本發(fā)明屬于藥物成分的分析
技術領域：
，涉及一種血必凈注射液中五類化合物的檢測方法，具體涉及一種血必凈注射液中紅花黃酮類化合物、赤芍單萜糖苷類化合物、丹參兒茶酚類化合物、川芎和當歸苯酞類化合物以及其它化合物共47個化合物的檢測方法。
背景技術：
：膿毒癥是由感染引起的宿主失調性反應導致的致命性器官功能障礙(sofa評分≥2)的危重疾病。然而，目前膿毒癥的治療藥物仍然非常有限，新藥研發(fā)成功率低。血必凈注射液是由天津紅日藥業(yè)股份有限公司研制生產(chǎn)的抗膿毒癥中成藥，2004年獲中國fda批準上市。該中藥制劑由紅花、赤芍、丹參、川芎和當歸五味中藥所組復方，經(jīng)提取制備而成，具有活血化瘀、疏通經(jīng)絡、潰散毒邪的功效。作為膿毒癥常規(guī)治療中的加載藥物，血必凈注射液在臨床上被大量使用，與抗生素(抗感染)等化藥形成藥效互補，是中國抗膿毒癥用藥特色之一。信息學研究結果提示有四類來自血必凈注射液組成中藥的成分可能具有與血必凈注射液抗膿毒癥療效相關的藥效活性，包括：第一類成分是紅花黃酮類成分(具有抗炎、抗氧化、抗凝血和保護神經(jīng)細胞等藥效活性)；第二類成分是赤芍單萜糖苷類成分(具有抗炎、抗氧化、抗凝血和保護神經(jīng)細胞等藥效活性)；第三類成分是丹參兒茶酚類成分(具有抗炎、抗氧化、保護內皮細胞和心肌細胞等藥效活性)；第四類成分是川芎和當歸苯酞類成分(具有抗炎、抗氧化、擴張血管、保護神經(jīng)細胞等藥效活性)。除此以外的血必凈注射液中其它化學成分劃歸為第五類成分，這些成分也可能與血必凈注射液的療效相關。血必凈注射液產(chǎn)品的質量均一性對血必凈注射液臨床用藥的有效性和安全性進行系統(tǒng)再評價至關重要，而目前血必凈注射液的廠方質控標準的化合物僅為芍藥苷(1.0–1.7mg/ml)和羥基紅花黃色素a(0.2–0.5mg/ml)(見chengc,linj-z,lil,yangj-l,jiaw-w,huangy-h,duf-f,wangf-q,lim-j,liy-f,xuf,zhangn-t,olaleyee.olajide,suny,lij,sunc-h,zhangg-p,andlic(2016)pharmacokineticsanddispositionofmonoterpeneglycosidesderivedfrompaeonialactifloraroots(chishao)afterintravenousdosingofantisepticxuebijinginjectioninhumansubjectsandrats.actapharmacolsin37:530–544.)，這兩個成分僅來自于赤芍和紅花，因此對于血必凈注射液的質量均一性的評價是遠遠不夠的。目前，現(xiàn)有文獻報道對血必凈注射液中的某些成分建立了檢測方法，但這些方法存在以下不足：(1)血必凈注射液中一些含量相對較高、可能具有與血必凈注射液療效相關的化合物并未列入一同檢測目標對象，例如：芍藥內酯苷、阿魏酸等；(2)基于本研究團隊前期的人體藥代動力學研究結果，血必凈注射液中某些化學成分在制劑中含量不高，但在人體內暴露水平(體內藥物濃度)相對較高，例如：洋川芎內酯g雖然在注射液中含量不及洋川芎內酯i，但是洋川芎內酯g是靜注給藥血必凈注射液后人體內暴露最顯著的川芎當歸苯酞類成分，因此這個化合物對血必凈注射液臨床有效性和臨床用藥的安全性評估也是不容忽視的?？梢?，有必要建立能夠全面分析血必凈注射液中各類化學成分含量的分析方法，對于提高制劑加工生產(chǎn)中的質控水平、臨床合理用藥均具有積極意義。技術實現(xiàn)要素：鑒于以上所述現(xiàn)有技術的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種血必凈注射液中五類化合物的檢測方法，用于解決現(xiàn)有技術中缺乏全面地檢測血必凈注射液中的化學成分的方法的問題。為實現(xiàn)上述目的及其他相關目的，本發(fā)明第一方面提供一種血必凈注射液中五類化合物的檢測方法，包括以下步驟：1)將血必凈注射液采用有機溶劑稀釋后，制備待測液；2)分別配制標準溶液a、標準溶液b和標準溶液c，所述標準溶液a為血必凈注射液中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分標準品的溶液，所述標準溶液b為血必凈注射液中第三類化合物中任意一種或多種成分標準品的溶液，所述標準溶液c為血必凈注射液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分標準品的溶液；3)將步驟1)中獲得的待測液和步驟2)中配制的標準溶液a，采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)同時測定第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分的含量；4)將步驟1)中獲得的待測液和步驟2)中配制的標準溶液b，采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)同時測定第三類化合物中任意一種或多種成分的含量；5)將步驟1)中獲得的待測液和步驟2)中配制的標準溶液c，采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)同時測定第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分的含量。優(yōu)選地，所述第一類化合物為7種紅花黃酮類化合物成分，包括有山奈酚-3-o-葡萄糖苷(cas號為480-10-4)、野黃芩苷(cas號為27740-01-8)、槲皮素-3-o-葡萄糖苷(cas號為21637-25-2)、山奈酚-3-o-蕓香糖苷(cas號為17650-84-9)、山奈酚-3-o-槐糖苷(cas號為19895-95-5)、槲皮素-3-o-蕓香糖苷(cas號為153-18-4)、羥基紅花黃色素a(cas號為78281-02-4)。優(yōu)選地，所述第二類化合物為8種赤芍單萜糖苷類化合物成分，包括有芍藥內酯苷(cas號為39011-90-0)、芍藥苷(cas號為23180-57-6)、氧化芍藥苷(cas號為39011-91-1)、苯甲酰芍藥苷(cas號為38642-49-8)、牡丹皮苷c(cas號為172760-03-1)、苯甲酰氧化芍藥苷(cas號為72896-40-3)、牡丹皮苷j(cas號為262350-52-7)、沒食子酰芍藥苷(cas號為122965-41-7)。