一種快速檢測登革病毒ns1抗原膠體金檢測試紙條及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開“一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金檢測試紙條及試劑盒”屬于醫(yī)用檢測耗材，所述試紙條在高度方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層固定在基板支撐層上，且從手持端到加樣端依次設(shè)有手持端吸水材料墊，硝酸纖維素藥膜，金標(biāo)纖維墊，樣品纖維墊，在金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，在硝酸纖維素藥膜上印制有條狀的且與試紙條長度方向垂直的檢測線和質(zhì)控線，從手持端到加樣端，硝酸纖維素藥膜依次包被有檢測登革NS1抗原的質(zhì)控線C線和檢測線T線。本實(shí)用新型試劑盒可用于定性檢測人血清/血漿/全血樣本中的登革病毒NS1抗原。
【專利說明】
一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金檢測試紙條及試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物檢測領(lǐng)域，涉及一種醫(yī)用檢測耗材，具體涉及一種快速檢測 登革病毒NS1抗原膠體金試紙條及試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 登革熱是由登革病毒(Dengue viruSe，DENV)引起，經(jīng)蚊媒傳播的急性傳染病。臨 床特征為起病急驟，高熱，全身肌肉、骨骼及關(guān)節(jié)痛，極度疲乏，部分患者可有皮疹、出血傾 向和淋巴結(jié)腫大。本病于1779年在埃及開羅、印度尼西亞雅加達(dá)及美國費(fèi)城發(fā)現(xiàn)，并據(jù)癥狀 命名為關(guān)節(jié)熱和骨折熱。1869年由英國倫敦皇家內(nèi)科學(xué)會(huì)命名為登革熱。
[0003] 20世紀(jì)，登革熱在世界各地發(fā)生過多次大流行，病例數(shù)百萬計(jì)。該病多發(fā)生于熱帶 和亞熱帶地區(qū)，在東南亞一直呈地方性流行 (2)。據(jù)記載，于40年代本病曾傳入我國上海、福 建、漢口、廣東等地，并發(fā)生流行。1978年本病在廣東省佛山市發(fā)生流行，近十年來疫情在廣 東、海南省迅速蔓延，波及廣西，全國累計(jì)病例達(dá)幾十萬例。登革熱傳播迅猛，發(fā)病率高，并 可引起輕型的登革熱(Dengue fever，DF)和危及生命的癥候群一登革出血熱(DHF)和登革 休克綜合征(DSS)，所以登革病毒感染已成為熱帶和亞熱帶地區(qū)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。
[0004] 登革病毒有4個(gè)血清型，為單股正鏈RNA病毒，是黃病毒科的重要成員。病毒顆粒呈 啞鈴狀(700 X 20-40nm)、棒狀或球形(直徑為20-50nm)。髓核為單股線狀核糖核酸(RNA)， 最外層為兩種糖蛋白組成的包膜，包膜含有型和群特異性抗原。病毒基因組全長為llkb，依 次編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白（核蛋白C、膜結(jié)合蛋白Μ和包膜蛋白E)和7種非結(jié)構(gòu)蛋白（NSl、NS2a、 吧213、吧3、吧4 &、吧413和吧5)。其中吧1蛋白是登革病毒一種高度保守的非結(jié)構(gòu)糖蛋白，存在 膜結(jié)合型和分泌性兩種形式，均具有強(qiáng)免疫原性。登革病毒NS1蛋白在登革熱發(fā)病早期即在 病人血清中存在，隨后IgM抗體出現(xiàn)，隨著病人的已被證明可用于登革熱的早期診斷和預(yù)后 評估。此外，登革病毒NS1蛋白在登革熱的致病和免疫過程中也起重要作用。因此登革病毒 NS1蛋白的檢測可對登革病毒進(jìn)行早期診斷。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005] 根據(jù)上述領(lǐng)域的需求和不足，本實(shí)用新型旨在提供一種快速檢測登革病毒NS1抗 原膠體金檢測試紙條及試劑盒，本實(shí)用新型試劑盒用于定性檢測人血清/血漿/全血樣本中 的登革病毒NS1抗原，用于登革病毒早期感染和后期預(yù)后的臨床輔助診斷。
[0006] 本實(shí)用新型的技術(shù)方案如下：
