本發(fā)明涉及一種龍血竭酚類提取物的質(zhì)量檢測方法，還涉及龍血竭酚類提取物制劑的質(zhì)量檢測方法。

背景技術(shù)：

龍血竭為百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹dracaenacochinchinenis(lour)s.c.chen含脂木材的樹脂，主要分布在我國的廣西省和云南省，具有活血化瘀、生肌斂瘡等功效，臨床用于治療外傷出血、血瘀經(jīng)閉、瘡瘍不斂、心絞痛、心肌梗死等癥。中藥材龍血竭的有效部位——龍血竭酚類提取物，臨床上用于治療中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)(輕中度腦梗死)恢復(fù)期血瘀證，療效顯著，由其作為有效成分的中藥二類新藥——龍血通絡(luò)膠囊已經(jīng)上市。目前對于龍血竭酚類提取物的質(zhì)量檢測方法還未見報(bào)道。對于中藥材龍血竭，現(xiàn)有文獻(xiàn)僅報(bào)道了高效液相色譜法(hplc)測定其中不多于5個(gè)組分的方法和用紫外分光光度法測定2個(gè)組分的方法。

龍血竭中的酚類成分的類別較多，包括黃酮類、二氫查耳酮類、二苯乙烯類、高異黃烷酮類和黃酮寡聚體類等?，F(xiàn)有研究表明，高異黃烷酮類化合物具有抑制雌激素生成、細(xì)胞毒、抑菌等作用，黃酮寡聚體具有抑菌、細(xì)胞毒、抗炎等作用，然而現(xiàn)有的龍血竭藥材的質(zhì)量檢測方法對這兩類別的組分均未涉及；另外，對于其他類別的酚類化合物，檢測的數(shù)量也較少(不多于5個(gè))，因而難以全面衡量龍血竭的質(zhì)量。文獻(xiàn)《hplc同時(shí)測定龍血竭及其提取物中5個(gè)有效成分的含量》(李云等，中國中藥雜志，2012年第37卷第929～933頁)公開了用hplc法測定了龍血竭藥材中5個(gè)組分的含量，包括7,4′-二羥基黃酮、白藜蘆醇、龍血素a、龍血素b和紫檀茋。文獻(xiàn)《龍血竭特征成分對照指紋圖譜研究》(周艷林等，中華中醫(yī)藥雜志，2012年第27卷第12期，第3080～3082頁)公開了龍血竭藥材的hplc指紋圖譜的測定方法，該方法以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液梯度洗脫，同步檢測了龍血竭藥材中茋類、二氫查耳酮類及黃酮類的特征性成分。專利文獻(xiàn)cn1481788a公開了一種用紫外分光光度法測定了龍血竭中7,4′-二羥基黃酮(330nm)和龍血素b(275nm)的方法。

因此，需要一種能夠更全面地衡量龍血竭及其酚類提取物的質(zhì)量的檢測方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種龍血竭酚類提取物的質(zhì)量檢測方法，該方法能夠同時(shí)檢測龍血竭酚類提取物中多種酚類化合物，從而更全面地衡量龍血竭酚類提取物的質(zhì)量。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種龍血通絡(luò)制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法能夠有效檢測龍血通絡(luò)制劑中的多種組分，從而更全面地衡量龍血竭酚類提取物的質(zhì)量。

本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種龍血竭酚類提取物的質(zhì)量檢測方法，其包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取龍血竭酚類提取物，加溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾得到供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：將對照品用溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾，得到對照品溶液；所述的對照品選自如下化合物：7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮、7,4′-二羥基黃酮、7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮、7,4′-二羥基高異黃烷酮、龍血素c、4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮、5,7,4′-三羥基高異黃烷酮、3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯、索科特拉龍血素、龍血素a、龍血素b和紫檀茋；

(3)采用高效液相色譜法測定所述供試品溶液，其中高效液相色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，流動(dòng)相由乙腈a和0.1％甲酸水溶液b組成，洗脫方式為：

0→t1，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a1增加至a2；

t1→t2，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a2增加至a3；

t2→t3，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a3增加至a4；

t3→t4，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a4增加至a5；

t4→t5，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a5增加至a6；

其中，t1為13～17min，t2為24～28min，t3為41～45min，t4為63～65min，t5為66～68min；a1為18％～22％，a2為23％～27％，a3為35％～39％，a4為40％～42％，a5為53％～57％，a6為93％～97％；所述乙腈的體積百分比均以流動(dòng)相的總體積為基準(zhǔn)；