優(yōu)選地，所述第三類化合物為9種丹參兒茶酚類化合物成分，包括有原兒茶醛(cas號為139-85-5)、原兒茶酸(cas號為99-50-3)、丹參素(cas號為76822-21-4)、迷迭香酸(cas號為20283-92-5)、丹酚酸d(cas號為142998-47-8)、丹酚酸c(cas號為115841-09-3)、丹酚酸a(cas號為96574-01-5)、紫草酸(cas號為28831-65-4)、丹酚酸b(cas號為115939-25-8)。優(yōu)選地，所述第四類化合物為7種川芎和當歸苯酞類化合物成分，包括有洋川芎內酯a(cas號為62006-39-7)、3-羥基-3-丁基苯酞(自制)、洋川芎內酯g(cas號為94530-85-5)、洋川芎內酯i(cas號為94596-28-8)、洋川芎內酯h(cas號為94596-27-7)、洋川芎內酯n(自制)、開環(huán)洋川芎內酯i(自制)。更優(yōu)選地，所述3-羥基-3-丁基苯酞的化學結構式為：更優(yōu)選地，所述洋川芎內酯n的化學結構式為：更優(yōu)選地，所述開環(huán)洋川芎內酯i的化學結構式為：優(yōu)選地，所述第五類化合物為16種其它類化合物成分，包括有尿嘧啶(cas號為66-22-8)、丁二酸(cas號為110-15-6)、苯甲酸(cas號為65-85-0)、腺嘌呤(cas號為73-24-5)、對羥基苯甲酸(cas號為99-96-7)、對香豆酸(cas號為501-98-4)、苯丙氨酸(cas號為150-30-1)、沒食子酸(cas號為149-91-7)、咖啡酸(cas號為331-39-5)、阿魏酸(cas號為1135-24-6)、沒食子酰乙酯(cas號為831-61-8)、尿苷(cas號為58-96-8)、腺苷(cas號為58-61-7)、鳥苷(cas號為118-00-3)、兒茶素(cas號為154-23-4)、綠原酸(cas號為327-97-9)。優(yōu)選地，步驟1)中，所述有機溶劑為體積百分比為5-15％的甲醇水溶液。更優(yōu)選地，所述有機溶劑為體積百分比為10％的甲醇水溶液。優(yōu)選地，步驟1)中，所述血必凈注射液與有機溶劑的體積比為1：1-10000。更優(yōu)選地，所述血必凈注射液與有機溶劑的體積比為1：10-1000。優(yōu)選地，步驟2)中，所述標準溶液a、標準溶液b和標準溶液c分別采用有機溶劑稀釋后定容，配制而成。更優(yōu)選地，所述有機溶劑為體積百分比為5-15％的甲醇水溶液。進一步優(yōu)選地，所述有機溶劑為體積百分比為10％的甲醇水溶液。優(yōu)選地，步驟2)中，所述標準溶液中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。所述nm為nmol/l。優(yōu)選地，步驟3)中，所述采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)同時測定第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分的含量，包括以下步驟：a1)采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液a中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分進行分離；a2)采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液a中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。更優(yōu)選地，步驟a1)中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：水-甲醇溶液(含甲酸)，其中，a相為水(含20-30mm甲酸)，b相為甲醇(含20-30mm甲酸)；分析時間：13min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：水-甲醇溶液(含25mm甲酸)，其中，a相為水(含25mm甲酸)，b相為甲醇(含25mm甲酸)；分析時間：13min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述梯度洗脫程序的具體為(見表1)：0-8.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；8.0-11.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；11.0-13.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。表1時間(min)溶劑a相(v/v％)溶劑b相(v/v％)curve0.0982-8.03070611.0298113.09821表1的curve一欄中數(shù)值含義如下(參見圖1)：當溶劑b相洗脫比例從t1時的b1增加到t2時的b2時，若curve設為1，表示t1時b1瞬間增加到b2，再維持至t2；若curve設為11，b1將維持至t2再瞬間增加到b2；若curve設為6，b1則勻速增加到b2。更優(yōu)選地，步驟a2)中，所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)的數(shù)值見表2。所述測定參數(shù)包括有保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間、負離子模式優(yōu)化去簇電壓(dp)、碰撞電壓(ce)、碰撞室射出電壓(cxp)。表2測定參數(shù)的數(shù)值表進一步優(yōu)選地，所述測定參數(shù)中保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間的數(shù)值見表3。