zhì)是將抗體的“類(lèi)別”分別確定為igg、igm、iga、igg或ige。免疫球蛋白子類(lèi)別(同種型)(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1等)被很好地表征并且已知給予功能特化。鑒于本公開(kāi)，熟練的技術(shù)人員易于辨別出這些類(lèi)別和同種型各自的修改版本，并且因此處于本公開(kāi)的范圍內(nèi)。所有免疫球蛋白類(lèi)別清楚地處于本公開(kāi)的范圍內(nèi)。以下討論將總體上涉及免疫球蛋白分子的igg類(lèi)別。針對(duì)igg，標(biāo)準(zhǔn)免疫球蛋白分子包含分子量大約23,000道爾頓的兩個(gè)相同輕鏈多肽和分子量53,000至70,000的兩個(gè)相同重鏈多肽。這四條鏈通常由二硫鍵以“y”構(gòu)型連接在一起，其中輕鏈從“y”的開(kāi)口處開(kāi)始并且一直通過(guò)可變區(qū)與重鏈括在一起。輕鏈被分類(lèi)為κ(kappa)或λ(lambda)(κ、λ)?？梢杂忙驶颚溯p鏈結(jié)合每種重鏈類(lèi)別。通常，輕鏈和重鏈彼此共價(jià)鍵合，并且當(dāng)通過(guò)雜交瘤、b細(xì)胞或基因工程宿主細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生免疫球蛋白時(shí)，這兩條重鏈的“尾巴”部分由共價(jià)二硫鍵或非共價(jià)鍵彼此鍵合。在重鏈中，氨基酸序列從y構(gòu)型的叉端處的n-末端到每條鏈的底部處的c-末端。輕鏈和重鏈均分成結(jié)構(gòu)和功能同源性的區(qū)。就其功能使用術(shù)語(yǔ)“恒定的”和“可變的”。在這點(diǎn)上，將領(lǐng)會(huì)輕鏈部分(vl或vk)和重鏈部分(vh)的可變結(jié)構(gòu)域決定抗原識(shí)別和特異性。相反，輕鏈(cl)和重鏈(ch1、ch2或ch3)的恒定結(jié)構(gòu)域給予重要的生物性質(zhì)，如分泌、經(jīng)胎盤(pán)移動(dòng)、fc受體結(jié)合、補(bǔ)體結(jié)合以及類(lèi)似性質(zhì)。按照慣例，恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的編號(hào)當(dāng)它們變得離抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)或氨基末端更遠(yuǎn)時(shí)增加。n-末端部分是可變區(qū)并且在c-末端部分處是恒定區(qū)；ch3結(jié)構(gòu)域和cl結(jié)構(gòu)域?qū)嶋H上分別包含重鏈和輕鏈的羧基-末端。如上所指明，可變區(qū)允許抗體選擇性識(shí)別和特異性結(jié)合抗原上的表位。那就是說(shuō)，抗體的vl結(jié)構(gòu)域和vh結(jié)構(gòu)域或這些可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的子集組合以形成限定三維抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變區(qū)。這個(gè)四級(jí)抗體結(jié)構(gòu)形成了存在于y的每條臂的末端處的抗原結(jié)合位點(diǎn)。更確切來(lái)說(shuō)，通過(guò)每條vh和vl鏈上的三個(gè)cdr來(lái)限定抗原結(jié)合位點(diǎn)。在一些例子中，例如，源自駱駝科動(dòng)物種類(lèi)或基于駱駝科動(dòng)物免疫球蛋白的工程化的某些免疫球蛋白分子(完整的免疫球蛋白分子)可以?xún)H由重鏈組成，不具有輕鏈。參見(jiàn)，例如hamers-casterman等,nature363:446-448(1993)。在天然存在的抗體中，存在于每個(gè)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的六個(gè)“互補(bǔ)決定區(qū)”或“cdr”是短的、非鄰接的氨基酸序列，當(dāng)抗體在水性環(huán)境中呈現(xiàn)它的三維構(gòu)型時(shí)，所述氨基酸序列特異性地放置以形成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域中的其余氨基酸(稱(chēng)為“構(gòu)架”區(qū))示出較小的分子間可變性。構(gòu)架區(qū)大部分采用β-片層構(gòu)象，并且cdr形成連接β-片層結(jié)構(gòu)并且在一些情況下形成β-片層結(jié)構(gòu)的部分的環(huán)。因此，構(gòu)架區(qū)起到形成支架的作用，所述支架提供用于通過(guò)鏈間非共價(jià)的相互作用將cdr放置在正確的方向上。通過(guò)所放置的cdr形成的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域限定了與免疫反應(yīng)性抗原上的表位互補(bǔ)的表面。這個(gè)互補(bǔ)表面促進(jìn)了抗體與它的同源表位的非共價(jià)結(jié)合。分別包含cdr和構(gòu)架區(qū)的氨基酸可以被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地鑒定出任何給定的重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，因?yàn)樗鼈円呀?jīng)被精確地限定(參見(jiàn)以下)。在其中本領(lǐng)域內(nèi)使用和/或接受的術(shù)語(yǔ)存在兩種或更多種定義的情況下，如本文所使用的術(shù)語(yǔ)的定義旨在包括所有此類(lèi)意義，除非明確地相反說(shuō)明。一個(gè)具體實(shí)例是使用術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”(“cdr”)來(lái)描述在重鏈多肽和輕鏈多肽的可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非鄰接抗原結(jié)合位點(diǎn)。這個(gè)具體區(qū)已經(jīng)被kabat等(1983)u.s.dept.ofhealthandhumanservices,“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”和被chothia和lesk,j.mol.biol.196:901-917(1987)所描述，這些參考文獻(xiàn)以引用的方式并入本文，其中定義包括當(dāng)針對(duì)彼此比較時(shí)的氨基酸殘基的重疊或子集。不過(guò)，應(yīng)用任一定義來(lái)指抗體或其變體的cdr旨在處于如本文所定義和使用的術(shù)語(yǔ)的范圍內(nèi)。如通過(guò)每個(gè)以上引用的參考文獻(xiàn)所定義的涵蓋cdr的適當(dāng)氨基酸殘基作為比較被列舉在以下表1中。涵蓋具體cdr的準(zhǔn)確殘基編號(hào)將取決于cdr的序列和大小而改變。本領(lǐng)域技術(shù)人員通?？梢源_定什么殘基包含給定抗體的可變區(qū)氨基酸序列的具體cdr。表1cdr定義1kabatchothiavhcdr131-3526-32vhcdr250-6552-58vhcdr395-10295-102vlcdr124-3426-32vlcdr250-5650-52vlcdr389-9791-961表1中的所有cdr定義的編號(hào)根據(jù)由kabat等列舉的編號(hào)慣例(參見(jiàn)以下)。kabat等還定義了適用于任何抗體的用于可變結(jié)構(gòu)域序列的編號(hào)系統(tǒng)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以明確地對(duì)任何可變結(jié)構(gòu)域序列指定這種“kabat編號(hào)”系統(tǒng)，而不依賴(lài)于超過(guò)序列本身的任何實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。如本文所使用，“kabat編號(hào)”是指由kabat等(1983)u.s.dept.ofhealthandhumanservices,“sequenceofproteinsofimmunologicalinterest”所列舉的編號(hào)系統(tǒng)。除非另外指定，否則提到在本公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物中編號(hào)具體氨基酸殘基位置是根據(jù)kabat編號(hào)系統(tǒng)。本公開(kāi)的抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物包括，但不限于：多克隆的、單克隆的、多特異性的、人的、人源化的、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、表位結(jié)合片段(例如fab、fab'和f(ab')2、fd、fv、單鏈fv(scfv)、二硫鍵連接的fv(sdfv)、包含vl或vh結(jié)構(gòu)域的片段、由fab表達(dá)文庫(kù)產(chǎn)生的片段以及抗獨(dú)特型(抗id)抗體。scfv分子是本領(lǐng)域已知的并且例如被描述在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,892,019中。本公開(kāi)的免疫球蛋白或抗體分子可以具有任何類(lèi)型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、類(lèi)別(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2等)或免疫球蛋白分子的子類(lèi)別。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“重鏈部分”包括衍生自免疫球蛋白重鏈的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，包含重鏈部分的多肽包含以下至少一種：vh結(jié)構(gòu)域、ch1結(jié)構(gòu)域、鉸鏈結(jié)構(gòu)域(例如，上、中和/或下鉸鏈區(qū))、ch2結(jié)構(gòu)域、ch3結(jié)構(gòu)域或其變體或片段。例如，在本公開(kāi)中使用的結(jié)合多肽可以包括：包含ch1結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；包含ch1結(jié)構(gòu)域、至少一部分的鉸鏈結(jié)構(gòu)域以及ch2結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；包含ch1結(jié)構(gòu)域和ch3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；包含ch1結(jié)構(gòu)域、至少一部分的鉸鏈結(jié)構(gòu)域以及ch3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈或包含ch1結(jié)構(gòu)域、至少一部分的鉸鏈結(jié)構(gòu)域、ch2結(jié)構(gòu)域以及ch3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)的多肽包括包含ch3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈。此外，在本公開(kāi)中使用的結(jié)合多肽可以缺乏至少一部分的ch2結(jié)構(gòu)域(例如，所有或部分的ch2結(jié)構(gòu)域)。如上所列舉，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解這些結(jié)構(gòu)域(例如，重鏈部分)可以被修飾以使得它們的氨基酸序列與天然存在的免疫球蛋白分子不同。在某些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)了抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，多體的一條多肽鏈的重鏈部分是與多體的第二多肽鏈上的那些重鏈部分相同的?？蛇x地，本公開(kāi)的包含重鏈部分的單體是不相同的。例如，每個(gè)單體可以包括形成例如雙特異性抗體的不同靶結(jié)合位點(diǎn)。在本文所公開(kāi)的方法中使用的結(jié)合分子的重鏈部分可以衍生自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重鏈部分可以包括衍生自igg1分子的ch1結(jié)構(gòu)域和衍生自igg3分子的鉸鏈區(qū)。在另一個(gè)實(shí)例中，重鏈部分可以包括部分衍生自igg1分子和部分衍生自igg3分子的鉸鏈區(qū)。在另一個(gè)實(shí)例中，重鏈部分可以包括部分衍生自igg1分子和部分衍生自igg4分子的嵌合鉸鏈。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“輕鏈部分”包括衍生自免疫球蛋白輕鏈(例如，κ或λ輕鏈)的氨基酸序列。優(yōu)選地，輕鏈部分包括至少一個(gè)vl或cl結(jié)構(gòu)域。如先前所指明，各種免疫球蛋白類(lèi)別的恒定區(qū)的亞單位結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是眾所周知的。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“vh結(jié)構(gòu)域”包括免疫球蛋白重鏈的氨基末端的可變結(jié)構(gòu)域，并且術(shù)語(yǔ)“ch1結(jié)構(gòu)域”包括免疫球蛋白重鏈的第一(最氨基末端)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域。ch1結(jié)構(gòu)域與vh結(jié)構(gòu)域相鄰并且是免疫球蛋白重鏈分子的鉸鏈區(qū)的氨基末端。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“ch2結(jié)構(gòu)域”包括使用常規(guī)編號(hào)方案(殘基244至殘基360，kabat編號(hào)系統(tǒng)；并且殘基231至殘基340，eu編號(hào)系統(tǒng)；參見(jiàn)前面引用的kabatea等)例如從抗體的約殘基244延伸至殘基360的重鏈分子的部分。ch2結(jié)構(gòu)域的獨(dú)特在于它不與另一個(gè)結(jié)構(gòu)域緊密配對(duì)。而兩條n-連接的支鏈碳水化合物鏈介于完整的天然igg分子的兩個(gè)ch2結(jié)構(gòu)域之間。還被充分記載的是ch3結(jié)構(gòu)域從ch2結(jié)構(gòu)域延伸至igg分子的c-末端并且包含大約108個(gè)殘基。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“鉸鏈區(qū)”包括使ch1結(jié)構(gòu)域與ch2結(jié)構(gòu)域連接的重鏈分子的部分。