一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方法
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方法，屬于化學(xué)檢測領(lǐng)域。方法包括：（1）提?。悍Q取試樣于50ml離心管中，加入乙腈，均質(zhì)1min，再加入無水硫酸鈉，振蕩、離心后收集上清液于梨形瓶中，在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干。（2）凈化：分別使用甲醇、水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品溶解過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液；（3）檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入流動相溶解，過有機相濾膜，進液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜檢測。本發(fā)明的有益效果是，利用氧化石墨烯固相萃取技術(shù)，建立了磺胺類藥物殘留的檢測方法，凈化效果明顯，減少了基質(zhì)干擾，提高了檢測效率，所建立的方法快捷、高效、實用性強。
【專利說明】
一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方法，尤其 是一種氧化石墨烯固相萃取結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測食品中磺胺類藥物殘留的方法，屬 于分析化學(xué)檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 磺胺類藥物(sulfonamides，SAS)因具有廣譜抗菌、廉價方便等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用 于養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，但其過量使用會在食用動物產(chǎn)品中殘留，危害人類健康。世界各國均有關(guān)于磺 胺類殘留的最高限量要求，我國規(guī)定磺胺類藥物在動物源性食品中的最高殘留限量總和為 100yg/kg。目前關(guān)于磺胺類藥物殘留的檢測已有較多的報道，前處理過程中使用較廣泛的 方法為固相萃取，涉及的填料主要有碳納米管、氧化鋁、PSA，C18和石墨化碳黑(GCB)。
[0003] 氧化石墨烯是一種由天然石墨制備、與碳納米管結(jié)構(gòu)相似的碳納米材料，是單原 子層厚度的二維結(jié)構(gòu)納米材料，其比表面積理論上可達2900m 2/g，是所有碳納米材料中比 表面積最大的材料。在氧化石墨烯制備過程中，其表面形成了大量的活性基團如羧基、羰 基、羥基、環(huán)氧基等，因此，氧化石墨稀不僅具有足夠大的比表面積，同時還擁有足夠尚的表 面功能基團密度，是一種性能優(yōu)異的吸附劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方法。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù) 檢測磺胺類藥物殘留的方法，包括如下步驟。
[0006] (1)提取:稱取2-5g試樣，加入20-30mL乙腈，均質(zhì)l-2min，再加入無水硫酸鈉，振蕩 提取l -3min后，8000-9000r/min條件下離心6min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴中旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干;殘渣用乙腈-水溶解，待凈化。
[0007] (2)凈化:分別使用3-5mL甲醇、3-5mL水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品 溶解液以每秒1滴的速度過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中。
[0008] (3)檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，進 儀器檢測。
[0009] 方法中磺胺類藥物包括磺胺啼啶（s u 1 f a d i a z i n e，S D Ζ )、磺胺甲Β,惡Ρ坐 (sulfamethoxazole，SMZ)、橫胺二甲氧啼啶（sulfadimethoxine，SDM)、橫胺喹噁啉 (sulfaquinoxaline，SQX)〇
[0010] 步驟⑴所述的殘渣用乙腈-水溶解后調(diào)節(jié)pH至6。
[0011] 步驟(1)所述乙腈-水的體積比為1: 9。
[0012]步驟（2)所述的氧化石墨烯固相萃取柱的制作方法是在3mL空管柱（事先用超純 水、乙腈洗滌，晾干）內(nèi)加入篩板，用玻璃棒壓平，裝入15mg氧化石墨稀后蓋上篩板。
[0013]步驟(2)所使用的含氨乙腈體積為5mL。
[0014] 步驟(3)儀器檢測所使用的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜配有電噴霧離子源(ESI)。
[0015] 檢測時的色譜條件為： 色譜柱:Poroshel 1 120 EC-C18，3 · 0 X 100mm，2 · 7μL?;柱溫：30°C ;進樣體積：5yL;流動 相:A為甲醇;B為0.1%甲酸水;流速:0.3mL/min。
[0016] 流動相梯度洗脫程序：0-lmin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 80-10%A;9-10min，10%A。
[0017] 檢測時的質(zhì)譜條件為： 離子源：噴射流離子聚焦電噴霧離子源；掃描模式：正離子模式;檢測方式：多反應(yīng)監(jiān) 測;干燥氣溫度:350°C ;干燥氣流速：10L/min;霧化氣壓力:45psi ;鞘氣溫度:350°C ;鞘氣流 速:1 lL/min;毛細管電壓:4000V;碰撞氣:高純氮;各離子對駐留時間均為60ms。
[0018] 表1磺胺類藥物的質(zhì)譜參數(shù)。
[0019] 本發(fā)明的有益效果是，利用氧化石墨烯固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速的磺胺類 藥物殘留檢測方法，方法具有良好的線性關(guān)系和精密度，回收率高，檢出限和定量限均能滿 足檢測需要;通過優(yōu)化固相萃取條件、質(zhì)譜條件和液相色譜條件，凈化效果明顯，減少了基 質(zhì)干擾，回收率高，提高了檢測效率，所建立的方法快捷、高效、實用性強。
【具體實施方式】
[0020] 以豬肉檢測為例來說明本發(fā)明。
[0021] 儀器設(shè)備： 美國Agilent公司1290-6460液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有噴射流離子聚焦電噴霧離子 源(AJS-ESI);德國IKA公司GM200型高速均質(zhì)機；日本東京理化MMV-1000W型振蕩器；日本 Hitachi公司CR22GIII型高速冷凍離心機;瑞士 Buchi公司R215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;德國IKA公司 MS3型渦旋混勻器。
