本發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法
背景技術(shù)：
子宮肌瘤是由增生的子宮平滑肌組織和少量纖維結(jié)締組織形成的良形腫瘤，為女性生殖器中最常見的腫瘤。發(fā)生年齡多在30歲～50歲之間，尤其多見于不孕的婦女。子宮肌瘤的患者絕大多數(shù)無癥狀，少數(shù)可表現(xiàn)為月經(jīng)過多，經(jīng)期延長(zhǎng)，下腹包塊，壓迫癥狀(尿頻、尿急、尿儲(chǔ)留等)，下腹墜脹甚至導(dǎo)致不孕及流產(chǎn)等，嚴(yán)重影響婦女的生活質(zhì)量和生育能力。往往在普查或因其他疾病檢查中發(fā)現(xiàn)，臨床報(bào)道的子宮肌瘤發(fā)生率遠(yuǎn)較真實(shí)的發(fā)生率低。其主要癥狀有：月經(jīng)改變，壓迫癥狀，陰道分泌物增多，不孕等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，至少有20％育齡婦女有子宮肌瘤。
子宮肌瘤屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)“癓瘕”范疇，《素問·骨空論》及《靈樞·水脹》篇中有“瘕聚”、“腸覃”、“石瘕”等癓瘕疾患的較早記載。后世的中醫(yī)書中，又有比較詳細(xì)的記載，《景岳全書·婦人規(guī)》載有“瘀血留之作癓，惟婦人有這其證，……總由血?jiǎng)又畷r(shí)，余血未凈，而一有所逆，則留滯日積，而漸以成癓矣。”癓者，堅(jiān)硬不移，痛有定處，瘕者，推之可移，痛無定處。大抵癓屬血病，瘕屬氣病，彼此密切相連，難于分割。本病的形成，多與正氣虛弱，血?dú)馐д{(diào)有關(guān)?；蛴山?jīng)期產(chǎn)后，內(nèi)傷生冷，或外受風(fēng)寒，或恚怒傷肝，氣逆而血留，或憂思傷脾，氣虛而血滯，或積勞積弱，氣弱而不行所致。常以氣滯血閼，痰濕內(nèi)阻等因素結(jié)聚而成。且正氣虛弱為形成本病的主要病機(jī)，一旦形成，邪氣愈甚，正氣愈傷，故后期則形成正氣虛，邪氣實(shí)，虛實(shí)錯(cuò)雜之痼疾。病在氣則理氣行滯為主，佐以理血；病在血?jiǎng)t活血破瘀散結(jié)為主，佐以理氣。
目前臨床治療子宮肌瘤多以手術(shù)治療為主，但手術(shù)治療往往具有一定的適應(yīng)證，且患者的接受程度也限制了其應(yīng)用，常規(guī)的藥物治療大多療效欠佳。中醫(yī)治療子宮肌瘤多采用活血、化瘀、消癥的治法，具有一定治療效果，甚至可以使子宮肌瘤明顯縮小。過分活血化瘀可損傷人體正氣，甚至引起子宮出血過多，加重貧血。因此中醫(yī)治療子宮肌瘤宜標(biāo)本兼顧，益氣以扶正，化瘀以祛邪。近年來，研究表明，核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)與心肌素可相互作用影響平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和轉(zhuǎn)化。中醫(yī)藥在治療子宮肌瘤上有其獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)，中醫(yī)藥對(duì)子宮肌瘤的認(rèn)識(shí)及探索也已逐步深化，中醫(yī)藥對(duì)子宮肌瘤不僅僅是發(fā)揮其治療作用，同時(shí)也能較好的調(diào)節(jié)機(jī)體的內(nèi)分泌及免疫等多個(gè)方面。因此選用中醫(yī)藥，采取現(xiàn)代優(yōu)選的提取工藝與制備工藝，制得藥品，將為子宮肌瘤的治療提供一個(gè)確有療效的中藥新品種，為該病患者提供新的治療藥物。因此，對(duì)治療子宮肌瘤的中藥制劑進(jìn)行檢測(cè)，控制藥品質(zhì)量，保障用藥安全，顯得尤為必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法，使該藥品的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制藥品質(zhì)量。
為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
首先，本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥制劑為：按重量份數(shù)計(jì)，由丹參90～450份、當(dāng)歸90～360份、赤芍90～360份、菟絲子90～360份、淫羊藿90～300份、三棱60～300份、莪術(shù)90～360份、水蛭40～120份、土鱉蟲(土別)60～300份、牡丹皮90～360份、虎杖90～360份、茯苓120～450份、火炭母120～900份、桂枝60～300份、延胡索(元胡)60～300份、桃仁80～300份、香附90-300份、黨參120～900份和黃芪120～900份制成。其制備方法為：量稱取取丹參、當(dāng)歸、赤芍、菟絲子、淫羊藿、三棱、莪術(shù)、水蛭、土鱉蟲蟲(土別)、牡丹皮、虎杖、茯苓、火炭母、桂枝、延胡索(元胡)、桃仁、香附、黨參和黃芪，加水提取，濾過，濾液減壓濃縮至一定相對(duì)密度，加入乙醇，攪拌，靜置，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至一定相對(duì)密度，干燥，干膏粉碎過80目篩，得到藥粉，再加入輔料制成各種藥物制劑。
在以上基礎(chǔ)上，本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法，包括鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目；鑒別是對(duì)赤芍、香附、虎杖的薄層色譜鑒別；含量測(cè)定是用高效液相色譜法測(cè)定制劑中丹參的丹酚酸B含量。
前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法中，虎杖的薄層色譜鑒別方法是以虎杖對(duì)照藥材、大黃素對(duì)照品為對(duì)照，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑的薄層色譜法；赤芍的薄層色譜鑒別方法是以赤勺對(duì)照藥材、芍藥苷對(duì)照品為對(duì)照，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(20：2.5：5：0.1)為展開劑的薄層色譜法；香附的薄層色譜鑒別方法是以香附對(duì)照藥材為對(duì)照，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑的薄層色譜法。
進(jìn)一步地，前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法中，具體鑒別方法包括下述項(xiàng)目中的至少一項(xiàng)：
(1)虎杖的薄層色譜鑒別取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加熱30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性無干擾；
(2)赤芍的薄層色譜鑒別取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加水30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取赤勺對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；