這個(gè)鉸鏈區(qū)包含大約25個(gè)殘基并且是柔性的，從而允許兩個(gè)n-末端抗原結(jié)合區(qū)獨(dú)立地移動(dòng)。鉸鏈區(qū)可以再分成三個(gè)相異的結(jié)構(gòu)域：上、中和下鉸鏈結(jié)構(gòu)域(roux等,j.immunol.161:4083(1998))。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“二硫鍵”包括在兩個(gè)硫原子之間形成的共價(jià)鍵。氨基酸半胱氨酸包含可以形成二硫鍵或與第二個(gè)巰基橋聯(lián)的巰基。在大多數(shù)天然存在的igg分子中，ch1區(qū)和cl區(qū)由二硫鍵連接并且兩條重鏈在使用kabat編號(hào)系統(tǒng)(位置226或229，eu編號(hào)系統(tǒng))的對(duì)應(yīng)于239和242的位置上由兩個(gè)二硫鍵連接。本文所公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以它們識(shí)別或特異性結(jié)合抗原(例如，本文所公開(kāi)的靶多肽(例如，α-共核蛋白))的一個(gè)或多個(gè)表位或一個(gè)或多個(gè)部分的方式描述或規(guī)定。特異性地與抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域相互作用的靶多肽的部分是“表位”或“抗原決定簇”。靶多肽可以包含單個(gè)表位，但是通常包含至少兩個(gè)表位，并且可以取決于抗原的大小、構(gòu)象和類(lèi)型包括任何數(shù)目的表位。此外，應(yīng)該注意靶多肽上的“表位”可以是非多肽元素或可以包括非多肽元素，例如表位可以包括碳水化合物側(cè)鏈。針對(duì)抗體的肽或多肽表位的最小大小認(rèn)為是約四個(gè)氨基酸至五個(gè)氨基酸。肽或多肽表位優(yōu)選地包含至少七個(gè)、更優(yōu)選地至少九個(gè)并且最優(yōu)選地在至少約15個(gè)至約30個(gè)之間的氨基酸。因?yàn)閏dr可以識(shí)別在它的三級(jí)形式下的抗原肽或抗原多肽，所以包含表位的氨基酸不需要是鄰接的，并且在一些情況下可以甚至不在相同的肽鏈上。被本公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體識(shí)別的肽或多肽表位可以包含至少4個(gè)、至少5個(gè)、至少6個(gè)、至少7個(gè)、更優(yōu)選地至少8個(gè)、至少9個(gè)、至少10個(gè)、至少15個(gè)、至少20個(gè)、至少25個(gè)、或在約15個(gè)至約30個(gè)之間的α-共核蛋白的鄰接或非鄰接氨基酸的序列。“特異性結(jié)合”通常意指抗體經(jīng)由它的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與表位結(jié)合，并且結(jié)合需要在抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與表位之間有一些互補(bǔ)。根據(jù)這個(gè)定義，當(dāng)抗體經(jīng)由它的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域比它將與隨機(jī)、不相關(guān)的表位結(jié)合更容易地與所述表位結(jié)合時(shí)，所述抗體稱(chēng)為與表位“特異性結(jié)合”。本文使用術(shù)語(yǔ)“特異性”來(lái)限定相對(duì)親和性，通過(guò)所述相對(duì)親和性某一抗體與某一表位結(jié)合。例如，抗體“a”可以被認(rèn)為具有比抗體“b”更高的針對(duì)給定表位的特異性，或抗體“a”可以稱(chēng)為具有比它針對(duì)相關(guān)表位“d”更高的特異性與表位“c”結(jié)合。“優(yōu)選結(jié)合”意指抗體比它將與相關(guān)的、相似的、同源的或類(lèi)似的表位結(jié)合更容易地與表位特異性結(jié)合。因此，與給定表位“優(yōu)選結(jié)合”的抗體將更可能與所述表位結(jié)合而不是與相關(guān)表位結(jié)合，即使這樣一種抗體可以與相關(guān)表位交叉反應(yīng)。通過(guò)非限制性實(shí)例，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的kd小的解離常數(shù)(kd)結(jié)合所述第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一表位。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的kd小至少一個(gè)數(shù)量級(jí)的親和性結(jié)合第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一抗原。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的kd小至少兩個(gè)數(shù)量級(jí)的親和性結(jié)合第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一表位。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的k(off)小的解離速率(offrate)(k(off))結(jié)合第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一表位。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的k(off)小至少一個(gè)數(shù)量級(jí)的親和性結(jié)合第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一表位。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如果抗體以比針對(duì)第二表位的抗體的k(off)小至少兩個(gè)數(shù)量級(jí)的親和性結(jié)合第一表位，則抗體可以被認(rèn)為優(yōu)選結(jié)合第一表位。本文所公開(kāi)的抗體或抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以據(jù)說(shuō)以小于或等于5×10-2秒-1、10-2秒-1、5×10-3秒-1或10-3秒-1的解離速率(k(off))結(jié)合本文所公開(kāi)的靶多肽(例如，人α-共核蛋白)或其片段或變體。更優(yōu)選地，本公開(kāi)的抗體可以據(jù)說(shuō)以小于或等于5×10-4秒-1、10-4秒-1、5×10-5秒-1或10-5秒-1、5×10-6秒-1、10-6秒-1、5×10-7秒-1或10-7秒-1的解離速率(k(off))結(jié)合本文所公開(kāi)的靶多肽(例如，人α-共核蛋白)或其片段或變體。本文所公開(kāi)的抗體或抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以據(jù)說(shuō)以大于或等于103m-1秒-1、5×103m-1秒-1、104m-1秒-1或5×104m-1秒-1的締合速率(onrate)(k(on))結(jié)合本文所公開(kāi)的靶多肽(例如，人α-共核蛋白)或其片段或變體。更優(yōu)選地，本公開(kāi)的抗體可以據(jù)說(shuō)以大于或等于105m-1秒-1、5×105m-1秒-1、106m-1秒-1或5×106m-1秒-1或107m-1秒-1的締合速率(k(on))結(jié)合本文所公開(kāi)的靶多肽(例如，人α-共核蛋白)或其片段或變體。如果抗體與所述表位優(yōu)選結(jié)合達(dá)到在某種程度上阻斷參比抗體與表位結(jié)合的程度，抗體被稱(chēng)為競(jìng)爭(zhēng)性地抑制參比抗體與給定表位結(jié)合。可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法(例如，競(jìng)爭(zhēng)elisa測(cè)定)來(lái)確定競(jìng)爭(zhēng)性抑制?？贵w可以據(jù)說(shuō)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％的參比抗體與給定表位的結(jié)合。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“親和性”是指單獨(dú)表位與免疫球蛋白分子的cdr結(jié)合的強(qiáng)度的量度。參見(jiàn)，例如harlow等(1988)antibodies:alaboratorymanual(coldspringharborlaboratorypress，第2版)第27至28頁(yè)。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“足夠親和性”是指抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段與α-共核蛋白或其表位結(jié)合以改變從腦至血液或從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出的足夠強(qiáng)度。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“凈流出”是指從腦至血液或腦至csf的α-共核蛋白的總流量。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“親和力(avidity)”是指一個(gè)群體的免疫球蛋白與抗原之間的復(fù)合體的總體穩(wěn)定性，即，免疫球蛋白與抗原的混合物的功能組合強(qiáng)度。參見(jiàn)，例如harlow的第29至34頁(yè)處。親和力與具有特異性表位的群體中的單獨(dú)免疫球蛋白分子的親和性并且還有免疫球蛋白和抗原的化合價(jià)相關(guān)。例如，二價(jià)單克隆抗體與具有高度重復(fù)的表位結(jié)構(gòu)的抗原(如聚合體)之間的相互作用將是高親和力的一種相互作用。本文所公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物還可以它們的交叉反應(yīng)性的方式描述或規(guī)定。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“交叉反應(yīng)性”是指對(duì)一種抗原有特異性的抗體與第二抗原反應(yīng)的能力；為兩種不同抗原物質(zhì)之間的相關(guān)性量度。因此，如果抗體與除了誘導(dǎo)它形成的一種表位以外的表位結(jié)合，則抗體是交叉反應(yīng)的。交叉反應(yīng)表位通常包含許多與誘導(dǎo)表位相同的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)特征，并且在一些情況下可以實(shí)際上比原物更好地適合。例如，某些抗體具有一定程度的交叉反應(yīng)性，其中它們結(jié)合相關(guān)但不相同的表位，例如與參比表位具有至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少65％、至少60％、至少55％并且至少50％同一性(如使用本領(lǐng)域已知并且本文描述的方法所計(jì)算)的表位。如果抗體不能結(jié)合與參比表位具有小于95％、小于90％、小于85％、小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％并且小于50％同一性(如使用本領(lǐng)域已知并且本文描述的方法所計(jì)算)的表位，則抗體可以據(jù)說(shuō)具有幾乎沒(méi)有的交叉反應(yīng)性或不具有交叉反應(yīng)性。如果抗體不能結(jié)合所述表位的任何其它類(lèi)似物、直向同源物或同源物，則抗體可以被認(rèn)為對(duì)某一表位有“高度特異性”。如本文所描述的抗α-共核蛋白結(jié)合分子(例如，抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物)還可以它們對(duì)本公開(kāi)的多肽(例如，人α-共核蛋白)的結(jié)合親和性的方式描述或規(guī)定。優(yōu)選的結(jié)合親和性包括具有小于以下的解離常數(shù)或kd的那些：5×10-2m、10-2m、5×10-3m、10-3m、5×10-4m、10-4m、5×10-5m、10-5m、5×10-6m、10-6m、5×10-7m、10-7m、5×10-8m、10-8m、5×10-9m、10-9m、5×10-10m、10-10m、5×10-11m、10-11m、5×10-12m、10-12m、5×10-13m、10-13m、5×10-14m、10-14m、5×10-15m或10-15m。包括單鏈抗體的抗體片段可以包含單獨(dú)地或與以下的全部或一部分組合的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)：鉸鏈區(qū)、ch1結(jié)構(gòu)域、ch2結(jié)構(gòu)域和ch3結(jié)構(gòu)域。還包括了也包含一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)與鉸鏈區(qū)、ch1結(jié)構(gòu)域、ch2結(jié)構(gòu)域和ch3結(jié)構(gòu)域的任何組合的抗原結(jié)合片段。結(jié)合分子(例如，本文所公開(kāi)的抗體或其抗原結(jié)合片段)可以來(lái)自包括鳥(niǎo)和哺乳動(dòng)物的任何動(dòng)物來(lái)源?？贵w可以是人、鼠、驢、兔、山羊、豚鼠、駱駝、羊駝、馬或雞的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可變區(qū)可以是來(lái)源于軟骨魚(yú)(condricthoid)(例如，來(lái)自鯊魚(yú))。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”將意指其中免疫反應(yīng)性區(qū)或位點(diǎn)獲自或衍生自第一物種并且恒定區(qū)(所述恒定區(qū)可以是完整的、部分的或根據(jù)本公開(kāi)修飾的)獲自第二物種的任何抗體。例如，靶結(jié)合區(qū)或位點(diǎn)可以來(lái)自非人來(lái)源(例如，小鼠或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)并且恒定區(qū)可以是人的。可選地，完全人結(jié)合區(qū)可以與非人(例如，小鼠)恒定區(qū)組合。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“鼠源化的抗體”或“鼠源化的免疫球蛋白”是指包含一個(gè)或多個(gè)cdr和人構(gòu)架區(qū)的抗體，所述一個(gè)或多個(gè)cdr來(lái)自本公開(kāi)的人抗體，所述人構(gòu)架區(qū)包含基于小鼠抗體序列的氨基酸取代和/或缺失和/或插入。提供cdr的人免疫球蛋白稱(chēng)為“親本”或“受體”，并且提供構(gòu)架變化的小鼠抗體稱(chēng)為“供體”。