本發(fā)明涉及中醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及治療子宮肌瘤的中藥制劑及其制備方法
背景技術(shù)：
：子宮肌瘤是由增生的子宮平滑肌組織和少量纖維結(jié)締組織形成的良形腫瘤，為女性生殖器中最常見的腫瘤。發(fā)生年齡多在30歲～50歲之間，尤其多見于不孕的婦女。子宮肌瘤的患者絕大多數(shù)無癥狀，少數(shù)可表現(xiàn)為月經(jīng)過多，經(jīng)期延長(zhǎng)，下腹包塊，壓迫癥狀(尿頻、尿急、尿儲(chǔ)留等)，下腹墜脹甚至導(dǎo)致不孕及流產(chǎn)等，嚴(yán)重影響婦女的生活質(zhì)量和生育能力。往往在普查或因其他疾病檢查中發(fā)現(xiàn)，臨床報(bào)道的子宮肌瘤發(fā)生率遠(yuǎn)較真實(shí)的發(fā)生率低。其主要癥狀有：月經(jīng)改變，壓迫癥狀，陰道分泌物增多，不孕等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，至少有20％育齡婦女有子宮肌瘤。子宮肌瘤屬于祖國醫(yī)學(xué)“癓瘕”范疇，《素問·骨空論》及《靈樞·水脹》篇中有“瘕聚”、“腸覃”、“石瘕”等癓瘕疾患的較早記載。后世的中醫(yī)書中，又有比較詳細(xì)的記載，《景岳全書·婦人規(guī)》載有“瘀血留之作癓，惟婦人有這其證，……總由血?jiǎng)又畷r(shí)，余血未凈，而一有所逆，則留滯日積，而漸以成癓矣?！卑L者，堅(jiān)硬不移，痛有定處，瘕者，推之可移，痛無定處。大抵癓屬血病，瘕屬氣病，彼此密切相連，難于分割。本病的形成，多與正氣虛弱，血?dú)馐д{(diào)有關(guān)?；蛴山?jīng)期產(chǎn)后，內(nèi)傷生冷，或外受風(fēng)寒，或恚怒傷肝，氣逆而血留，或憂思傷脾，氣虛而血滯，或積勞積弱，氣弱而不行所致。常以氣滯血閼，痰濕內(nèi)阻等因素結(jié)聚而成。且正氣虛弱為形成本病的主要病機(jī)，一旦形成，邪氣愈甚，正氣愈傷，故后期則形成正氣虛，邪氣實(shí)，虛實(shí)錯(cuò)雜之痼疾。病在氣則理氣行滯為主，佐以理血；病在血?jiǎng)t活血破瘀散結(jié)為主，佐以理氣。目前臨床治療子宮肌瘤多以手術(shù)治療為主，但手術(shù)治療往往具有一定的適應(yīng)證，且患者的接受程度也限制了其應(yīng)用，常規(guī)的藥物治療大多療效欠佳。中醫(yī)治療子宮肌瘤多采用活血、化瘀、消癥的治法，具有一定治療效果，甚至可以使子宮肌瘤明顯縮小。過分活血化瘀可損傷人體正氣，甚至引起子宮出血過多，加重貧血。因此中醫(yī)治療子宮肌瘤宜標(biāo)本兼顧，益氣以扶正，化瘀以祛邪。近年來，研究表明，核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)與心肌素可相互作用影響平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和轉(zhuǎn)化。中醫(yī)藥在治療子宮肌瘤上有其獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)，中醫(yī)藥對(duì)子宮肌瘤的認(rèn)識(shí)及探索也已逐步深化，中醫(yī)藥對(duì)子宮肌瘤不僅僅是發(fā)揮其治療作用，同時(shí)也能較好的調(diào)節(jié)機(jī)體的內(nèi)分泌及免疫等多個(gè)方面。因此選用中醫(yī)藥，采取現(xiàn)代優(yōu)選的提取工藝與制備工藝，制得藥品，將為子宮肌瘤的治療提供一個(gè)確有療效的中藥新品種，為該病患者提供新的治療藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種治療子宮肌瘤的中藥制劑及其制備方法。本發(fā)明提供的治療子宮肌瘤的中藥制劑，具有良好的治療子宮肌瘤的作用，本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)、制劑產(chǎn)品較穩(wěn)定，制備條件易控制，操作簡(jiǎn)單，易于大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明采用的技術(shù)方案：首先，本發(fā)明提出這樣一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，按重量份數(shù)計(jì)，由以下原料藥制成：丹參90～450份、當(dāng)歸90～360份、赤芍90～360份、菟絲子90～360份、淫羊藿90～300份、三棱60～300份、莪術(shù)90～360份、水蛭40～120份、土鱉蟲(土別)60～300份、牡丹皮90～360份、虎杖90～360份、茯苓120～450份、火炭母120～900份、桂枝60～300份、延胡索(元胡)60～300份、桃仁80～300份、香附90-300份、黨參120～900份和黃芪120～900份。進(jìn)一步地，治療子宮肌瘤的中藥制劑按重量份數(shù)計(jì)，由以下原料藥制成：丹參300份、當(dāng)歸180份、赤芍240份、菟絲子240份、淫羊藿300份、三棱150份、莪術(shù)180份、水蛭60份、土鱉蟲(土別)90份、牡丹皮300份、虎杖270份、茯苓300份、火炭母450份、桂枝150份、延胡索(元胡)90份、桃仁150份、香附180份、黨參270份和黃芪270份。前述制劑是以可溶性淀粉各糊精作賦形劑、0.2％阿司帕坦作矯味劑、85％乙醇作潤濕劑制成的顆粒劑。