其中，步驟(1)和步驟(2)的順序不分先后。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(1)中所述溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液；步驟(2)中，所述溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(1)中所述供試品溶液的濃度為0.3～3.0mg/ml；步驟(2)中，將所述對照品中的多種或全部溶解于同一溶劑中，得到對照品溶液，且該對照品溶液中含有的單種對照品的濃度為3～100μg/ml。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(3)中，流動(dòng)相流速為1ml·min^-1；柱溫為30℃；檢測波長為280nm，理論板數(shù)按龍血素a計(jì)算不低于5000。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(3)中，t1為14～16min，t2為25～27min，t3為42～44min，t4為64～65min，t5為66～67min；a1為19％～21％，a2為24％～26％，a3為36％～38％，a4為40％～41％，a5為54％～56％，a6為94％～96％。

本發(fā)明中，更優(yōu)選地，步驟(3)中，t1為15min，t2為26min，t3為43min，t4為65min，t5為66min；a1為20％，a2為25％，a3為37％，a4為40％，a5為55％，a6為95％。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(2)中，將所述7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮、7,4′-二羥基黃酮、7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮、7,4′-二羥基高異黃烷酮、龍血素c、4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮、5,7,4′-三羥基高異黃烷酮、3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯、索科特拉龍血素、龍血素a、龍血素b和紫檀茋溶解在同一溶劑中，得到混合對照品溶液。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，所述對照品溶液中每種對照品化合物的濃度為3～100μg/ml。

本發(fā)明還提供龍血通絡(luò)制劑的含量檢測方法，所述龍血通絡(luò)制劑為以龍血竭酚類提取物為活性成分的制劑；所述含量檢測方法包括：

(1)供試品溶液的制備：將所述龍血通絡(luò)制劑加溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾得到供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：將對照品用溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾，得到對照品溶液；所述的對照品選自如下化合物：7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮、7,4′-二羥基黃酮、7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮、7,4′-二羥基高異黃烷酮、龍血素c、4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮、5,7,4′-三羥基高異黃烷酮、3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯、索科特拉龍血素、龍血素a、龍血素b和紫檀茋；

(3)采用高效液相色譜法測定所述供試品溶液和對照品溶液，其中高效液相色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，流動(dòng)相由乙腈a和0.1％甲酸水溶液b組成，洗脫方式為：

0→t1，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a1增加至a2；

t1→t2，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a2增加至a3；

t2→t3，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a3增加至a4；

t3→t4，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a4增加至a5；

t4→t5，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a5增加至a6；

其中，t1為13～17min，t2為24～28min，t3為41～45min，t4為63～65min，t5為66～68min；a1為18％～22％，a2為23％～27％，a3為35％～39％，a4為40％～42％，a5為53％～57％，a6為93％～97％；所述乙腈的體積百分比均以流動(dòng)相的總體積為基準(zhǔn)；

其中，步驟(1)和(2)的順序不分先后。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，步驟(3)中，流動(dòng)相流速為1ml·min^-1；柱溫為30℃；檢測波長為280nm，理論板數(shù)按龍血素a計(jì)算不低于5000。優(yōu)選地，步驟(3)中，t1為14～16min，t2為25～27min，t3為42～44min，t4為64～65min，t5為66～67min；a1為19％～21％，a2為24％～26％，a3為36％～38％，a4為40％～41％，a5為54％～56％，a6為94％～96％。更優(yōu)選地，步驟(3)中，t1為15min，t2為26min，t3為43min，t4為65min，t5為66min；a1為20％，a2為25％，a3為37％，a4為40％，a5為55％，a6為95％。

本發(fā)明建立了龍血竭酚類提取物以及以龍血竭酚類提取物作為有效成分的龍血通絡(luò)制劑的含量檢測方法，采用該方法可同時(shí)檢測龍血竭酚類提取物以及龍血通絡(luò)制劑中含有的至少12個(gè)酚類化合物，特別是涉及了具有重要藥學(xué)活性的、且具有高度特征性的高異黃烷酮類和黃酮寡聚體類的化合物，能夠更有效地衡量龍血竭酚類提取物及龍血通絡(luò)制劑的質(zhì)量，從而更全面有效地控制其質(zhì)量，保證臨床有效性。同時(shí)，本發(fā)明的方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的對照品溶液的高效液相色譜圖。

