本發(fā)明涉及動(dòng)物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體為一種能同時(shí)檢測(cè)水禽源細(xì)小病毒的膠體金試紙條及制備方法。

背景技術(shù)：

水禽源細(xì)小病毒，指感染水禽(這里主要指家養(yǎng)的各品種鴨和鵝，野生水禽中大雁、天鵝等)并致水禽發(fā)病的細(xì)小病毒，包括鵝細(xì)小病毒、番鴨細(xì)小病毒、新型番鴨細(xì)小病毒等。

水禽細(xì)小病毒的檢測(cè)方法有病毒的分離鑒定、分子生物學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)等。病毒分離鑒定方法是將病料在特定的細(xì)胞中培養(yǎng)，幾次傳代后根據(jù)是否出現(xiàn)特定的病變，再根據(jù)電鏡形態(tài)的觀察來(lái)判斷，耗時(shí)長(zhǎng)，需要的設(shè)備多，對(duì)人員的技術(shù)水平要求高。分子生物學(xué)檢測(cè)中的PCR技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和核酸探針技術(shù)能特異性檢測(cè)病料組織中的病毒，準(zhǔn)確度高，但技術(shù)要求高，需要特殊的設(shè)備，操作繁瑣，檢測(cè)成本高，不適宜臨床上的推廣。血清學(xué)檢測(cè)包括ELISA、瓊脂免疫擴(kuò)散法、反向間接血凝試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)、免疫熒光抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)等。ELISA方法有斑點(diǎn)ELISA、間接ELISA和雙抗體夾心ELISA，后兩種方法需要先對(duì)病毒進(jìn)行分離，耗時(shí)長(zhǎng)，只有斑點(diǎn)ELISA能直接檢測(cè)病料，在4h內(nèi)完成，其檢測(cè)限為4.833ng/mg。瓊脂免疫擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)便，需時(shí)1天，適于基層推廣和應(yīng)用，但靈敏度不高。反向間接血凝試驗(yàn)可以在3h內(nèi)可以檢測(cè)出病料及糞樣中的病毒，其檢測(cè)限為24ng/mL，有很好的實(shí)用價(jià)值，但易受到非特異性因素的影響。病毒中和試驗(yàn)重復(fù)性好，敏感性高，但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)數(shù)天，不適于大量病料組織的快速檢測(cè)。免疫熒光抗體技術(shù)重復(fù)性好、具有較強(qiáng)的特異性和敏感性，操作簡(jiǎn)便、2小時(shí)內(nèi)完成，但需要特殊的儀器，不適合基層推廣?，F(xiàn)有技術(shù)中膠體金試紙條只能檢測(cè)一種水禽源細(xì)小病毒，使用范圍窄，限制了其在實(shí)際中的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種能同時(shí)檢測(cè)水禽源細(xì)小病毒的膠體金試紙條及制備方法。

本發(fā)明具體的技術(shù)方案如下：

一種檢測(cè)水禽源細(xì)小病毒的膠體金試紙條，它包括底板、樣品墊、吸水墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜；所述底板的一端粘附有所述樣品墊，其另一端粘附有所述吸水墊，其中部依次粘附有所述金標(biāo)墊、所述硝酸纖維素膜；所述金標(biāo)墊的一端與所述樣品墊相粘附，其另一端與所述硝酸纖維素膜相粘附，所述硝酸纖維素膜與所述吸水墊相粘附；所述金標(biāo)墊包被了帶有抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ的膠體金標(biāo)記蛋白；所述硝酸纖維素膜上沿樣品流動(dòng)方向依次設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線；所述硝酸纖維素膜的檢測(cè)線包被抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ，所述硝酸纖維素膜的質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG抗體。

優(yōu)選的，所述膠體金標(biāo)記的抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ的包被濃度為20～90μg/mL。

優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ的包被濃度為1～3mg/mL。

優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上羊抗鼠IgG抗體的包被濃度為0.2～2mg/mL。

本發(fā)明還包括上述的膠體金試紙條的制備方法，包括以下步驟：

抗體的制備：以濃縮并純化的小鵝瘟病毒為抗原免疫小鼠制備抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ和抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ，并進(jìn)行純化；

