本發(fā)明涉及依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)方法，具體涉及1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：依匹哌唑是一款用于治療精神分裂癥的抗精神病藥物。該藥物化學(xué)名為Brexpiprazole，它還被批準(zhǔn)作為一款輔助治療藥物用于重度抑制癥(MDD)，MDD是一種嚴(yán)重的精神病癥，可導(dǎo)致持續(xù)的悲傷、挫折感或憤怒。精神分裂癥是一種慢性、嚴(yán)重并令人致殘的腦部障礙，它可以導(dǎo)致妄想和幻覺。據(jù)美國(guó)國(guó)家心理衛(wèi)生研究所提供的信息，這種疾病影響了大約1％的美國(guó)人。在其最糟糕時(shí)，MDD可導(dǎo)致自殺，據(jù)世界衛(wèi)生組織稱，每年大約有100萬(wàn)人因此而失去生命。該藥由大冢制藥公司于2015年8月投放于美國(guó)市場(chǎng)，目前未在中國(guó)境內(nèi)上市。中間體作為本品合成過(guò)程中的中間產(chǎn)品，其質(zhì)量情況直接影響成品的質(zhì)量和安全性有效性，而有關(guān)物質(zhì)作為保證藥品安全可靠的一個(gè)相當(dāng)重要的質(zhì)量控制指標(biāo)，幾乎所有的化學(xué)藥品都涉及到有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，同類藥品的有關(guān)物質(zhì)檢查方法也不盡相同。依匹哌唑和中間體有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，目前無(wú)法在公開的文獻(xiàn)報(bào)道中查閱到。依匹哌唑化學(xué)名稱為：7-[4-(4-苯并[b]噻吩-4-基-哌嗪-1-基)丁氧基]-1H-喹啉-2-酮，分子式：C25H27N3O2S，分子量：433.57，結(jié)構(gòu)式如下：依匹哌唑中間體(Ⅰ)化學(xué)名稱為：7-(4-氯丁氧基)-1H-喹啉-2-酮，分子式：C13H14ClNO2，分子量：251.71，結(jié)構(gòu)式如下：雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的分子式為：C4H8BrCl，分子量為：171.46，結(jié)構(gòu)式如下：在依匹哌唑中間體產(chǎn)品中，往往會(huì)存在有多種雜質(zhì)，1-溴-4-氯丁烷作為依匹哌唑合成過(guò)程中的關(guān)鍵起始物料，容易在中間體中殘留。為避免其影響成品的質(zhì)量，進(jìn)而影響藥物的質(zhì)量控制和用藥安全，有必要對(duì)該雜質(zhì)的含量進(jìn)行檢測(cè)和監(jiān)控。但是1-溴-4-氯丁烷紫外吸收小，HPLC檢測(cè)信號(hào)響應(yīng)低，準(zhǔn)確檢測(cè)存在一定的難度。目前尚未有依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)方法報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了式(Ⅰ)所示依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷雜質(zhì)的檢測(cè)方法：它包括以下步驟：(1)1-溴-4-氯丁烷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：a、對(duì)照品溶液的制備：取1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品，加甲醇配制成對(duì)照品溶液；b、對(duì)照品溶液的測(cè)定：配制系列濃度的對(duì)照品溶液，分別注入高效液相色譜儀檢測(cè)，測(cè)定色譜峰面積，得到1-溴-4-氯丁烷的標(biāo)準(zhǔn)曲線；色譜條件如下：色譜柱：C18色譜柱；檢測(cè)波長(zhǎng)：215±5nm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鹽溶液或甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鹽溶液；所述磷酸氫二鹽溶液選自磷酸氫二鈉溶液或磷酸氫二鉀溶液；所述甲醇或乙腈與磷酸氫二鹽溶液的體積比為40％：60％～60％：40％；(2)待測(cè)樣品中1-溴-4-氯丁烷的含量測(cè)定：c、供試品溶液的制備：取待測(cè)依匹哌唑中間體樣品，流動(dòng)相溶解，得供試品溶液；d、供試品溶液的測(cè)定：取供試品溶液，注入高效液相色譜儀，以步驟b相同的色譜條件檢測(cè)，根據(jù)步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)樣品中1-溴-4-氯丁烷的含量。進(jìn)一步地，所述檢測(cè)波長(zhǎng)為215±2nm。進(jìn)一步地，所述磷酸氫二鹽溶液是通過(guò)磷酸調(diào)節(jié)pH至2.9～3.1的。進(jìn)一步地，所述磷酸氫二鹽溶液是通過(guò)磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0的。進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相為下述體積比的混合溶液：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝45：55、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝55：45、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝50：50、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝45：55、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝55：45、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝50：50、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝45：55、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝55：45或乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝50：50。進(jìn)一步地，所述色譜柱的規(guī)格為：內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)度250mm，填料粒徑5μm。進(jìn)一步地，所述色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18。進(jìn)一步地，所述色譜條件的柱溫為30℃～40℃，優(yōu)選35℃。進(jìn)一步地，所述色譜條件的流速為0.8mL/min～1.2mL/min，優(yōu)選1.0mL/min。進(jìn)一步地，所述色譜條件的進(jìn)樣量為20μL。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)方法，通過(guò)多種工藝的篩選，有效將依匹哌唑中間體中的1-溴-4-氯丁烷分離檢測(cè)出來(lái)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并且具有線性關(guān)系優(yōu)異、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好、回收率高、操作簡(jiǎn)便等諸多優(yōu)點(diǎn)，適合于推廣應(yīng)用。