[0022]材料與試劑： 氧化石墨烯由濟寧利特納米技術(shù)有限責(zé)任公司提供;3mL空柱管、篩板(孔徑<20μπι)購 于天津博納艾杰爾公司；甲醇、乙腈、丙酮、甲酸均為色譜純;無水硫酸鈉(650°C灼燒4h，冷 卻后貯存于干燥器中，備用）、氨水為分析純;實驗用水為超純水。
[0023]標(biāo)準(zhǔn)品：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉，均購自德國Dr公 司，純度均在98%以上。
[0024]固相萃取柱制作 取準(zhǔn)備好的3mL的空管柱(事先用超純水、乙腈洗滌，晾干)加入篩板，用玻璃棒壓平，裝 入15mg氧化石墨烯后蓋上篩板，備用。
[0025] 樣品前處理。
[0026] 提取:稱取5g試樣(精確至0.01 g)于50ml離心管中，加入15ml乙腈，均質(zhì)lmin，再加 入l〇g無水硫酸鈉，振蕩提取lmin后，在4°C，9000r/min條件下離心8min，重復(fù)操作一次，合 并提取液，加入10mL乙腈飽和的正己烷，振蕩，靜置分層，將乙腈層轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，在40°C 水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干。殘渣用3ml乙腈-水溶液（10+90,體積比）溶解，調(diào)節(jié)pH至6,待凈 化。
[0027]凈化:分別使用3mL甲醇、3mL水活化事先準(zhǔn)備好的氧化石墨烯固相萃取柱，然后將 樣品溶解液以lmL/min的速度過柱，最后用5mL含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中， 氮氣吹干后用lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，上機檢測。
[0028]液相色譜條件。
[0029] 色譜柱：P〇roshell 120 EC-C18,3.0X100mm，2.7ym。
[0030] 柱溫：30 °C。
[0031] 進樣體積：5yL。
[0032] 流動相:A為甲醇、B為0 · 1%甲酸水。
[0033] 流動相梯度洗脫程序：0-lmin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 80-10%A;9-10min，10%A。
[0034] 流速：0.3mL/min。
[0035] 質(zhì)譜條件。
[0036] 離子源:噴射流離子聚焦電噴霧離子源。
[0037]掃描模式:正離子模式。
[0038] 檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測。
[0039] 干燥氣溫度：325Γ。
[0040] 干燥氣流速:10L/min。
[0041 ] 霧化氣壓力：45psi。
[0042] 鞘氣溫度：350°C。
[0043] 鞘氣流速：llL/min。
[0044] 毛細管電壓:4000V。
[0045] 碰撞氣:高純氮。
[0046] 各離子對駐留時間均為60ms。
[0047] 表2磺胺類藥物的質(zhì)譜參數(shù)。
[0048] 方法評價。
[0049] 為避免基質(zhì)效應(yīng)的影響，采用基質(zhì)加標(biāo)的方式配制標(biāo)準(zhǔn)溶液進行上機測定，濃度 分別為10、20、50、100、200、50(^8/1。實驗結(jié)果表明，在10~50(^8/1濃度范圍內(nèi)，4種磺胺的 線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9965~0.9990。以10倍信噪比確定磺胺定量限，均為10yg/kg。
[0050] 準(zhǔn)確稱取5 g(精確至O.Olg)樣品，分別準(zhǔn)確添加50yL、100yL、150yL 1.00 mg/L三 個水平的4種磺胺混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在優(yōu)化實驗條件下進行前處理并上機測定，每個水平平 行測定6次，計算回收率和精密度。其平均回收率為72%~86%，精密度均小于12%。
[0051] 所述實施例僅僅是本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施例，并不是對本發(fā)明的范圍進行限 定?；诒景l(fā)明實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下，對本發(fā)明的 技術(shù)方案進行的各種改進、優(yōu)化，進而獲得的所有其他實施例，均屬于本發(fā)明權(quán)利要求書所 聲明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方法，其特征在于，所述 方法包括以下步驟： (1) 提取:稱取2-5g試樣，加入20-30mL乙腈，均質(zhì)l-2min，再加入無水硫酸鈉、氯化鈉， 振蕩提取l-3min后，8000-9000r/min條件下離心6min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴 中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干;殘渣用乙腈-水溶解，待凈化； (2) 凈化:分別使用3-5mL甲醇、3-5mL水活化氧化石墨烯固相萃取柱，然后將樣品溶解 液以每秒1滴的速度過柱，最后用含氨乙腈洗脫，收集洗脫液至15mL離心管中； (3) 檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，加入lmL流動相溶解，過0.22μπι有機相濾膜，進儀器 檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(1)所述的殘渣用乙腈-水溶解后調(diào)節(jié)pH至6。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(1)所述乙腈-水的體積比為1:9。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(2)所述的氧化石墨烯固相萃取柱的制作方法是在3mL空管柱(事先用超 純水、乙腈洗滌，晾干）內(nèi)加入篩板，用玻璃棒壓平，裝入15mg氧化石墨稀后蓋上篩板。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于氧化石墨烯固相萃取技術(shù)檢測磺胺類藥物殘留的方 法，其特征是:步驟(2)所使用的含氨乙腈體積為5mL。
【文檔編號】G01N30/06GK106018585SQ201610315261
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月14日
【發(fā)明人】倪永付
【申請人】中華人民共和國濟寧出入境檢驗檢疫局