1.一種用于動物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:以反相色譜柱對動物樣品提取凈化液進(jìn)行在柱連續(xù)進(jìn)樣富集,以甲醇-乙腈-水三元混合溶液為流動相,采用恒流等度洗脫和柱后熒光檢測模式,連續(xù)分離檢測動物源樣品中痕量F-2毒素及代謝組分,實現(xiàn)動物源樣品中F-2毒素代謝組分的痕量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于動物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述動物源樣品中F-2毒素代謝組分包括F-2毒素、β-玉米赤霉烯醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于動物源樣品中F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:
所述的反相色譜柱為十八烷基鍵合硅膠填充柱;
所述的甲醇-乙腈-水三元混合溶液體積比為55:13:32;
所述的熒光檢測模式的激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述動物源樣品為豬的肝臟、肌肉和血清。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述方法對于肝臟、肌肉組織樣品分析的具體包括以下步驟:
(1)提?。喝?g均質(zhì)的組織樣品,均勻攪碎,置放于10 mL離心管中,加入2.0 mL乙酸鈉溶液、3.0 mL無水乙醚,4000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液;重復(fù)提取一次;合并提取液,40℃下氮?dú)獯蹈桑?/p>
殘渣用0.5mL三氯甲烷溶解,超聲2min,加入1.5mL 0.5mol/L的氫氧化鈉溶液,4000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液;重復(fù)提取一次;合并提取液,40℃下氮?dú)獯蹈?,得固體備用;
(2)凈化:在步驟(1)得到的固體中加入體積比1:4的磷酸-水溶液0.5mL,混勻后轉(zhuǎn)入PEP固相萃取柱中,先用1.0 mL水淋洗,棄去;采用3.0ml甲醇洗脫,洗脫液于40℃下氮?dú)獯蹈?,殘渣用體積比為1:3的乙腈-水溶液1.0 mL溶解,過濾,取濾液待測;
(3)在柱富集:以十八烷基鍵合硅膠顆粒填充柱為分離柱;在步驟(2)得到的濾液中加入體積比1:3的乙腈-水混合溶液配制樣品,在柱連續(xù)進(jìn)樣200μL;
(4)等度洗脫分析:以甲醇、乙腈、水三元混合溶液為流動相,以流速為1.0 mL/min進(jìn)行恒流等度洗脫;采用熒光檢測方式,激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm,在線測定β-玉米赤霉烯醇、F-2毒素組分,實現(xiàn)對痕量F-2毒素代謝組分的色譜等度洗脫-熒光檢測。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于動物源樣品中痕量F-2毒素代謝分析的方法,其特征在于:所述方法對于血清樣品分析的具體包括以下步驟:
(1)凈化:取 1mL 血清樣品于 10 mL 離心管中,加入 5.0 mL 乙酸乙酯,渦旋混勻 5min,3000r/min 離心 10 min 取上清液于 10 mL 玻璃離心管中,剩余殘渣用 4.0 mL 乙酸乙酯分兩次清洗,洗液轉(zhuǎn)入玻璃離心管中,40℃水浴氮?dú)獯蹈?,殘渣?1.0 mL 流動相溶解,3000 r/min 離心 10min,取上清液過濾,濾液待測;
(2)在柱富集:以十八烷基鍵合硅膠顆粒填充柱為分離柱;在步驟(1)得到的濾液中加入體積比1:3的乙腈-水混合溶液配制樣品,在柱連續(xù)進(jìn)樣200μL;
(3)等度洗脫分析:以甲醇、乙腈、水三元混合溶液為流動相,以流速為1.0 mL/min進(jìn)行恒流等度洗脫;采用熒光檢測方式,激發(fā)波長為274 nm、發(fā)射波長為440 nm,在線測定β-玉米赤霉烯醇、F-2毒素組分,實現(xiàn)對痕量F-2毒素代謝組分的色譜等度洗脫-熒光檢測。