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1本發(fā)明方法對(duì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果；圖2為實(shí)施例13的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖3-5為實(shí)施例13專屬性試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果：圖3為供試品溶液；圖4為對(duì)照品溶液；圖5為溶劑空白溶液。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。高效液相色譜儀(型號(hào)：LC-20AT二元泵，生產(chǎn)廠家：日本島津公司)。電子天平(型號(hào)：AUW220D，生產(chǎn)廠家：日本島津公司)。依匹哌唑中間體(批號(hào)：20150731A，來(lái)源：成都百裕制藥股份有限公司)。1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品(批號(hào)：15-09-01，來(lái)源：東臺(tái)鑫源化工有限公司)。實(shí)施例11、檢測(cè)波長(zhǎng)的確定精密稱取依匹哌唑中間體適量，用甲醇配制成濃度為20μg/mL的溶液，作為供試品溶液。精密稱取對(duì)照品(1-溴-4-氯丁烷)適量，用甲醇配制成濃度為20μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述的供試品溶液、對(duì)照品溶液，在200nm～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1供試品溶液和對(duì)照品溶液紫外掃描結(jié)果項(xiàng)目峰波長(zhǎng)(nm)峰值谷波長(zhǎng)(nm)谷值供試品溶液215.70.6172780.226對(duì)照品溶液215.20.8342920.006試驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)波長(zhǎng)在210nm～220nm范圍內(nèi)，均適合本發(fā)明的高效液相色譜檢測(cè)方法；優(yōu)選的，檢測(cè)波長(zhǎng)為215±2nm。2、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)制備供試品溶液：稱取依匹哌唑中間體20mg，置于10mL量瓶中，加甲醇適量，振搖溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。制備對(duì)照品溶液：稱取1-溴-4氯丁烷對(duì)照品4mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)pH至3.0)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取依匹哌唑中間體2mg、1-溴-4氯丁烷對(duì)照品4.0μg，加入1mL甲醇溶解，作為系統(tǒng)適用性溶液；量取20μL系統(tǒng)適用性溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，依匹哌唑中間體與1-溴-4氯丁烷之間的分離度應(yīng)不低于2.0，理論塔板數(shù)按依匹哌唑中間體峰計(jì)算應(yīng)不小于2000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果見圖1，依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為5.726min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(保留時(shí)間為14.710min)之間的分離度為21.885，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為17104，該色譜條件及方法可以用于檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。3、高效液相色譜檢測(cè)方法制備供試品溶液：稱取依匹哌唑中間體20mg，置于10mL量瓶中，加甲醇適量，振搖溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。制備對(duì)照品溶液：稱取1-溴-4氯丁烷對(duì)照品4mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別將供試品溶液和對(duì)照品溶液注入高效液相色譜儀檢測(cè)，色譜條件如下：色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)pH至3.0)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。實(shí)施例2色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝45：55；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為9.771min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(供其保留時(shí)間為24.582min)之間的分離度為19.715，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為5913，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.051?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例3色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝55：45；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為3.7707min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(供其保留時(shí)間為9.666min)之間的分離度為5.011，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為19855，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.003?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例4色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝45：55；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為11.073min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(供其保留時(shí)間為29.362min)之間的分離度為21.027，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為4787，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.178?