(3)香附的薄層色譜鑒別取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加三氯甲烷30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取香附對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加熱1分鐘，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾。
進(jìn)一步地，前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法中，丹參的含量測(cè)定方法是以丹酚酸B對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)為流動(dòng)相的高效液相色譜法。
具體的含量測(cè)定方法包括下述項(xiàng)目中的至少一項(xiàng)：
含量測(cè)定：照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備：取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入水適量，超聲(功率300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液,用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液，即得。
測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每袋(5g)含丹參以丹酚酸B(C36H30O16)計(jì)，不得少于38mg。
本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥制劑檢測(cè)方法，專屬性強(qiáng)，精密度高，重現(xiàn)性好，回收率高，測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制藥品質(zhì)量，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的安全、有效。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合試驗(yàn)例和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
為了確保本發(fā)明方案的科學(xué)、合理、可行，通過以下一系列試驗(yàn)研究和考察，從而確定本發(fā)明的方案。以下試驗(yàn)例中以本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥顆粒劑為研究對(duì)象。
試驗(yàn)例1：
1、性狀
本發(fā)明的產(chǎn)品為棕色至棕褐色顆粒；味甜、微苦。
2、鑒別
2.1材料
儀器 電子分析天平(METTLER TOLEDO AB204-S)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)；YHG-600-S-II型紅外快速干燥箱(賀德試器有限公司)；超聲波清洗器(寧波新芝生物科技有限公司)；DHG9070A-電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；ZF三用紫外分析儀；薄層層析用硅膠為化學(xué)純，試劑均為分析純。
試藥 虎杖對(duì)照藥材(批號(hào)120980-201202)，大黃素對(duì)照品(批號(hào)110756-201110)，赤勺對(duì)照藥材(批號(hào)121092-201202)，芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)110736-201324)，香附對(duì)照藥材(批號(hào)121059-201204)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；薄層色譜用硅膠G(青島海洋化工有限公司)；石油醚、甲酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、甲醇、正已烷、二乙胺等均為分析純。
2.2虎杖的鑒別：
按《中國(guó)藥典(2010版)一部》中虎杖藥材的鑒別方法，進(jìn)行鑒別，分離效果理想，且陰性無干擾。
取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加熱30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
2.3赤芍的鑒別：
在選擇鑒別方法時(shí)，首先采用了《中國(guó)藥典(2010版)一部》中赤芍藥材的鑒別方法，TLC法展開后，在與芍藥苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯不同顏色斑點(diǎn)，有干擾，經(jīng)調(diào)整展開劑后，也無法消除干擾。繼而選擇以下四種方法進(jìn)行試驗(yàn)。其試驗(yàn)方法及結(jié)果見表1：
表1 該中藥制劑中赤芍的TLC鑒別試驗(yàn)方法比較
從表1可知，方法四可得預(yù)期效果：
取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加水30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取赤勺對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.4香附的鑒別：
先按《中國(guó)藥典(2010版)一部》香附藥材的鑒別方法進(jìn)行試驗(yàn)，但供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。進(jìn)一步調(diào)整TLC法的展開劑，效果也不理想。參考相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行以下五種方法試驗(yàn)。其方法及結(jié)果見表2：
表2 該中藥制劑中香附的TLC鑒別試驗(yàn)方法比較
從上表看出方五較為理想：
取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加三氯甲烷30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取香附對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加熱1分鐘，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
3檢查
應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄IL)。
3.1粒度1、粒度：除另有規(guī)定外，照粒度測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅪB第二法，雙篩分法)測(cè)定，不能通過一號(hào)篩與能通過五號(hào)篩之和，不得過15％。粒度測(cè)定結(jié)果見表3。
表3 粒度測(cè)定結(jié)果表
3.2水分：照水分測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅨH)測(cè)定，不得過6.0％，水分測(cè)定結(jié)果見表4。
表4 水分測(cè)定結(jié)果表
3.3溶化性：取供試品1袋，加熱水200ml，攪拌5分鐘，立即觀察，應(yīng)全部溶化或呈混懸狀?？扇苄灶w粒應(yīng)全部溶化，允許有輕微渾濁。三批樣品試驗(yàn)結(jié)果，三批顆粒全部溶化，符合規(guī)定。
