本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的HPLC測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

尼可地爾又名煙浪丁、硝煙酯，屬硝酸酯類化合物，是目前上市的心血管系統(tǒng)藥品中的唯一的具有雙重作用機(jī)智的治療冠心病，心絞痛的藥品。它既有硝酸酯類藥物擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管，持續(xù)性增加冠狀動(dòng)脈血流量，一直冠狀動(dòng)脈痙攣的作用，又能阻止細(xì)胞內(nèi)鈣離子的游離，增加細(xì)胞膜對(duì)鉀離子的通透性。另外，它還具有抑制血小板聚集，防止形成血栓的作用。其結(jié)構(gòu)式如下：

按照ICH（人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)）指南Q2A、Q2B規(guī)定，要求為尼可地爾成品在出口放行及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中的有關(guān)物質(zhì)的準(zhǔn)確測(cè)定，提供合適的方法，目前普遍采用TLC方法來控制有關(guān)物質(zhì)，但該方法適用性差，準(zhǔn)確度不高，不能準(zhǔn)確定量。相對(duì)于TLC法，高效液相色譜儀（HPLC）法，具有快速準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，所以其應(yīng)用也日益廣泛。

現(xiàn)有技術(shù)中，高效液相色譜儀測(cè)定尼可地爾的有關(guān)物質(zhì)（李步良、黃東、王昉，高效液相色譜儀發(fā)測(cè)定尼可地爾的有關(guān)物質(zhì)，中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)雜志，2014年1月，第4期，第2卷，P52頁(yè)）公開了一種方法：碳十八烷鍵合硅膠（5um）填充4㎜×250㎝不銹鋼柱；流動(dòng)相為水：四氫呋喃：三乙胺：三氟乙酸（982:10:5:3）；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；流速：調(diào)整流速使尼可地爾出峰時(shí)間約為18min。該方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析，但存在的問題是：流動(dòng)相中的四氫呋喃毒性大，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員身體有損害，對(duì)環(huán)境有污染；三乙胺是可揮發(fā)性的鹽，同樣對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境有危害；分析時(shí)間長(zhǎng)，主峰（尼可地爾）出峰時(shí)間約為18min，根據(jù)行業(yè)慣例，分析樣品有關(guān)物質(zhì)時(shí)，單個(gè)樣品的采集時(shí)間至少是主峰出峰時(shí)間的3倍，即單個(gè)樣品采集時(shí)間至少54min。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的HPLC分析方法。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的HPLC分析方法，在該分析方法中：固定相為碳十八烷基鍵合硅膠的反相柱，流動(dòng)相為緩沖溶液與甲醇和四氫呋喃混合溶液，所述流動(dòng)相以等度方式洗脫尼可地爾樣品，所述緩沖溶液的組成為三氟乙酸和三乙胺，采用三乙胺調(diào)節(jié)PH范圍至5.8～6.2，三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%；所述流動(dòng)相中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為0.5%；所述流動(dòng)相中四氫呋喃的體積分?jǐn)?shù)為1.0%；所述流動(dòng)相中緩沖溶液的體積分?jǐn)?shù)98.5%；柱溫為30℃～40℃，流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。

優(yōu)選的方法，所述緩沖溶液的PH為6.0。

優(yōu)選的方法，所述柱溫為35℃。

優(yōu)選的方法，所述尼可地爾樣品是指經(jīng)過前處理的尼可地爾原料藥或者尼可地爾成品。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明建立了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的液相色譜條件，提供了一種尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析方法。該方法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適合有關(guān)物質(zhì)的控制和穩(wěn)定性研究，為有關(guān)物質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定建立了基礎(chǔ)，從而對(duì)藥品質(zhì)量控制、用藥安全提供可能。通過降低毒性大的有機(jī)溶劑、揮發(fā)性鹽的比例，減少采集時(shí)間，使得經(jīng)濟(jì)成本降低，適合規(guī)模化生產(chǎn)時(shí)使用，同時(shí)減輕對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的危害。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1的色譜分析典型示意圖。

圖2是本發(fā)明實(shí)施例2的色譜分析典型示意圖。

圖3是本發(fā)明實(shí)施例3的色譜分析典型示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

以下實(shí)施例中使用試劑及儀器設(shè)備如下：

HPLC為Ultimate3000（賽默飛/Thermo），工作站為變色龍色譜工作站，色譜柱為XDB-C18（Agilent，Zorbax Eclipse,250㎜×4.6㎜,5um），電子分析天平（梅特勒，十萬分之一），超純水系統(tǒng)（Agilent），四氫呋喃（默克，色譜級(jí)），甲醇（默克，色譜級(jí)），三氟乙酸（Fisher，色譜級(jí)），三乙胺（國(guó)藥，分析級(jí)），注射用尼可地爾（北京四環(huán)科寶制藥有限公司）。

