本發(fā)明涉及藥品控制領(lǐng)域，特別涉及一種他克莫司制劑的評(píng)價(jià)方法。

背景技術(shù)：

他克莫司(tacrolimus，F(xiàn)K506)是從鏈霉菌屬中分離出的發(fā)酵產(chǎn)物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)屬23元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。由日本藤澤公司(現(xiàn)在的安斯泰來制藥有限公司)研究開發(fā)，作為一種強(qiáng)力的新型免疫抑制劑，主要通過抑制白介素-2(L-2)的釋放，全面抑制T淋巴細(xì)胞的作用，較環(huán)孢素(CsA)強(qiáng)100倍。他克莫司滴眼液可有效治療春季角膜結(jié)膜炎。

春季角膜結(jié)膜炎(vernalkeratoconjunctivitis，VKC)，是一種雙側(cè)慢性外眼疾病，特應(yīng)性個(gè)體對(duì)環(huán)境中普遍存在的抗原可以發(fā)生反應(yīng)。主要的特應(yīng)性疾病包括濕疹、哮喘和蕁麻疹?；颊咧饕憩F(xiàn)為外眼疾病，其主要癥狀為瘙癢、流淚、羞光和黏性分泌物。春季角膜炎是一種復(fù)發(fā)性結(jié)膜炎，常常雙眼受累，并可損害角膜表層。

臨床實(shí)驗(yàn)表明，他克莫司滴眼液能改善VKC患者的體征與癥狀，對(duì)于經(jīng)過一系列藥物治療(抗組胺藥、血管收縮劑)仍有強(qiáng)烈畏光、以至于無法正常生活和頑固病例，具有毒性低、迅速、良好的治療效果。

在對(duì)照的臨床試驗(yàn)中證明有效性是所有藥品的重要依據(jù)。鑒于此類實(shí)驗(yàn)相關(guān)的時(shí)間與費(fèi)用，不適合作為常規(guī)質(zhì)量控制方法。因此，體外替代試驗(yàn)常用于確保產(chǎn)品質(zhì)量和特性，可提供產(chǎn)品性能一致的合理證據(jù)。目前已知的他克莫司滴眼液進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，沒有對(duì)體外釋放實(shí)驗(yàn)進(jìn)行說明，也沒有該品種體外釋放試驗(yàn)的相關(guān)報(bào)道。因此，找到一種簡(jiǎn)便快捷的醫(yī)藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)方法是十分重要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于公開一種他克莫司制劑的評(píng)價(jià)方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種他克莫司制劑的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：1)體外釋放試驗(yàn)；2)用HPLC的方法測(cè)定藥物含量；3)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)果分析。

優(yōu)選的，體外釋放試驗(yàn)是按照以下步驟進(jìn)行的：利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用人工膜隔開，接收液體積為5～14mL，然后加樣品0.1mL～1mL，于實(shí)驗(yàn)溫度25～40℃、攪拌轉(zhuǎn)速100～600r/min下試驗(yàn)；分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積0.5～2.0mL，作為供試品溶液。

優(yōu)選的，人工膜的材料為尼龍、聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯、聚醚砜中的任意一種，人工膜孔徑為0.22μm～1.2μm。

進(jìn)一步優(yōu)選的，人工膜擴(kuò)散面積為2.1cm2，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜。

優(yōu)選的，HPLC的應(yīng)用條件如下：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，柱長50～250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑2～6μm，流動(dòng)相為水：異丙醇：四氫呋喃＝(4～5)：(2～3)：(2～3)，流速為0.5～2.0mL/min，柱溫為10～60℃，進(jìn)樣量為10～100ul，檢測(cè)波長為200～240nm。

進(jìn)一步優(yōu)選的，HPLC方法用到的色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm。

優(yōu)選的，結(jié)果分析的方法是：

1)通過HPLC測(cè)定藥物含量，用單位面積累積釋放量相對(duì)時(shí)間的平方根繪圖生成一條直線，其斜率代表釋放率(K值)，每個(gè)樣品重復(fù)6次，各得到6個(gè)K值；

2)用自制制劑T的6個(gè)K值分別除以參比制劑R的6個(gè)K值，得到36個(gè)比值(T/R)，將36個(gè)比值從小到大排序，選擇第8個(gè)和第29個(gè)比值作為90％置信區(qū)間的下限和上限，如果置信區(qū)間在0.75～1.3333范圍內(nèi)，說明兩個(gè)制劑無明顯差異。

優(yōu)選的，他克莫司制劑的組成成分，以質(zhì)量比計(jì)算，他克莫司含量是0.08％～0.12％，高分子聚合物含量是0.1％～0.6％，氯化鈉含量是0.6％～0.9％，苯扎氯銨的含量為0.1％～0.2％，磷酸二氫鈉含量為0.05％～0.2％，磷酸氫二鈉含量為0.005％～0.2％。