[0007] -種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金檢測試紙條，其特征在于，試紙條在高度方 向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層固定在基板支撐層上， 且從手持端到加樣端依次設(shè)有手持端吸水材料墊，硝酸纖維素藥膜，金標(biāo)纖維墊，樣品纖維 墊，在金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，在硝酸纖維素藥膜上印制有條 狀的且與試紙條長度方向垂直的檢測線和質(zhì)控線，從手持端到加樣端，硝酸纖維素藥膜依 次包被有檢測登革NS1抗原的質(zhì)控線C線和檢測線T線。
[0008] 所述試紙條金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2,檢測線T線上包 被有抗登革NS 1單抗1，質(zhì)控線C線上包被有抗鼠I gG多抗。
[0009] 所述金標(biāo)纖維墊上包被膠體金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2的標(biāo)記濃度為10-20ug/ml， 所述檢測線T線上包被抗登革NS1單抗1的包被濃度為1.0-2.0mg/ml，所述質(zhì)控線C線上包被 抗鼠IgG多抗的被濃度為1.0-2.0mg/ml。
[0010] -種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金試劑盒，其特征在于:包括任一上述的膠體 金檢測試紙條。
[0011]還包括由盒體和盒蓋構(gòu)成的盒封閉體，所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位 槽。
[0012] 所述盒蓋上設(shè)有加樣孔和結(jié)果觀察孔；當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位 槽時(shí)，對應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊;對應(yīng)于結(jié)果觀察孔處為硝酸纖維素藥膜。
[0013] 所述試劑盒為長方形、橢圓形、半圓形或圓角矩形。生產(chǎn)、安裝、運(yùn)輸、使用、保存極 為方便，簡單、美觀、大方。
[0014] 檢驗(yàn)原理：
[0015] 本實(shí)用新型試劑盒試紙條應(yīng)用雙抗體夾心法原理定性檢測人血清/血漿/全血樣 本中的登革病毒NS1抗原，用于登革病毒早期感染的臨床輔助診斷。如果樣本中含有Dengue NS1抗原，將與金標(biāo)Dengue NS1單抗2反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下，被預(yù)先固定在膜上的 Dengue NS1單抗1捕獲，在反應(yīng)區(qū)形成肉眼可見的兩條紅色反應(yīng)線，反之則只在質(zhì)控線位置 C出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線；
[0016] 本實(shí)用新型試劑盒主要組成成份：
[0017]檢測試劑盒:試紙條將Dengue NS1單抗1和抗鼠IgG多抗固相在硝酸纖維膜，金標(biāo) 墊上固定膠體金標(biāo)記的Dengue NS1單抗2及其他試劑組成(氯金酸、梓檬酸三鈉、牛血清白 蛋白、碳酸鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉）
[0018] 抗登革NS1單抗1和抗登革NS1單抗2是不同表位的單抗。
[0019] 技術(shù)效果：
[0020]本實(shí)用新型試劑盒通過登革NS1抗原檢測，實(shí)現(xiàn)了登革病毒早期感染和后期預(yù)后 的臨床輔助診斷。
【附圖說明】：
[0021 ]圖1本實(shí)用新型試紙條的俯視圖；
[0022] 圖2本實(shí)用新型試紙條的縱向剖面圖；
[0023] 圖3本實(shí)用新型試劑盒俯視圖；
[0024] 圖4優(yōu)選的本實(shí)用新型試劑盒仰視圖；
[0025] 圖5優(yōu)選的本實(shí)用新型試劑盒仰視圖；
[0026] 圖6本實(shí)用新型登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)生產(chǎn)工藝流程圖；
[0027]其中：1-手持端，2-質(zhì)控線C線，3-檢測線T線，4-MAX標(biāo)志線，5-加樣端，6-硝酸纖維 素藥膜，7-樣品纖維墊，8-手持端吸水材料墊，9-金標(biāo)纖維墊，10-大無紡布，11-小無紡布， 12-手持端膠帶，13-箭頭膠帶，14-基板支撐層，15-盒蓋，16-盒體，17-加樣孔，18-結(jié)果觀察 孔。