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例5色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝55：45；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為5.011min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(其保留時(shí)間為12.776min)之間的分離度為7.913，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為11107，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.015?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例6色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為7.019min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(其保留時(shí)間為17.555min)之間的分離度為11.116，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為8913，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.056?？梢姡撋V條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例7色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝45：55；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為10.017min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(保留時(shí)間為25.118min)之間的分離度為21.008，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為5557，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.081。可見，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例8色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝55：45；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為3.801min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(供其保留時(shí)間為9.882min)之間的分離度為6.232，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為18187，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.005?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例9色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為5.805min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(保留時(shí)間為14.991min)之間的分離度為11.011，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為9988，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.025?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例10色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.9)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為5.833min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(保留時(shí)間為14.887min)之間的分離度為10.655，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為9973，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.019?？梢姡撋V條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例11色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.1)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明：依匹哌唑中間體(保留時(shí)間為5.790min)與1-溴-4氯丁烷對(duì)照品(供其保留時(shí)間為14.905min)之間的分離度為10.446，理論塔板數(shù)(按1-溴-4氯丁烷色譜峰計(jì)算)為10103，1-溴-4氯丁烷色譜峰的拖尾因子為1.022?？梢?，該色譜條件可以準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4氯丁烷的含量。實(shí)施例12本發(fā)明的色譜條件篩選1、流動(dòng)相篩選試驗(yàn)色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；如：色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：表2；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果見表2。表2流動(dòng)相篩選試驗(yàn)結(jié)果表2中，流動(dòng)相“例如：乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀(用磷酸調(diào)pH至3.0)＝50：50”具有中國(guó)藥典2015年版通常具有的含義，其中50：50表示乙腈與0.02mol/L磷酸二氫鉀(用磷酸調(diào)pH至3.0)(50：50)的體積比；保留時(shí)間是指1-溴-4-氯丁烷的保留時(shí)間；分離度是指依匹哌唑中間體與1-溴-4-氯丁烷之間的分離度；拖尾因子是指1-溴-4-氯丁烷色譜峰的拖尾因子；理論塔板數(shù)是指理論塔板數(shù)(按1-溴-4-氯丁烷計(jì)算)。試驗(yàn)結(jié)果表明，乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝45：55、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝55：45、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝50：50、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝45：55、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝55：45、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液＝50：50、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝45：55、乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝55：45或乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液＝50：50，均適合用于檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷的含量。