恒定區(qū)不需要存在，但是如果它們存在，它們通常與小鼠抗體恒定區(qū)大致上相同，即至少約85％至90％、優(yōu)選地約95％或更多相同。因此，在一些實(shí)施方案中，全長(zhǎng)鼠源化的人重鏈或輕鏈免疫球蛋白包含小鼠恒定區(qū)、人cdr和具有一定數(shù)目的“鼠源化”氨基酸取代的大致上人的構(gòu)架。通常，“鼠源化的抗體”是包含鼠源化的可變輕鏈和/或鼠源化的可變重鏈的抗體。例如，鼠源化的抗體將不涵蓋通常的嵌合抗體，例如因?yàn)榍逗峡贵w的整個(gè)可變區(qū)是非小鼠的。通過(guò)“鼠源化”的方法被“鼠源化”的修飾的抗體與提供cdr的親本抗體相同的抗原結(jié)合，并且與親本抗體相比時(shí)通常是在小鼠中免疫原性更少的。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“工程化的抗體”是指其中重鏈或輕鏈或這兩者中的可變結(jié)構(gòu)域通過(guò)來(lái)自已知特異性的抗體的一個(gè)或多個(gè)cdr的至少部分替代并且如果必要的話通過(guò)部分構(gòu)架區(qū)替代和序列變化而改變的抗體。雖然cdr可以衍生自與構(gòu)架區(qū)衍生自其中的抗體相同類(lèi)別或甚至子類(lèi)別的抗體，但是應(yīng)該設(shè)想到cdr將衍生自不同類(lèi)別的抗體并且優(yōu)選地衍生自來(lái)自不同物種的抗體。其中來(lái)自已知特異性的非人抗體的一個(gè)或多個(gè)“供體”cdr被移植到人重鏈或輕鏈構(gòu)架區(qū)中的工程化的抗體在本文中被稱(chēng)為”人源化的抗體”。它可以不必要用來(lái)自供體可變區(qū)的全部cdr替代所有的cdr以使一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合能力轉(zhuǎn)移至另一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域。而它可以?xún)H必要轉(zhuǎn)移必須維持靶結(jié)合位點(diǎn)的活性的那些殘基。如本文所使用，“人的”或“完全人的”抗體包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體，并且包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從針對(duì)一種或多種人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的并且不會(huì)表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白的動(dòng)物中分離出的抗體，如下并且例如在kucherlapati等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,939,598中所描述?！叭说摹被颉巴耆说摹笨贵w還包括至少包含重鏈的可變結(jié)構(gòu)域、或至少包含重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域的抗體，其中一個(gè)或多個(gè)可變結(jié)構(gòu)域具有一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列?！叭说摹被颉巴耆说摹笨贵w還包括如本文所描述的“人的”或“完全人的”抗體，所述如本文所描述的“人的”或“完全人的”抗體包含本文所描述的抗體分子(例如，vh區(qū)和/或vl區(qū))的變體(包括衍生物)、基本上由此組成或由此組成，所述抗體或其片段與α-共核蛋白多肽或其片段或變體免疫特異性結(jié)合?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在編碼人抗α-共核蛋白抗體的核苷酸序列中引入突變，所述突變包括但不限于導(dǎo)致氨基酸取代的定點(diǎn)誘變和pcr介導(dǎo)的誘變。優(yōu)選地，相對(duì)于參比vh區(qū)(vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3)、vl區(qū)(vlcdr1、vlcdr2或vlcdr3)，變體(包括衍生物)編碼小于50個(gè)氨基酸取代、小于40個(gè)氨基酸取代、小于30個(gè)氨基酸取代、小于25個(gè)氨基酸取代、小于20個(gè)氨基酸取代、小于15個(gè)氨基酸取代、小于10個(gè)氨基酸取代、小于5個(gè)氨基酸取代、小于4個(gè)氨基酸取代、小于3個(gè)氨基酸取代或小于2個(gè)氨基酸取代。一方面，本公開(kāi)的抗體是從人分離出來(lái)的人單克隆抗體。任選地，根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)人種系可變區(qū)序列比對(duì)和采用人抗體的構(gòu)架區(qū)；參見(jiàn)，例如由用于蛋白質(zhì)工程(cambridge,uk)的mrc中心托管的vbase(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)。例如，認(rèn)為可能偏離真實(shí)種系序列的氨基酸可以是由于在克隆過(guò)程中并入的pcr引物序列。與人工產(chǎn)生的人樣抗體如來(lái)自噬菌體展示抗體文庫(kù)或異種小鼠的單鏈抗體片段(scfv)相比，本公開(kāi)的人單克隆抗體的特征為：(i)使用人免疫反應(yīng)而不是動(dòng)物替代物的免疫反應(yīng)獲得，即，抗體響應(yīng)于人體中的處于它的相關(guān)構(gòu)象下的天然α-共核蛋白而產(chǎn)生；(ii)具有保護(hù)個(gè)體或至少對(duì)α-共核蛋白的存在重要的；以及(iii)因?yàn)榭贵w是具有人來(lái)源的，所以抵抗自體抗原的交叉反應(yīng)性的危險(xiǎn)被最小化。因此，根據(jù)本公開(kāi)，使用術(shù)語(yǔ)“人單克隆抗體”、“人單克隆自身抗體”、“人抗體”以及類(lèi)似的抗體來(lái)指代具有人來(lái)源的α-共核蛋白結(jié)合分子，即所述α-共核蛋白結(jié)合分子從人細(xì)胞如b細(xì)胞或其雜交瘤中分離出或所述α-共核蛋白結(jié)合分子的cdna直接從人細(xì)胞(例如人記憶b細(xì)胞)的mrna克隆。即使在抗體中進(jìn)行了氨基酸取代例如以改進(jìn)結(jié)合特征，但是人抗體仍然是“人的”。將如下和例如在kucherlapati等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,939,598中所描述的衍生自人免疫球蛋白文庫(kù)或衍生自對(duì)一種或多種人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的并且不會(huì)表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白的動(dòng)物的抗體指代為人樣抗體，為了使它們與本公開(kāi)的真正人抗體加以區(qū)別。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“樣品”是指從受試者或患者獲得的任何生物材料。一方面，樣品可以包括血液、腦脊髓液(“csf”)或尿液。在其它方面中，樣品可以包括從血液樣品中富集的全血、血漿、b細(xì)胞，以及培養(yǎng)細(xì)胞(例如，來(lái)自受試者的b細(xì)胞)。樣品還可以包括活組織檢查物或組織樣品，所述活組織檢查物或組織樣品包括神經(jīng)組織。在還其它方面中，樣品可以包括全細(xì)胞和/或細(xì)胞的裂解液?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)收集血液樣品。一方面，可以通過(guò)在4℃下、在200μl緩沖液(20mmtris，ph7.5；0.5％nonidet；1mmedta；1mmpmsf；0.1mnacl；ix西格瑪?shù)鞍酌敢种苿┮约癷x西格瑪磷酸酶抑制劑1和2)中渦旋振蕩來(lái)重新懸浮沉淀?？梢园橛虚g歇渦旋振蕩將懸浮液保持在冰上，持續(xù)20分鐘。在約4℃下、在15,000×g下旋轉(zhuǎn)5分鐘之后，可以將上清液的等分試樣儲(chǔ)存在約-70℃下。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“治療(treat)”或“治療(treatment)”是指治療性治療和預(yù)防性或防止性措施，其中目的是為了防止或減緩(減輕)不希望的生理學(xué)變化、感染或病癥。有益的或希望的臨床結(jié)果包括，但不限于：癥狀緩和、疾病程度減小、疾病狀態(tài)穩(wěn)定(即，沒(méi)有惡化)、受試者中的傳染物清除或減少、疾病進(jìn)展延遲或減慢、疾病狀態(tài)改善或減輕以及緩解(無(wú)論部分的或全體的)，無(wú)論可檢測(cè)的或不可檢測(cè)的?！爸委煛边€可以意指與如果沒(méi)有接受治療的預(yù)期的存活期相比，延長(zhǎng)存活期。有治療需要的那些人包括已經(jīng)具有感染、病狀或病癥的那些人以及易于具有病狀或病癥的那些人或其中待預(yù)防病狀或病癥的那些人?！皽y(cè)試受試者”或“個(gè)體”或“動(dòng)物”或“患者”或“哺乳動(dòng)物”意指任何受試者，具體是哺乳動(dòng)物受試者，希望對(duì)它們進(jìn)行診斷、預(yù)后或治療。哺乳動(dòng)物受試者包括人、家養(yǎng)動(dòng)物、農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、以及動(dòng)物園、體育競(jìng)技動(dòng)物或?qū)櫸?，如狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛、熊等等。ii.靶多肽描述如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“α-共核蛋白(α-synuclein)”、“α-共核蛋白(alpha-synuclein)”、“a-共核蛋白”以及“asyn”可互換使用以確切地指α-共核蛋白的天然單體形式。還使用術(shù)語(yǔ)“α-共核蛋白”來(lái)總體上鑒定α-共核蛋白的其它構(gòu)象異構(gòu)體，例如與多巴胺-醌(daq)結(jié)合的α-共核蛋白和α-共核蛋白的低聚體或聚集體。還使用術(shù)語(yǔ)“α-共核蛋白”來(lái)共同指α-共核蛋白的所有類(lèi)型和形式。人α-共核蛋白的蛋白質(zhì)序列是：mdvfmkglskakegvvaaaektkqgvaeaagktkegvlyvgsktkegvvhgvatvaektkeqvtnvggavvtgvtavaqktvegagsiaaatgfvkkdqlgkneegapqegiledmpvdpdneayempseegyqdyepea(seqidno)：1)α-共核蛋白的氨基酸序列可以從文獻(xiàn)和相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索；參見(jiàn)，例如ueda等，pnas90：1282-11286(1993)；genbankswissprot：locussyua_human，登錄號(hào)p37840。最初在人腦中鑒定出α-共核蛋白作為阿爾茨海默氏病(ad)斑塊的非β-淀粉樣組分(nac)的前體蛋白；參見(jiàn)，例如ueda等，見(jiàn)上文。α-共核蛋白是具有140個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，并且作為無(wú)規(guī)卷曲以它的天然形式存在。然而，ph、分子集群、重金屬含量以及多巴胺水平的變化所有均影響蛋白質(zhì)構(gòu)象。低聚體部分、原纖絲部分、纖絲部分和聚集體部分的構(gòu)象變化被認(rèn)為可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)毒性。越來(lái)越多的證據(jù)表明：與非加合的蛋白質(zhì)相比，多巴胺加合的α-共核蛋白具有更快的時(shí)間進(jìn)程來(lái)形成原纖維。此外，在α-共核蛋白過(guò)表達(dá)的背景下的多巴胺是毒性的。nac(α-共核蛋白內(nèi)的高度疏水結(jié)構(gòu)域)是由至少28個(gè)氨基酸殘基(殘基60至87)和任選地35個(gè)氨基酸殘基(殘基61至95)組成的肽。nac展示出形成β-片層結(jié)構(gòu)的趨勢(shì)(iwai等,biochemistry,34:10139-10145(1995))。nac的氨基酸序列被描述在jensen等,biochem.j.310:91-94(1995)；genbank登錄號(hào)s56746和ueda等中，見(jiàn)上文。包括nac的解聚集的α-共核蛋白或其片段意指單體肽單元。解聚集的α-共核蛋白或其片段通常是可溶的，并且能夠自聚集以形成可溶的低聚體。α-共核蛋白及其片段的低聚體通常是可溶的并且主要呈α-螺旋存在。單體α-共核蛋白可以通過(guò)用超聲處理將凍干的肽溶解在純凈的dmso中來(lái)體外制備。離心所得到的溶液以去除任何不可溶顆粒。包括nac的聚集的α-共核蛋白或其片段意指已經(jīng)締合到不可溶β-片層組合體中的α-共核蛋白或其片段的低聚體。包括nac的聚集的α-共核蛋白或其片段還意指原纖聚合體。原纖維通常是不可溶的。一些抗體結(jié)合可溶的α-共核蛋白或其片段或聚集的α-共核蛋白或其片段。一些抗體與比單體形式或原纖形式更堅(jiān)固的α-共核蛋白的低聚體結(jié)合。一些抗體結(jié)合可溶的和聚集的α-共核蛋白或其片段，以及任選地低聚體形式。iii.抗α-共核蛋白抗體本領(lǐng)域中已經(jīng)描述了結(jié)合α-共核蛋白的抗體。參見(jiàn)，例如國(guó)際專(zhuān)利公布wo2010/069603，所述國(guó)際專(zhuān)利公布以引用的方式整體并入本文。本文所描述的人抗α-共核蛋白抗體與α-共核蛋白及其表位特異性結(jié)合并且與α-共核蛋白及其表位的各種構(gòu)象特異性結(jié)合。例如，本文公開(kāi)了特異性結(jié)合α-共核蛋白、以它的天然單體形式存在的α-共核蛋白、全長(zhǎng)和截短的α-共核蛋白以及α-共核蛋白聚集體的抗體。例如，如本文所描述的12f4抗體與全長(zhǎng)α-共核蛋白結(jié)合并且與在通過(guò)直接elisa所測(cè)試的包含氨基酸(aa)1至60、指向α-共核蛋白的n-末端兩親重復(fù)區(qū)內(nèi)的12f4的表位的α-共核蛋白截短形式結(jié)合。(參見(jiàn)wo2010/069603)。如本文所使用，提到“特異性結(jié)合”、“選擇性結(jié)合”或“優(yōu)選結(jié)合”α-共核蛋白的抗體是指不會(huì)結(jié)合其它不相關(guān)的蛋白質(zhì)的抗體。在一個(gè)實(shí)例中，本文所公開(kāi)的α-共核蛋白抗體可以結(jié)合α-共核蛋白或其表位并且在其它蛋白質(zhì)的約1.5倍背景以上的情況下沒(méi)有示出結(jié)合?！疤禺愋越Y(jié)合”或“選擇性結(jié)合”α-共核蛋白構(gòu)象異構(gòu)體的抗體是指不會(huì)結(jié)合α-共核蛋白的所有構(gòu)象(即，不會(huì)結(jié)合至少一個(gè)其它α-共核蛋白構(gòu)象異構(gòu)體)的抗體。