表3優(yōu)選地，步驟4)中，所述采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)同時測定第三類化合物中任意一種或多種成分的含量，包括以下步驟：b1)采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的超高效液相色譜(uplc)對待測液和標準溶液b中第三類化合物中任意一種或多種成分進行分離；b2)采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的高分辨質譜(q-tofms)，確定待測液和標準溶液b中第三類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第三類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。更優(yōu)選地，步驟b1)中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：水-甲醇溶液(含甲酸)，其中，a相為水(含20-30mm甲酸)，b相為甲醇(含20-30mm甲酸)；分析時間：20min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：水-甲醇溶液(含25mm甲酸)，其中，a相為水(含25mm甲酸)，b相為甲醇(含25mm甲酸)；分析時間：20min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述梯度洗脫程序的具體為(見表4)：0-1.0min，a相：b相體積比為98：2-98：2；1.0-15.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；15.0-17.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；17.0-20.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。表4時間(min)溶劑a相(v/v％)溶劑b相(v/v％)curve0.0982-1.0982615.03070617.0298120.09821更優(yōu)選地，步驟b2)中，所述高分辨質譜(q-tofms)為電噴霧離子源高分辨串聯(lián)飛行時間質譜。更優(yōu)選地，步驟b2)中，所述高分辨質譜(q-tofms)的測定條件為(見表5-6)：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；毛細管電壓(capillaryvoltage)：2.5kv；錐孔電壓(samplingconevoltage)：35v；萃取錐孔電壓(extractionconevoltage)：5v；離子源溫度(souretemperature)：120℃；去溶劑化溫度(desolvationtemperature)：400℃；錐孔氣體流量(conegasflow)：80l/hr；去溶劑化氣體流量(desolvationgasflow)：500l/hr；數(shù)據(jù)采集方式：全掃描模式；[m-h]–峰采集范圍：50-1200da；保留時間(tr)、[m-h]–峰提取值見表6。表5表6化合物tr(min)[m-h]–(m/z)原兒茶醛5.98±0.1137.0239±0.002原兒茶酸4.97±0.1153.0188±0.002丹參素4.72±0.1197.0450±0.002迷迭香酸11.09±0.1359.0767±0.002丹酚酸d10.64±0.1417.0822±0.002丹酚酸c13.90±0.1491.0978±0.002丹酚酸a12.11±0.1493.1135±0.002紫草酸10.81±0.1493.1135±0.002/[m-h-co2]–丹酚酸b11.16±0.1717.1456±0.002進一步優(yōu)選地，所述保留時間(tr)、[m-h]–峰提取值見表7。表7化合物tr(min)[m-h]–(m/z)原兒茶醛5.98137.0239原兒茶酸4.97153.0188丹參素4.72197.0450迷迭香酸11.09359.0767丹酚酸d10.64417.0822丹酚酸c13.90491.0978丹酚酸a12.11493.1135紫草酸10.81493.1135/[m-h-co2]–丹酚酸b11.16717.1456優(yōu)選地，步驟5)中，所述采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)同時測定第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分的含量，包括以下步驟：c1)采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液c中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分進行分離；c2)采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液c中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。更優(yōu)選地，步驟c1)中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：甲醇-水溶液(含甲酸、醋酸鋰)，其中，a相為甲醇-水溶液(體積比v/v：0.5：99.5-1.5：98.5，含0.5-1.5mm甲酸、20-30μm醋酸鋰)，b相為甲醇-水溶液(體積比v/v：0.5：99.5-1.5：98.5，含0.5-1.5mm甲酸、20-30μm醋酸鋰)；分析時間：8min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：甲醇-水溶液(含甲酸、醋酸鋰)，其中，a相為甲醇-水溶液(體積比v/v：1：99，含1.0mm甲酸、25μm醋酸鋰)，b相為甲醇-水溶液(體積比v/v：1：99，含1.0mm甲酸、25μm醋酸鋰)；分析時間：8min；梯度洗脫。進一步優(yōu)選地，所述梯度洗脫程序的具體為(見表8)：0-7.0min，a相：b相體積比為94：6-5：95；7.0-8.0min，a相：b相體積比為5：95-94：6。