【具體實(shí)施方式】：
[0028]提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本實(shí)用新型，并不局限于所述最佳實(shí)施 方式，不對本實(shí)用新型的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成限制，任何人在本實(shí)用新型的啟示下或是將 本實(shí)用新型與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本實(shí)用新型相同或相近似的 產(chǎn)品，均落在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0029]實(shí)施例中未注明具體實(shí)驗(yàn)步驟或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的常規(guī)實(shí)驗(yàn) 步驟的操作或條件即可進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得 的常規(guī)試劑產(chǎn)品。
[0030] 主要原材料的來源及質(zhì)量控制方法
[0031] 1.2.1抗鼠以6多抗為商購來源·
[0032] 性狀：肉眼觀察，為澄清透明的液體；只要符合如下規(guī)格型號便能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā) 明目的：純度>95% ;濃度多Smg/mLELISA法測定效價(jià)應(yīng)>1:20000。
[0033] 1.2.2Dengue NS1 單抗 1 為商購來源·
[0034] 性狀：肉眼觀察，為澄清透明的液體；只要符合如下規(guī)格型號便能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā) 明目的：純度>95% ;濃度彡Smg/mLELISA法測定效價(jià)應(yīng)>1:40000。
[0035] 1.2.3Dengue NS1 單抗2為商購來源·
[0036] 性狀：肉眼觀察，為澄清透明的液體；只要符合如下規(guī)格型號便能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā) 明目的：純度> 95 % ;濃度彡lmg/ml; ELISA法測定效價(jià)應(yīng)> 1:40000。
[0037] 本實(shí)用新型一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金試紙條，其特征在于，包括試紙 條在高度方向上包括基板支撐層14、反應(yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層固定在基 板支撐層14上，且從手持端1到加樣端5依次設(shè)有手持端吸水材料墊8，硝酸纖維素藥膜6，金 標(biāo)纖維墊9，樣品纖維墊7，在金標(biāo)纖維墊9和手持端吸水材料墊8上覆蓋有保護(hù)膜層，在硝酸 纖維素藥膜6上印制有條狀的且與試紙條長度方向垂直的檢測線和質(zhì)控線，從手持端1到加 樣端5,硝酸纖維素藥膜6依次包被有檢測登革NS1抗原的質(zhì)控線C線2和檢測線T線3，
[0038]試紙條金標(biāo)纖維墊9上包被有膠體金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2,檢測線T線3上包被 有抗登革NS1單抗1，質(zhì)控線C線2上包被有抗鼠IgG多抗。
[0039]所述金標(biāo)纖維墊9上包被膠體金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2的標(biāo)記濃度為10-20ug/ ml，所述檢測線T線3上包被抗登革NS1單抗1的包被濃度為1.0-2.0mg/ml，所述質(zhì)控線C線2 上包被抗鼠IgG多抗的被濃度為1.0-2. Omg/ml。
[0040] 本實(shí)用新型一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金試劑盒包括上述的膠體金試紙 條。
[0041] 所述盒蓋15上均設(shè)有加樣孔17和結(jié)果觀察孔18;當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體 16內(nèi)的定位槽時(shí)，對應(yīng)于盒蓋15加樣孔處17為樣品纖維墊7;對應(yīng)于結(jié)果觀察孔18處為硝酸 纖維素藥膜6。