治療子宮肌瘤的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟：按量稱取取丹參、當(dāng)歸、赤芍、菟絲子、淫羊藿、三棱、莪術(shù)、水蛭、土鱉蟲蟲(土別)、牡丹皮、虎杖、茯苓、火炭母、桂枝、延胡索(元胡)、桃仁、香附、黨參和黃芪，加水提取，濾過，濾液減壓濃縮至一定相對(duì)密度，加入乙醇，攪拌，靜置，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至一定相對(duì)密度，干燥，干膏粉碎過80目篩，得到藥粉，再加入輔料制成各種藥物制劑。具體地，前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟：按量稱取丹參、當(dāng)歸、赤芍、菟絲子、淫羊藿、三棱、莪術(shù)、水蛭、土鱉蟲(土別)、牡丹皮、虎杖、茯苓、火炭母、桂枝、延胡索(元胡)、桃仁、香附、黨參和黃芪，加6～10倍量水，水提取1～3次，每次1～2h，濾過，濾液濃縮至密度1.05～1.25(50℃)，得濃縮液，加入乙醇使含醇量為40-80％，攪拌，靜置24h，取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.25～1.30(50℃)，得濃縮液，濃縮液60℃～80℃真空干燥，得浸膏提取物，粉碎過5號(hào)篩，得到藥粉，再加入輔料制成各種藥物制劑。優(yōu)選地，前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟：按量稱取丹參、當(dāng)歸、赤芍、菟絲子、淫羊藿、三棱、莪術(shù)、水蛭、土鱉蟲(土別)、牡丹皮、虎杖、茯苓、火炭母、桂枝、延胡索(元胡)、桃仁、香附、黨參和黃芪，分別加9倍量、8倍量水，煎煮提取2次，每次1h，過濾，濾液濃縮至密度為1.15(50℃)，加入乙醇使含醇量為70％，攪拌，靜置24h，取上清液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.30(50℃)，得濃縮液，濃縮液微波減壓干燥，得浸膏提取物，粉碎過5號(hào)篩，得到藥粉，再加入輔料制成各種藥物制劑。更具體地，前述治療子宮肌瘤的中藥制劑的制備方法，是按1:1的質(zhì)量比例向藥粉中加入可溶性淀粉和糊精，以用量占藥粉總質(zhì)量0.2％的阿司帕坦作矯味劑，85％乙醇作潤濕劑制粒，顆粒于50℃～70℃干燥，整粒，即得顆粒劑。本發(fā)明中原料藥的選用及療效機(jī)理詳述如下：丹參本品為唇形科植物丹參miltiorrhizaBge.的干燥根和根莖。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。本品具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。用于胸痹心痛，脘腹脅痛，癥瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛。當(dāng)歸本品為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。秋末采挖，除去須根和泥沙，待水分稍蒸發(fā)后，捆成小把，上棚，用煙火慢慢熏干。本品具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便。用于血虛萎黃，眩暈心悸，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，虛寒腹痛，風(fēng)濕痹痛，跌撲損傷，癰疽瘡瘍，腸燥便秘之功效。酒當(dāng)歸活血通經(jīng)。用于經(jīng)閉痛經(jīng)，風(fēng)濕痹痛，跌撲損飭。赤芍本品為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPalL或川赤PaeoniaveitchiiLynch的干燥根。春、秋二季采控，除去根莖、須根及泥沙，曬干。本品應(yīng)符合《中國藥典》2010年版一部“赤芍”項(xiàng)下各項(xiàng)規(guī)定。菟絲子本品為旋花科植物南方菟絲子CwscwiaaustralisR.Br.或菟絲子CuscutachinensisLam.的干燥成熟種子。秋季果實(shí)成熟時(shí)采收植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)。本品具有清熱涼血，散瘀止痛之功效。用于熱人營血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。淫羊藿本品為小藥科植物淫羊蕾EpimediumbrevicomuMaxim.、箭葉淫羊蕾Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。夏、秋季蓮葉茂盛時(shí)采收，曬干或陰干。本品具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕之功效。用于腎陽虛衰，陽痿遺精，筋骨痿軟，風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣。三棱本品為黑三棱科植物黑三棱SparganiumstoloniferumBuch--Ham.的干燥塊莖。冬季至次年春采挖，洗凈，削去外皮，曬干。本品具有破血行氣，消積止痛之功效。用于癥瘕痞塊，痛經(jīng)，瘀血經(jīng)閉，胸痹心痛，食積脹痛。莪術(shù)本品為姜科植物蓬義術(shù)CurcumaphaeocaulisVal.