2、柱溫和流速篩選試驗(yàn)選擇不同的柱溫和流速進(jìn)行篩選試驗(yàn)，其他色譜條件如下：色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；如：色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)；柱溫：表3；流速：表3；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果見表3：表3柱溫和流速篩選試驗(yàn)結(jié)果表3中，保留時(shí)間是指1-溴-4-氯丁烷的保留時(shí)間；分離度是指依匹哌唑中間體與1-溴-4-氯丁烷之間的分離度；拖尾因子是指1-溴-4-氯丁烷的拖尾因子；理論塔板數(shù)是指理論塔板數(shù)(按1-溴-4-氯丁烷峰計(jì)算)。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同的柱溫和流速下，本發(fā)明方法均能有效準(zhǔn)確檢測(cè)依匹哌唑中間體中的1-溴-4-氯丁烷的含量，優(yōu)選的柱溫為30℃～40℃，進(jìn)一步優(yōu)選為35℃；優(yōu)選的流速為0.8mL/min～1.2mL/min，進(jìn)一步優(yōu)選為1.0mL/min。實(shí)施例13本發(fā)明方法的方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證中，色譜條件均如下：色譜柱的填充劑：用十八烷基硅烷鍵合的硅膠為填充劑；色譜柱的型號(hào)為WatersSymmetryC18，規(guī)格為：內(nèi)徑為4.6mm，長(zhǎng)度為250mm，填充劑粒徑為5μm；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)＝50：50；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；進(jìn)樣量：20μL。1、線性關(guān)系取雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品適量，用溶劑溶解并稀釋制成一系列濃度的雜質(zhì)對(duì)照品溶液。照上述色譜條件，分別取不同濃度對(duì)照品溶液各20μL注入液相色譜儀，分別測(cè)定峰面積。結(jié)果見表4和圖2。表4線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果表以雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y＝1319.2502X-374.9654，R2＝0.9997。試驗(yàn)結(jié)果表明，雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷在濃度1.7248μg/mL～43.1211μg/mL范圍內(nèi)，其峰面積與測(cè)定濃度呈良好的線性關(guān)系。2、專屬性按照本發(fā)明方法制備供試品溶液、對(duì)照品溶液，并準(zhǔn)備空白溶劑甲醇。精密量取上述各溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖3-5。圖3為供試品溶液；圖4為對(duì)照品溶液；圖5為溶劑空白溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶液不會(huì)對(duì)本發(fā)明檢測(cè)依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷含量的方法造成干擾。3、精密度取1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含4μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；精密量取20μL對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。檢測(cè)結(jié)果見表5。表5精密度試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明方法精密度良好。4、穩(wěn)定性取于日光下放置的20150731A批中間體樣品，依法配制供試品溶液，分別于配制后0h、2h、4h、6h、8h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，考察其供試品溶液各個(gè)雜質(zhì)的穩(wěn)定性情況，并統(tǒng)計(jì)雜質(zhì)個(gè)數(shù)，結(jié)果見表6。表6有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表時(shí)間0h2h4h6h8h1-溴-4-氯丁烷(％)0.047％0.048％0.047％0.047％0.047％試驗(yàn)結(jié)果表明，在8小時(shí)內(nèi)供試品溶液檢出的雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的含量，其結(jié)果差異不大，可知供試品溶液在配制后8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。5、重復(fù)性取20150731A批樣品，按擬定的方法分別平行制備6份供試品溶液，同時(shí)制備相對(duì)應(yīng)的雜質(zhì)對(duì)照溶液。照上述確定的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)色譜條件，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，其有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見表7。表7有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表樣品樣1樣2樣3樣4樣5樣61-溴-4-氯丁烷(％)0.047％0.048％0.047％0.043％0.051％0.042％試驗(yàn)結(jié)果表明，6份樣品雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的測(cè)定結(jié)果差異不大，本法測(cè)定本品中的雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷，重復(fù)性良好。6、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取依匹哌唑中間體0.5mg及1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品4μg，加甲醇1mL使溶解，作為系統(tǒng)適用性溶液；量取20μL系統(tǒng)適用性溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，依匹哌唑中間體與1-溴-4-氯丁烷之間的分離度應(yīng)不低于2.0，理論塔板數(shù)按1-溴-4-氯丁烷峰計(jì)算應(yīng)不小于2000。制備供試品溶液：稱取依匹哌唑中間體20mg，置于10mL量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。