[0042] 所述試劑盒為橢圓形、圓角矩形、半圓形或圓角矩形。生產(chǎn)、安裝、運(yùn)輸、使用、保存 極為方便，簡單、美觀、大方。
[0043]實(shí)施例1.試劑盒的制備 [0044] 3.1.1反應(yīng)膜(5140)制備
[0045] 分別將1 .Omg/ml的抗Dengue NS1單抗1溶液(檢測線T)和1 .Omg/ml的抗鼠IgG多抗 溶液(質(zhì)控線C)包被在硝酸纖維膜上，
[0046] 3.1.2膠體金墊(3440)制備
[0047] 3.1.2.1膠體金溶液的制備
[0048]用檸檬酸三鈉還原法制備。即氯金酸水溶液加熱煮沸，加入檸檬酸三鈉，混勻后煮 沸，待膠體金溶液顏色至紫紅色，繼續(xù)煮沸5分鐘，冷卻即可。
[0049] 3.1.2.2金標(biāo)記抗體的制備
[0050] 用碳酸鉀溶液調(diào)整膠體金溶液pH值，加入20μg/ml抗Dengue NS1單抗2，30分鐘后 加入牛血清白蛋白溶液，離心制得金標(biāo)抗體濃縮液后保存，使用前稀釋至20%。
[0051 ] 3.1.2.3膠體金墊的制備
[0052]取已經(jīng)制備好的金標(biāo)記抗體溶液均勻的涂抹在玻璃纖維上，干燥，檢測，備用。 [0053] 3·1·3ρΗ7·4 20mM磷酸鹽緩沖溶液的制備
[0054] 稱取氯化鈉9g、磷酸氫二鈉5.95g、磷酸二氫鈉0.53g至1000ml容量瓶中定容，混勻 備用。
[0055] 3.1.4輔料墊的制備
[0056]取已經(jīng)制備好的pH7.4 20mM磷酸鹽緩沖溶液均勻的涂抹在玻璃纖維上，干燥，檢 測，備用。
[0057] 3.1.5組裝
[0058]將各組裝材料組裝成反應(yīng)體后切成適宜條寬的測試條。
[0059] 實(shí)施例2.本實(shí)用新型試劑盒的使用。
[0060] 樣本要求：
[0061] 用常規(guī)方法采集血清、血漿或者全血樣本，血清樣本應(yīng)收集在不含任何抗凝劑的 容器中，血漿或者全血樣本應(yīng)收集于含有正常使用量枸櫞酸鈉、肝素、EDTA、草酸鉀等抗凝 劑的容器中。所有樣本應(yīng)視為傳染因子對待，勿采用溶血樣本。
[0062]檢驗(yàn)方法：
[0063] 1.在進(jìn)行測試前必須先仔細(xì)閱讀使用說明書。
[0064] 2.待測樣本、檢測試劑及其他檢測用材料等均平衡至室溫后，取出測試條或測試 板。
[0065] 3.用所配滴管加2滴（約60μ1-80μ1)樣本于左側(cè)加樣孔中。若測試全血樣本，需要 將60μ1-80μ1全血滴加在測試條MAX標(biāo)志線下端或測試板加樣孔，若樣本出現(xiàn)爬行緩慢或不 爬現(xiàn)象，需再滴加1滴稀釋液。
[0066] 4.15分鐘觀察顯示結(jié)果，30分鐘后的顯示結(jié)果無臨床意義。
[0067]【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
[0068] 1.Dengue NS1陽性:在檢測線(T)及質(zhì)控線位置(C)各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線。
[0069] 2.Dengue NS1陰性:僅在質(zhì)控線位置(C)出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線。
[0070] 3.無效:無紅色反應(yīng)線出現(xiàn)，或僅在檢測線位置(T)出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線，提示試 驗(yàn)失敗或試劑失效，請用新試劑重試。如果問題仍然存在，請停止使用本批產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)?經(jīng)銷商聯(lián)系。
[0071] 【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
[0072] 1.產(chǎn)品的臨床陽性符合率（診斷靈敏度）和陰性符合率（診斷特異性）均不低于 99% 〇
[0073] 2.產(chǎn)品可用于檢測人血清/血漿/全血樣本，結(jié)果一致。