、廣西莪術(shù)CurcumaKwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang或溫郁金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling的干燥根蓮。后者習(xí)稱“溫莪術(shù)”。冬季莖葉枯萎后采挖，洗凈，蒸或煮至透心，曬干或低溫干燥后除去須根和雜質(zhì)。本品具有行氣破血，消積止痛之功效。用于癥瘕痞塊，瘀血經(jīng)閉，胸痹心痛，食積脹痛。水蛭本品為水蛭科動(dòng)物螞蟥WhitmczniapigraWhitman、水蛭HirudonipponicaWhitman或柳葉螞蟥hitmczniaacranulataWhitman的干燥全體。夏、秋二季捕捉,用沸水燙死，曬干或低溫干燥。本品具有破血通經(jīng)，逐瘀消癥之功效。用于血瘀經(jīng)閉，癥瘕痞塊，中風(fēng)偏癱，跌撲損傷。土鱉蟲(土別)本品為鱉蠊科昆蟲地鱉Eupolyph,agasin,ensisWalker或冀地鱉SteleophagaPlancyi(Boleny)的雌蟲干燥體。捕捉后，置沸水中燙死，曬干或烘干。本品具有破血逐瘀,續(xù)筋接骨之功效。用于跌打損傷，筋傷骨折，血瘀經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻腹痛，癥瘕痞塊。牡丹皮本品為毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥裉皮。秋季采挖根部，除去細(xì)根和泥沙，剝?nèi)「?，曬干或刮去粗皮，除去木心，曬干。前者?xí)稱連丹皮，后者習(xí)稱刮丹皮。本品具有清熱涼血，活血化瘀之功效。用于熱人營血，溫毒發(fā)斑，吐血艦血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲傷痛，癰腫瘡毒。虎杖本品為寥科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的干燥根莖和根。春、秋二季采挖，除去須根，洗凈，趁鮮切短段或厚片，曬干。本品具有利濕退黃，清熱解毒，散瘀止痛，止咳化痰之功效。用于濕熱黃疸，淋濁，帶下，風(fēng)濕痹痛，癰腫瘡毒，水火燙傷，經(jīng)閉，癥瘕，跌打損傷，肺熱咳嗽。茯苓本品為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。多于月采挖，挖出后除去泥沙，堆置“發(fā)汗”后，攤開晾至表面干燥，再“發(fā)汗”，反復(fù)數(shù)次至現(xiàn)皺紋、內(nèi)部水分大部散失后，陰干，稱為“茯苓個(gè)”；或?qū)Ⅴr茯苓按不同部位切制，陰干，分別稱為“茯苓塊”和“茯苓片”。本品具有利水滲濕，健脾，寧心之功效。用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠?；鹛磕副酒窞檗た浦参锘鹛磕窹olygonumchinenseL.或硬毛火炭母PolygonumchinenseL.var.hispidumHook.f.的干燥全草。夏、秋二季采挖，除去泥沙，曬干。本品具有清熱解毒，利濕消滯，涼血止癢，明目退翳之功效。用于治痢疾，腸炎，消化不良，肝炎，感冒，扁桃體炎，咽喉炎，白喉，百日咳，角膜云翳，霉菌性陰道炎，白帶，乳腺炎，癤腫，小兒膿皰瘡，濕疹，毒蛇咬傷。桂枝本品為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝。春、夏二季采收，除去葉，曬干，或切片曬干。本品具有發(fā)汗解肌，溫通經(jīng)脈，助陽化氣，平?jīng)_降氣之功效。用于風(fēng)寒感冒，脘腹冷痛，血寒經(jīng)閉，關(guān)節(jié)痹痛，痰飲，水腫，心悸，奔豚。延胡索本品為罌粟科植物延胡索CArrydalhyanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖。夏初莖葉枯萎時(shí)采挖，除去須根，洗凈，置沸水中煮至恰無白心時(shí)，取出，曬千。本品具有活血，行氣，止痛之功效。用于胸脅、脘腹疼痛，胸痹心痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀阻，跌撲腫痛。桃仁本品為薔薇科植物桃Prunuspersica(L.)Batsch或山桃Prunusdavidiana(Carr.)Franch.的干燥成熟種子。果實(shí)成熟后采收，除去果肉和核殼，取出種子，曬干。本品具有活血祛瘀，潤腸通便，止咳平喘之功效。用于經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕痞塊，肺癰腸癰，跌撲損傷，腸燥便秘，咳嗽氣喘。香附本品為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖。秋季采挖，燎去毛須，置沸水中略煮或蒸透后曬干，或燎后直接曬干。本品具有疏肝解郁，理氣寬中，調(diào)經(jīng)止痛之功效。用于肝郁氣滯，胸脅脹痛，疝氣疼痛，乳房脹痛，脾胃氣滯，脘腹痞悶，脹滿疼痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)。黨參本品為桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參CodonopsistangshenOliv.的干燥根。秋季采挖，洗凈，曬干。本品具有健脾益肺，養(yǎng)血生津之功效。用于脾肺氣虛，食少倦怠，咳嗽虛喘，氣血不足，面色萎黃，心悸氣短，津傷口渴，內(nèi)熱消渴。黃芪本品為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干。