例如，本文公開(kāi)了可以在α-共核蛋白、人和小鼠α-共核蛋白的單體形式和聚集形式；全長(zhǎng)α-共核蛋白和截短形式以及人α-共核蛋白與β-共核蛋白和γ-共核蛋白之中加以區(qū)別的抗體。因?yàn)楸竟_(kāi)的人抗α-共核蛋白抗體已經(jīng)從不具有帕金森綜合癥的體征并且展現(xiàn)出α-共核蛋白特異性免疫應(yīng)答的老年受試者的一個(gè)庫(kù)中分離，所以本文所公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體還可以稱(chēng)為“人自身抗體”以便強(qiáng)調(diào)那些抗體確實(shí)由受試者表達(dá)并且尚未從例如人免疫球蛋白表達(dá)噬菌體文庫(kù)中分離，迄今為止這代表了用于試著提供人樣抗體的一種常見(jiàn)方法。本公開(kāi)總體上涉及一種診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平的方法，所述方法包括施用與α-共核蛋白或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物特異性結(jié)合的抗體?？功?共核蛋白抗體可以在本文所提供的方法中使用?？梢允褂玫目贵w包括，但不限于在國(guó)際專(zhuān)利公布wo2010/069603中完全描述的重組人α-共核蛋白抗體ni-202.3g12、12f4或ni-202.3d8以及其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在某些實(shí)施方案中，在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物具有與參比抗α-共核蛋白抗體分子(例如本文描述的那些)的氨基酸序列有至少約80％、約85％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％或約95％序列同一性的氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案中，結(jié)合分子與參比抗體共有至少約96％、約97％、約98％、約99％或100％的序列同一性。在某些實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段與包含免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(vh)和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(vl)的參比抗體相同的α-共核蛋白表位特異性結(jié)合，其中vh包含與seqidno:2至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列并且vl包含與seqidno:3至少80％、85％、90％、95％或100％相同的氨基酸序列，如在表2中所示。進(jìn)一步公開(kāi)了與包含vh和vl的參比抗體相同的α-共核蛋白表位特異性結(jié)合的在本文所提供的方法中有用的抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中vh包含與seqidno:2相同或除了一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè)氨基酸取代之外與seqidno:2相同的氨基酸序列，并且vl包含與seqidno:3相同或除了一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè)氨基酸取代之外與seqidno:3相同的氨基酸序列，如在表2中所示。一些實(shí)施方案包括包含vh的在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中vh的一個(gè)或多個(gè)vhcdr1、vhcdr2或vhcdr3區(qū)是與以下序列中的一種或多種的一個(gè)或多個(gè)參比重鏈vhcdr1、vhcdr2和/或vhcdr3氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或100％相同：seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6，如在表3中所示。進(jìn)一步公開(kāi)了包含vh的在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中vh的一個(gè)或多個(gè)vhcdr1、vhcdr2或vhcdr3區(qū)是與以下序列中的一種或多種的一個(gè)或多個(gè)參比重鏈vhcdr1、vhcdr2或vhcdr3氨基酸序列相同或除了四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸取代之外相同的：seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6，如在表3中所示。還公開(kāi)了包含vl的在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中vl的一個(gè)或多個(gè)vlcdr1、vlcdr2或vlcdr3區(qū)是與以下序列中的一種或多種的一個(gè)或多個(gè)參比重鏈vlcdr1、vlcdr2或vlcdr3氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或100％相同：seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9，如在表3中所示。一些實(shí)施方案公開(kāi)了包含vl的在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中vl的一個(gè)或多個(gè)vlcdr1、vlcdr2或vlcdr3區(qū)是與以下序列中的一種或多種的一個(gè)或多個(gè)參比重鏈vlcdr1、vlcdr2或vlcdr3氨基酸序列相同或除了四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸取代之外相同：seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9，如在表3中所示。在其它實(shí)施方案中，在本文所提供的方法中有用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物包含與如在表2中所示的seqidno:2和seqidno:3至少80％、85％、90％、95％或100％相同的vh和vl氨基酸序列、主要由其組成或由其組成。表2：參比vh和vl氨基酸序列**vh和vlcdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以下劃線標(biāo)注表3：參比vh和vlcdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列還包括用于在本文所描述的方法中使用的是編碼如本文所描述的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多肽；編碼此類(lèi)多肽的多核苷酸；包含此類(lèi)多核苷酸的載體以及包含此類(lèi)載體或多核苷酸的宿主細(xì)胞，所有均用于產(chǎn)生在本文所描述的方法中使用的抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。如本文所描述的抗α-共核蛋白抗體的適合的生物活性變體可以在本公開(kāi)的方法中使用。此類(lèi)變體將保留親本抗α-共核蛋白抗體的希望的結(jié)合性質(zhì)。用于制造抗體變體的方法通常是在本領(lǐng)域中可獲得的。用于誘變和核苷酸序列改變的方法是本領(lǐng)域中眾所周知的。參見(jiàn)，例如walker和gaastra編著(1983)techniquesinmolecularbiology(macmillanpublishingcompany,newyork)；kunkel,proc.natl.acad.sci.usa82:488-492(1985)；kunkel等,methodsenzymol.154:367-382(1987)；sambrook等(1989)molecularcloning:alaboratorymanual(coldspringharbor,n.y.)；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,873,192；以及在其中引用的參考文獻(xiàn)；以引用的方式并入本文。關(guān)于不影響感興趣的多肽的生物活性的適當(dāng)氨基酸取代的指導(dǎo)可以在dayhoff等在atlasofproteinsequenceandstructure(natl.biomed.res.found.,washington,d.c.)第345-352頁(yè)(1978)中的模型中發(fā)現(xiàn)，以引用的方式整體并入本文。dayhoff等的模型使用了接受點(diǎn)突變(pam)氨基酸相似性矩陣(pam250矩陣)來(lái)確定適合的保守性氨基酸取代。保守性取代(如用具有類(lèi)似性質(zhì)的另一個(gè)氨基酸與一個(gè)氨基酸交換)可以是優(yōu)選的。如通過(guò)dayhoff等模型的pam250矩陣所教導(dǎo)的保守性氨基酸取代的實(shí)例包括，但不限于以及用于測(cè)量抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的結(jié)合特異性的方法包括，但不限于：標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定、用于監(jiān)測(cè)通過(guò)t細(xì)胞或b細(xì)胞的免疫球蛋白分泌的測(cè)定、t細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞凋亡測(cè)定、elisa測(cè)定以及類(lèi)似的方法。參見(jiàn)，例如在wo93/14125；shi等,immunity13:633-642(2000)；kumanogoh等,jimmunol169:1175-1181(2002)；watanabe等,jimmunol167:4321-4328(2001)；wang等,blood97:3498-3504(2001)；以及giraudon等,jimmunol172(2):1246-1255(2004)中公開(kāi)的此類(lèi)測(cè)定，所有所述參考文獻(xiàn)以引用的方式并入本文。當(dāng)本文討論包括本文所公開(kāi)的恒定區(qū)、cdr、vh結(jié)構(gòu)域或vl結(jié)構(gòu)域的任何具體多肽是否是與另一個(gè)多肽至少約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或甚至約100％相同時(shí)，％同一性可以使用本領(lǐng)域中已知的方法和計(jì)算機(jī)程序/軟件來(lái)測(cè)定，所述已知的方法和計(jì)算機(jī)程序/軟件如但不限于bestfit程序(威斯康星序列分析包(wisconsinsequenceanalysispackage)，用于unix的版本8，geneticscomputergroup,universityresearchpark,575sciencedrive,madison,wis.53711)。bestfit使用了smith和waterman(1981)adv.appl.math.2:482-489的局部同源性算法來(lái)找出兩個(gè)序列之間的同源性的最佳區(qū)段。當(dāng)使用bestfit或任何其它序列比對(duì)程序以確定具體序列是否是與根據(jù)本公開(kāi)的參比序列例如95％相同時(shí)，必然設(shè)定了參數(shù)以使得通過(guò)參比多肽序列的全長(zhǎng)計(jì)算同一性的百分比并且允許參比序列中的氨基酸的總數(shù)的同源性的間隔高達(dá)至5％。出于本公開(kāi)的目的，可以使用smith-waterman同源性搜索算法使用仿射間隔搜索的具有間隔開(kāi)放罰分(gapopenpenalty)為12，間隔延伸罰分(gapextensionpenalty)為2，blosum矩陣為62來(lái)確定序列同一性百分比。smith-waterman同源性搜索算法被教導(dǎo)在smith和waterman(1981)adv.appl.math.2:482-489中。變體可以例如與參比抗α-共核蛋白抗體的少至1至15個(gè)氨基酸殘基，少至1至10個(gè)氨基酸殘基，如6至10個(gè)，少至5個(gè)，少至4個(gè)，少至3個(gè)，少至2個(gè)，或甚至1個(gè)氨基酸殘基不同?！氨Ｊ匦园被崛〈笔瞧渲邪被釟埢痪哂袔ь?lèi)似電荷的側(cè)鏈的氨基酸殘基替代的一種保守性氨基酸取代。具有帶類(lèi)似電荷的側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族已經(jīng)在本領(lǐng)域中定義。這些家族包括具有以下側(cè)鏈的氨基酸：堿性側(cè)鏈(例如，賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支鏈側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)以及芳香族側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)?？蛇x地，可以如通過(guò)飽和誘變沿著所有或部分的編碼序列隨機(jī)引入突變，并且可以篩選所產(chǎn)生的突變體的生物活性以鑒定保留活性(例如，結(jié)合α-共核蛋白多肽的能力)的突變體。例如，可能僅在抗體分子的構(gòu)架區(qū)或僅在cdr區(qū)中引入突變。引入的突變可以是沉默或中性錯(cuò)義突變，即對(duì)抗體結(jié)合抗原的能力不具有作用或幾乎不具有作用。這些類(lèi)型的突變可以是對(duì)優(yōu)化密碼子使用有用的，或改進(jìn)雜交瘤的抗體產(chǎn)生?？蛇x地，非中性錯(cuò)義突變可以改變抗體結(jié)合抗原的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠設(shè)計(jì)和測(cè)試帶有希望的性質(zhì)的突變分子，所述希望的性質(zhì)如抗原結(jié)合活性不改變或結(jié)合活性改變(例如，抗原結(jié)合活性改進(jìn)或抗體特異性變化)。誘變之后，通?？梢员磉_(dá)編碼的蛋白質(zhì)，并且編碼的蛋白質(zhì)的功能活性和/或生物活性(例如，免疫特異性結(jié)合α-共核蛋白多肽的至少一個(gè)表位的能力)可以使用本文所描述的技術(shù)或通過(guò)通常本領(lǐng)域中已知的修飾技術(shù)來(lái)確定。iv.使用抗α-共核蛋白抗體的診斷或追蹤方法本公開(kāi)涉及抗α-共核蛋白結(jié)合分子(例如抗體或其抗原結(jié)合片段)用于診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平(例如，用于確定受試者發(fā)展共核蛋白疾病的危險(xiǎn))或用于在測(cè)試受試者中監(jiān)測(cè)共核蛋白疾病的進(jìn)展或?qū)埠说鞍准膊≈委煹姆磻?yīng)的用途。