表8時間(min)溶劑a相(v/v％)溶劑b相(v/v％)curve0.0946-7.059568.09461更優(yōu)選地，步驟c2)中，所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：正離子電噴霧電離模式(esi+)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)的數(shù)值見表9。所述測定參數(shù)包括有保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間、負離子模式優(yōu)化去簇電壓(dp)、碰撞電壓(ce)、碰撞室射出電壓(cxp)。表9進一步優(yōu)選地，所述測定參數(shù)中保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間的數(shù)值見表10。表10化合物tr(min)q1(m/z)q3(m/z)scantime(ms)洋川芎內酯a6.58193.1137.1253-羥基-3-丁基苯酞6.12213.0189.025洋川芎內酯g6.20215.0191.025洋川芎內酯i5.10231.1202.325洋川芎內酯h5.29231.1184.025洋川芎內酯n4.72233.1171.225開環(huán)洋川芎內酯i4.39243.3207.225腺嘌呤1.35136.1118.925腺苷2.15268.0136.025上述外標法是指，利用檢測到的標準溶液中血必凈注射液中五類化合物成分的標準品含量與其色譜峰面積的線性關系，得到相應線性回歸方程，從而由已知含量的標準溶液計算待測液中被測物的含量，進行定量檢測。如上所述，本發(fā)明提供的一種血必凈注射液中五類化合物的檢測方法，針對目前報道的血必凈注射液化學成分檢測化合物數(shù)目較少的現(xiàn)狀，能夠同時檢測血必凈注射液中47種五類化合物，包括7種紅花黃酮類化合物、8種赤芍單萜糖苷類化合物、9種丹參兒茶酚類化合物、7種川芎和當歸苯酞類化合物以及16種其它化合物。本發(fā)明所建檢測方法更全面地反映血必凈注射液的質量均一性，比目前已有的血必凈注射液分析方法有更強的分析能力，能夠更全面地檢測血必凈注射液中的化學成分，有效提高血必凈注射液的質控水平，也有助于合理選擇用藥批次用于血必凈注射液臨床有效性和安全性再評價。附圖說明圖1顯示為本發(fā)明的超高效液相色譜中curve數(shù)值設定曲線圖。圖2顯示為本發(fā)明的血必凈注射液中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物的液相色譜圖，其中，1：山柰酚-3-o-葡萄糖苷；2：野黃芩苷；3：槲皮素-3-o-葡萄糖苷；4：山柰酚-3-o-蕓香糖苷；5：山柰酚-3-o-槐糖苷；6：槲皮素-3-o-蕓香糖苷；7：羥基紅花黃色素a；8：芍藥內酯苷；9：芍藥苷；10：氧化芍藥苷；11：苯甲酰芍藥苷；12：牡丹皮苷c；13：苯甲酰氧化芍藥苷；14：牡丹皮苷j；15：沒食子酰芍藥苷；32：尿嘧啶；33：丁二酸；34：苯甲酸；36：對羥基苯甲酸；37：對香豆酸；38：苯丙氨酸；39：沒食子酸；40：咖啡酸；41：阿魏酸；42：沒食子酰乙酯；43：尿苷；45：鳥苷；46：兒茶素；47：綠原酸。圖3顯示為本發(fā)明的血必凈注射液中第三類化合物成分的液相色譜圖，其中，16：原兒茶醛；17：原兒茶酸；18：丹參素；19：迷迭香酸；20：丹酚酸d；21：丹酚酸c；22：丹酚酸a；23：紫草酸；24：丹酚酸b。圖4顯示為本發(fā)明的血必凈注射液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分的液相色譜圖，其中，25：洋川芎內酯a；26：3-羥基-3-丁基苯酞；27：洋川芎內酯g；28：洋川芎內酯i；29：洋川芎內酯h；30：洋川芎內酯n；31：開環(huán)洋川芎內酯i；35：腺嘌呤；44：腺苷。具體實施方式下面結合具體實施例進一步闡述本發(fā)明，應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。以下通過特定的具體實例說明本發(fā)明的實施方式，本領域技術人員可由本說明書所揭露的內容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實施方式加以實施或應用，本說明書中的各項細節(jié)也可以基于不同觀點與應用，在沒有背離本發(fā)明的精神下進行各種修飾或改變。須知，下列實施例中未具體注明的工藝設備或裝置均采用本領域內的常規(guī)設備或裝置；所有壓力值和范圍都是指相對壓力。此外應理解，本發(fā)明中提到的一個或多個方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后還可以存在其他方法步驟或在這些明確提到的步驟之間還可以插入其他方法步驟，除非另有說明；還應理解，本發(fā)明中提到的一個或多個設備/裝置之間的組合連接關系并不排斥在所述組合設備/裝置前后還可以存在其他設備/裝置或在這些明確提到的兩個設備/裝置之間還可以插入其他設備/裝置，除非另有說明。而且，除非另有說明，各方法步驟的編號僅為鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實施的范圍，其相對關系的改變或調整，在無實質變更技術內容的情況下，當亦視為本發(fā)明可實施的范疇。以下實施例使用的試劑和儀器如下：1、試劑水(純水，由純水機制備)；甲醇(≥99.9％、sigma-aldrich公司)；47種化合物標準品(＞98％、購買自售賣中藥標準品的公司或由實驗室自制)；甲酸、醋酸鋰(99.999％、sigma-aldrich公司)。血必凈注射液，由天津紅日藥業(yè)股份有限公司提供，共9批血必凈注射液，批號見下表11。