制備對(duì)照品溶液：稱取對(duì)照品(1-溴-4-氯丁烷)4mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使1-溴-4-氯丁烷色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的20％，再精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中如果顯示1-溴-4-氯丁烷的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算1-溴-4-氯丁烷的含量不得過(guò)0.2％。按照上述的方法，對(duì)依匹哌唑中間體進(jìn)行檢測(cè)3次。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品中檢出1-溴-4-氯丁烷的量為0.047％，依匹哌唑中間體與1-溴-4-氯丁烷達(dá)到良好的基線分離。7、定量限和檢測(cè)限取濃度為0.53887mg/mL雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品貯備液，逐級(jí)稀釋至一定濃度，搖勻，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，當(dāng)雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷濃度為每1mL中含1.29μg時(shí)，峰高約為基線噪音的10倍，按信噪比等于10：1計(jì)，測(cè)得雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的定量限為25.8ng。量取“1-溴-4-氯丁烷定量限試驗(yàn)項(xiàng)下”對(duì)照品溶液3mL，置于10mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷濃度為每1mL中含0.387μg，峰高約為基線噪音的3倍，按信噪比等于3：1計(jì)，測(cè)得雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)限為7.74ng。8、回收率濃度1：稱取中間體樣品20mg，置于10mL量瓶中，加入雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品貯備液(43.11μg/mL)0.8mL，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，同法配制三份，備用；濃度2：稱取中間體樣品20mg，置于10mL量瓶中，加入雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品貯備液(43.11μg/mL)1mL，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，同法配制三份，備用；濃度3：稱取中間體樣品20mg，置于10mL量瓶中，加入雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品貯備液(43.11μg/mL)1.2mL，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，同法配制三份，備用；另外，按照上述擬定的方法制備雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品溶液，精密吸取供試品及雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷對(duì)照品溶液20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，并計(jì)算上述成分的測(cè)得量及回收率，其結(jié)果見表8。表8雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷回收率試驗(yàn)結(jié)果表以上試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法測(cè)定雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷的含量，回收率較好，測(cè)定的回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，準(zhǔn)確度較高。9、破壞性試驗(yàn)為了進(jìn)一步考察上述初步確定的色譜系統(tǒng)的專屬性，擬以酸、堿、氧化、高溫、強(qiáng)光破壞后的樣品進(jìn)樣分析，考察樣品的降解情況，以及主峰與雜質(zhì)峰的分離情況。酸破壞稱取20150731A批中間體20.15mg，置10mL量瓶中，加入0.1mol/L鹽酸2mL，搖勻，加入0.1mol/L氫氧化鈉2mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。堿破壞稱取20150731A批中間體20.48mg，置10mL量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉2mL，搖勻，加入0.1mol/L鹽酸2mL中和，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。氧化破壞稱取20150731A批中間體20.04mg，置10mL量瓶中，加30％過(guò)氧化氫溶液2mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。高溫破壞取經(jīng)130℃烘箱中加熱3小時(shí)的20150731A批中間體，精密稱取20.39mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。強(qiáng)光破壞稱取20150731A批中間體20.47mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解后并稀釋至刻度，搖勻，于紫外光燈下放置24h，即得。未破壞樣品稱取20150731A批中間體19.77mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。酸堿空白溶液的制備：取0.1mol/L鹽酸2mL，置10mL量瓶中，加入0.1mol/L氫氧化鈉溶液2mL中和，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。氧化空白溶液的制備：取30％過(guò)氧化氫溶液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。照上述擬定的色譜條件，取上述溶液各20μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見表9。表9破壞試驗(yàn)結(jié)果表試驗(yàn)結(jié)果表明，在本色譜條件下，本品在酸、堿、氧化、高溫條件下均較為穩(wěn)定，供試品溶液在光照射下，中間體中的雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷明顯增加，因此，本法完全能滿足本品中雜質(zhì)1-溴-4-氯丁烷檢測(cè)的需要，因此，本品的檢測(cè)和貯存等各項(xiàng)操作條件均應(yīng)在避光條件下進(jìn)行。綜上所述，本發(fā)明依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷的檢測(cè)方法，通過(guò)多種工藝的篩選，有效將依匹哌唑中間體中1-溴-4-氯丁烷分離檢測(cè)出來(lái)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并且具有線性關(guān)系優(yōu)異、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好、回收率好、操作簡(jiǎn)便等諸多優(yōu)點(diǎn)，適合于推廣應(yīng)用。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3