[0074] 3.產(chǎn)品與臨床甲肝IgM抗體、乙肝表面抗原、丙肝抗體、戊肝IgM、梅毒螺旋體抗體、 艾滋抗體、類風(fēng)濕因子、EV71IgM抗體、乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒陽性樣本無交叉反應(yīng)。 [0075] 4.干擾試驗(yàn)中，高膽紅素(TBil〈220ymol/l)和高脂樣本(TG〈26.1mmol/l)對本產(chǎn) 品使用未見明顯干擾，但溶血樣本(HGB彡5g/L)會(huì)影響產(chǎn)品背景退白。
[0076]實(shí)施3.本實(shí)用新型試劑盒的效果驗(yàn)證 [0077] 1.靈敏度
[0080]結(jié)論：用本實(shí)用新型登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)在稀釋度為1:8時(shí)測 試條的檢測結(jié)果為陽性，因此確定最低檢出量為1:8。
[0081 ] 2.特異性
[0082] 表1.交叉反應(yīng)
[0084] 表2.血清/血漿/全血一致性試驗(yàn)和不同抗凝劑試驗(yàn)
[0086]
[0087] 表3 ·干擾試驗(yàn)
[0088]
[0089] 結(jié)論:與臨床甲肝I gM抗體、乙肝表面抗原、丙肝抗體、戊肝I gM抗體、梅毒螺旋體抗 體、艾滋抗體、類風(fēng)濕因子、EV71IgM抗體、乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒陽性血清反應(yīng)結(jié)果 為陰性，表明無交叉反應(yīng)，通過對同一個(gè)人的陰/陽性血清、血漿和全血樣本50例進(jìn)行檢測， 臨床血清、血漿和全血樣本均可適用；檢測不同抗凝劑結(jié)果基本一致，無明顯區(qū)別；高血脂 樣本(TG<26.1mmol/L)以及黃疸樣本(TBil<220ymol/L)時(shí)對產(chǎn)品檢測結(jié)果無影響，但溶 血樣本(HGB多5g/L)對實(shí)用新型的本底消退有影響，因此可能影響弱陽性樣本的判讀結(jié)果。
[0090] 3.重復(fù)性
[0092]
[0093] 結(jié)論:登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)的重復(fù)性測試結(jié)果均完全一致，且 反應(yīng)色度(主要是檢測線)沒有顯著差異，批內(nèi)可重現(xiàn)性良好，批間差異不明顯。
[0094]結(jié)果分析:本實(shí)用新型登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)采用高度特異性 的抗原-抗體反應(yīng)、免疫層析分析及膠體金標(biāo)記技術(shù)，用于定性檢測人血清/血漿/全血樣本 中的Dengue NS1抗原。測試方法簡單，快速，準(zhǔn)確。經(jīng)過一系列的性能評估試驗(yàn)表明，該產(chǎn)品 的靈敏度高、特異性好，批內(nèi)可重復(fù)性良好，批與批之間質(zhì)量相對穩(wěn)定。因而從最大程度上 滿足了臨床工作的需求，更好地方便一線臨檢操作者的使用。
[0095] 4.穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0096] (1)常溫穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0097] 1 · 1在2°C-10°C環(huán)境下穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0098] 1.1.1產(chǎn)品批號：20111201
[0100] 1.1.2 產(chǎn)品批號：20111202
[0101]
[0102] 1.1.3 產(chǎn)品批號：20111203
[0104] 1.1.4 產(chǎn)品批號：20111204
[0105]
[0106] 1.1.5 產(chǎn)品批號：20111205
[0108] 1.1.6 產(chǎn)品批號：20111206
[0109]
[0110] 1.2在10 °C-30 °C環(huán)境下穩(wěn)定性試驗(yàn)1.2.1產(chǎn)品批號:20 111 201
[0112] 1.2.2產(chǎn)品批號：20111202
[0113]
[0114] 1.2.3 產(chǎn)品批號：20111203
[0116] 1.2.4產(chǎn)品批號：20111204
[0117]
[0118] 1.2.5產(chǎn)品批號：20111205
[0120] 1.2.6產(chǎn)品批號：20111206
[0121]