表11血必凈注射液批號編號批號編號批號編號批號1150428141507081715101312150527151508181815113013150618161509231915120812、儀器和色譜柱超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)由watersuplc系統(tǒng)超高液相色譜儀以及ab公司生產(chǎn)的api4000三重四極桿質譜組成，系統(tǒng)工作軟件為empower(uplc)和analyst1.4.1(質譜)；超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)由美國waters公司生產(chǎn)的acquitytmuplc系列超高液相色譜儀以及waters公司生產(chǎn)的synaptg2hdms型電噴霧離子源高分辨串聯(lián)飛行時間質譜儀組成，系統(tǒng)工作軟件為masslynxv4.0.1(美國)；watersacquityhsst3色譜柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)。實施例11、樣品前處理移取一定量的血必凈注射液，采用體積百分比為5-15％的甲醇水溶液稀釋1-10000倍，制備待測液。分別移取一定量的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分，采用體積百分比為5-15％的甲醇水溶液稀釋1-10000倍，制備標準溶液a，標準溶液a中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。分別移取一定量的第三類化合物中任意一種或多種成分，采用體積百分比為5-15％的甲醇水溶液稀釋1-10000倍，制備標準溶液b，標準溶液b中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。分別移取一定量的第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分，采用體積百分比為5-15％的甲醇水溶液稀釋1-10000倍，制備標準溶液c，標準溶液c中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。2、測定2.1第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物的測定采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液a中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分進行分離，并采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液a中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。具體測定結果見圖1。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：水-甲醇溶液(含甲酸)，其中，a相為水(含20-30mm甲酸)，b相為甲醇(含20-30mm甲酸)；分析時間：13min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-8.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；8.0-11.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；11.0-13.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)的數(shù)值見表2。2.2第三類化合物的測定采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的超高效液相色譜(uplc)對待測液和標準溶液b中第三類化合物中任意一種或多種成分進行分離，并采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的高分辨質譜(q-tofms)，確定待測液和標準溶液b中第三類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第三類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。具體測定結果見圖2。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：水-甲醇溶液(含甲酸)，其中，a相為水(含20-30mm甲酸)，b相為甲醇(含20-30mm甲酸)；分析時間：20min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-1.0min，a相：b相體積比為98：2-98：2；1.0-15.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；15.0-17.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；17.0-20.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。所述高分辨質譜(q-tofms)為電噴霧離子源高分辨串聯(lián)飛行時間質譜。所述高分辨質譜(q-tofms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；毛細管電壓(capillaryvoltage)：2.5kv；錐孔電壓(samplingconevoltage)：35v；萃取錐孔電壓(extractionconevoltage)：5v；離子源溫度(souretemperature)：120℃；去溶劑化溫度(desolvationtemperature)：400℃；錐孔氣體流量(conegasflow)：80l/hr；去溶劑化氣體流量(desolvationgasflow)：500l/hr；數(shù)據(jù)采集方式：全掃描模式；[m-h]–峰采集范圍：50-1200da；保留時間(tr)、[m-h]–峰提取值見表6。