具體為，以濃縮并純化的小鵝瘟病毒為抗原免疫小鼠，與弗氏完全佐劑乳化，皮下多點(diǎn)注射小鼠，每隔2周以相同的抗原加弗氏不完全佐劑加強(qiáng)免疫。最后一次免疫后1周采血制備血清，以間接ELISA方法測(cè)定效價(jià)，將血清效價(jià)達(dá)到1:1000及以上的小鼠進(jìn)行1次無(wú)佐劑抗原加強(qiáng)免疫，3天后取脾臟，進(jìn)行細(xì)胞融合、篩選、克隆化及腹水制備。得到了同屬于IgG類IgG1亞類的兩株高效價(jià)單克隆抗體：抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ和抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ。

制備抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ的膠體金標(biāo)記蛋白溶液：首先按檸檬酸還原法制備膠體金溶液，用0.1mol/L的K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH至7.0～8.0，按20～90μg/mL的比例將抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ與膠體金溶液攪拌混合，再加入30～80g/L的BSA溶液，使其終質(zhì)量濃度為5～20g/L，以2000～5000r/min的速度離心取上清，再以10000～14000r/min離心得沉淀物，沉淀用含5～15g/L的BSA和5～15g/L的蔗糖的0.001～0.1mol/L的Tris-HCl溶液重懸至原體積的1/10～1/5，得到抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ的膠體金標(biāo)記蛋白溶液；

本發(fā)明純化的抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ與膠體金偶聯(lián)的pH值為7.0～8.0，優(yōu)選為7.2～7.8，具體優(yōu)選為7.4；最佳結(jié)合量為20～90μg/mL，優(yōu)選為30～70μg/mL，進(jìn)一步為50μg/mL。將金標(biāo)墊浸漬于膠體金標(biāo)記的單克隆抗體3D9。

金標(biāo)墊的制備：將玻璃纖維素膜浸泡于抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ的膠體金標(biāo)記蛋白溶液中，經(jīng)浸透、室溫干燥后，制得金標(biāo)墊；

硝酸纖維素膜的制備：將1～3mg/mL的抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ噴涂于硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線，優(yōu)選包被濃度為2mg/mL；將0.2～2mg/mL的羊抗鼠IgG抗體噴涂于硝酸纖維素膜上的質(zhì)控線，優(yōu)選包被濃度為1mg/mL；室溫干燥，浸泡于10～30g/L的BSA溶液中，室溫靜置后，PBST洗滌，室溫干燥，即為硝酸纖維素膜；

組裝：將樣品墊和制備好的金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊依次粘貼于底板上，得到膠體金試紙條。

對(duì)制備好的試紙條進(jìn)行特異性、靈敏度、檢測(cè)范圍的驗(yàn)證。結(jié)果表明，本發(fā)明的膠體金試紙條對(duì)鵝細(xì)小病毒(GPV)、番鴨細(xì)小病毒(MDPV)和新型番鴨細(xì)小病毒(NMDPV)的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，證明本發(fā)明的膠體金試紙條對(duì)GPV、MDPV和NMDPV有較好的特異性。

本發(fā)明的膠體金試紙條是將抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅰ作為捕獲抗體，將抗小鵝瘟病毒單克隆抗體Ⅱ作為檢測(cè)抗體，極大程度降低了反應(yīng)的假陽(yáng)性，提高了檢測(cè)的特異性以及靈敏度。通過(guò)一系列稀釋梯度的GPV-C3株、MDPV-ZJ株、NMDPV-FJ1341株的鴨胚適應(yīng)毒進(jìn)行靈敏度檢測(cè)，得到本發(fā)明膠體金試紙條對(duì)GPV、MDPV和NMDPV的最低檢出量分別為10^4.7ELD₅₀/mL、10^4.7ELD₅₀/mL和10^5.7ELD₅₀/mL。

本發(fā)明的膠體金試紙條能同時(shí)檢測(cè)鵝細(xì)小病毒、番鴨細(xì)小病毒和新型番鴨細(xì)小病毒，靈敏度高，重復(fù)性好，臨床檢驗(yàn)沒(méi)有假陽(yáng)性。

附圖說(shuō)明

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。

圖1：不同病毒的膠體金試紙條檢測(cè)結(jié)果，從左至右依次為：鵝細(xì)小病毒、番鴨細(xì)小病毒、新型番鴨細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒、I型鴨甲肝病毒、坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒、H9N2亞型禽流感病毒、番鴨呼腸孤病毒和新城疫病毒；