圖2為實(shí)施例1的供試品溶液的高效液相色譜圖。

附圖標(biāo)記說明如下：

1為7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮的色譜峰；

2為7,4′-二羥基黃酮的色譜峰；

3為7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮的色譜峰；

4為7,4′-二羥基高異黃烷酮的色譜峰；

5為龍血素c的色譜峰；

6為4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮的色譜峰；

7為5,7,4′-三羥基高異黃烷酮的色譜峰；

8為3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯的色譜峰；

9為索科特拉龍血素的色譜峰；

10為龍血素a的色譜峰；

11為龍血素b的色譜峰；

12為紫檀茋的色譜峰。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。

本發(fā)明的龍血竭或龍血竭藥材是指百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹dracaenacochinchinenis(lour)s.c.chen含脂木材的樹脂。

本發(fā)明中，所述索科特拉龍血素(英文名cinnabarone)是已知的化合物，屬于黃酮二聚體類化合物，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的龍血竭酚類提取物，是指從龍血竭藥材中提取的酚類化合物的組合物，所述酚類化合物包括黃酮類、二氫查耳酮類、二苯乙烯類、高異黃烷酮類和黃酮寡聚體類等。需要說明的是，本發(fā)明的龍血竭酚類提取物中，除了酚類化合物，還可以含有少量其他類別的雜質(zhì)。提取方法可以采用有機(jī)溶劑提取，然后進(jìn)行或不進(jìn)行除雜處理，從而得到龍血竭酚類提取物。所述有機(jī)溶劑可以選自乙酸乙酯、5％～95％的乙醇水溶液、二氯甲烷、三氯甲烷、正丁醇等。例如，可以采用乙酸乙酯提取得到的提取物，用堿液溶解，再用酸液調(diào)節(jié)ph至酸性，靜置，所得沉淀物即為龍血竭酚類提取物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，所述的龍血竭酚類提取物的制備方法為：將龍血竭藥材采用乙酸乙酯作為溶劑進(jìn)行加熱回流提取，所得提取液回收乙酸乙酯，殘?jiān)脷溲趸c溶液溶解，再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph至1～2，靜置，除去上清液，收集沉淀物，水洗至中性，干燥，得到龍血竭酚類提取物。

本發(fā)明的龍血竭酚類提取物的質(zhì)量檢測方法，包括：供試品溶液的制備步驟，對照品溶液的制備步驟和采用高效液相色譜法檢測所述供試品溶液和對照品溶液中的酚類化合物的步驟。本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法還可以包括對照品溶液的制備步驟。

<供試品溶液的制備>

本發(fā)明的供試品溶液的制備，是將龍血竭酚類提取物用溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾，得到所述的供試品溶液。所述的溶劑可以選自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述甲醇水溶液中甲醇的體積百分比為30～95％；所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分比為30～95％，所述乙腈水溶液中乙腈的體積百分比為30～95％。優(yōu)選地，所述的溶劑為甲醇。所述供試品溶液的濃度可以為0.3～3.0mg/ml，優(yōu)選為0.5～2.0mg/ml，更優(yōu)選為0.8～1.5mg/ml。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述供試品溶液的濃度為1.0mg/ml。所述供試品溶液的濃度是指龍血竭酚類提取物的重量與提取的溶劑的體積之比，例如當(dāng)濃度為0.5mg/ml，是指每ml溶劑提取0.5mg的龍血竭酚類提取物。所述的微孔濾膜優(yōu)選為孔徑為0.22μm的微孔濾膜。

當(dāng)所述供試品溶液為龍血竭酚類提取物的供試品溶液時(shí)，本發(fā)明的供試品溶液的制備步驟還可以包括龍血竭酚類提取物的制備步驟。龍血竭酚類提取物的制備步驟具體包括：將龍血竭藥材采用乙酸乙酯作為溶劑進(jìn)行加熱回流提取，所得提取液回收乙酸乙酯，殘?jiān)脷溲趸c溶液溶解，再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph至1～2，靜置，除去上清液，收集沉淀物，水洗至中性，干燥，得到龍血竭酚類提取物。

<對照品溶液的制備>

本發(fā)明的方法還包括對照品溶液的制備步驟，包括將對照品用溶劑溶解，再用微孔濾膜過濾。通過將對照品溶液進(jìn)行高效液相色譜法測定，能夠?qū)┰嚻啡芤褐泻械呐c對照品相同的化學(xué)成分進(jìn)行定性和定量檢測。

