1.一種提取香精香料中維生素B的方法,包括如下步驟:
(1)將香精香料樣品與鹽酸溶液混合,得到混合物;
(2)將混合物固液分離,得到提取液;
其中,所述維生素B包括維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9中的一種或多種;
優(yōu)選地,所述維生素B為維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法,其在步驟(1)和(2)之間還包括步驟(1-A):將步驟(1)得到的混合物與溶液a混合,得到混合物;其中,所述溶液a中包含乙腈和水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法,其還包括步驟(2-A):將步驟(2)得到的提取液與溶液a混合,固液分離,得到提取液;其中,所述溶液a中包含乙腈和水。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的提取方法,其中,溶液a中乙腈的含量為20%-80%(W/W),優(yōu)選為40%-60%(W/W)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的提取方法,其中,步驟(1)得到的混合物或步驟(2)得到的提取液與溶液a混合的體積比為1:(6-12),優(yōu)選為1:(8-10)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的提取方法,其中,所述溶液a中還包含乙酸銨;
優(yōu)選地,溶液a中乙酸銨的摩爾濃度為7-13mmol/L,更優(yōu)選為9-11mmol/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的提取方法,其特征在于如下(a)至(f)中的一項(xiàng)或多項(xiàng):
(a)步驟(1)中,鹽酸溶液的摩爾濃度為0.1-0.3mol/L,優(yōu)選為0.15-0.3mol/L;
(b)步驟(1)中,香精香料樣品與鹽酸溶液的比例為1:(70-130)(g/mL),優(yōu)選為1:(90-110)(g/mL);
(c)步驟(1)中,所述混合在超聲條件下進(jìn)行;
優(yōu)選地,超聲時間為20-60分鐘,更優(yōu)選為25-50分鐘;
(d)步驟(2)和/或步驟(2-A)中,所述固液分離包括靜置沉淀,收集上清液的步驟;
優(yōu)選地,靜置沉淀的時間為6-13分鐘;
優(yōu)選地,步驟(2)中,所述固液分離還包括將上清液過濾,收集濾液的步驟;
更優(yōu)選地,過濾所用濾膜的孔徑為0.1-1μm,進(jìn)一步優(yōu)選為0.4-0.5μm;
(e)所述香精香料樣品為煙用香精香料樣品;
(f)所述提取方法為同時提取香精香料中維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9的方法。
8.一種檢測香精香料中維生素B的方法,包括如下步驟:
A)采用權(quán)利要求1至7中任一所述提取方法對香精香料樣品進(jìn)行前處理,將步驟(2)得到的提取液或步驟(2-A)得到的提取液作為待測樣品;
B)采用液相色譜-質(zhì)譜法對待測樣品進(jìn)行檢測;
優(yōu)選地,所述檢測方法還包括步驟C):根據(jù)步驟B)的檢測結(jié)果計(jì)算香精香料樣品中維生素B的含量;
優(yōu)選地,所述檢測方法使用的內(nèi)標(biāo)物包括葉酸-13C5、煙酸-D4和泛酸鈣-[13C3,15N];
優(yōu)選地,所述檢測方法為同時檢測香精香料中維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9的方法;
優(yōu)選地,所述香精香料樣品為煙用香精香料樣品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法,其中,所述液相色譜的操作條件包括如下(A)至(E)中的一項(xiàng)或多項(xiàng):
(A)色譜柱為Waters Atiantis T3色譜柱;
優(yōu)選地,色譜柱的規(guī)格為100mm×3mm i.d.,2.6μm粒徑;
(B)色譜柱的溫度為25-35℃,優(yōu)選為29-33℃;
(C)進(jìn)樣量為6-14μL,優(yōu)選為7-13μL;
(D)流動相為甲醇溶液或者流動相由流動相A和流動相B組成;
優(yōu)選地,流動相A為包含有乙酸銨和水的溶液b,流動相B為乙腈;
更優(yōu)選地,溶液b中乙酸銨的摩爾濃度為7-13mmol/L;
更優(yōu)選地,溶液b還包含0.1%(W/W)的甲酸;
優(yōu)選地,梯度洗脫程序?yàn)椋?/p>