在某些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)在向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后，在指定的時(shí)間間隔下測(cè)定從測(cè)試受試者獲得的血漿或csf樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗α-共核蛋白抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出；(b)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。在其它實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)在向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后，在指定的時(shí)間間隔下測(cè)定從測(cè)試受試者獲得的血漿或csf樣品中的α-共核蛋白的水平，其中抗α-共核蛋白抗體或其片段使血液或csf中的α-共核蛋白穩(wěn)定或螯合；(b)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出；(b)指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者向測(cè)試受試者外周施用抗體并且在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從受試者獲得血漿樣品或csf樣品；(c)測(cè)定血漿樣品或csf樣品中的α-共核蛋白的水平；(d)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。在其它實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)提供抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段，其中抗α-共核蛋白抗體或其片段使血液或csf中的α-共核蛋白穩(wěn)定或螯合；(b)指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者向測(cè)試受試者外周施用抗體并且在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從受試者獲得血漿樣品或csf樣品；(c)測(cè)定血漿樣品或csf樣品中的α-共核蛋白的水平；(d)將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。為了應(yīng)用本公開(kāi)的方法和系統(tǒng)，可以在施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之前或之后獲得來(lái)自患者的樣品。樣品可以例如被醫(yī)療服務(wù)提供者(例如，醫(yī)生)或醫(yī)療服務(wù)福利提供者(healthcarebenefitsprovider)要求、通過(guò)相同或不同的醫(yī)療服務(wù)提供者(例如，護(hù)士、醫(yī)院)或臨床實(shí)驗(yàn)室獲得和/或加工，并且在加工之后，可以將結(jié)果轉(zhuǎn)發(fā)給另一個(gè)醫(yī)療服務(wù)提供者、醫(yī)療服務(wù)福利提供者或患者。類(lèi)似地，可以通過(guò)一個(gè)或多個(gè)醫(yī)療服務(wù)提供者、醫(yī)療服務(wù)福利提供者和/或臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定樣品中的α-共核蛋白的水平、將測(cè)試受試者中的α-共核蛋白的測(cè)定的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較、評(píng)價(jià)結(jié)果。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“醫(yī)療服務(wù)提供者”是指直接與活受試者(例如，人患者)相互作用和向其施用的個(gè)體或機(jī)構(gòu)。醫(yī)療服務(wù)提供者的非限制性實(shí)例包括醫(yī)生、護(hù)士、技術(shù)人員、治療學(xué)家、藥劑師、顧問(wèn)、可選的醫(yī)學(xué)從業(yè)者、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、醫(yī)生辦公室、醫(yī)院、急診室、診所、緊急護(hù)理中心、可選的醫(yī)學(xué)診所/機(jī)構(gòu)以及任何其它提供以下服務(wù)的實(shí)體：通常和/或?qū)ｉT(mén)的治療、評(píng)價(jià)、維持、療法、藥物治療和/或涉及所有或任何部分的患者的健康狀態(tài)的建議，包括但不限于通常醫(yī)療、專(zhuān)門(mén)醫(yī)療、手術(shù)和/或任何其它類(lèi)型的治療、評(píng)價(jià)、維持、療法、藥物治療和/或建議。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“臨床實(shí)驗(yàn)室”是指用于檢驗(yàn)或加工源自活受試者(例如，人類(lèi))的材料的機(jī)構(gòu)。出于提供信息(例如，出于診斷、預(yù)防或治療活受試者(例如，人類(lèi))的任何疾病或損傷或評(píng)價(jià)活受試者(例如，人類(lèi))的健康)的目的，加工的非限制性實(shí)例包括生物檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn)、血清檢驗(yàn)、化學(xué)檢驗(yàn)、免疫血液檢驗(yàn)、血液檢驗(yàn)、生物物理檢驗(yàn)、細(xì)胞檢驗(yàn)、病理檢驗(yàn)、遺傳檢驗(yàn)或其它檢驗(yàn)源自人體的材料。這些檢驗(yàn)還可以包括收集或以另外的方式獲得樣品、制備、確定、測(cè)量或以另外的方式描述活受試者(例如，人類(lèi))的身體中或從活受試者(例如，人類(lèi))的身體獲得的樣品中的各種物質(zhì)的存在或不存在的程序。在某些方面中，臨床實(shí)驗(yàn)室可以是“中央的”或“本地的”，意味著少量或單個(gè)實(shí)驗(yàn)室做出從所有外部來(lái)源遞交的樣品的所有測(cè)量。在其它方面中，可以驗(yàn)證多個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室(又稱(chēng)為“衛(wèi)星”或“全球”實(shí)驗(yàn)室)來(lái)都提供可以容易比較的標(biāo)準(zhǔn)、可靠的結(jié)果。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“醫(yī)療服務(wù)福利提供者”涵蓋提供、提出、給予、全部或部分給付或以另外的方式與給予患者得到一種或多種醫(yī)療服務(wù)福利、福利計(jì)劃、健康保險(xiǎn)和/或醫(yī)療服務(wù)費(fèi)用賬戶程序相關(guān)的個(gè)體當(dāng)事人、組織或團(tuán)體。在一些方面中，醫(yī)療服務(wù)提供者可以施用或指示另一個(gè)醫(yī)療服務(wù)提供者施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段。醫(yī)療服務(wù)提供者可以實(shí)施或指示另一個(gè)醫(yī)療服務(wù)提供者或患者進(jìn)行以下行為：獲得樣品；加工樣品；遞交樣品；接收樣品；轉(zhuǎn)移樣品；分析或測(cè)量樣品；定量樣品；提供分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果；接收分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果；比較/記分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品之后所獲得的結(jié)果；提供來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/得分；獲得來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/得分；施用療法或治療劑(例如，抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段)；開(kāi)始施用療法；終止施用療法；繼續(xù)施用療法；暫時(shí)中斷施用療法；增加施用的治療劑的量；減少施用的治療劑的量；繼續(xù)施用一定量的治療劑；增加施用治療劑的頻率；減少施用治療劑的頻率；維持治療劑的相同給藥頻率；通過(guò)至少另一種療法或治療劑替代一種療法或治療劑；將一種療法或治療劑與至少另一種療法或額外的治療劑組合。在一些方面中，醫(yī)療服務(wù)福利提供者可以授權(quán)或拒絕例如收集樣品；加工樣品；遞交樣品；接收樣品；轉(zhuǎn)移樣品；分析或測(cè)量樣品；定量樣品；提供分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果；轉(zhuǎn)移分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果；比較/記分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品之后所獲得的結(jié)果；轉(zhuǎn)移來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/得分；施用療法或治療劑；開(kāi)始施用療法或治療劑；終止施用療法或治療劑；繼續(xù)施用療法或治療劑；暫時(shí)中斷施用療法或治療劑；增加施用的治療劑的量；減少施用的治療劑的量；繼續(xù)施用一定量的治療劑；增加施用治療劑的頻率；減少施用治療劑的頻率；維持治療劑的相同給藥頻率；通過(guò)至少另一種療法或治療劑替代一種療法或治療劑；或?qū)⒁环N療法或治療劑與至少另一種療法或額外的治療劑組合。另外，醫(yī)療服務(wù)福利提供者可以例如授權(quán)或拒絕開(kāi)處療法，授權(quán)或拒絕覆蓋療法，授權(quán)或拒絕賠償療法的成本，確定或拒絕療法的合適性等等。在一些方面中，臨床實(shí)驗(yàn)室可以例如收集或獲得樣品、加工樣品、遞交樣品、接收樣品、轉(zhuǎn)移樣品、分析或測(cè)量樣品、定量樣品、提供分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果、接收分析/測(cè)量/定量樣品之后所獲得的結(jié)果、比較/記分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品之后所獲得的結(jié)果、提供來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/得分、獲得來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/得分。以上列舉的行為可以通過(guò)醫(yī)療服務(wù)提供者、醫(yī)療服務(wù)福利提供者或患者自動(dòng)使用計(jì)算機(jī)實(shí)施的方法(例如，經(jīng)由網(wǎng)絡(luò)服務(wù)或獨(dú)立計(jì)算機(jī)系統(tǒng))來(lái)進(jìn)行。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者”包括口頭指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者或通過(guò)使用書(shū)面命令或這兩者來(lái)指導(dǎo)醫(yī)療服務(wù)提供者。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出；(b)在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從測(cè)試受試者獲得血漿樣品或csf樣品，并且遞交血漿樣品或csf樣品用于確定α-共核蛋白的水平；(c)將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。在其它實(shí)施方案中，如本文所描述的方法涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)通過(guò)以下方法來(lái)診斷測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的升高水平：(a)向測(cè)試受試者外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其片段使血液或csf中的α-共核蛋白穩(wěn)定或螯合；(b)在施用之后在指定的時(shí)間間隔下從測(cè)試受試者獲得血漿樣品或csf樣品，并且遞交血漿樣品或csf樣品用于確定α-共核蛋白的水平；(c)將血漿樣品中的α-共核蛋白的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)比較；其中血漿樣品或csf樣品與參比標(biāo)準(zhǔn)中的α-共核蛋白的水平之間的差異或相似性與測(cè)試受試者的腦中的α-共核蛋白的水平相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，抗α-共核蛋白抗體(包括本文所描述的其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出并且使血液或csf中的α-共核蛋白穩(wěn)定或螯合。待診斷的測(cè)試受試者可以是對(duì)疾病而言無(wú)癥狀的或臨床前的。在具體實(shí)施方案中，測(cè)試受試者包括癥狀前的或具有臨床前共核蛋白疾病的個(gè)體。在具體實(shí)施方案中，本文所描述的方法中的“參比標(biāo)準(zhǔn)”包括在一個(gè)或多個(gè)對(duì)照受試者中的α-共核蛋白的測(cè)量的水平，其中對(duì)照受試者包括正常的健康個(gè)體和具有各種嚴(yán)重性的共核蛋白病的個(gè)體。例如，對(duì)照受試者具有共核蛋白疾病，例如帕金森氏病(pd)、路易體癡呆(dlb)或阿爾茨海默氏病的路易體變體(lbvad)，其中α-共核蛋白的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)之間的相似性表明待診斷的受試者具有共核蛋白疾病。可選地或另外作為第二對(duì)照，對(duì)照受試者不具有共核蛋白疾病，其中α-共核蛋白的水平與參比標(biāo)準(zhǔn)之間的差異表明待診斷的受試者具有共核蛋白疾病。優(yōu)選地，待診斷的受試者和一個(gè)或多個(gè)對(duì)照受試者是年齡匹配的。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法進(jìn)一步包括將血漿樣品(即，測(cè)試樣品)中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體(包括其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)之前從測(cè)試受試者獲得的血漿樣品(即，基線樣品)比較。