本發(fā)明屬于分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉測定富硒蔬菜中有機硒含量的分析方法。
背景技術(shù)：
：硒是人體必需的微量元素，作為一種抗氧化劑，它具有清除人體內(nèi)自由基而產(chǎn)生抗衰老作用。醫(yī)學(xué)研究表明，人類的某些疾病如克山病與體內(nèi)缺硒有關(guān)，因此硒對人體健康及生命質(zhì)量具有重要意義。對硒在環(huán)境與生命科學(xué)中的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究在許多科學(xué)領(lǐng)域受到重視。目前人類獲取微量元素的主要途徑仍是食品，近年來各種富硒食品紛紛上市，但是一些食品內(nèi)硒量是否屬安全食用量范圍，硒在食品中的形態(tài)及生物可利用性如何，是各科學(xué)研究領(lǐng)域?qū)W者共同關(guān)心的問題。有機硒一般以硒蛋氨酸形式存在，依循蛋氨酸代謝途徑代謝，參與蛋白的合成，容易在組織內(nèi)儲存、吸收；被人體吸收后可迅速的被人體利用，有效改善人體內(nèi)血硒狀況。同無機硒強化劑相比，生物有機硒安全性高，不易發(fā)生中毒，易被人體吸收利用，補硒效率高，特別受歡迎。但是由于食品中的有機硒屬痕量組分，傳統(tǒng)的分析方法已難以滿足測定靈敏度的要求，且前處理較煩瑣、費事。如3，3一二氨基聯(lián)苯胺比色法，熒光分光光度法，氫化物發(fā)生AAs法等。本研究通過對硒測定條件的選擇，探索出一種具有簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定、準確的分析方法，用于富硒蔬菜中有機硒含量測定，效果令人滿意。目前，尚無使用電感耦合等離子體質(zhì)譜法分析手段用于富硒蔬菜中有機硒含量測定的報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明提供了一種電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定富硒蔬菜中有機硒含量的分析方法。該方法中有機硒含量采用差減法，通過測定樣品中總硒和無機硒含量來計算獲得有機硒含量，該方法線性范圍寬、檢出限低、從總硒和無機硒測定精密度、加標回收率的結(jié)果看，測定富硒蔬菜中總硒、無機硒含量，并間接測定有機硒含量的方法，滿足富硒蔬菜中有機硒含量的測定。為了實現(xiàn)上述目的，本申請采取的技術(shù)方案如下：電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定富硒蔬菜中有機硒含量的方法，通過測定富硒蔬菜中總硒、無機硒含量，間接測定有機硒含量的方法。電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定富硒蔬菜中有機硒含量的方法，包括以下步驟：(1)標準曲線繪制取硒標準儲備液，用體積分數(shù)為1％硝酸溶液進行稀釋，配制不同濃度的硒標準溶液A、B、C、D、E、F、G，分別取硒標準溶液A、B、C、D、E、F、G中的溶液作標準曲線，得標準曲線公式Y(jié)＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值；(2)總硒測定取樣品，濃硝酸，雙氧水，放置在微波消解罐中，放至微波消解儀內(nèi)消解30～50min，消解結(jié)束后，趕酸定容；使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(3)無機硒提取前處理稱取樣品于離心管中，加入去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲20～40min，用離心機4000～6000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入15～25mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中，將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入8～10mL濃硝酸，2～3mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解，消解結(jié)束后，趕酸定容；(4)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對步驟(1)配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程；將步驟(3)獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中總硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g；將步驟(4)獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中無機硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：無機硒含量mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。所述的ICP-MS儀器參數(shù)如下；所述的微波消解儀微波消解升溫程序條件如下：步驟(2)總硒測定中，樣品與濃硝酸的質(zhì)量體積比為1:5～1:4g/ml，樣品與雙氧水的質(zhì)量體積比為0.7～1g/ml。本發(fā)明于其它分析方法相比，具有以下幾個優(yōu)點：(一)該方法中有機硒含量采用差減法，通過測定樣品中總硒和無機硒含量來計算獲得有機硒含量，能夠更好地反應(yīng)富硒蔬菜中硒的形態(tài)分布；(二)本發(fā)明采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀對硒進行測定具有精密度好，回收率高，檢出限低。