1.檢測(cè)馬鈴薯主食粉或馬鈴薯主食中馬鈴薯粉含量的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(一)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
(1)將小麥粉和馬鈴薯粉按照(0-10):(10-0)的重量比例混合,得若干馬鈴薯主食粉樣品,備用;以所述馬鈴薯主食粉為原料,將其制作成若干個(gè)馬鈴薯主食樣品,備用;
(2)取所述馬鈴薯主食粉樣品和馬鈴薯主食樣品,分別加入中性緩沖溶液,使蛋白溶出,取含有蛋白的溶液,得不同濃度梯度的主食粉標(biāo)準(zhǔn)溶液和主食標(biāo)準(zhǔn)溶液;
(3)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分別對(duì)所述主食粉標(biāo)準(zhǔn)溶液和主食標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),對(duì)所得電泳圖中的馬鈴薯糖蛋白進(jìn)行定量分析,以小麥粉和馬鈴薯粉的混合比例為橫坐標(biāo),馬鈴薯糖蛋白量為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,分別得馬鈴薯主食粉回歸方程和馬鈴薯主食回歸方程;
(二)檢測(cè)待測(cè)樣品中馬鈴薯粉的添加量
取待測(cè)樣品,按照步驟(2)和(3)的操作對(duì)所述待測(cè)樣品進(jìn)行處理和檢測(cè),依據(jù)回歸方程,計(jì)算得到待測(cè)樣品中馬鈴薯粉的添加量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:小麥粉和馬鈴薯粉的重量比例分別為10:0,9:1,8:2,7:3,6:4,5:5,0:10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于:步驟(2)的操作為:按照1g:(5-10)mL的固液比,分別將馬鈴薯主食粉樣品、馬鈴薯主食樣品與中性緩沖溶液混合,超聲提取,離心所得提取液,取上清液,即得;
優(yōu)選地,在將馬鈴薯主食樣品與中性緩沖溶液混合前,先對(duì)所述馬鈴薯主食樣品進(jìn)行冷凍干燥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于:所述中性緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽-NaCl緩沖溶液、磷酸鹽-NaCl-KCl緩沖溶液、磷酸鹽-NaCl-KCl-SDS緩沖溶液、Tris-HCl-蔗糖-SDS-甘氨酸緩沖溶液中的一種;優(yōu)選為磷酸鹽-NaCl-KCl-SDS緩沖溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于:按w/v計(jì),NaCl、KCl、SDS、蔗糖、甘氨酸在各緩沖溶液中的添加量各自獨(dú)立地為:NaCl為0.5%-1.0%,KCl為0.01%-0.05%,SDS為0.8%-2%,蔗糖為15%-20%,甘氨酸為1.2%-1.8%;
優(yōu)選地,所述中性緩沖溶液的pH為6.5-7.4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或4或5所述的方法,其特征在于:所述聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠的濃度為10-15%,優(yōu)選為10-12.5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于:所述電泳的條件為先用70-90V電壓電泳5-15min,再用110-130V電壓電泳0.8-1.2h;
優(yōu)選地,先用80V電壓電泳10min,再用120V電壓電泳1h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或4或5或7所述的方法,其特征在于:采用如下方法制備上樣樣品:向所述主食粉標(biāo)準(zhǔn)溶液和主食標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入上樣緩沖溶液,沸水浴加熱處理1-10min,離心,取上清液,即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:采用考馬斯亮藍(lán)對(duì)電泳后的凝膠進(jìn)行染色。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(一)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
(1)將小麥粉和馬鈴薯粉按照(0-10):(10-0)的重量比例混合,得若干馬鈴薯主食粉樣品,備用;以所述馬鈴薯主食粉為原料,將其制作成若干個(gè)馬鈴薯主食樣品,備用;
(2)取所述馬鈴薯主食粉樣品和馬鈴薯主食樣品,分別加入pH值為6.5-7.4的中性緩沖溶液,超聲處理,離心,取上清液,得不同濃度梯度的主食粉標(biāo)準(zhǔn)溶液和主食標(biāo)準(zhǔn)溶液;
(3)向所述主食粉標(biāo)準(zhǔn)溶液和主食標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入上樣緩沖溶液,采用10-12.5%的聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),先用70-90V電壓電泳5-15min,轉(zhuǎn)用110-130V電壓電泳0.8-1.2h;對(duì)所得電泳圖中的馬鈴薯糖蛋白進(jìn)行定量分析,以小麥粉和馬鈴薯粉的混合比例為橫坐標(biāo),馬鈴薯糖蛋白量為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,分別得馬鈴薯主食粉回歸方程和馬鈴薯主食回歸方程;
(二)檢測(cè)待測(cè)樣品中馬鈴薯粉添加量
取待測(cè)樣品,按照步驟(2)和(3)的操作對(duì)所述待測(cè)樣品進(jìn)行處理,當(dāng)所述待測(cè)樣品為馬鈴薯主食粉時(shí),依據(jù)馬鈴薯主食粉回歸方程,計(jì)算得到待測(cè)樣品中馬鈴薯粉的添加量;當(dāng)所述待測(cè)樣品為馬鈴薯主食時(shí),依據(jù)馬鈴薯主食回歸方程,計(jì)算得到待測(cè)樣品中馬鈴薯粉的添加量。