在其它實(shí)施方案中，如本文所描述的方法進(jìn)一步包括將csf樣品(即，測(cè)試樣品)中的α-共核蛋白的水平與在施用抗α-共核蛋白抗體(包括其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)之前從測(cè)試受試者獲得的csf樣品(即，基線樣品)比較。例如，可以對(duì)基線樣品做出替代或除了與參比標(biāo)準(zhǔn)比較以外的比較。在這點(diǎn)上，基線樣品可以用來(lái)使測(cè)試樣品校準(zhǔn)至參考標(biāo)準(zhǔn)(例如，測(cè)量值是差值或比率而不是絕對(duì)值)。通過(guò)另外的實(shí)施方案，如本文所描述的抗α-共核蛋白結(jié)合分子(具體是抗α-共核蛋白抗體)還可以在用于通過(guò)從測(cè)試的個(gè)體獲得體液樣品(所述體液樣品可以是血液樣品、淋巴樣品、csf樣品或任何其它體液樣品)并且在能夠形成抗體-抗原復(fù)合體的條件下使體液樣品與如本文所描述的抗α-共核蛋白抗體接觸而在個(gè)體中診斷病癥的方法中使用。然后通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法確定此類(lèi)復(fù)合體的水平，水平顯著高于對(duì)照樣品中形成的水平表明了測(cè)試的個(gè)體中的疾病。以相同的方式，還可以使用通過(guò)如本文所描述的抗α-共核蛋白抗體結(jié)合的特異性抗原。因此，本公開(kāi)涉及體外免疫測(cè)定，所述體外免疫測(cè)定包含抗α-共核蛋白結(jié)合分子例如本公開(kāi)的抗體或其抗原結(jié)合片段?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何適合的方法來(lái)評(píng)價(jià)α-共核蛋白的水平，所述方法包括例如，通過(guò)選自以下的一種或多種技術(shù)分析α-共核蛋白：蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)、放射免疫測(cè)定(ria)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)、二維凝膠電泳、質(zhì)譜法(ms)、基質(zhì)輔助的激光脫附/離子化飛行時(shí)間-ms(maldi-tof)、表面增強(qiáng)的激光脫附離子化飛行時(shí)間(seldi-tof)、高效液相色譜法(hplc)、快速蛋白質(zhì)液相色譜法(fplc)、串聯(lián)質(zhì)譜法(ms/ms)之后的多維液相色譜法(lc)以及激光密度測(cè)定法。優(yōu)選地，所述α-共核蛋白的體內(nèi)成像包括正電子發(fā)射斷層攝影(pet)、單光子發(fā)射斷層攝影(spect)、近紅外(nir)光學(xué)成像或磁共振成像(mri)。如在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中眾所周知，用于任何一個(gè)患者的劑量取決于許多因素，包括患者的大小、體表面積、年齡、待施用的具體化合物、性別、施用時(shí)間和途徑、一般健康狀況以及目前正在施用的其它藥物。通常，劑量可以例如在宿主體重的約0.0001mg/kg至100mg/kg，并且更通常在0.01mg/kg至5mg/kg(例如，0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kg等等)的范圍內(nèi)。例如，劑量可以是1mg/kg體重或10mg/kg體重或在1mg/kg至10mg/kg的范圍內(nèi)。介于以上范圍中間的劑量還旨在處于本公開(kāi)的范圍內(nèi)。本文其它地方描述了術(shù)語(yǔ)“外周施用”。在某些實(shí)施方案中，可以使用基于抗體的陣列，所述陣列例如裝載有特異性識(shí)別α-共核蛋白的本公開(kāi)的抗α-共核蛋白抗體或等效的抗原結(jié)合分子。微陣列免疫測(cè)定的設(shè)計(jì)被概述在kusnezow等,mol.cellproteomics5:1681-1696(2006)中。因此，本公開(kāi)還涉及裝載有根據(jù)本公開(kāi)鑒定的抗α-共核蛋白結(jié)合分子的微陣列。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法還涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)來(lái)追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平，包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段可以結(jié)合具有足夠親和性的α-共核蛋白以改變從腦至血液或腦至csf的α-共核蛋白的凈流出；并且其中受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關(guān)。在具體實(shí)施方案中，如本文所描述的方法進(jìn)一步包括在額外的外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白的水平，從而繪制受試者的腦中的α-共核蛋白水平隨時(shí)間變化的曲線圖。在一些實(shí)施方案中，如本文所描述的方法還涉及使用抗α-共核蛋白抗體(包括其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物)來(lái)追蹤被治療共核蛋白疾病的受試者的腦中的α-共核蛋白水平，包括在外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白的水平，其中抗體或其片段使血液或csf中的α-共核蛋白穩(wěn)定或螯合；并且其中受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白水平與受試者的腦中的水平相關(guān)。在具體實(shí)施方案中，如本文所描述的方法進(jìn)一步包括在額外的外周施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段之后在指定時(shí)間下測(cè)定受試者的血漿或受試者的csf中的α-共核蛋白的水平，從而繪制受試者的腦中的α-共核蛋白水平隨時(shí)間變化的曲線圖。一些實(shí)施方案包括如本文所描述的方法，其中指定的時(shí)間間隔是小于12個(gè)月、小于11個(gè)月、小于10個(gè)月、小于9個(gè)月、小于8個(gè)月、小于7個(gè)月、小于6個(gè)月、小于5個(gè)月、小于4個(gè)月、小于3個(gè)月、小于2個(gè)月、小于一個(gè)月、小于一周、或小于或等于24小時(shí)、或小于或等于3小時(shí)。v.組合物和施用方法制備和向有需要的受試者施用抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的或由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易確定?？功?共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的施用途徑可以是例如口服、腸胃外、通過(guò)吸入或局部。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“外周施用”包括例如靜脈內(nèi)施用、動(dòng)脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用、肌肉內(nèi)施用、皮下施用、直腸施用或陰道施用。雖然所有這些施用形式清楚認(rèn)為在本公開(kāi)的范圍內(nèi)，但是用于施用的形式的實(shí)例將是用于注射的溶液，具體是用于靜脈內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)注射或滴注的溶液。用于注射的適合的藥物組合物可以包含緩沖液(例如乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖液)、表面活性劑(例如聚山梨醇酯)、任選地穩(wěn)定劑(例如，人白蛋白)等等。如本文所討論，抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以被配制以便有助于施用并且促進(jìn)活性劑的穩(wěn)定性。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本公開(kāi)的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的、無(wú)毒性的、無(wú)菌的載體，如生理鹽水、無(wú)毒性的緩沖液、防腐劑以及類(lèi)似物質(zhì)。出于本申請(qǐng)的目的，抗α-共核蛋白抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物有效量應(yīng)該理解為意指足以實(shí)現(xiàn)與靶標(biāo)有效結(jié)合并且實(shí)現(xiàn)例如改變從腦至血液的α-共核蛋白的凈流出或改變從腦至csf的α-共核蛋白的凈流出的益處的量。用于本公開(kāi)中的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體，包括例如離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、緩沖物質(zhì)(如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)(如硫酸魚(yú)精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮)、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羥甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。用于外周施用的制劑包括無(wú)菌水性或非水性的溶液、懸浮液以及乳液。非水性溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄欖油)以及可注射有機(jī)酯(如油酸乙酯)。水性載體包括例如水、酒精溶液/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖的介質(zhì)。在本公開(kāi)中，藥學(xué)上可接受的載體包括，但不限于0.01m至0.1m磷酸鹽緩沖液或0.8％鹽水。其它常見(jiàn)腸胃外媒介物包括磷酸鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化的林格氏溶液或固定油。靜脈內(nèi)媒介物包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(如基于林格氏葡萄糖的那些)以及類(lèi)似物質(zhì)。防腐劑和其它添加劑也可以存在，例如像抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體以及類(lèi)似物質(zhì)。更具體來(lái)說(shuō)，適合用于可注射使用的藥物組合物包括無(wú)菌水溶液(其中水溶性的)或用于臨時(shí)制備無(wú)菌可注射的溶液或分散液的分散劑和無(wú)菌粉末。在此類(lèi)情況下，組合物必須是無(wú)菌的并且流動(dòng)性應(yīng)該達(dá)到存在容易注射性的程度。在制造和儲(chǔ)存的條件下組合物應(yīng)該是穩(wěn)定的，并且將優(yōu)選地不受微生物(如細(xì)菌和真菌)的污染作用影響而保存。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇以及類(lèi)似物質(zhì))以及其適合的混合物?？梢岳缤ㄟ^(guò)使用涂層(如卵磷脂)、通過(guò)在分散液情況下保持所需要的粒徑以及通過(guò)使用表面活性劑來(lái)保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。用于本文所公開(kāi)的治療方法的適合的制劑被描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingco.)第16版(1980)中?？梢酝ㄟ^(guò)各種抗菌劑和抗真菌劑(例如，對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞以及類(lèi)似物質(zhì))來(lái)實(shí)現(xiàn)預(yù)防微生物的作用。在許多情況下，在組合物中將優(yōu)選包括等滲劑，例如糖、多元醇，如甘露醇、山梨醇或氯化鈉?？梢酝ㄟ^(guò)在組合物中包括延緩吸收的試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)而帶來(lái)可注射組合物的延長(zhǎng)吸收。在任何情況下，可以通過(guò)在適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⑷胄枰牧康幕钚曰衔?例如，單獨(dú)地或與其它活性劑組合的抗α-抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物)與本文所列舉的一種成分或多種成分的組合，如果需要的話，接著通過(guò)過(guò)濾型滅菌來(lái)制備無(wú)菌可注射溶液。通常，通過(guò)將活性化合物并入到無(wú)菌媒介物中來(lái)制備分散液，所述無(wú)菌媒介物包含基本分散介質(zhì)和來(lái)自以上列舉的那些的需要的其它成分。在用于制備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌粉末的情況下，制備的優(yōu)選方法是真空干燥和冷凍干燥，這產(chǎn)生活性成分加上來(lái)自其先前無(wú)菌過(guò)濾的溶液的任何額外希望的成分的粉末。加工用于注射的制劑，過(guò)濾到容器(如安瓿、袋、瓶、注射器或小瓶)中，并且在根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法的無(wú)菌條件下密封。此外，可以包裝制劑并且以試劑盒的形式出售。制造的此類(lèi)物品可以具有標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)，這表明相關(guān)的組合物是有用于治療遭受或易感疾病或病癥的受試者。腸胃外制劑可以是快速灌注劑量、輸注或具有維持劑量的裝載推注劑量?？梢栽诰唧w固定的或可變的時(shí)間間隔(例如，一天一次或基于“如需要時(shí)”)下施用這些組合物。如本文所公開(kāi)的某些藥物組合物可以可接受的劑型(包括例如，膠囊、片劑、水性混懸劑或溶液)口服施用。某些藥物組合物還可以通過(guò)鼻氣霧劑或吸入來(lái)施用。采用芐醇或其它適合的防腐劑、吸附促進(jìn)劑以增強(qiáng)生物利用率、和/或其它常規(guī)穩(wěn)定劑或分散劑，可以將此類(lèi)組合物制備成鹽水溶液。待與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑型的抗α-共核蛋白抗體或其片段、變體或衍生物的量將取決于所治療的宿主和施用的具體模式而改變。組合物可以被施用為單一劑量、多劑量或以輸注的形式經(jīng)過(guò)確立的時(shí)間段。