技術(shù)特征：

1.一種芘類熒光探針，其特征在于它是1-(芘-1-基)-3-(2,6-二氯吡啶-3-基)丙烯酮，結(jié)構(gòu)式為：

2.按照權(quán)利要求1所述的一種芘類熒光探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：在容器中按摩爾比5:7加入乙酰芘的乙醇溶液和2,6-二氯吡啶-3-甲醛的乙醇溶液，再加入質(zhì)量濃度10％的氫氧化鈉水溶液，在常溫下利用磁力攪拌器攪拌反應(yīng)20h；反應(yīng)完全后過濾，點(diǎn)板確定產(chǎn)物純凈后，自然晾干3h后放入真空干燥箱干燥2h，得到橙黃色產(chǎn)物。

3.一種定量熒光檢測H⁺的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的芘類熒光探針儲備液；

(2)將2ml蒸餾水和30μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，460nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱，420nm處的熒光增強(qiáng)；

(3)用蒸餾水配制0.01M，0.1M，1M的H⁺溶液，將2ml蒸餾水和30μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，進(jìn)行pH滴定實(shí)驗；以pH為橫坐標(biāo)，相對熒光強(qiáng)度I_420nm/I_460nm為縱坐標(biāo)繪制圖并進(jìn)行Sigmoidal擬合，求得pK_a＝3.76；通過線性擬合得到最佳線性響應(yīng)范圍為pH 3.10-4.66，回歸方程為：I_420nm/I_460nm＝3.39-0.64*pH，線性系數(shù)為R²＝0.9819。

4.一種定量熒光檢測OH^-的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的芘類熒光探針儲備液；

(2)將2ml蒸餾水和30μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，463nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱；

(3)用蒸餾水配制0.01M，0.1M，1M的OH^-溶液，將2ml蒸餾水和30μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，進(jìn)行pH滴定實(shí)驗；以pH為橫坐標(biāo)，相對熒光強(qiáng)度F₀-F為縱坐標(biāo)繪制圖并進(jìn)行Sigmoidal擬合，求得pK_a＝9.65；通過線性擬合得到最佳線性響應(yīng)范圍為pH 9.41-12.18，回歸方程為：F₀-F＝116.02*pH–529.13，線性系數(shù)為R²＝0.9955。

5.一種定量熒光檢測CN^-的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的芘類熒光探針儲備液；

(2)將2ml PBS緩沖液(pH＝10.0)和20μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，463nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱；

(3)用蒸餾水配制的0.01M CN^-溶液，將2ml PBS緩沖液(pH＝10.0)和20μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，進(jìn)行滴定實(shí)驗；以CN^-濃度為橫坐標(biāo)，相對熒光強(qiáng)度F₀-F為縱坐標(biāo)繪制圖，得到CN^-濃度的工作曲線，線性回歸方程為：F₀-F＝12.40+132.60*c,c的單位為10^-6mol/L；通過線性擬合得到探針的最佳響應(yīng)范圍為：0–2.0μM，線性系數(shù)為R²＝0.9802。

6.一種定量熒光檢測HSO₃^-的方法，其特征在于，步驟為：

(1)用DMSO配制1mM的芘類熒光探針儲備液；

(2)將2ml PBS緩沖液(pH＝6.0)和20μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，463nm處的熒光強(qiáng)度逐漸減弱；

(3)用蒸餾水配制的0.001M HSO₃^-溶液，將2ml PBS緩沖液(pH＝6.0)和20μL芘類熒光探針儲備液加入熒光比色皿中，進(jìn)行滴定實(shí)驗；以HSO₃^-濃度為橫坐標(biāo)，相對熒光強(qiáng)度F₀-F為縱坐標(biāo)繪制圖，得到HSO₃^-濃度的工作曲線，線性回歸方程為：F₀-F＝15.90+927.71*c,c的單位為10^-6mol/L；通過線性擬合得到探針的最佳響應(yīng)范圍為：0-0.5μM，線性系數(shù)為R²＝0.9903。

7.如權(quán)利要求1所述的一種芘類熒光探針用于細(xì)胞pH或HSO₃^-的檢測。

8.如權(quán)利要求1所述的一種芘類熒光探針用于大腸桿菌pH的檢測。