本發(fā)明中，所述的對照品選自如下化合物中的一種或多種：7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮、7,4′-二羥基黃酮、7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮、7,4′-二羥基高異黃烷酮、龍血素c、4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮、5,7,4′-三羥基高異黃烷酮、3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯、索科特拉龍血素、龍血素a、龍血素b和紫檀茋。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，所述的對照品包括上述全部12種化合物。上述12中化合物均為已知化合物，其對照品來源不限，可以來自市售，也可以按照文獻(xiàn)記載的方法制備得到。

本發(fā)明中，所述的溶劑可以選自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一種或幾種，并優(yōu)選為甲醇。優(yōu)選地，所述甲醇水溶液中甲醇的體積百分比為30～95％；所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分比為30～95％，所述乙腈水溶液中乙腈的體積百分比為30～95％。優(yōu)選地，所述的溶劑與供試品制備步驟采用的溶劑相同。所述的微孔濾膜優(yōu)選為孔徑為0.22μm的微孔濾膜。

本發(fā)明中，所述的對照品溶液可以是將上述對照品分別溶解在單獨(dú)的溶劑中，制成每份僅包含一種對照品的多份對照品溶液；也可以是將上述對照品中的多種或全部共同溶解在同一溶劑中，制成混合對照品溶液，該對照品溶液中含有上述的多種或全部對照品。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的對照品溶液是將多種或全部對照品溶解于同一溶劑中制備而成。優(yōu)選地，所述的對照品溶液中每種對照品的濃度為3～100μg/ml。

<高效液相色譜檢測>

本發(fā)明采用高效液相色譜法測定，將供試品溶液注入高效液相色譜儀，得到高效液相色譜圖。所述的檢測方法還包括將對照品溶液注入高效液相色譜儀，得到高效液相色譜圖。本發(fā)明的高效液相色譜法中，高效液相色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，流動(dòng)相由乙腈(a)和含量為0.1vol％的甲酸水溶液(b)組成。本發(fā)明中，流動(dòng)相由a組分和b組分組成，當(dāng)a組分的體積含量確定后，余量即為b組分，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的。本發(fā)明采用梯度洗脫方式將龍血竭酚類提取物中的上述的12種組分分離開，具體的梯度洗脫條件如下：

0→t1，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a1增加至a2；

t1→t2，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a2增加至a3；

t2→t3，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a3增加至a4；

t3→t4，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a4增加至a5；

t4→t5，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由a5增加至a6；

其中，

t1為13～17min，優(yōu)選為14～16min，更優(yōu)選為15min；

t2為24～28min，優(yōu)選為25～27min，更優(yōu)選為26min；

t3為41～45min，優(yōu)選為42～44min，更優(yōu)選為43min；

t4為63～65min，優(yōu)選為64～65min，更優(yōu)選為65min；

t5為66～68min，優(yōu)選為66～67min，更優(yōu)選為66min；

其中，

a1為18％～22％，更優(yōu)選為19％～21％，優(yōu)選為20％；

a2為23％～27％，更優(yōu)選為24％～26％，優(yōu)選為25％；

a3為35％～39％，更優(yōu)選為36％～38％，優(yōu)選為37％；

a4為40％～42％，更優(yōu)選為40％～41％，優(yōu)選為40％；

a5為53％～57％，更優(yōu)選為54％～56％，優(yōu)選為55％；

a6為93％～97％，更優(yōu)選為94％～96％，優(yōu)選為95％。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，t1為14～16min，t2為25～27min，t3為42～44min，t4為64～65min，t5為66～67min；a1為19％～21％，a2為24％～26％，a3為36％～38％，a4為40％～41％，a5為54％～56％，a6為94％～96％。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，t1為15min，t2為26min，t3為43min，t4為65min，t5為66min；a1為20％，a2為25％，a3為37％，a4為40％，a5為55％，a6為95％。

本發(fā)明中，所述乙腈的體積百分比均以流動(dòng)相的總體積為基準(zhǔn)。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，流動(dòng)相的流速為1ml·min^-1；柱溫為30℃；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按龍血素a計(jì)算不低于5000。