0分鐘,99%(V/V)流動相A;1.0分鐘,99%(V/V)流動相A;3.0分鐘,1%(V/V)流動相A;4.0分鐘,1%(V/V)流動相A;4.1分鐘,99%(V/V)流動相A,保持到7分鐘結(jié)束;
(E)流動相的流速為0.2-0.6mL/min,優(yōu)選為0.3-0.5mL/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的檢測方法,其中,所述質(zhì)譜的操作條件包括如下1)至27)中的一項(xiàng)或多項(xiàng):
1)離子源為電噴霧電離源(ESI);
2)掃描方式為正離子掃描;
3)檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);
4)電噴霧電壓為5000-6000V,優(yōu)選為5300-5700V;
5)離子源溫度為500-600℃,優(yōu)選為540-560℃;
6)輔助氣Gas1和/或輔助氣Gas2的壓力為40-70psi,優(yōu)選為48-62psi;
7)維生素B9的定量離子對為442.0/295.0;
8)維生素B9的定性離子對為442.0/176.0;
9)維生素B9的碰撞能為14-48V,優(yōu)選為15V或44V;
10)維生素B3的定量離子對為124.0/80.0;
11)維生素B3的定性離子對為124.0/53.0;
12)維生素B3的碰撞能為16-22V,優(yōu)選為18V或20V;
13)維生素B7的定量離子對為245.1/227.0;
14)維生素B7的定性離子對為245.1/97.0;
15)維生素B7的碰撞能為15-33V,優(yōu)選為16V或32V;
16)維生素B5的定量離子對為220.1/90.0;
17)維生素B5的定性離子對為220.1/202.0;
18)維生素B5的碰撞能為14-16V,優(yōu)選為15V;
19)葉酸-13C5的定量離子對為447.0/295.0;
20)葉酸-13C5的定性離子對為447.0/176.0;
21)葉酸-13C5的碰撞能為14-46V,優(yōu)選為16V或44V;
22)煙酸-D4的定量離子對為128.0/84.0;
23)煙酸-D4的定性離子對為128.0/56.0;
24)煙酸-D4的碰撞能為15-20V,優(yōu)選為18V;
25)泛酸鈣-[13C3,15N]的定量離子對為224.1/94.0;
26)泛酸鈣-[13C3,15N]的定性離子對為224.1/206.0;
27)泛酸鈣-[13C3,15N]的碰撞能為14-16V,優(yōu)選為15V。
11.一種提取和/或檢測香精香料中維生素B的試劑盒,其包含:
鹽酸溶液、含有乙酸銨的乙腈水溶液和孔徑為0.4-0.5μm的濾膜;
其中,所述維生素B包括維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9中的一種或多種;
優(yōu)選地,所述維生素B為維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9;
優(yōu)選地,所述試劑盒中還包含:Waters Atiantis T3色譜柱、含有甲酸的乙酸銨水溶液和乙腈;
優(yōu)選地,所述試劑盒中還包含:葉酸-13C5、煙酸-D4和泛酸鈣-[13C3,15N]。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試劑盒,其特征在于如下(Ⅰ)至(Ⅸ)中的一項(xiàng)或者多項(xiàng):
(Ⅰ)鹽酸溶液的摩爾濃度為0.1-0.3mol/L,優(yōu)選為0.15-0.3mol/L;
(Ⅱ)含有乙酸銨的乙腈水溶液中乙腈的含量為20%-80%(W/W),優(yōu)選為40%-60%(W/W);
(Ⅲ)含有乙酸銨的乙腈水溶液中乙酸銨的摩爾濃度為7-13mmol/L,優(yōu)選為9-11mmol/L。
(Ⅳ)濾膜的孔徑為0.45μm;
(Ⅴ)色譜柱的規(guī)格為100mm×3mm i.d.,2.6μm粒徑;
(Ⅵ)含有甲酸的乙酸銨水溶液中乙酸銨的摩爾濃度為7-13mmol/L;
(Ⅶ)含有甲酸的乙酸銨水溶液中甲酸的含量為0.1%(W/W);
(Ⅷ)所述試劑盒為同時提取和/或檢測香精香料中維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9的試劑盒;
(Ⅸ)所述香精香料為煙用香精香料。
13.權(quán)利要求11或12所述的試劑盒在提取和/或檢測香精香料中維生素B中的用途;所述維生素B包括維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9中的一種或多種;
優(yōu)選地,所述維生素B為維生素B3、維生素B5、維生素B7和維生素B9;
優(yōu)選地,所述香精香料為煙用香精香料。