3.4裝量差異：除另有規(guī)定外,取供試品10袋,分別稱定每袋內(nèi)容物的重量,每袋裝量與標(biāo)示裝量(10.0g)相比較，裝量差異限度應(yīng)在標(biāo)示裝量(10.0g)的±5％以內(nèi)，超出裝量差異限度的不得多于2袋，并不得有1袋超出限度的1倍。結(jié)果見表5。
表5 裝量差異測(cè)定結(jié)果表
3.5微生物限度：照微生物限度檢查法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄XIII C) 檢查，本發(fā)明的產(chǎn)品三批樣品微生物限度檢查，結(jié)果見表6，均符合規(guī)定。
表6 三批樣品微生物限度檢查表
3.6重金屬及有害元素：照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法測(cè)定。結(jié)果見表7
表7 重金屬及有害元素測(cè)定結(jié)果
如上表所示，所測(cè)數(shù)據(jù)均未超過10ppm，故不作為質(zhì)量檢測(cè)的技術(shù)方案。
試驗(yàn)例2：
1含量測(cè)定
1.1儀器及試藥
儀器：高效液相色譜儀(LC-10ATVP型)；ANASTAR色譜數(shù)據(jù)工作站；SPD-10Avp紫外檢測(cè)器；TG332A(十萬分之一)微量分析天平(上海天平儀器廠)；超聲波清洗器(250W，35KHz，北京創(chuàng)新德儀器設(shè)備廠)。
試劑：乙腈為色譜純，甲醇為色譜純，水為姓哈哈純凈水。
丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)111562-201302)。
2樣品制備
(1)對(duì)照品溶液的制備：精密稱取丹酸酸B對(duì)照品適量，加水使其溶解制成每1ml含丹酸酸B60μg的溶液，即得。
(2)供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入水適量，超聲(功率300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液,用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液，即得。
(3)陰性對(duì)照溶液的制備：按處方取除丹參以外的各藥材，按本品制備工藝制備陰性樣品，稱取1g,按供試品溶液的制備方法操作，制得陰性對(duì)照溶液。
3色譜條件的選擇
在進(jìn)行丹酚酸B色譜條件選擇時(shí)，參考中國(guó)藥典2010年版一部丹參項(xiàng)下的丹酚酸B含量測(cè)定色譜條件，丹酚酸B的色譜條件為：漢邦-C18色譜柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-甲醇-甲酸-水(10：30：1：59)為流動(dòng)相；流速1.0ml/分鐘；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，柱溫25℃。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品中丹酚酸B分離較好，該色譜條件可作為丹酚酸B含測(cè)色譜條件。
4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
系統(tǒng)適用性試驗(yàn)經(jīng)過試驗(yàn)，在乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)條件下，樣品中丹酚酸B主峰對(duì)稱性良好，與相鄰峰分離度較好，色譜柱的理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)為6587，陰性對(duì)照無干擾，故確定流動(dòng)相組成和比例，確定色譜主的理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)應(yīng)不低于4000。
5線性關(guān)系的考察
配制274ug/ml的丹酚酸B對(duì)照品溶液,精密吸取2、4、8、15、25、40ml置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含丹酚酸B:10.96μg、21.92μg、43.84μg、82.2μg、137μg、219.2μg的系列對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10μl測(cè)定,測(cè)定峰面積,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表8。
表8 線性關(guān)系考察試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明丹酚酸B在0.01096-0.2192μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程：y＝11418x-6460.2，r＝0.9996。
6重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批樣品(20150301)6份,按供試品溶液制備方法制備成供試品溶液,按色譜條件測(cè)定樣品中丹酚酸B含量。結(jié)果RSD＝1.83％。
7精密度試驗(yàn)
精密吸取對(duì)照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，按色譜條件測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次,以丹酚酸B的峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(％)，結(jié)果見表9。
表9 精密度考察試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果表明：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(％)為1.21％(n＝6)，小于3％，表明重復(fù)性良好。
8穩(wěn)定性試驗(yàn)
稱取樣品按供試品溶液制備方法制備成供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h精密吸取供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，按色譜條件測(cè)定樣品中丹酚酸B含量，求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(％)，結(jié)果見表10。
表10 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果，供試品溶液在設(shè)定的時(shí)間內(nèi)注入色譜儀，測(cè)得平均峰面積為544525.7，RSD為0.99％(n＝6)，表明制備的供試品液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
9加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量的樣品(8.33mg/g)約0.15g，共6份，置50ml量瓶中，分別精確加入丹酚酸B對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.262mg/ml)各5ml；按供試品的制備方法制備供試品溶液，按色譜條件吸取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定丹酚酸B的含量,按下式計(jì)算出回收率，計(jì)算式如下，結(jié)果見表11。