本發(fā)明中，流動(dòng)相的組成和梯度洗脫條件對于龍血竭酚類提取物中組分的分離具有重要影響。采用本發(fā)明的高效液相色譜條件，能夠?qū)堁叻宇愄崛∥镏械膶儆诓煌悇e的至少12種酚類組分分離開來，從而同時(shí)檢測龍血竭酚類提取物中多種成分，包括黃酮類、二苯乙烯類、二氫查耳酮類、高異黃烷酮和黃酮寡聚體類等，而后兩類是龍血竭中極具特征性的酚類化合物，鮮見于其他藥材，因而，本發(fā)明的方法能夠更全面、準(zhǔn)確地檢測龍血竭酚類提取物。同時(shí)，本發(fā)明的方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于控制龍血竭酚類提取物的質(zhì)量控制。當(dāng)采用本發(fā)明上述優(yōu)選的梯度洗脫條件，能夠使各組分更有效地分離開來。

<龍血通絡(luò)制劑的質(zhì)量檢測方法>

本發(fā)明中，所述龍血通絡(luò)制劑是指以從龍血竭中提取得到的龍血竭酚類提取物作為有效成分制成的制劑，包括但不限于龍血通絡(luò)膠囊(例如江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的、已作為二類新藥上市的龍血通絡(luò)膠囊)。所述龍血通絡(luò)制劑包括上述的龍血竭酚類提取物和藥學(xué)上可接受的輔料，劑型不限，例如可以為片劑、丸劑、顆粒劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、溶液劑等。本發(fā)明的龍血通絡(luò)制劑的質(zhì)量檢測方法包括供試品溶液的制備步驟和高效液相色譜檢測步驟，還包括對照品溶液的制備步驟。所述的供試品溶液的制備步驟包括將龍血通絡(luò)制劑用溶劑溶解，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)處理，再用微孔濾膜過濾。所述的對照品溶液的制備步驟和高效液相色譜檢測步驟同前所述，不再贅述。本發(fā)明為龍血通絡(luò)制劑提供了一種快速、準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好的質(zhì)量檢測方法，其能夠有效檢測龍血通絡(luò)制劑中的多種類型的酚類化合物，有利于更全面地控制龍血通絡(luò)制劑的質(zhì)量，保證其有效性。

以下實(shí)施例中采用的龍血通絡(luò)膠囊為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。高效液相色譜儀為島津(shimadzu)公司lc-20ad型號(hào)，高效液相色譜柱為北京迪馬歐泰科技發(fā)展中心的diamonsilc18柱(250×4.6mm，5μm,sn：201051415，cn：99603)。采用的試劑均為色譜純。

實(shí)施例1-龍血通絡(luò)膠囊的質(zhì)量檢測方法

對照品溶液的制備：精密稱取12種對照品適量，加甲醇溶解，使得混合對照品溶液中的各組分的濃度分別為：7,4′-二羥基-5-甲氧基黃酮20.86μg/ml，7,4′-二羥基黃酮39.69μg/ml，7,4′-二羥基-5-甲氧基高異黃烷酮55.60μg/ml，7,4′-二羥基高異黃烷酮12.50μg/ml，龍血素c37.65μg/ml，4,4′-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮48.85μg/ml，5,7,4′-三羥基高異黃烷酮34.32μg/ml，3,4′-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯35.43μg/ml，索科特拉龍血素39.31μg/ml，龍血素a51.09μg/ml，龍血素b73.66μg/ml和紫檀茋79.51μg/ml，得到對照品溶液。

供試品溶液的制備：稱取龍血竭通絡(luò)膠囊適量，用甲醇溶解，使其濃度為1mg/ml，用0.22μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

高效液相色譜法檢測：分別將上述對照品溶液、供試品溶液注入高效液相色譜儀，獲得高效液相色譜圖。色譜條件為：流動(dòng)相為乙腈(a)-0.1％甲酸水溶液(b)，流速1ml·min^-1；柱溫30℃；檢測波長280nm；理論板數(shù)按龍血素a計(jì)算應(yīng)不低于5000；梯度洗脫條件為：0→15min，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由20％增加至25％；

15min→26min，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由25％增加至37％；

26min→43min，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由37％增加至40％；

43min→65min，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由40％增加至55％；

65min→66min，流動(dòng)相中乙腈的體積百分比由55％增加至95％。

上述對照品溶液和供試品溶液的高效液相色譜圖分別見圖1和圖2，12種酚類化合物的吸收峰具有良好的分離度，能夠有效實(shí)現(xiàn)定性和定量檢測。

本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式，在不背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以想到的任何變形、改進(jìn)、替換均落入本發(fā)明的范圍。