本發(fā)明的有益效果是：提供一種他克莫司滴眼液體外釋放實(shí)驗(yàn)方法，用于評(píng)價(jià)同品種制劑間產(chǎn)品的一致性情況，具有操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性良好、高效靈敏等優(yōu)點(diǎn)，可提高該制劑品種的質(zhì)量控制水平，為臨床試驗(yàn)提供參考。

附圖說明

附圖1是他克莫司對(duì)照品圖譜。

附圖2是塔克司樣品圖譜。

附圖3是他克莫司滴眼液樣品圖譜。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。

以下實(shí)施使用的儀器為：Agilent 1260高效液相色譜儀(含紫外檢測(cè)器)；試劑及其來源：色譜級(jí)異丙醇和四氫呋喃購于默克公司，無水乙醇購于廣州化學(xué)試劑廠，試劑用水為純化水；試藥及其來源：他克莫司滴眼液(廣州邁達(dá)康醫(yī)藥科技有限公司)、塔克司(他克莫司滴眼液參比制劑，日本千壽株式會(huì)社)。

所述他克莫司滴眼液的組成成分，以質(zhì)量比計(jì)算，他克莫司含量是0.08％～0.12％，高分子聚合物含量是0.1％～0.6％，氯化鈉含量是0.6％～0.9％，苯扎氯銨的含量為0.1％～0.2％，磷酸二氫鈉含量為0.05％～0.2％，磷酸氫二鈉含量為0.005％～0.2％。

實(shí)施例1

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.22μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表1不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

用單位面積累積釋放量相對(duì)時(shí)間的平方根繪圖生成一條直線，其斜率代表釋放率(K值)。每個(gè)樣品重復(fù)6次，各得到6個(gè)K值。用他克莫司滴眼液T的6個(gè)K值分別除以塔克司R的6個(gè)K值，得到36個(gè)比值(T/R)，將36個(gè)比值從小到大排序，選擇第8個(gè)和第29個(gè)比值作為90％置信區(qū)間的下限和上限，如果置信區(qū)間在0.75～1.3333(用百分?jǐn)?shù)表示75％～133.33％)范圍內(nèi)，說明兩個(gè)制劑無明顯差異。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為94.20～108.96，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表2：

表2釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例2

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為4.7cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表3不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為94.20～108.96，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表4：

表4釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例3

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.80μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為1.5cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表5不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為86.28～105.93％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表6：

表6釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例4

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μmPVDF(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH5.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表7不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為92.00～101.77％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表8：

表8釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例5

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μmPTFE(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH9.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表9不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為92.57～106.07％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表10：

表10釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例6

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μmPES(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表11不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為94.64～106.31％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表12：

表12釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例7

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速300r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表13不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為88.98～100.09％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表14：

表14釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例8

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.45μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速100r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5:2:2)，流速為1.2mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表15不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為95.31～101.33％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表16：

表16釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例9

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.80μm尼龍膜(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為4.5:2.5:2)，流速為1.0mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表17不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為80.76～95.75％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表18：

表18釋放率(K值)比值排序

實(shí)施例10

(1)體外釋放試驗(yàn)

利用藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀測(cè)定體外釋藥性能，接收池與供給池用孔徑0.8μmN66膜(擴(kuò)散面積為2.1cm²，使用前用pH6.00人工淚液浸泡過夜)隔開，接收液體積為7mL，然后加樣品0.3mL，于實(shí)驗(yàn)溫度35℃、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min下試驗(yàn)。分別于0.5、1、2、4、6h取樣體積1.0mL(及時(shí)補(bǔ)加同溫等量接收液)，作為供試品溶液。

(2)HPLC檢測(cè)含量

色譜條件為：色譜柱為Thermo Syncronis C18柱，柱長250mm*內(nèi)徑4.6mm*粒徑5μm，流動(dòng)相為水-異丙醇-四氫呋喃(體積比為5.5:1.5:2)，流速為1.5mL/min，柱溫為55℃，進(jìn)樣量為20ul，檢測(cè)波長為220nm。按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，最終得到樣品的單位面積累積釋放量，結(jié)果見下表。

表19不同時(shí)間點(diǎn)的單位面積累積釋放量

(3)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

按照實(shí)施例1中結(jié)果統(tǒng)計(jì)的方法進(jìn)行分析。本次實(shí)驗(yàn)90％置信區(qū)間為91.66～103.71％，表明他克莫司滴眼液與塔克司無明顯差異，結(jié)果詳見表20：

表20釋放率(K值)比值排序

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這種改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。