本品具有補(bǔ)氣升陽，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌之功效。用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，半身不遂，痹痛麻木，癰疽難潰，久潰不斂。本發(fā)明通過對(duì)本方組成藥材的功能主治、化學(xué)成分及藥理作用和臨床應(yīng)用的研究，并結(jié)合本品的功能主治，同時(shí)考慮大生產(chǎn)的可行性及設(shè)備要求等條件，選擇合理的工藝路線。丹參、虎杖、赤芍、火炭母、香附等19味藥水提取，但因水提液中的雜質(zhì)較多，服用量較大，同時(shí)考慮制成的顆粒劑溶化性及顆粒劑裝量等因素，擬對(duì)水提液濃縮至相應(yīng)密度后醇沉除雜，取醇沉上清液回收乙醇，濃縮，干燥，得干膏，加入輔料，制成顆粒。本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥制劑，具有活血化瘀，行氣化痰，清熱益氣，消癓止痛之功效。適用濕熱下注、淤血遏阻，或熱毒蘊(yùn)結(jié)所致的子宮肌瘤及見上述征候者。本發(fā)明的組成藥物，均為藥典和地標(biāo)所載的常用藥，其資源豐富。本發(fā)明的治療子宮肌瘤的中藥制劑優(yōu)選為顆粒劑，方便患者服用，真正意義的做到“三小五便”，實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化。通過對(duì)本制劑的提取、制備工藝研究，優(yōu)選出了較為合理的提取工藝條件及制備工藝條件。本發(fā)明的制備工藝簡(jiǎn)單、可行、穩(wěn)定，制備條件溫和易控制，操作簡(jiǎn)單，易于大規(guī)模生產(chǎn)。附圖說明圖1為本發(fā)明的相對(duì)臨界濕度曲線圖；圖2為實(shí)驗(yàn)例4中模型組(HE×100)鏡下觀察圖；圖3為實(shí)驗(yàn)例4中正常組(HE×100)鏡下觀察圖；圖4為實(shí)驗(yàn)例4中高劑量組(HE×100)鏡下觀察圖；圖5為實(shí)驗(yàn)例4中桂枝茯苓膠囊組(HE×100)鏡下觀察圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。為了確保本發(fā)明方案的科學(xué)、合理、可行，通過進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)研究和考察，從而確定本發(fā)明的方案。所用的飲片均購自貴州同濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)鑒定符合《中國藥典》2010年版一部及《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版各藥材(飲片)項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。實(shí)驗(yàn)例1：水提工藝正交實(shí)驗(yàn)的考察(1)藥材吸水率考察按處方比例量稱取水提藥材(醇提藥材已吸濕透)：馬鞭草、赤芍、香附，加適量水浸泡，每隔30分鐘觀察1次浸泡情況，直至藥材全部透心，濾出全部未被吸收的水，稱濕藥材重量，按下式計(jì)算藥材吸水率，結(jié)果見表1。表1藥材吸水實(shí)驗(yàn)結(jié)果故首次加水煎煮時(shí)，應(yīng)補(bǔ)足藥材113％的吸水量，為方便生產(chǎn)計(jì)算，首次加水煎煮時(shí)，以全部水提藥材多加1倍量水，因醇提藥渣已全部潤濕，與理論吸水率所要加的水相關(guān)不大，因此首次水提時(shí)多加1倍量水是合理的。(2)水提條件篩選①正交因素水平的確定影響水煎煮的主要因素有：煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時(shí)間等。本實(shí)驗(yàn)以這3個(gè)因素為考察因素，各取3個(gè)水平，進(jìn)行4因素3水平正交實(shí)驗(yàn)，篩選水提工藝條件，因素水平表見表2。表2水提正交因素水平表②評(píng)價(jià)指標(biāo)選擇以丹參中丹酚酸B的轉(zhuǎn)移率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)來優(yōu)選水提條件。③樣品制備按處方比例稱取醇提藥材丹參、虎杖等藥材，共9份，按L9(34)正交實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行煎煮水提，藥液用200目濾布過濾后，減壓濃縮至適量，稱量，記錄重量，即得。④水提正交實(shí)驗(yàn)樣品中芍藥苷含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-甲醇-甲酸-水(10:30:1:59)作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算不低于3000。對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹酸酸B對(duì)照品適量，加水使其溶解制成每1ml含丹酸酸B60μg的溶液，即得。供試品溶液的制備：稱取樣品適量，置50ml量瓶中，加水適量，超聲處理(功率250W，頻率40KHZ)30min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，用0.45μ濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，即得。