圖2：GPV-C3株的檢測(cè)敏感性結(jié)果，從左至右的稀釋倍數(shù)依次為：1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024；

圖3：本發(fā)明膠體金試紙條的示意圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明中的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1：小鵝瘟病毒單克隆抗體的制備

1.1小鼠免疫

以濃縮并純化的小鵝瘟病毒為抗原，與弗氏完全佐劑乳化，皮下多點(diǎn)注射小鼠，每隔2周以相同的抗原加弗氏不完全佐劑加強(qiáng)免疫5次。最后一次免疫后1周采血制備血清，以間接ELISA方法測(cè)定效價(jià)，將血清效價(jià)達(dá)到1:1000及以上的小鼠進(jìn)行1次無(wú)佐劑抗原加強(qiáng)免疫，3天后進(jìn)行細(xì)胞融合。

1.2骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備

融合前48h，將SP2/0骨髓瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)于直徑為9cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿加10mL含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司產(chǎn)品)，置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；融合當(dāng)天，選擇形態(tài)良好、呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的SP2/0細(xì)胞，將其從瓶壁上輕輕吹下，收集于50mL離心管內(nèi)，1000r/min離心5min，棄上清；用DMEM培養(yǎng)基混勻細(xì)胞后計(jì)數(shù)，取所需細(xì)胞數(shù)，用DMEM培養(yǎng)基洗2次，以10mL DMEM培養(yǎng)基重新懸浮，備用。

1.3飼養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備

融合前24h，取1只健康未免疫的6周齡雌性BALB/c小鼠，剝離脾臟置于滅菌的平皿中，用DMEM培養(yǎng)基輕輕洗3次，并剝?nèi)ブ車慕Y(jié)締組織；將脾臟移入另一滅菌平皿中，置于200目銅網(wǎng)上，用滅菌的西林瓶底部擠壓研磨脾臟，并用DMEM培養(yǎng)基輕輕沖洗銅網(wǎng)，使脾細(xì)胞全部通過(guò)銅網(wǎng)壓擠到溶液中；將脾細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)至50mL離心管中，加DMEM培養(yǎng)基至50mL，混勻；1000r/min離心5min，棄上清；沉淀細(xì)胞再用DMEM培養(yǎng)基同法離心洗滌一次；先用5mL HAT培養(yǎng)液(Sigma公司產(chǎn)品)將沉淀細(xì)胞懸浮并混勻，作細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果，補(bǔ)加HAT培養(yǎng)液至30mL，使細(xì)胞濃度為2×10⁵個(gè)/mL；將細(xì)胞懸液滴于6塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔50μL，然后將培養(yǎng)板置37℃、含5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞呈多形性，貼壁，折光性好時(shí)即可使用。

1.4融合

取免疫小鼠1只，按照1.3的方法制備脾細(xì)胞懸液；將骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞按1：10的比例混合在一起，轉(zhuǎn)入50mL離心管內(nèi)，1000r/min離心10min，棄上清，用滴管吸凈殘留液體；用滴管輕輕攪動(dòng)沉淀，使其松散均勻成糊狀；在37℃水浴中融合：一手均勻地轉(zhuǎn)動(dòng)離心管，另一手用吸管吸取PEG4000溶液1mL，并沿轉(zhuǎn)動(dòng)的管壁(盡量接近細(xì)胞處)加入，從加入到加完的時(shí)間控制在1min左右，邊加邊攪動(dòng)，用吸管在1min內(nèi)加入1mL預(yù)熱至37℃的DMEM培養(yǎng)基，重復(fù)3次；然后每分鐘加入3mL，直至加滿到25mL為止(注意此時(shí)操作應(yīng)輕柔，邊轉(zhuǎn)動(dòng)邊加，盡量不攪散細(xì)胞)；37℃培養(yǎng)箱靜置10min，800r/min離心10min，棄上清；加入10mL HAT培養(yǎng)液，輕輕吹吸混勻；根據(jù)所用96孔培養(yǎng)板的數(shù)量，按一塊96孔培養(yǎng)板用量15mL，補(bǔ)加HAT培養(yǎng)液至所需的量；將融合好的細(xì)胞懸液加入含有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板，每孔150μL，37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

1.5雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)