回收率＝(C-A)/B×100％
A:樣品中丹酚酸B的量(mg)
B：丹酚酸B對(duì)照品加入量(mg)
C：測(cè)得量(mg)
表11 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)
結(jié)果：平均回收率為98.678％，RSD為1.37％(n＝6)，表明丹酚酸B的回收率良好。
10樣品測(cè)定
取3個(gè)批號(hào)的本品供試品溶液制備方法操作制備供試品溶液，按色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算出各樣品中丹酚酸B含量(mg/g),試驗(yàn)結(jié)果見表12。
每袋含量(mg/袋)＝含量×每袋袋重注：每袋袋重為10g
表12 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果
上述3批樣品測(cè)得的分別為65.6mg/袋、67.7mg/袋、73.1mg/袋。
下面給出幾個(gè)用于詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方式的實(shí)施例。
實(shí)施例1 治療子宮肌瘤的中藥制劑中虎杖的鑒別：
虎杖的鑒別方法是以大黃素對(duì)照品、虎杖對(duì)照藥材為對(duì)照，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑的薄層色譜法，具體為：取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加熱30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例2 治療子宮肌瘤的中藥制劑中赤芍的鑒別：
赤芍的鑒別方法是以芍藥苷對(duì)照品、赤勺對(duì)照藥材為對(duì)照，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)為展開劑的薄層色譜法，具體為：取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加水30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取赤勺對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例3 治療子宮肌瘤的中藥制劑中香附的鑒別：
香附的鑒別方法是以香附對(duì)照藥材為對(duì)照，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑的薄層色譜法，具體為：取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加三氯甲烷30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取香附對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加熱1分鐘，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
實(shí)施例4 治療子宮肌瘤的中藥制劑中丹參的含量測(cè)定：
丹參含量測(cè)定方法是以丹酚酸B對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)為流動(dòng)相的高效液相色譜法，具體的含量測(cè)定方法為：
含量測(cè)定：照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備：取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入水適量，超聲(功率300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液,用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液，即得。
測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本發(fā)明所述治療子宮肌瘤的中藥制劑的檢測(cè)方法包括鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目，其中鑒別至少包括實(shí)施例1～實(shí)施例3中任意一項(xiàng)，含量測(cè)定包括實(shí)施例4中的項(xiàng)目。
實(shí)施例5 治療子宮肌瘤的中藥顆粒劑的檢測(cè)方法包括：
性狀：本制劑為黃褐色顆粒；氣微，味微苦；
鑒別：
(1)取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液5ml，水浴加熱30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(2)取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加水30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值至8～9，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取赤勺對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸(20：5：2.5：0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(3)取裝量差異項(xiàng)下的顆粒研細(xì)，稱取約3g，加三氯甲烷30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取香附對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷－乙酸乙酯－二乙胺(20：6：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在80℃加熱1分鐘，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查：應(yīng)符合中國(guó)藥典2010年版一部附錄I C顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；
含量測(cè)定：照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備：取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入水適量，超聲(功率300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液,用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液，即得。
測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每粒(5g)含丹參以丹酚酸B(C36H30O16)計(jì)，不得少于38mg。
當(dāng)然，以上只是本發(fā)明的具體應(yīng)用范例，本發(fā)明還有其他的實(shí)施方式，凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。