含量測(cè)定分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10ull，注入色譜儀，記錄，計(jì)算含量。結(jié)果見表3、4、5。表3水提正交實(shí)驗(yàn)樣品中丹酚酯量結(jié)果表4水提正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表5水提正交實(shí)驗(yàn)方差分析表注:F0.05(2，2)＝19.00F0.01(2，2)＝99.0從上表結(jié)果分析可知，各因素作用主次為A>B>C，D因素為空白作為誤差來源，與其他因素作方差分析優(yōu)選水提條件。A、B因素均有顯著性差異，且因素A中A2>A3>A1，則應(yīng)選擇A2為水提工藝條件參數(shù)；因素B中B2>B3>B1，則應(yīng)選擇B2為水提工藝條件參數(shù)；因素B無顯著性差異，B2>B1>B3，根據(jù)方差分析結(jié)果，有顯著性差異的因素A、B必選A2、B2，結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際，無顯著性差異的因素C應(yīng)選擇C2為水提工藝條件，故選擇水提工藝A2B2C2，即煎煮2次，加7倍量水，每次提取1小時(shí)。(3)優(yōu)選水提工藝條件驗(yàn)證根據(jù)選擇水提工藝條件A2B2C2，即煎煮2次，第一次加8倍量水(扣除藥材吸水)，第二次各加7倍量水，每次提取1小時(shí)，濾過，濾液濃縮。據(jù)此條件稱取藥材丹參、虎杖、赤芍、香附等藥材，按水提條件提取，濾過，濾液濃縮，測(cè)定樣品中的丹酚酸B，驗(yàn)證三批，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。表6水提正交驗(yàn)證結(jié)果表由上表結(jié)果得知，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果與正交結(jié)果相一致，說明水提工藝條件基本穩(wěn)定，可作為水提工藝條件。實(shí)驗(yàn)例2：醇沉工藝正交實(shí)驗(yàn)的考察1、醇沉工藝正交因素水平的確定影響水提醇沉的因素主要有醇沉浸膏密度、含醇量、靜置時(shí)間等，本實(shí)驗(yàn)以醇沉浸膏密度、含醇量、靜置時(shí)間3個(gè)因素各取3個(gè)水平，因素水平見表7。表7水提醇沉正交實(shí)驗(yàn)因素水平2、指標(biāo)選擇以水提醇沉樣品中丹酚酸B的量為指標(biāo)優(yōu)選醇沉條件。3、樣品制備按處方比例稱取醇提藥材丹參、虎杖、杠板歸，按醇提工藝條件提取，藥渣分別加水提藥材：馬鞭草、赤芍、香附，按水提條件提取，水提藥液均分成九份，按四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)L9(34)的要求進(jìn)行醇沉正交實(shí)驗(yàn)，回收乙醇，濃縮，至適量，稱樣品重量，并記錄，按水提條件含測(cè)方法測(cè)定樣品含量，結(jié)果見表-16，對(duì)醇沉正交進(jìn)行方差分析，優(yōu)選醇沉條件，結(jié)果見表8，9、10。表8水提醇沉正交樣品重量及含量測(cè)定表9水提醇沉正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表10水提醇沉正交實(shí)驗(yàn)方差分析表差異來源SS自由度變異均方統(tǒng)計(jì)量F顯著性密度A8976.124488.144.1P＜0.05含醇量B6484.423242.231.8P＜0.05靜置時(shí)間C318.82159.41.6空白D203.72101.81.0總計(jì)15983.08注：F0.05(2，2)＝19.00F0.01(2，2)＝99.0從上表結(jié)果分析得知，以空白D作為誤差來源。各因素作用主次為A＞B＞C，A、B因素有顯著性差異，且因素A中A2＞A1＞A3，因素B中B2＞B1＞B3，則應(yīng)選擇A2、B2為醇沉工藝條件參數(shù)；因素C無顯著性差異，因素C中C2＞C3＞C1，結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際，無顯著性差異的C因素選擇C2為水提醇沉工藝條件，故選擇醇沉工藝A2B2C2，即相對(duì)密度為1.15(60℃)的浸膏，加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時(shí)。4、醇沉工藝驗(yàn)證根據(jù)選擇醇沉工藝條件A282C2，即相對(duì)密度為1.15(50℃)的浸膏，加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時(shí)。據(jù)此條件稱取藥材丹參、虎杖、赤芍、香附等藥材，按水提條件提取，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.15(50℃)，加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮，測(cè)定樣品中的芍藥苷，驗(yàn)證三批，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表11。表11水提醇沉正交驗(yàn)證結(jié)果表可見，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果與正交結(jié)果相一致，說明醇沉工藝條件基本穩(wěn)定，可作為醇沉工藝條件。