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一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法與流程

文檔序號:12657637閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物,所述組合物由多肽及對照品檢測基質(zhì)組成,其特征在于:所述多肽的氨基酸序列為Gly-Glu-Pro-Gly-Pro-Ala-Gly-Ser-Val-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Val-Gly-Pro-Arg,對照品檢測基質(zhì)為魚骨膠。

2.一種含有權(quán)利要求1所述組合物的檢測試劑盒。

3.一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)對照品溶液的制備

1)基質(zhì)溶液的制備:將稱量好的對照品檢測基質(zhì)置于量瓶中,加入NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,加NH4HCO3溶液稀釋至刻度;

2)對照品母液的制備:將稱量好的對照品檢測基質(zhì)置于量瓶中,加入NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,將稱量好的的多肽加入該量瓶中,用NH4HCO3溶液溶解并稀釋至刻度;

3)對照品溶液制備:以步驟1)制得的基質(zhì)溶液為溶劑,將步驟2)制得的對照品母液稀釋,微孔濾膜過濾,續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液,酶解;

(2)待檢測樣品溶液的制備

將稱量好的待測樣品置于量瓶中,加NH4HCO3溶液,超聲使樣品完全溶解,加NH4HCO3溶液稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液,酶解;

(3)液質(zhì)聯(lián)用儀檢測

分別取步驟(1)制得的對照品溶液、步驟(2)制得的待檢測樣品溶液放入液質(zhì)聯(lián)用儀進行檢測,選擇m/z781.4→752.4、809.5、908.5作為檢測離子對,其中選擇m/z781.4→752.4作為多肽的定量離子對;

(4)樣品中狗骨源成分含量的計算

以對照品溶液的多肽的含量為縱坐標、峰面積為橫坐標進行標準曲線的繪制,線性相關(guān)系數(shù)R≥0.9990,由此計算出樣品中多肽的含量,然后,按下式計算出各樣品中狗骨源成分的含量:

狗骨源成分的含量(%)=(待測樣品中多肽含量/待測樣品的重量)÷(5.328×10-3)×100%。

4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(1)及步驟(2)所述的酶解溫度為37℃。

5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,步驟(3)中液質(zhì)聯(lián)用儀檢測的液相條件為:C18反相色譜柱,流動相A為0.1%(v/v)甲酸的水溶液,流動相B為0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液,流速0.3ml/min;梯度洗脫:5→20min,流動相A 90%→75%,流動相B 10%→25%,質(zhì)譜條件:電噴霧正離子模式(ESI+)進行多反應(yīng)監(jiān)測。

6.如權(quán)利要求1所述的用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物,其特征在于,所述膠類中藥為阿膠、黃明膠、龜甲膠、鹿角膠、驢骨膠、牛骨膠、豬骨膠、羊骨膠或其他膠類中藥。

7.權(quán)利要求1所述的組合物或權(quán)利要求2所述的試劑盒在檢測膠類中藥及其復方制劑中的狗骨源成分含量中的應(yīng)用。

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