[0122] 結(jié)論:將6批產(chǎn)品分別放置在2°C_10°C和10°C_30°C，在26個(gè)月內(nèi)按期檢測均能達(dá) 到技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求，因此能保證4-30Γ 24個(gè)月的貯存條件。
[0123] (2)加速穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0124] 2.1產(chǎn)品批號：20111201
[0126] 2.2產(chǎn)品批號：20111202
[0128] 2.3產(chǎn)品批號：20111203
[0136] 2.7結(jié)論:將6批產(chǎn)品放置在37°C恒溫箱20天，經(jīng)檢測，產(chǎn)品性能均能達(dá)到技術(shù)標(biāo)準(zhǔn) 要求，產(chǎn)品無明顯變化。
[0137] (3)破壞性試驗(yàn)
[0138] 3.1_20°C 冰箱放置 15 天
[0139] 3.1.1試驗(yàn)結(jié)果
[0140] 產(chǎn)品批號：20111201
[0142] 3.1.2 結(jié)論
[0143] 產(chǎn)品放置在-20°C冰箱15天，經(jīng)檢測，產(chǎn)品性能均能達(dá)到技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求，產(chǎn)品無任 何變化。
[0144] 3.2 45°C水浴放置15天
[0145] 3.2.1試驗(yàn)結(jié)果
[0146] 產(chǎn)品批號：20111201
[0148] 3.2.2 結(jié)論
[0149] 產(chǎn)品放置在45°C水浴箱15天，經(jīng)檢測，產(chǎn)品在第15天時(shí)檢測雖也在標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)， 出現(xiàn)CT線下降趨勢，因此產(chǎn)品在高溫高濕條件不能超過15天。
[0150] 4.開封試驗(yàn)結(jié)果
[0151] 所用批號 20111202
[0152] 4 · 1濕度<20%，溫度25±5°C試驗(yàn)結(jié)果
[0153]
[0154] 4 · 2濕度20-60%，溫度25 ±5°C試驗(yàn)結(jié)果
[0156] 4.3濕度60-80%，溫度25 ±5°C試驗(yàn)結(jié)果
[0158] 4.4濕度80-100%，溫度25±5°C試驗(yàn)結(jié)果
[0160] 4.5試驗(yàn)結(jié)論：
[0161] 根據(jù)以上結(jié)果，產(chǎn)品開封后濕度<20%和20-60%的條件下，測試條暴露在空氣中 的時(shí)間在8小時(shí)之內(nèi)檢測是合格的;濕度60-80 %的條件下，測試條暴露在空氣中的時(shí)間在2 小時(shí)之內(nèi)檢測是合格的；濕度80-100%的條件下，測試條暴露在空氣中的時(shí)間在1小時(shí)時(shí) 出現(xiàn)液體移行速度慢，靈敏度弱，假陽和假陰。因此，試紙條從包裝內(nèi)取出后應(yīng)盡快進(jìn)行試 驗(yàn)，避免放置于空氣中過長時(shí)間，導(dǎo)致受潮。
[0162] 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)論：
[0163] 1.該產(chǎn)品于原包裝常溫4°C_30°C儲(chǔ)存條件下放置26個(gè)月，其物理檢查、最低檢出 量、陰性參考品符合率、陽性參考品符合率和重復(fù)性均符合產(chǎn)品技術(shù)要求的要求。
[0164] 2.該產(chǎn)品在37°C恒溫箱放置20天，其物理檢查、最低檢出量、陰性參考品符合率、 陽性參考品符合率和重復(fù)性完全符合產(chǎn)品技術(shù)要求的要求。
[0165] 3.該產(chǎn)品在-20 °C冰箱放置15天，其物理檢查、最低檢出量、陰性參考品符合率、陽 性參考品符合率和重復(fù)性完全符合產(chǎn)品技術(shù)要求的要求。
[0166] 4.該產(chǎn)品在45°C水浴箱下放置15天，其C、T線色度有下降趨勢，但其物理檢查、最 低檢出量、陰性參考品符合率、陽性參考品符合率和重復(fù)性仍符合產(chǎn)品技術(shù)要求的要求，但 是考慮其條件對產(chǎn)品性能有影響，建議產(chǎn)品應(yīng)避光干燥處密封貯存，謹(jǐn)防高溫、受潮。