實(shí)驗(yàn)例3：制劑成型工藝研究無糖型顆粒劑常用輔料賦形劑和矯味劑，其中常賦形有可溶性淀粉、糊精，矯味劑常用有阿斯巴甜、甜味素等。而本方所得膏粉引濕性很強(qiáng)，粘性較大，本實(shí)驗(yàn)將對(duì)賦形劑及甜味劑進(jìn)行篩選，以確定制備工藝條件。1、賦形劑的篩選為擴(kuò)大使用人群，兼顧肥胖癥或糖尿病人使用，將其制成無糖型顆粒劑。在現(xiàn)代中藥制劑工藝中，無糖型顆粒常用的賦形劑有糊精、可溶性淀粉。本方所得的浸膏粉引濕性較強(qiáng)，粘性大，為了使顆粒具有相對(duì)較小的吸濕性和流動(dòng)性，對(duì)制粒賦形劑進(jìn)行了篩選。稱取浸膏粉與輔料，比例為5/4，混合均勻，采用濕法制粒制得顆粒。以成型性及休止角為考察指標(biāo)選定賦形劑。表12制備成型處方比例由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用可溶性淀粉易制粒，其制成的顆粒形狀、均勻性及流動(dòng)性均好于可溶性淀粉制成的顆粒，故選可溶性淀粉作為本方的賦形劑，即選處方3。2、潤濕劑的篩選按處方3比例稱取膏粉及糊精，混勻，用75％乙醇、85％乙醇、95％乙醇作潤濕劑制軟材，14目篩制粒，于60℃干燥，14目篩整粒，實(shí)驗(yàn)過程中軟材制粒情況及顆粒分布情況見表13。表13不同潤濕劑制粒情況實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用75％乙醇較易制粒，且顆粒頒均勻，成型率高，故選75％乙醇作為潤濕劑。經(jīng)對(duì)潤濕劑用量作篩選實(shí)驗(yàn)，用量為膏粉與輔料之和的25％，制粒過程及顆粒成型等均較好。3、矯味劑阿斯巴甜用量的篩選阿斯巴甜的用量通常為0.1％-0.3％,按上述處方3，分別加上不同量的阿斯巴甜，與處方3中的輔料混勻，加浸膏用14目篩制粒，干燥，用4g顆粒，測(cè)定顆粒的溶出度，同時(shí)品嘗口感，根據(jù)口感確定阿斯巴甜的用量。表14阿斯巴甜用量的篩選按上述處方制備的顆粒，處方4制備的顆粒粒度、溶化性均符合要求，口感苦澀；處方5制備的顆粒粒度、溶化性均符合要求，微有點(diǎn)甜味，口感較好；處方6阿斯巴甜用量較多，味澀，甜。最終確定制備工藝最終選定處方6，即膏粉與糊精：可溶性淀粉(1：1)比為5/4、阿斯巴甜為膏粉與輔料之和的0.2％，用85％乙醇制粒。4、顆粒流動(dòng)性及臨界濕度的測(cè)定(1)休止角的測(cè)定采用固定漏斗法。將3只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的坐標(biāo)紙上4.00cm高度處，小心地將制備的顆粒沿漏斗壁倒入最上的漏斗中，直到最下面漏斗形成的藥粉圓錐尖端接觸到漏斗口為止，由坐標(biāo)紙測(cè)出圓錐底部的直徑，計(jì)算休止角(tgα＝h/(d/2))，結(jié)果見表15。表15休止角測(cè)定結(jié)果測(cè)得顆粒休止角為34.4°，說明顆粒流動(dòng)性較好，能較好顆粒裝量。(2)臨界相對(duì)濕度的測(cè)定將制備好的顆粒干燥至恒重后，在恒重的稱量瓶底部放入厚約2mm的顆粒，精密稱量后置于鹽過飽和溶液的干燥器內(nèi)(稱量瓶蓋打開)，于25℃恒溫培養(yǎng)箱保持72h后稱量后，計(jì)算吸濕率。以吸濕率為縱坐標(biāo),相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)作圖，根據(jù)曲線斜率確定臨界相對(duì)濕度，如圖1所示。表16鹽的過飽和溶液在25℃的相對(duì)濕度和吸濕率表4、制備方法：以上丹參、當(dāng)歸、赤芍、菟絲子、淫羊藿、三棱、莪術(shù)、水蛭、土別、牡丹皮等藥材加水提取2次，第一次加9倍量水，第二次加8倍量水，每次提取1小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度1.15(60℃)，加甲醇使含醇量70％，靜置24小時(shí)，取上清液，回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎成細(xì)粉，加適量輔粒制粒，干燥，即得。實(shí)驗(yàn)例4：本發(fā)明用于藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)(一)實(shí)驗(yàn)材料1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雌性健康成年未孕SD大鼠，體重180～200g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2藥物與試劑2.1由本發(fā)明的組方制備的香虎清婦炎顆粒(XHQFYKL)：由貴州壽仙藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)20070302；2.2桂枝茯苓膠囊(GZFLC)：購自江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：Z10950005；2.3已烯雌酚注射液，2mg/1ml，購自廣州明興制藥廠，批號(hào)：MB3201；2.4黃體酮注射液，20mg/1ml，購自浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：121201；2.5雌二醇放射免疫分析藥盒，孕酮放射免疫分析藥盒，購自天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司。(二)實(shí)驗(yàn)方法1.