具體實施方式實施例1(一)實驗儀器與試劑(1)實驗儀器：用儀器為賽默飛世爾科技X2SeriesICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀以及Mars6高通量密閉微波消解系統(tǒng)(微波消解儀)；(2)實驗試劑：硝酸、超純水、雙氧水、環(huán)己烷、硒標準溶液。(二)儀器參數(shù)條件(1)ICP-MS儀器參數(shù)ICP-MS儀器參數(shù)工作參數(shù)設(shè)定值功率RFPowe1208W冷卻氣流量Coolgasflowrate(Ar)13.0L/min輔助氣流量Auxiliarygasflowrate(Ar)0.8L/min霧化氣流量atomizationgasflowrate(Ar)0.77L/min測量方式AcquistinmodeFullyquant掃描次數(shù)Numberofsweep50停留時間Dwelltime30ms每個質(zhì)量通道數(shù)Channelspermass3總采集時間Acquisitionduration50s樣品間隔沖洗時間Washingtimebetweenruns50s硒質(zhì)量數(shù)選擇82內(nèi)標元素釔89(2)微波消解儀升溫程序微波消解升溫程序條件爬升升速率℃/min爬升溫度℃保持時間min功率W1101601080021018020800(三)標準曲線繪制取100mg/L的硒標準儲備液(中國計量科學(xué)研究院)1.0mL，用1％硝酸溶液(優(yōu)級純濃硝酸與一級水的體積百分比)定容至100mL，分別取0、10、30、50、100、150、200uL,用1％硝酸溶液定容至100mL，做梯度為0、1、3、5、10、15、20ug/L的標準曲線，標準曲線計算公式，Y＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值。(四)待測樣品檢測(1)總硒測定取2.0015芹菜樣品，向微波消解罐中加入8mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解30min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積50mL。使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(2)無機硒提取前處理稱取芹菜2.0165g于50mL離心管中，加入15mL去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲20min，用離心機4000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入15mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中。將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入8mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解30min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積10mL。(五)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對第三步配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程。將第四步獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量(無機硒含量)mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。測得樣品中總硒含量和無機硒含量，數(shù)據(jù)如下：無機硒含量ug/kg101.54總硒含量ug/kg434.5有機硒含量ug/kg332.81代入公式：計算可得樣品中有機硒含量為76.62％實施例2(一)實驗儀器與試劑(1)實驗儀器：用儀器為賽默飛世爾科技X2SeriesICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀以及Mars6高通量密閉微波消解系統(tǒng)(微波消解儀)；(2)實驗試劑：硝酸、超純水、雙氧水、環(huán)己烷、硒標準溶液。(二)儀器參數(shù)條件(1)ICP-MS儀器參數(shù)ICP-MS儀器參數(shù)工作參數(shù)設(shè)定值功率RFPowe1208W冷卻氣流量Coolgasflowrate(Ar)13.0L/min輔助氣流量Auxiliarygasflowrate(Ar)0.8L/min霧化氣流量atomizationgasflowrate(Ar)0.77L/min測量方式AcquistinmodeFullyquant掃描次數(shù)Numberofsweep60停留時間Dwelltime40ms每個質(zhì)量通道數(shù)Channelspermass3總采集時間Acquisitionduration60s樣品間隔沖洗時間Washingtimebetweenruns60s硒質(zhì)量數(shù)選擇82內(nèi)標元素釔89(2)微波消解儀升溫程序微波消解升溫程序條件爬升升速率℃/min爬升溫度℃保持時間min功率W1101601580021518010800(三)標準曲線繪制取100mg/L的硒標準儲備液(中國計量科學(xué)研究院)1.0mL，用1％硝酸溶液(優(yōu)級純濃硝酸與一級水的體積百分比)定容至100mL，分別取0、10、30、50、100、150、200uL,用1％硝酸溶液定容至100mL，做梯度為0、1、3、5、10、15、20ug/L的標準曲線，標準曲線計算公式，Y＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值。