上述細(xì)胞培養(yǎng)5d后，吸去表面液體，加HAT培養(yǎng)液15mL，繼續(xù)培養(yǎng)7d后，吸去表面液體，加HT培養(yǎng)液(Sigma公司產(chǎn)品)15mL，繼續(xù)培養(yǎng)7d，期間每天仔細(xì)觀察融合細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，待融合后的細(xì)胞克隆生長(zhǎng)到覆蓋細(xì)胞孔底部1/10時(shí)，進(jìn)行下一步。

1.6陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選

吸取有克隆生長(zhǎng)的細(xì)胞孔上清，用間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，選擇檢測(cè)結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性的細(xì)胞進(jìn)行克隆。

1.7陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆

以有限稀釋法進(jìn)行克隆，具體步驟如下。

1.7.1飼養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備

克隆前24h進(jìn)行，參照上述1.3的方法。

1.7.2稀釋

將檢測(cè)結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性的細(xì)胞孔中的雜交瘤細(xì)胞集落吹起，混勻，取適量細(xì)胞懸液至一無(wú)菌EP管中，適當(dāng)稀釋后計(jì)數(shù)；取130個(gè)細(xì)胞加入到6.5mL含20％胎牛血清的HT培養(yǎng)液，此時(shí)的濃度為20個(gè)細(xì)胞/mL；飼養(yǎng)細(xì)胞A、B、C三排，每孔加100μL，即2個(gè)細(xì)胞。余下2.9mL細(xì)胞懸液，再加入2.9mL含20％胎牛血清的HT培養(yǎng)液，此時(shí)的濃度為10個(gè)細(xì)胞/mL；飼養(yǎng)細(xì)胞D、E、F三排，每孔加100μL，即1個(gè)細(xì)胞。

1.7.3培養(yǎng)并檢測(cè)

加了稀釋細(xì)胞的飼養(yǎng)細(xì)胞于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，適時(shí)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，待細(xì)胞集落生長(zhǎng)到孔底1/10面積，吸取上清，用間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，選擇檢測(cè)結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性的細(xì)胞進(jìn)行再次克隆。

1.8陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的再次克隆

仍以有限稀釋法進(jìn)行，直到所有克隆化細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性時(shí)收獲雜交瘤細(xì)胞。最終獲得2株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為3D9和5F4。

1.9腹水制備

選取12周齡SPF雌性BALB/C小鼠，腹腔注射弗氏不完全佐劑，0.4mL/只；1周后每只小鼠注射5×10⁵個(gè)雜交瘤細(xì)胞；至10～12d，觀察小鼠腹部明顯隆起時(shí)，抽取腹水，離心后吸取上清液，小管分裝保存于-80℃；采用飽和硫酸銨法提純單克隆抗體。

1.10單克隆抗體亞類鑒定

根據(jù)MAb亞類鑒定試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行類及亞類的鑒定，結(jié)果表明，3D9和5F4同屬于IgG類IgG1亞類。

實(shí)施例2：?jiǎn)慰?D9的膠體金標(biāo)記

2.1膠體金的制備

取1mL 10g/L氯金酸溶液加入到經(jīng)泡酸和硅化處理過(guò)的錐形瓶中，加入100mL去離子水，錫箔紙封口，放入到微波爐中。高火3min使溶液煮至沸騰，取出錐形瓶，迅速加入10g/L檸檬酸三鈉溶液1.5mL，同時(shí)混勻。溶液會(huì)從淡黃色變?yōu)闊o(wú)色，再變?yōu)榛液谏?。錫箔紙封口，將錐形瓶放入到微波爐，中高火加熱3min，溶液變?yōu)榫萍t色后，再加熱3min，待其冷卻至室溫后，用去離子水補(bǔ)至100mL，使用450nm濾膜過(guò)濾后，4℃避光保存。

2.2膠體金標(biāo)記

將制備好的膠體金于4℃3000r/min離心20min，取上清，用0.1mol/L的K₂CO₃溶液調(diào)pH至7.4。在磁力攪拌器上，按50μg/mL的比例，加入單克隆抗體3D9，室溫?cái)嚢?0min，靜置10min，加入50g/L的BSA溶液，使其終質(zhì)量濃度為10g/L，繼續(xù)攪拌20min。此即為膠體金標(biāo)記的單克隆抗體3D9，4℃保存。