分組及給藥取SD大鼠72只，隨機(jī)分為六組，每組12只，即正常對(duì)照組、模型組、XHQFYKL低(0.375g/Kg/d)、中(0.75g/Kg/d)、高(1.125g/Kg/d)劑量組、陽性藥對(duì)照組(桂枝茯苓膠囊0.3g/Kg/d)。模型組及各給藥組大鼠隔日肌注已烯雌酚0.04mg/只，另每周肌注黃體酮1mg/只；對(duì)照組大鼠隔日肌注花生油0.1ml/只，共20周。造模第11周起，各給藥組及陽性藥對(duì)照組按上述劑量分別灌胃給予XHQFYKL或桂枝茯苓膠囊；模型組、正常對(duì)照組灌胃給予蒸餾水2ml/只，每天1次，每周6天，連續(xù)10周。2觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物的一般狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，股動(dòng)脈取血并處死動(dòng)物。取血及子宮進(jìn)行以下指標(biāo)檢查。2.1血清雌二醇、孕酮：取血，靜置后分離血清，放免法測(cè)雌二醇、孕酮水平。2.2子宮系數(shù)、子宮橫徑：取子宮，電子天平稱重，計(jì)算子宮系數(shù)(子宮重量mg/大鼠體重g)，游標(biāo)卡尺測(cè)量子宮分角下(子宮頸以上)及分角根部(一側(cè)分角子宮根部)橫徑。2.3病理組織檢查：對(duì)各組大鼠子宮進(jìn)行肉眼觀察，然后取子宮分角以上相同部位0.5cm一段子宮，中性福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下進(jìn)行子宮組織病理檢查。3.統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，單因素方差分析(One-WayANOVA)，各組間兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05為差異顯著性。4.結(jié)果4.1XHQFYKL對(duì)血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平的影響結(jié)果(見表17)顯示，模型組血清E2、P水平均明顯增高，與正常對(duì)照組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。XHQFYKL各治療組后可不同程度降低血清、P水平，與模型組相比有顯著性差異(高、中劑量組P＜0.01，低劑量組、桂枝茯苓膠囊組P＜0.05)。表17XHQFYKL對(duì)血中雌二醇、孕酮水平的影響注：與對(duì)照組比較△△P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05,**P＜0.01；(下同)4.2XHQFYKL對(duì)子宮系數(shù)及子宮橫徑的影響表18結(jié)果顯示，模型組子宮重量增加，子宮系數(shù)增大，與對(duì)照組相比，差異有顯著性(P＜0.01)。XHQFYKL灌胃給藥可不同程度降低子宮系數(shù)，與模型組相比，差異有顯著性，XHQFYKLC高、中劑量組(P＜0.01)，低劑量組(P＜0.05)。表18XHQFYKLC對(duì)子宮系數(shù)的影響表19結(jié)果顯示,模型組子宮分角下及分角根部宮橫徑較對(duì)照組增加(P＜0.01)。XHQFYKL各治療組兩處子宮橫徑均小于模型組，差異有顯著性(高、中劑量組P＜0.01，低劑量組P＜0.05)。表19XHQFYKL對(duì)子宮橫徑的影響5.3組織形態(tài)學(xué)的影響肉眼觀察：模型組子宮較正常對(duì)照組體積增大，質(zhì)地厚實(shí)，暗紅色，部分區(qū)域水腫呈空泡狀。治療組子宮體積、顏色與正常對(duì)照組接近，鮮紅色。鏡下觀察：模型組子宮肌纖維明顯增生肥大，肌層明顯增厚，肌纖維排列紊亂，呈輕微編織狀，出現(xiàn)穿插現(xiàn)象，病變近似平滑肌瘤樣增生。(見圖2)；GSFJK高、中劑量組和桂枝茯苓膠囊組子宮肌層明顯變薄，肌纖維細(xì)長(zhǎng)或稍肥大，排列規(guī)則，內(nèi)環(huán)外縱，偶見或未見穿插現(xiàn)象。(見圖4、5)。4結(jié)論傳統(tǒng)認(rèn)為雌激素有誘發(fā)并促進(jìn)子宮肌瘤生長(zhǎng)的作用。生物化學(xué)測(cè)定證實(shí)，子宮肌瘤較正常肌層中雌二醇(estradial,E2)的濃度明顯增高,E2向雌酮(E1)的轉(zhuǎn)化率也低于正常肌組織，提示局部高E2環(huán)境的存在,可刺激肌瘤的生長(zhǎng)。近年來發(fā)現(xiàn)孕激素在子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展中也有重要作用。Kawaguchi等通過肌瘤細(xì)胞的培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，肌瘤生長(zhǎng)也受孕激素影響，而且在雌-孕激素培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞，比在單用雌激素和無激素培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞增生活躍，且由雌-孕激素培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞肌絲和致密體增多。本實(shí)驗(yàn)參照Fujii法，給予大鼠注射外源性雌、孕激素，HE染色顯示子宮平滑肌層增生,平滑肌排列紊亂,細(xì)胞增大,病理改變與人子宮肌瘤病理組織學(xué)結(jié)構(gòu)類似,子宮系數(shù)增大，子宮橫徑增粗，說明模型成功。