2.3第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分的測定采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液c中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分進行分離；并采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液c中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。具體測定結果見圖3。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：t3柱；柱溫：30-50℃；流速：0.2-0.4ml/min；進樣量：4-6μl；流動相：甲醇-水溶液(含甲酸、醋酸鋰)，其中，a相為甲醇-水溶液(體積比v/v：0.5：99.5-1.5：98.5，含0.5-1.5mm甲酸、20-30μm醋酸鋰)，b相為甲醇-水溶液(體積比v/v：0.5：99.5-1.5：98.5，含0.5-1.5mm甲酸、20-30μm醋酸鋰)；分析時間：8min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-7.0min，a相：b相體積比為94：6-5：95；7.0-8.0min，a相：b相體積比為5：95-94：6。所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：正離子電噴霧電離模式(esi+)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)的數(shù)值見表9。實施例21、樣品前處理移取一定量的血必凈注射液，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備待測液。分別移取一定量的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備標準溶液，標準溶液中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。2、測定采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分進行分離，并采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：水-甲醇溶液(含25mm甲酸)，其中，a相為水(含25mm甲酸)，b相為甲醇(含25mm甲酸)；分析時間：13min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-8.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；8.0-11.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；11.0-13.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)中負離子模式優(yōu)化去簇電壓(dp)、碰撞電壓(ce)、碰撞室射出電壓(cxp)的數(shù)值見表2，測定參數(shù)中保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間的數(shù)值見表3。3、測定方法的線性關系、檢出限和定量限配制各成分的濃度范圍為12.3-9000nm的標準溶液，分別進行uplc/ms/ms檢測，以色譜峰面積為縱坐標(y軸)，其相應血必凈注射液中第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物成分的質量濃度為橫坐標(x軸)，進行回歸分析，得到回歸方程及其相關系數(shù)，如表12所示。由表12可知，上述回歸方程的在相應濃度范圍內進樣時線性關系良好，相關系數(shù)r>0.99。對標準溶液中的目標物響應信號，采用最低濃度標樣重復進樣3次，進行uplc/ms/ms分析。表12工作曲線和定量下限化合物線性范圍(nm)回歸方程相關系數(shù)(r)定量下限(nm)山柰酚-3-o-葡萄糖苷37–9000y＝742x+80500.99937野黃芩苷12.3–1000y＝285x+0.9810.99112.3槲皮素-3-o-葡萄糖苷37–3000y＝1070x-49300.99937山柰酚-3-o-蕓香糖苷37–9000y＝789x+38000.99837山柰酚-3-o-槐糖苷12.3–9000y＝935x+460.99812.3槲皮素-3-o-蕓香糖苷12.3–3000y＝1020x-1220.99912.3羥基紅花黃色素a111–9000y＝24.7x-2290.997111芍藥內酯苷37–3000y＝719x+110000.99837芍藥苷37–3000y＝1410x+16000.99837氧化芍藥苷37–3000y＝1180x+77700.99837苯甲酰芍藥苷111–9000y＝270x-80100.999111牡丹皮苷c37–3000y＝994x-25100.99937苯甲酰氧化芍藥苷12.3–9000y＝1270x-93600.99812.3牡丹皮苷j37–9000y＝291x-26100.99937沒食子酰芍藥苷37–3000y＝1650x+63100.99837尿嘧啶111–9000y＝329x+150000.998111丁二酸37–9000y＝206x+61200.99937苯甲酸1000–9000y＝47.2x-61100.9971000對羥基苯甲酸37–3000y＝786x+211000.99937對香豆酸37–3000y＝665x+75900.99837苯丙氨酸37–3000y＝78.8x+47.80.99937沒食子酸37–9000y＝453x+105000.99937咖啡酸37–3000y＝574x+256000.99937阿魏酸37–3000y＝146x+12000.99837沒食子酰乙酯37–3000y＝1350x+247000.99837尿苷37–3000y＝28.2x+2540.99737鳥苷37–3000y＝563x+34900.99737兒茶素37–3000y＝218x+26000.99937綠原酸37–3000y＝1670x+319000.999374、加樣回收率和精密度考察血必凈注射液中含量較高的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中成分測定方法的準確度和精密度。