實(shí)施例3：膠體金試紙條的組裝

3.1金標(biāo)墊的制備

將玻璃纖維素膜浸泡于膠體金標(biāo)記的單克隆抗體3D9中，于37℃靜置30min，室溫干燥，即為金標(biāo)墊，4℃保存。

3.2硝酸纖維素膜(NC膜)的制備

用噴膜系統(tǒng)將2mg/mL的單克隆抗體5F4噴涂于NC膜上的檢測(cè)線(T)；用噴膜系統(tǒng)將1mg/mL的羊抗鼠IgG抗體噴涂于NC膜上的質(zhì)控線(C)。室溫干燥，浸泡于20g/L的BSA溶液中，室溫靜置30min，PBST洗滌3次，每次5min，室溫干燥，即為NC膜，4℃保存。

3.3組裝

將樣品墊、制備好的金標(biāo)墊、NC膜和吸水紙依次粘貼于塑料底板上，切割成4mm寬的試紙條，置于裝有干燥劑的鋁箔袋中即可，常溫保存。

實(shí)施例4：膠體金試紙條的特異性研究

用制備的膠體金試紙條檢測(cè)，鵝細(xì)小病毒(GPV)、番鴨細(xì)小病毒(MDPV)和新型番鴨細(xì)小病毒(NMDPV)的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；豬細(xì)小病毒、I型鴨甲肝病毒、坦布蘇病毒、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒、H9N2亞型禽流感病毒、番鴨呼腸孤病毒和新城疫病毒，檢測(cè)結(jié)果全為陰性。詳見(jiàn)圖1。

實(shí)施例5：膠體金試紙條的敏感性研究

將GPV-C3株(效價(jià)為10^6.5ELD₅₀/mL)、MDPV-ZJ株(效價(jià)為10^6.5ELD₅₀/mL)、NMDPV-FJ1341株(效價(jià)為10^7.5ELD₅₀/mL)的鴨胚適應(yīng)毒分別做倍比稀釋，檢測(cè)，以試紙條能夠檢測(cè)出的最高稀釋度對(duì)應(yīng)的病毒效價(jià)為試紙條的檢測(cè)靈敏度。結(jié)果顯示，滴度不同的水禽源細(xì)小病毒，倍比稀釋后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果相同，稀釋倍數(shù)為1：64時(shí)，試紙條檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，稀釋倍數(shù)大于1：64后，試紙條的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，GPV-C3株的檢測(cè)敏感性結(jié)果見(jiàn)圖2。該方法對(duì)GPV、MDPV和NMDPV的最低檢出量分別為10^4.7ELD₅₀/mL、10^4.7ELD₅₀/mL和10^5.7ELD₅₀/mL。

實(shí)施例6：膠體金試紙條的重復(fù)性研究

用同一批次的試紙條，對(duì)2株GPV、2株MDPV、2株NMDPV進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣品重復(fù)3次，均為陽(yáng)性；用3個(gè)不同批次的試紙條，檢測(cè)上述6株病毒，結(jié)果也均為陽(yáng)性。表明該試紙條的重復(fù)性良好。

實(shí)施例7：膠體金試紙條的應(yīng)用研究

采集疑似病例的糞便樣品41份，加等量PBS振蕩，靜置后取上清，用試紙條進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)提取核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增。兩種檢測(cè)方法的結(jié)果見(jiàn)表1，結(jié)果顯示，PCR檢測(cè)陽(yáng)性的樣品有35份，其中32份的膠體金試紙檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，3份為陰性。由于臨床病例處于發(fā)病的不同階段，從糞便中排出的病毒量也不相同，當(dāng)病毒量低于檢測(cè)限時(shí)，試紙條即檢測(cè)不出。PCR檢測(cè)陰性的樣品有6份，膠體金試紙檢測(cè)結(jié)果全為陰性。說(shuō)明試紙條沒(méi)有假陽(yáng)性的結(jié)果。

表1臨床糞便樣品的檢測(cè)結(jié)果

上述實(shí)施方式旨在舉例說(shuō)明本發(fā)明可為本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員實(shí)現(xiàn)或使用，對(duì)上述實(shí)施方式進(jìn)行修改對(duì)本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見(jiàn)的，故本發(fā)明包括但不限于上述實(shí)施方式，任何符合本權(quán)利要求書(shū)或說(shuō)明書(shū)描述，符合與本文所公開(kāi)的原理和新穎性、創(chuàng)造性特點(diǎn)的方法、工藝、產(chǎn)品，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。