(四)待測樣品處理(1)總硒測定取2.0045g油菜樣品，微波消解罐中加入9mL濃硝酸，3mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解40min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積50mL。使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(2)無機硒提取前處理稱取油菜2.0784g于50mL離心管中，加入16mL去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲25min，用離心機4500r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入16mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中。將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入9mL濃硝酸，3mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解，消解結(jié)束后，趕酸定容至10mL。(五)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對第三步配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程。將第四步獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量(無機硒含量)mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。測得樣品中總硒含量和無機硒含量，數(shù)據(jù)如下：無機硒含量ug/kg79.37總硒含量ug/kg493.40有機硒含量ug/kg414.03代入公式：計算可得油菜中有機硒含量為83.91％實施例3(一)實驗儀器與試劑(1)實驗儀器：用儀器為賽默飛世爾科技X2SeriesICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀以及Mars6高通量密閉微波消解系統(tǒng)(微波消解儀)；(2)實驗試劑：硝酸、超純水、雙氧水、環(huán)己烷、硒標準溶液。(二)儀器參數(shù)條件(1)ICP-MS儀器參數(shù)ICP-MS儀器參數(shù)工作參數(shù)設(shè)定值功率RFPowe1208W冷卻氣流量Coolgasflowrate(Ar)13.0L/min輔助氣流量Auxiliarygasflowrate(Ar)0.8L/min霧化氣流量atomizationgasflowrate(Ar)0.77L/min測量方式AcquistinmodeFullyquant掃描次數(shù)Numberofsweep70停留時間Dwelltime35ms每個質(zhì)量通道數(shù)Channelspermass3總采集時間Acquisitionduration70s樣品間隔沖洗時間Washingtimebetweenruns70s硒質(zhì)量數(shù)選擇82內(nèi)標元素釔89(2)微波消解儀升溫程序微波消解升溫程序條件爬升升速率℃/min爬升溫度℃保持時間min功率W1151601490021018015900(三)標準曲線繪制取100mg/L的硒標準儲備液(中國計量科學(xué)研究院)1.0mL，用1％硝酸溶液(優(yōu)級純濃硝酸與一級水的體積百分比)定容至100mL，分別取0、10、30、50、100、150、200uL,用1％硝酸溶液定容至100mL，做梯度為0、1、3、5、10、15、20ug/L的標準曲線，標準曲線計算公式，Y＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值。(四)待測樣品處理(1)總硒測定取2.0108g菠菜樣品，微波消解罐中加入10mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解45min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積50mL。使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(2)無機硒提取前處理稱取黃瓜2.0087g于50mL離心管中，加入15mL去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲30min，用離心機5000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入18mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中。將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入10mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解，消解結(jié)束后，趕酸定容至10mL。(五)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對第三步配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程。將第四步獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量(無機硒含量)mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。測得樣品中總硒含量和無機硒含量，數(shù)據(jù)如下：無機硒含量ug/kg82.09總硒含量ug/kg401.27有機硒含量ug/kg319.18代入公式：計算可得菠菜中有機硒含量為79.54％實施例4(一)實驗儀器與試劑(1)實驗儀器：用儀器為賽默飛世爾科技X2SeriesICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀以及Mars6高通量密閉微波消解系統(tǒng)(微波消解儀)；(2)實驗試劑：硝酸、超純水、雙氧水、環(huán)己烷、硒標準溶液。