本模型的成功也說明了高水平雌、孕激素是子宮肌瘤發(fā)生的主要原因之一。造模后，予GSFJKC進(jìn)行治療，并以桂枝茯苓膠囊作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從子宮系數(shù)、子宮橫徑以及組織病理變化對(duì)比，發(fā)現(xiàn)GSFJKC能抑制子宮平滑肌瘤樣增生。檢測(cè)血清雌、孕激素水平，結(jié)果顯示，GSFJKC有調(diào)節(jié)雌、孕激素的作用，這可能是其治療子宮肌瘤的機(jī)制之一。通過本實(shí)驗(yàn)我們認(rèn)為XHQFYKLC有治療子宮肌瘤的作用，并且可能通過調(diào)節(jié)雌、孕激素而發(fā)揮作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供了部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的介紹。實(shí)施例1一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，由以下原料藥制成：丹參333g、當(dāng)歸200g赤芍267g、菟絲子267g、淫羊藿333g、三棱167g、莪術(shù)167g、水蛭67g、土別100g、牡丹皮333g、虎杖300g、茯苓333g、火炭母500g、桂枝167g、延胡索100g、桃仁167g、香附200g、黨參300g、黃芪300g。按照以下步驟制備：按量稱取藥材，加6～10倍量水，煎煮提取1～3次，每次1～2h，過濾，合并濾液，濃縮至密度為1.05～1.30(50℃)，再加入乙醇，攪拌均勻，含醇量為40％～80％，靜置24h，取上清液，濃縮至密度為1.15～1.30(50℃)，干燥，粉碎，得到粉末，再加入輔料制成各種藥物制劑。實(shí)施例2一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，由以下原料藥制成：丹參333g、當(dāng)歸200g赤芍267g、菟絲子267g、淫羊藿333g、三棱167g、莪術(shù)167g、水蛭67g、土別100g、牡丹皮333g、虎杖300g、茯苓333g、火炭母500g、桂枝167g、延胡索100g、桃仁167g、香附200g、黨參300g、黃芪300g。按照以下步驟制備：按量稱取藥材，加7倍量水，煎煮提取2次，每次1h，過濾，得水提液，濃縮至密度為1.15(50℃)，再加入乙醇，攪拌均勻，含醇量為70％，靜置24h，取上清液，濃縮至密度為1.30(50℃)，干燥，粉碎，得到粉末，再加入可溶淀粉，總質(zhì)量0.1％的阿司帕坦作矯味劑制成顆粒劑。本制劑開水沖服。一次1袋，一日三次。每袋裝10g。實(shí)施例3一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，由以下原料藥制成：丹參200g、當(dāng)歸100g赤芍167g、菟絲子167g、淫羊藿200g、三棱100g、莪術(shù)100g、水蛭45g、土別650g、牡丹皮200g、虎杖175g、茯苓200g、火炭母350g、桂枝100g、延胡索75g、桃仁100g、香附150g、黨參175g、黃芪175g。按照以下步驟制備：按量稱取藥材，加7倍量水，煎煮提取2次，每次1h，過濾，得水提液，濃縮至密度為1.10(50℃)，再加入乙醇，攪拌均勻，含醇量為70％，靜置24h，取上清液，濃縮至密度為1.30(50℃)，干燥，粉碎，得到粉末，總質(zhì)量0.1％的阿司帕坦作矯味劑制成顆粒劑。本制劑開水沖服。一次1袋，一日三次。每袋裝10g。實(shí)施例4一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，由以下原料藥制成：丹參200g、當(dāng)歸100g赤芍167g、菟絲子167g、淫羊藿200g、三棱100g、莪術(shù)100g、水蛭45g、土別650g、牡丹皮200g、虎杖175g、茯苓200g、火炭母350g、桂枝100g、延胡索75g、桃仁100g、香附150g、黨參175g、黃芪175g。按照以下步驟制備：按量稱取藥材，加7倍量水，煎煮提取2次，每次1h，過濾，得水提液，濃縮至密度為1.20(50℃)，再加入乙醇，攪拌均勻，含醇量為75％，靜置24h，取上清液，濃縮至密度為1.30(50℃)，干燥，粉碎，得到粉末，總質(zhì)量0.1％的阿司帕坦作矯味劑制成顆粒劑。本制劑開水沖服。一次1袋，一日三次。每袋裝10g。實(shí)施例5一種治療子宮肌瘤的中藥制劑，由以下原料藥制成：丹參333g、當(dāng)歸200g赤芍267g、菟絲子267g、淫羊藿333g、三棱167g、莪術(shù)167g、水蛭67g、土別100g、牡丹皮333g、虎杖300g、茯苓333g、火炭母500g、桂枝167g、延胡索100g、桃仁167g、香附200g、黨參300g、黃芪300g。按照以下步驟制備：按量稱取藥材，加7倍量水，煎煮提取2次，每次1h，過濾，得水提液，濃縮至密度為1.25(50℃)，再加入乙醇，攪拌均勻，含醇量為70％，靜置24h，取上清液，濃縮至密度為1.30(50℃)，干燥，粉碎，得到粉末，再加入可溶淀粉，總質(zhì)量0.1％的阿司帕坦作矯味劑制成顆粒劑。本制劑開水沖服。一次1袋，一日三次。每袋裝10g。當(dāng)然，以上只是本發(fā)明的具體應(yīng)用范例，本發(fā)明還有其他的實(shí)施方式，凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3