還可以調(diào)整給藥方案以提供最優(yōu)的希望的反應(yīng)(例如，治療反應(yīng)或預(yù)防反應(yīng))。***本公開(kāi)的實(shí)踐將采用(除非另外指出)細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、轉(zhuǎn)基因生物學(xué)、微生物學(xué)、重組dna以及免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，所述技術(shù)處于本領(lǐng)域的技能之內(nèi)。此類(lèi)技術(shù)被完全解釋在參考文獻(xiàn)中。參見(jiàn)，例如molecularcloningalaboratorymanual,第2版,sambrook等編著,coldspringharborlaboratorypress:(1989)；molecularcloning:alaboratorymanual,sambrook等編著,coldspringsharborlaboratory,newyork(1992),dnacloning,d.n.glover編著,第i和ii卷(1985)；oligonucleotidesynthesis,m.j.gait編著,(1984)；mullis等美國(guó)專(zhuān)利號(hào):4,683,195；nucleicacidhybridization,b.d.hames&s.j.higgins編著(1984)；transcriptionandtranslation,b.d.hames&s.j.higgins編著(1984)；cultureofanimalcells,r.i.freshney,alanr.liss,inc.,(1987)；immobilizedcellsandenzymes,irlpress,(1986)；b.perbal,apracticalguidetomolecularcloning(1984)；thetreatise,methodsinenzymology,academicpress,inc.,n.y.；genetransfervectorsformammaliancells,j.h.millerandm.p.calos編著,coldspringharborlaboratory(1987)；methodsinenzymology,第154和155期(wu等編著)；immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology,canerandwalker編著,academicpress,london(1987)；handbookofexperimentalimmunology,第i至iv卷,d.m.weirandc.c.blackwell編著,(1986)；manipulatingthemouseembryo,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,(1986)；以及在ausubel等,currentprotocolsinmolecularbiology,johnwileyandsons,baltimore,maryland(1989)中?？贵w工程的一般原理列舉在antibodyengineering,第2版,c.a.k.borrebaeck編著,oxforduniv.press(1995)中。蛋白質(zhì)工程的一般原理列舉在proteinengineering,apracticalapproach,rickwood,d.等編著,irlpressatoxforduniv.press,oxford,eng.(1995)中。抗體和抗體-半抗原結(jié)合的一般原理列舉在以下：nisonoff,a.,molecularimmunology,第2版,sinauerassociates,sunderland,ma(1984)；和steward,m.w.,antibodies,theirstructureandfunction,chapmanandhall,newyork,ny(1984)。另外，本領(lǐng)域已知并且沒(méi)有確切描述的免疫學(xué)方面的標(biāo)準(zhǔn)方法通常根據(jù)如下參考文獻(xiàn)中：currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,newyork；stites等(編著),basicandclinical-immunology(第8版),appleton&lange,norwalk,ct(1994)以及mishell和shiigi(編著),selectedmethodsincellularimmunology,w.h.freemanandco.,newyork(1980)。列舉免疫學(xué)的一般原理的標(biāo)準(zhǔn)參考工作包括currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,newyork；klein,j.,immunology:thescienceofself-nonselfdiscrimination,johnwiley&sons,newyork(1982)；kennett,r.等編著,monoclonalantibodies,hybridoma:anewdimensioninbiologicalanalyses,plenumpress,newyork(1980)；campbell,a.,“monoclonalantibodytechnology”inburden,r.等編著,laboratorytechniquesinbiochemistryandmolecularbiology,第13期,elsevere,amsterdam(1984),kubyimmunnology第4版.編著richarda.goldsby,thomasj.kindtandbarbaraa.osborne,h.freemand&co.(2000)；roitt,i.,brostoff,j.andmaled.,immunology第6版london:mosby(2001)；abbasa.,abul,a.和lichtman,a.,cellularandmolecularimmunology第5版,elsevierhealthsciencesdivision(2005)；kontermann和dubel,antibodyengineering,springerverlan(2001)；sambrook和russell,molecularcloning:alaboratorymanual.coldspringharborpress(2001)；lewin,genesviii,prenticehall(2003)；harlow和lane,antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborpress(1988)；dieffenbach和dveksler,pcrprimercoldspringharborpress(2003)。實(shí)施例常規(guī)方法的詳述(如本文采用的那些)可以在所引用的參考文獻(xiàn)中找到。除非以下另外指出，否則已經(jīng)或可以如在出版為wo2008/081008的國(guó)際申請(qǐng)pct/ep2008/000053和出版為wo2010/069603的國(guó)際申請(qǐng)pct/ep2009/009186的實(shí)施例和補(bǔ)充方法部分中所描述進(jìn)行α-共核蛋白特異性b細(xì)胞的鑒定和展現(xiàn)出感興趣的特異性以及它們的重組表達(dá)和功能特征的α-共核蛋白抗體的分子克隆，所述國(guó)際申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容以引用的方式整體并入本文。實(shí)施例1：當(dāng)在過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中12f4施用時(shí)劑量依賴(lài)型的人α-共核蛋白血漿脈沖本實(shí)施例描述了確定注射12f4抗體后的在過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中的小鼠血漿中的人α-共核蛋白水平。過(guò)表達(dá)人野生型(wt)α-共核蛋白(pdgfβ-h[wt]α-共核蛋白；即，d系；masliah等,science,287(5456):1265-9(2000))的三個(gè)半月大的轉(zhuǎn)基因小鼠被腹膜內(nèi)注射單一劑量的0mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg12f4抗體。當(dāng)共轉(zhuǎn)染到ig重鏈表達(dá)載體和κ或λig輕鏈表達(dá)載體的cho細(xì)胞(或人或小鼠來(lái)源的任何其它適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞系)中時(shí)獲得功能重組的單克隆抗體12f4和嵌合12f4。隨后使用如在wo2008/081008中所描述的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)a柱純化從條件培養(yǎng)基純化重組單克隆抗體。可以使用短暫地或穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染細(xì)胞產(chǎn)生不限數(shù)量的重組人單克隆抗體。嵌合12f4抗體在調(diào)節(jié)至人可變重鏈和輕鏈的種系(gl)序列的ig可變區(qū)的n-末端上具有引物誘導(dǎo)的突變(參見(jiàn)wo2010/069603)，并且表達(dá)為嵌合分子，其中調(diào)節(jié)的人可變結(jié)構(gòu)域融合至小鼠igg2a恒定區(qū)。在具有自由獲得食物和水的反轉(zhuǎn)12h:12h光照/黑暗循環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)居住條件下保持d系轉(zhuǎn)基因α-共核蛋白小鼠。均衡治療組的年齡和性別。注射24小時(shí)后，制備血漿樣品并且通過(guò)夾心elisa(invitrogen,usa)確定人α-共核蛋白的血漿濃度。以1:4稀釋血漿樣品，并且在稀釋緩沖液中制備具有野生型小鼠的1:4血漿標(biāo)準(zhǔn)物?？刂朴糜?2f4抗體對(duì)elisa讀數(shù)的影響的結(jié)果。使用作為標(biāo)準(zhǔn)的已知濃度的重組12f4，通過(guò)人fcg捕獲elisa來(lái)確定12f4抗體血漿水平。在含有來(lái)自野生型小鼠的稀釋的血漿的pbs中制備標(biāo)準(zhǔn)物。當(dāng)與媒介物對(duì)照比較時(shí)，在單一劑量的1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg12f4抗體之后人α-共核蛋白的血漿水平顯著增加。血漿人α-共核蛋白的增加是顯著地劑量依賴(lài)型(圖1a至圖1b)。在僅用媒介物治療的小鼠中檢測(cè)不到顯著水平的人α-共核蛋白(圖1b)。實(shí)施例2：α-共核蛋白血漿脈沖的時(shí)程和12f4血漿濃度本實(shí)施例描述了隨時(shí)間測(cè)量的過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中的小鼠血漿中的人α-共核蛋白水平和12f4抗體水平的變化的時(shí)程。過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白a53t(prp-h[a53t]α-共核蛋白](giasson等,neuron,34:521-533(2001))的八個(gè)月大轉(zhuǎn)基因小鼠被腹膜內(nèi)注射單一劑量的5mg/kg12f4抗體，并且注射后在時(shí)間點(diǎn)0小時(shí)、1小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)和168小時(shí)下收集血漿樣品。通過(guò)如在實(shí)施例1中所描述的elisa定量血漿人α-共核蛋白。圖2示出已在1小時(shí)時(shí)間點(diǎn)下的血漿人α-共核蛋白峰，并且然后隨時(shí)間衰退。另一方面，在24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)下發(fā)現(xiàn)12f4抗體的最高水平，并且12f4血漿水平看起來(lái)似乎比人α-共核蛋白水平衰退更慢。實(shí)施例3：急性高劑量12f4治療過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠減少了與血漿人α-共核蛋白水平相關(guān)的腦人α-共核蛋白水平本實(shí)施例描述了確定在用12f4抗體注射之后的腦樣品中的人α-共核蛋白水平。過(guò)表達(dá)人野生型α-共核蛋白(pdgfβ-h[wt]α-共核蛋白；d-系)的三個(gè)半月大轉(zhuǎn)基因小鼠在8天內(nèi)(第一次注射后72小時(shí)、144小時(shí)和192小時(shí))被腹膜內(nèi)注射四個(gè)50mg/kg劑量的12f4抗體。在最后注射之后的24小時(shí)，處死動(dòng)物并且用pbs灌注。使皮層和海馬均質(zhì)在pbs中并且通過(guò)差速離心制備可溶(pbs-可溶)和不可溶(pbs-不可溶)腦部分。確切來(lái)說(shuō)，去除腦，在-80℃下解剖并且冷凍。使用杜恩斯勻漿器(500rpm，30沖程)使冷凍的腦組織均質(zhì)在10體積(v/w)的pbs中，并且超聲處理1min。通過(guò)在5000g下離心5min(4℃)來(lái)去除細(xì)胞碎片。在35000rpm(ti51轉(zhuǎn)子；beckman-coulter)下將上清液(sn)離心1小時(shí)(4℃)。所得到的sn命名為可溶部分。將沉淀重新懸浮在1％tritionpbs中并且超聲處理(3×1min)。這個(gè)部分命名為不可溶部分。通過(guò)夾心elisa(invitrogen,usa)并且歸一化至蛋白質(zhì)含量來(lái)定量這兩個(gè)部分中的人α-共核蛋白水平。如在圖3a中所示，12f4治療的小鼠的皮層可溶人α-共核蛋白水平顯著減少34％(針對(duì)12f4190±29μg/g與針對(duì)媒介物對(duì)照288±36μg/g，n＝10，p<0.05，student’s測(cè)試)。類(lèi)似地，在急性12f4治療之后觀察到可溶海馬人α-共核蛋白(圖3b)-(針對(duì)12f4119±22μg/g與針對(duì)媒介物對(duì)照178±30μg/g，n＝9-10，p＝0.14,student’s測(cè)試)減少33％，并且不可溶海馬人α-共核蛋白(圖3c)-(針對(duì)12f423±3μg/g與針對(duì)媒介物對(duì)照31±6μg/g，n＝9-10，p＝0.29,student’s測(cè)試)減少26％。這些結(jié)果示出用12f4的短治療引起過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠中的腦α-共核蛋白病理減少。為了看出所觀察的人α-共核蛋白血漿上升是否與腦α-共核蛋白病理關(guān)聯(lián)，針對(duì)腦人α-共核蛋白水平繪制血漿人α-共核蛋白水平的曲線圖。