(二)儀器參數(shù)條件(1)ICP-MS儀器參數(shù)ICP-MS儀器參數(shù)(2)微波消解儀升溫程序微波消解升溫程序條件爬升升速率℃/min爬升溫度℃保持時間min功率W115160151000215180101000(三)標準曲線繪制取100mg/L的硒標準儲備液(中國計量科學(xué)研究院)1.0mL，用1％硝酸溶液(優(yōu)級純濃硝酸與一級水的體積百分比)定容至100mL，分別取0、10、30、50、100、150、200uL,用1％硝酸溶液定容至100mL，做梯度為0、1、3、5、10、15、20ug/L的標準曲線，標準曲線計算公式，Y＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值。(四)待測樣品處理(1)總硒測定取2.0032g黃瓜樣品，微波消解罐中加入8mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解50min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積50mL。使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(2)無機硒提取前處理稱取黃瓜2.0047g于50mL離心管中，加入20mL去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲35min，用離心機5500r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入19mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中。將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入8mL濃硝酸，2mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解，消解結(jié)束后，趕酸定容至10mL。(五)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對第三步配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程。將第四步獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量(無機硒含量)mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。測得樣品中總硒含量和無機硒含量，數(shù)據(jù)如下：無機硒含量ug/kg43.20總硒含量ug/kg381.42有機硒含量ug/kg338.22代入公式：計算可得黃瓜中有機硒含量為88.67％實施例5(一)實驗儀器與試劑(1)實驗儀器：用儀器為賽默飛世爾科技X2SeriesICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀以及Mars6高通量密閉微波消解系統(tǒng)(微波消解儀)；(2)實驗試劑：硝酸、超純水、雙氧水、環(huán)己烷、硒標準溶液。(二)儀器參數(shù)條件(1)ICP-MS儀器參數(shù)ICP-MS儀器參數(shù)(2)微波消解儀升溫程序微波消解升溫程序條件爬升升速率℃/min爬升溫度℃保持時間min功率W11016015100021518018800(三)標準曲線繪制取100mg/L的硒標準儲備液(中國計量科學(xué)研究院)1.0mL，用1％硝酸溶液(優(yōu)級純濃硝酸與一級水的體積百分比)定容至100mL，分別取0、10、30、50、100、150、200uL,用1％硝酸溶液定容至100mL，做梯度為0、1、3、5、10、15、20ug/L的標準曲線，標準曲線計算公式，Y＝0.0088X-0.8752，式中Y為樣品中硒濃度，單位ug/L，X為樣品中硒元素檢測響應(yīng)值。(四)待測樣品處理(1)總硒測定取2.0029生菜樣品，微波消解罐中加入9mL濃硝酸，3mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解36min，消解結(jié)束后，趕酸定容，定容體積50mL。使用濃硝酸的目的就是酸化被消解物質(zhì)，達到在微波產(chǎn)生的高溫高壓下使樣品被消化分解，雙氧水在其中主要起氧化脫色的作用。(2)無機硒提取前處理稱取生菜2.0127g于50mL離心管中，加入20mL去離子水混勻，放入超聲清洗儀中超聲40min，用離心機6000r/min離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入20mL環(huán)己烷，搖晃使水相與有機相充分混勻，靜止待水相與有機相分層后，將水相轉(zhuǎn)移至微波消解罐中。將微波消解罐放至趕酸板上，140℃將液體趕至近干，向微波消解罐中加入9mL濃硝酸，3mL雙氧水，放至微波消解儀內(nèi)消解，消解結(jié)束后，趕酸定容至10mL。(五)測試與數(shù)據(jù)處理上機檢測，ICP-MS儀器調(diào)諧通過后，在規(guī)定的操作條件下，對第三步配制的標準曲線進行測試獲得溶液中硒濃度與儀器響應(yīng)值ICPS的線性方程。將第四步獲得的溶液采用ICP-MS儀器進行檢測，通過儀器檢測得到溶液中硒含量的ICPS值，將該數(shù)值帶入至標準曲線公式計算，獲得溶液中硒濃度cug/L，將該濃度帶入至公式：總硒含量(無機硒含量)mg/kg＝(c×V)/m，式中V為動容體積單位mL，m為稱樣質(zhì)量單位g。測得樣品中總硒含量和無機硒含量，數(shù)據(jù)如下：無機硒含量ug/kg81.09總硒含量ug/kg364.02有機硒含量ug/kg282.93代入公式：計算可得生菜中有機硒含量為77.72％。當前第1頁1 2 3