實(shí)施例1：

1.1 樣品溶液配制：用流動(dòng)相作為溶劑,精密稱取注射用尼可地爾適量，配制1.0mg/ml的樣品溶液，然后用0.45um濾膜過濾后，作為尼可地爾樣品溶液。精密移取上述尼可地爾樣品溶液1ml于100ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解后定容，搖勻后作為自身對(duì)照溶液。

1.2 色譜條件：色譜柱為C18硅膠柱（Agilent , Zorbax Eclipse,250㎜×4.6㎜,5um），流動(dòng)相為緩沖溶液與甲醇和四氫呋喃混合溶液（緩沖溶液：甲醇：四氫呋喃=98.5:0.5:1.0 V/V/V），其中緩沖溶液的組成為三氟乙酸和三乙胺，采用三乙胺調(diào)節(jié)PH范圍至6.0，三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%；柱溫為35℃，流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20ul。

1.3 進(jìn)樣：取1.1項(xiàng)下的樣品溶液按照1.2項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣。

1.4 結(jié)果：洗脫完畢后，得到樣品溶液的色譜圖。結(jié)果尼可地爾的各個(gè)有關(guān)物質(zhì)達(dá)到基線分離，峰型良好，分析時(shí)間適中，達(dá)到了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析要求。并且通過自身對(duì)照法得到樣品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。

實(shí)施例2：

2.1 樣品溶液配制：同實(shí)施例1項(xiàng)下樣品溶液配制。

2.2 色譜條件：色譜柱為C18硅膠柱（Agilent , Zorbax Eclipse,250㎜×4.6㎜,5um），流動(dòng)相為緩沖溶液與甲醇和四氫呋喃混合溶液（緩沖溶液：甲醇：四氫呋喃=98.5:0.5:1.0 V/V/V），其中緩沖溶液的組成為三氟乙酸和三乙胺，采用三乙胺調(diào)節(jié)PH范圍至6.2，三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%；柱溫為30℃，流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20ul。

2.3 進(jìn)樣：取2.1項(xiàng)下的樣品溶液按照2.2項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣。

2.4 結(jié)果：洗脫完畢后，得到樣品溶液的色譜圖。結(jié)果尼可地爾的各個(gè)有關(guān)物質(zhì)達(dá)到基線分離，峰型良好，分析時(shí)間變長(zhǎng)，達(dá)到了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析要求。并且通過自身對(duì)照法得到樣品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。

實(shí)施例3：

3.1 樣品溶液配制：同實(shí)施例1 項(xiàng)下的樣品溶液配制。

3.2 色譜條件：色譜柱為C18硅膠柱（Agilent , Zorbax Eclipse,250㎜×4.6㎜,5um），流動(dòng)相為緩沖溶液與甲醇和四氫呋喃混合溶液（緩沖溶液：甲醇：四氫呋喃=98.5:0.5:1.0 V/V/V），其中緩沖溶液的組成為三氟乙酸和三乙胺，采用三乙胺調(diào)節(jié)PH范圍至5.8，三氟乙酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%；柱溫為40℃，流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為20ul。

3.3 進(jìn)樣：取3.1項(xiàng)下的樣品溶液按照3.2項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣。

3.4 結(jié)果：洗脫完畢后，得到樣品溶液的色譜圖。結(jié)果尼可地爾的各個(gè)有關(guān)物質(zhì)達(dá)到基線分離，峰型良好，分析時(shí)間變短，達(dá)到了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析標(biāo)準(zhǔn)，但是雜質(zhì)峰與溶劑峰的分離度比實(shí)施例1中的分離度小。并且通過自身對(duì)照法得到樣品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。

實(shí)施例4：

4.1 樣品溶液配制：同實(shí)施例1項(xiàng)下的樣品溶液配制，平行配制6份尼可地爾樣品溶液及各自的自身對(duì)照溶液。

4.2 色譜條件：同實(shí)施例1項(xiàng)下的色譜條件。

4.3進(jìn)樣：取4.1項(xiàng)下的樣品溶液按照4.2項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣。

3.4 結(jié)果：洗脫完畢后，得到6份樣品溶液的色譜圖。結(jié)果尼可地爾的各個(gè)有關(guān)物質(zhì)達(dá)到基線分離，峰型良好，達(dá)到了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析標(biāo)準(zhǔn)。通過自身對(duì)照法得到樣品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量，靠近主峰的雜質(zhì)含量RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）為1.23%。表明該方法重現(xiàn)性良好。

綜上所述，實(shí)施例1的方案是優(yōu)選方案，尼可地爾的各個(gè)有關(guān)物質(zhì)達(dá)到基線分離，峰型良好，分析時(shí)間適中，分離度良好，達(dá)到了尼可地爾有關(guān)物質(zhì)的分析要求。該方法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可以有效分析尼可地爾的有關(guān)物質(zhì)，對(duì)藥品有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制、藥品用藥安全提供了可能。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。