在急性12f4治療之后，血漿人α-共核蛋白水平和可溶皮層人α-共核蛋白水平(圖4a)與可溶海馬人α-共核蛋白水平(圖4b)和不可溶海馬人α-共核蛋白水平(圖4c)之間存在高度顯著的相關(guān)性。當(dāng)媒介物治療時(shí)，觀察不到血漿α-共核蛋白與腦α-共核蛋白之間的相關(guān)性。實(shí)施例4：慢性12f4治療過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠之后的血漿人α-共核蛋白水平與腦人α-共核蛋白水平之間的相關(guān)性本實(shí)施例描述了確定在用12f4抗體每周注射持續(xù)六個(gè)月之后的腦樣品中的人α-共核蛋白水平。過(guò)表達(dá)人野生型α-共核蛋白a30p(thy1-h[a30p]-α-共核蛋白)(kahle等,amjpathol.,159(6):2215-2225(2001))的六個(gè)月大轉(zhuǎn)基因小鼠每周被腹膜內(nèi)注射10mg/kg嵌合12f4，持續(xù)6個(gè)月。在最后注射之后的24小時(shí)制備血漿樣品和腦樣品。在pbs中使皮層/海馬一起均質(zhì)并且通過(guò)如實(shí)施例3中所描述的差速離心制備可溶(pbs-可溶)和不可溶(pbs-不可溶)腦部分。通過(guò)如在實(shí)施例3中所描述的elisa并且歸一化至蛋白質(zhì)含量來(lái)定量這兩個(gè)部分中的人α-共核蛋白水平。通過(guò)elisa確定血漿人α-共核蛋白水平(圖5a)和嵌合12f4水平(圖5b)。如在實(shí)施例1中所描述測(cè)定血漿人α-共核蛋白水平，并且使用直接α-共核蛋白elisa，使用作為標(biāo)準(zhǔn)已知濃度的重組嵌合12f4來(lái)確定嵌合12f4血漿水平。為了看出當(dāng)用嵌合12f4慢性治療時(shí)血漿α-共核蛋白和腦α-共核蛋白是否相關(guān)，針對(duì)人腦α-共核蛋白水平繪制血漿人α-共核蛋白水平的曲線圖。在用嵌合12f4慢性治療過(guò)表達(dá)人α-共核蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠六個(gè)月之后，在血漿α-共核蛋白水平與腦α-共核蛋白水平之間存在顯著相關(guān)性。(圖5c)。實(shí)施例5：當(dāng)在食蟹猴中12f4施用時(shí)的α-共核蛋白腦脊髓液(csf)脈沖本實(shí)施例描述了確定當(dāng)12f4施用時(shí)食蟹猴的血清和腦脊髓液(csf)中的12f4水平以及csf中的內(nèi)源α-共核蛋白水平。用單一劑量的10mg/kg12f4靜脈內(nèi)注射三只雄性幼稚食蟹猴。在12f4施用之前1至12分鐘使動(dòng)物禁食，并且用于給藥后2小時(shí)csf樣品收集。在給藥后0.5小時(shí)、2小時(shí)、5小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、168小時(shí)、240小時(shí)、336小時(shí)、408小時(shí)、504小時(shí)、672小時(shí)和840小時(shí)下從股靜脈/動(dòng)脈收集血液樣品(大約0.5ml/樣品)。允許樣品凝結(jié)至少30分鐘，并且在每個(gè)時(shí)間間隔下完成樣品收集之后在環(huán)境條件下離心。分離所得到的血清并且在-50℃至-90℃下冷凍儲(chǔ)存直到運(yùn)送在干冰上用于分析。通過(guò)夾心elisa(covance)來(lái)確定12f4血清水平。還通過(guò)elisa(covance)在給藥后的各種時(shí)間點(diǎn)下從小腦延髓池收集的csf樣品中確定12f4濃度和內(nèi)源α-共核蛋白濃度。在csf樣品收集之前，用肌肉內(nèi)(im)注射0.1mg/kg乙酰丙嗪馬來(lái)酸鹽(如果必要的話用額外的維持劑量)使動(dòng)物鎮(zhèn)靜。用im注射20mg/kg氯胺酮誘導(dǎo)麻醉。刮剃頭部背面用于進(jìn)入小腦延髓池，并且用無(wú)菌領(lǐng)域內(nèi)的氯己定擦洗和氯己定溶液制備進(jìn)入部位。將動(dòng)物放在側(cè)臥的位置上，并且使頭向前直到下巴?？吭谛厣稀Ｊ褂脽o(wú)菌技術(shù)，套在針上的導(dǎo)管用來(lái)進(jìn)入小腦延髓池。在每天的樣品收集上每日三次，大約每6至9小時(shí)對(duì)動(dòng)物im施用0.01mg/kg丁丙諾啡(在csf收集之前開(kāi)始)。麻醉和csf取樣之后，在恢復(fù)生理病害的過(guò)程中密切監(jiān)測(cè)動(dòng)物，所述生理病害包括心血管/呼吸下降、體溫過(guò)低以及從手術(shù)部位過(guò)量出血。在給藥后的2小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)、168小時(shí)、336小時(shí)、504小時(shí)和672小時(shí)下從小腦延髓池收集csf樣品(大約0.2ml/樣品)，并且放在冰上。在-50℃至-90℃下冷凍儲(chǔ)存樣品直到運(yùn)送在干冰上用于分析。如對(duì)于人igg抗體所期望，csf/血清12f4比率是大約0.1％。當(dāng)12f4治療時(shí)，csfα-共核蛋白增加約5倍。(圖6)。實(shí)施例6：轉(zhuǎn)基因α-共核蛋白小鼠中的體內(nèi)微量透析本實(shí)施例描述了確定當(dāng)在轉(zhuǎn)基因α-共核蛋白a53t小鼠中12f4施用時(shí)的血漿和腦組織間隙流體(isf)中的α-共核蛋白水平。當(dāng)施用12f4或媒介物對(duì)照(對(duì)照igg抗體)時(shí)，進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因α-共核蛋白小鼠isf中的體內(nèi)微量透析。確切來(lái)說(shuō)，在異氟烷麻醉(4％至2.5％)下，在6至9個(gè)月大a53tα-共核蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠(b6；c3-tg(prp-snca*a53t)83vle/j)的紋狀體中立體定向植入引導(dǎo)插管。刮剃頭部并且用無(wú)菌解剖刀切開(kāi)皮膚以暴露顱骨。在根據(jù)paxinos和franklin的寰椎的右紋狀體之上進(jìn)行鉆孔(themousebraininstereotaxiccoordinates，第二版(2004))(坐標(biāo)，ap＝+0.5mm，ml＝-2.2mm，dv＝-2.4mm)。插入cma-12引導(dǎo)插管(cmamicrodialysisab,sweden)并且用不銹鋼螺絲和牙粘固粉固定至顱骨。將小鼠從立體定位裝置移開(kāi)并且允許在單獨(dú)的籠子中恢復(fù)。手術(shù)后五天，將小鼠移開(kāi)至一個(gè)或多個(gè)微量透析籠子。插入cma-12定做的探針(2mm，100kda截留)并且連接至具有0.6μl/min恒定流速的cma泵。在含有bsa作為滲透劑的人工csf中進(jìn)行灌注。在樣品收集之前，允許探針用相同流速平衡4至20小時(shí)。通常每?jī)尚r(shí)收集基線樣品，持續(xù)2小時(shí)。以單一劑量的30mg/kg腹膜內(nèi)注射12f4或媒介物對(duì)照。當(dāng)注射時(shí)，每小時(shí)收集樣品持續(xù)大約24小時(shí)。使用冷藏的部分收集器收集所有樣品并且在-80℃下儲(chǔ)存直到通過(guò)室內(nèi)紫外敏感的α-共核蛋白夾心elisa(emmanouilidou等,plosone6(7):e22225(2011))分析。也在給藥前和在給藥后2小時(shí)和24小時(shí)下收集血漿樣品，并且然后通過(guò)人α-共核蛋白特異性的夾心elisa(invitrogen,carlsbadca)分析。在12f4施用后2至3小時(shí)，存在細(xì)胞外的isfα-共核蛋白減少大約60％。媒介物對(duì)照沒(méi)有改變微量透析液中的isfα-共核蛋白水平。(圖7)。實(shí)施例7：抗α-共核蛋白抗體對(duì)aav-α-共核蛋白大鼠模型中的腦脊髓液(csf)α-共核蛋白濃度的作用將在腺相關(guān)病毒(aav)-α-共核蛋白大鼠模型中評(píng)價(jià)抗α-共核蛋白抗體對(duì)csfα-共核蛋白濃度的作用。aav載體將被形成表達(dá)野生型人α-共核蛋白或與家族性帕金森氏病相關(guān)的人α-共核蛋白序列變體之一(例如，a53t或a30p)。aav-α-共核蛋白載體將被注射到成年大鼠腦的具體區(qū)域(例如，紋狀體、皮層或海馬)中或注射到新生大鼠的側(cè)腦室中。一至數(shù)個(gè)月的周期將允許人α-共核蛋白的濃度在腦中增加。在此時(shí)，將通過(guò)腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)施用來(lái)用抗α-共核蛋白抗體治療大鼠，并且將在各種時(shí)間下取得csf的樣品。將通過(guò)elisa在csf樣品中測(cè)量α-共核蛋白的濃度。***本公開(kāi)不限于所描述的具體實(shí)施方案的范圍，所述具體實(shí)施方案旨在作為單一說(shuō)明本公開(kāi)的單獨(dú)方面，并且功能上等效的任何組合物或方法處于本公開(kāi)的范圍內(nèi)。確實(shí)，除了本文示出和描述的那些之外，根據(jù)以上描述和所附附圖，本公開(kāi)的各種修改將對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言變得顯而易見(jiàn)。此類(lèi)修改旨在處于所附權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。在本說(shuō)明書(shū)中提到的所有出版物和專(zhuān)利申請(qǐng)以引用的方式并入本文，其程度如同具體地和單獨(dú)地指出每個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠暾?qǐng)以引用的方式并入。序列表<110>生物國(guó)際神經(jīng)系統(tǒng)科學(xué)公司a·魏霍芬t·恩格貝爾j·格林姆<120>抗α-共核蛋白抗體診斷腦中的α-共核蛋白的升高水平的用途<130>2159.356pc01<140>tobeassigned<141>herewith<150>61/554,924<151>11-02-2011<160>9<170>patentinversion3.5<210>1<211>140<212>prt<213>homosapiens<220><223>alpha-synuclein<400>1metaspvalphemetlysglyleuserlysalalysgluglyvalval151015alaalaalaglulysthrlysglnglyvalalaglualaalaglylys202530thrlysgluglyvalleutyrvalglyserlysthrlysgluglyval354045valhisglyvalalathrvalalaglulysthrlysgluglnvalthr505560asnvalglyglyalavalvalthrglyvalthralavalalaglnlys65707580thrvalgluglyalaglyserilealaalaalathrglyphevallys859095lysaspglnleuglylysasnglugluglyalaproglngluglyile100105110leugluaspmetprovalaspproaspasnglualatyrglumetpro115120125serglugluglytyrglnasptyrgluprogluala130135140<210>2<211>113<212>prt<213>artificialsequence<220><223>heavychainvariableregion(vh)<400>2gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalgluproglygly151015serleuargleusercysalavalserglypheasppheglulysala202530trpmetsertrpvalargglnalaproglyglnglyleuglntrpval354045alaargilelysserthralaaspglyglythrthrsertyralaala505560provalgluglyargpheileileserargaspaspserargasnmet65707580leutyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr859095tyrcysthrseralahistrpglyglnglythrleuvalthrvalser100105110ser<210>3<211>108<212>prt<213>artificialsequence<220><223>lightchainvariableregion(vl)<400>3glnservalleuthrglnproproservalservalserproglygln151015thralaargilethrcysserglyglualaleuprometglnpheala202530histrptyrglnglnargproglylysalaprovalilevalvaltyr354045lysaspsergluargproserglyvalprogluargpheserglyser505560serserglythrthralathrleuthrilethrglyvalglnalaglu65707580aspglualaasptyrtyrcysglnserproaspserthrasnthrtyr859095gluvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu100105<210>4<211>5<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-1(vhcdr1)<400>4lysalatrpmetser15<210>5<211>19<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-2(vhcdr2)<400>5argilelysserthralaaspglyglythrthrsertyralaalapro151015valglugly<210>6<211>2<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-3(vhcdr3)<400>6alahis1<210>7<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-1(vlcdr1)<400>7serglyglualaleuprometglnphealahis1510<210>8<211>7<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-2(vlcdr2)<400>8lysaspsergluargproser15<210>9<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>complementaritydeterminingregion-3(vlcdr3)<400>9glnserproaspserthrasnthrtyrgluval1510當(dāng)前第1頁(yè)12