所考察化合物用血必凈空白溶媒配制“人造血必凈”，目標制劑中各成分的濃度為市售血必凈注射液中該成分平均濃度的50％、100％、150％，各濃度“人造血必凈”配制3份供試品。分析方法的加樣回收率用“人造血必凈”注射液成分實測濃度與其標示濃度之比表示，分析方法的精密度用同濃度3份“人造血必凈”供試品分析結果的rsd值表示。選取第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中含量較高的成分，按照上述方式進行配制后，進行測定，具體結果見表13。由表13可知，選取的第一類化合物、第二類化合物、除腺嘌呤和腺苷外的第五類化合物中成分的加樣平均回收率在78.1-122％之間，表明本方法加樣回收率良好，精密度為0.10-13.2％，表明本方法重復性良好。表13實施例31、樣品前處理移取一定量的血必凈注射液，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備待測液。分別移取一定量的第三類化合物中任意一種或多種成分，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備標準溶液，標準溶液中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。2、測定采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的超高效液相色譜(uplc)對待測液和標準溶液中第三類化合物中任意一種或多種成分進行分離，并采用超高效液相-高分辨質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/q-tofms)中的高分辨質譜(q-tofms)，確定待測液和標準溶液中第三類化合物中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第三類化合物中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：水-甲醇溶液(含25mm甲酸)，其中，a相為水(含25mm甲酸)，b相為甲醇(含25mm甲酸)；分析時間：20min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-1.0min，a相：b相體積比為98：2-98：2；1.0-15.0min，a相：b相體積比為98：2-30：70；15.0-17.0min，a相：b相體積比為30：70-2：98；17.0-20.0min，a相：b相體積比為2：98-98：2。所述高分辨質譜(q-tofms)為電噴霧離子源高分辨串聯(lián)飛行時間質譜。所述高分辨質譜(q-tofms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：負離子電噴霧電離模式(esi-)；毛細管電壓(capillaryvoltage)：2.5kv；錐孔電壓(samplingconevoltage)：35v；萃取錐孔電壓(extractionconevoltage)：5v；離子源溫度(souretemperature)：120℃；去溶劑化溫度(desolvationtemperature)：400℃；錐孔氣體流量(conegasflow)：80l/hr；去溶劑化氣體流量(desolvationgasflow)：500l/hr；數(shù)據(jù)采集方式：全掃描模式；[m-h]–峰采集范圍：50-1200da；保留時間(tr)、[m-h]–峰提取值見表7。3、測定方法的線性關系、檢出限和定量限配制各成分的濃度范圍為12.3-9000nm的標準溶液，分別進行uplc/q-tofms檢測，以色譜峰面積為縱坐標(y軸)，其相應血必凈注射液中第三類化合物成分的質量濃度為橫坐標(x軸)，進行回歸分析，得到回歸方程及其相關系數(shù)，如表14所示。由表14可知，上述回歸方程的在相應濃度范圍內進樣時線性關系良好，相關系數(shù)r>0.99。對標準溶液中的目標物響應信號，采用最低濃度標樣重復進樣3次，進行uplc/q-tofms分析。表14工作曲線和定量下限化合物線性范圍(nm)回歸方程相關系數(shù)(r)定量下限(nm)原兒茶醛1000–9000y＝0.395x+4110.9991000原兒茶酸333–9000y＝0.049x+1.340.999333丹參素333–9000y＝0.182x-14.10.999333迷迭香酸333–9000y＝0.820x-3.940.997333丹酚酸d333–9000y＝0.613x+59.50.999333丹酚酸c333–9000y＝0.218x-56.40.998333丹酚酸a333–9000y＝0.309x+5.010.999333紫草酸333–9000y＝0.565x+26.40.997333丹酚酸b333–3000y＝0.329x+4.500.9923334、加樣回收率和精密度選擇血必凈注射液中含量較高的第三類化合物成分考察方法的準確度和精密度。所考察化合物用血必凈空白溶媒配制“人造血必凈”，目標制劑中各化合物的濃度為市售血必凈注射液中該化合物平均濃度的50％、100％、150％，各濃度“人造血必凈”配制3份供試品。分析方法的加樣回收率用“人造血必凈”注射液成分實測濃度與其標示濃度之比表示，分析方法的精密度用同濃度3份“人造血必凈”供試品分析結果的rsd值表示。選取第三類化合物中含量較高的成分，按照上述方式進行配制后，進行測定，具體結果見表15。由表15可知，選取的第三類化合物成分的加樣平均回收率在92.7-119％之間，表明本方法加樣回收率良好，精密度為0.59-5.89％，表明本方法重復性良好。表15實施例41、樣品前處理移取一定量的血必凈注射液，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備待測液。分別移取一定量的第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分，采用體積百分比為10％的甲醇水溶液稀釋10-1000倍，制備標準溶液，標準溶液中各成分的濃度范圍為12.3-9000nm。2、測定采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的超高效液相色譜(uplc)，對待測液和標準溶液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分進行分離；并采用超高效液相-質譜聯(lián)用分析系統(tǒng)(uplc/ms/ms)中的三重四極桿質譜(ms/ms)，確定待測液和標準溶液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分，采用外標法同時對待測液中的第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分中任意一種或多種成分的含量進行定量檢測。其中，所述超高效液相色譜(uplc)的色譜條件為：色譜柱：watersacquityhsst3柱(100mm×2.1mmid，1.8μm)；柱溫：40℃；流速：0.3ml/min；進樣量：5μl；流動相：甲醇-水溶液(含甲酸、醋酸鋰)，其中，a相為甲醇-水溶液(體積比v/v：1：99，含1.0mm甲酸、25μm醋酸鋰)，b相為甲醇-水溶液(體積比v/v：1：99，含1.0mm甲酸、25μm醋酸鋰)；分析時間：8min；梯度洗脫。所述梯度洗脫程序的具體為：0-7.0min，a相：b相體積比為94：6-5：95；7.0-8.0min，a相：b相體積比為5：95-94：6。所述三重四極桿質譜(ms/ms)的測定條件為：離子源：esi源；檢測模式：正離子電噴霧電離模式(esi+)；工作模式：選擇反應監(jiān)測(srm)；測定參數(shù)中正離子模式優(yōu)化去簇電壓(dp)、碰撞電壓(ce)、碰撞室射出電壓(cxp)的數(shù)值見表9，測定參數(shù)中保留時間(tr)、q1掃描范圍、q3掃描范圍、掃描時間的數(shù)值見表10。3、測定方法的線性關系、檢出限和定量限配制各成分的濃度范圍為1.37-9000nm的標準溶液，分別進行uplc/ms/ms檢測，以色譜峰面積為縱坐標(y軸)，其相應血必凈注射液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分的質量濃度為橫坐標(x軸)，進行回歸分析，得到回歸方程及其相關系數(shù)，如表16所示。由表16可知，上述回歸方程的在相應濃度范圍內進樣時線性關系良好，相關系數(shù)r>0.99。對標準溶液中的目標物響應信號，采用最低濃度標樣重復進樣3次，進行uplc/ms/ms分析。表16工作曲線和定量下限化合物線性范圍(nm)回歸方程相關系數(shù)(r)定量下限(nm)洋川芎內酯a1.37–3000y＝1150x+12700.9971.373-羥基-3-丁基苯酞12.3–9000y＝89.7x+2820.99612.3洋川芎內酯g12.3–9000y＝91.8x+1690.99812.3洋川芎內酯i12.3–9000y＝350x+2940.99412.3洋川芎內酯h1.37–1000y＝1000x+1890.9961.37洋川芎內酯n4.1–1000y＝281x+8090.9974.1開環(huán)洋川芎內酯i12.3–9000y＝127x+8690.99812.3腺嘌呤4.1–3000y＝936x+21300.9974.1腺苷1.37–3000y＝3400x+10100.9951.374、加樣回收率和精密度考察血必凈注射液中第四類化合物、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分測定方法的準確度和精密度。所考察化合物用血必凈空白溶媒配制“人造血必凈”，目標制劑中各化合物的濃度為市售血必凈注射液中該化合物平均濃度的50％、100％、150％，各濃度“人造血必凈”配制3份供試品。分析方法的加樣回收率用“人造血必凈”注射液成分實測濃度與其標示濃度之比表示，分析方法的精密度用同濃度3份“人造血必凈”供試品分析結果的rsd值表示。取第四類化合物成分、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分，按照上述方式進行配制后，進行測定，具體結果見表17。由表17可知，第四類化合物成分、第五類化合物中腺嘌呤和腺苷成分的加樣平均回收率在74.6-137％之間，表明本方法加樣回收率良好，精密度為3.60-12.5％，表明本方法重復性良好。表17實施例5采用本方法測定實際多批次血必凈注射液樣品中47種五類化合物成分的含量，并計算每個成分的批間差，具體見表18。由表18可知，針對不同的樣品，該方法均能有效測定其實際樣品中47種五類化合物成分的含量，并能夠按照血必凈注射液日用劑量(100ml/人)計算每個成分的日用劑量并對47個成分進行分檔，其中一檔成分(化合物日用劑量，>100μmol/人)有1個，為芍藥苷，其批間差分別為10.1％；二檔成分(10-100μmol/人)有6個，分別為羥基紅花黃色素a、苯甲酸、苯丙氨酸、洋川芎內酯i、腺嘌呤和阿魏酸，批間差分別為9.73-19.3％；三檔成分(1-10μmol/人)有25個，分別為丁二酸、芍藥苷、尿苷、對香豆酸、鳥苷、原兒茶醛、氧化苯甲酰芍藥苷、芍藥內酯苷、沒食子酸、洋川芎內酯n、洋川芎內酯h、咖啡酸、山奈酚-3-o-蕓香糖苷、洋川芎內酯g、對羥基苯甲酸、迷迭香酸、3-羥基-3-丁基苯酞、沒食子酰芍藥苷、丹參素、原兒茶酸、兒茶素、綠原酸、開環(huán)洋川芎內酯i、腺苷和丹酚酸b，批間差為10.7–41.8％，四檔成分(<1μmol/人)有15個，批間差為8.80–31.6％。從而能夠對血必凈注射液中47種成分進行有效的質量控制評估。上述方法操作簡便、適用性好，結果準確、可靠。所以，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術中的種種缺點，對于進一步提高產(chǎn)品的質量均一性提供了重要的參考指標，具高度產(chǎn)業(yè)利用價值。上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬
技術領域：
中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應由本發(fā)明的權利要求所涵蓋。當前第1頁12