[0167] 5.產(chǎn)品開封后濕度<20 %和20-60%的條件下，測試條暴露在空氣中的時(shí)間在8小 時(shí)之內(nèi)檢測是合格的；濕度60-80 %的條件下，測試條暴露在空氣中的時(shí)間在2小時(shí)之內(nèi)檢 測是合格的;濕度80-100 %的條件下，測試條暴露在空氣中的時(shí)間在1小時(shí)時(shí)出現(xiàn)液體移行 速度慢，靈敏度弱，假陽和假陰。因此，試紙條從包裝內(nèi)取出后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)，避免放置于 空氣中過長時(shí)間，導(dǎo)致受潮。
[0168] 4.臨床考核結(jié)果
[0169] 表4考核試劑與金標(biāo)準(zhǔn)臨床研究的結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0171] 陽性符合率:A/(A+C)X 100% =99.2%
[0172] 陰性符合率:D/ (B+D) X 100 % = 99 · 6 %
[0173] 假陽性率:B/(B+D)X100%=0.4%
[0174] 假陰性率:C/(A+C)X100%=0.8%
[0175] 總體符合率：（A+D)/(A+B+C+D) X 100% = 99.4%
[0176] 表5臨床試驗(yàn)中的干擾樣本和交叉樣本試驗(yàn)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0178]表6臨床試驗(yàn)中血清、血漿和全血樣本一致性的結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[0180] 結(jié)果分析：
【申請人】選擇一家省級醫(yī)療單位、一家寄生蟲病防治所及一家疾病預(yù)防 控制中心，對1079例臨床樣本進(jìn)行了檢測，其中登革病毒NS1陽性樣本362例，登革病毒NS1 陰性樣本717例。登革病毒陽性符合率99.2%，陰性符合率為99.6%，總體符合率為99.4%。 X 2檢驗(yàn)結(jié)果顯示臨床研究產(chǎn)品與金標(biāo)準(zhǔn)核酸檢測方法或抗原檢測方法用于臨床樣本的檢 測結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本實(shí)用新型的登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)與金標(biāo)準(zhǔn)核 酸檢測方法或抗原檢測方法相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)也驗(yàn)證了巨細(xì)胞樣本、艾滋樣本、丙 型肝炎樣本、乙型肝炎樣本、溶血樣本、高血脂樣本、高膽紅素樣本等臨床常見病理樣本對 本產(chǎn)品無干擾或交叉反應(yīng)。因此本實(shí)用新型有良好的臨床靈敏度和臨床特異性。通過本次 試驗(yàn)檢測90例同一受試者的血清、血漿和全血樣本，表明本實(shí)用新型的登革病毒NS1抗原檢 測試劑盒(膠體金法)在檢測血清、血漿和全血樣本時(shí)無差異。
[0181] 結(jié)論
[0182] 通過上述一家省級醫(yī)療單位、一家寄生蟲病防治所及一家疾病預(yù)防控制中心1079 例臨床樣本的考核，結(jié)果表明本實(shí)用新型的"登革病毒NS1抗原檢測試劑盒(膠體金法)"靈 敏度高，特異性好。并且該試劑盒檢測方便快速，相對價(jià)廉，而且多個(gè)樣本可同時(shí)進(jìn)行檢測， 不需特殊儀器，非常適合于醫(yī)院、衛(wèi)生所的使用。
[0183] 以上詳細(xì)描述了本實(shí)用新型的較佳的具體的實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域普通技術(shù) 人員無需付出創(chuàng)造性的勞動(dòng)就可以根據(jù)本實(shí)用新型的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡 是本領(lǐng)域技術(shù)人員依照本實(shí)用新型的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上通過邏輯分析、推理或者 是有限次的實(shí)驗(yàn)可以得到的技術(shù)方案，皆應(yīng)在本實(shí)用新型權(quán)利要求書所確定的保護(hù)范圍之 內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述試紙條在高度 方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層固定在基板支撐層上， 且從手持端到加樣端依次設(shè)有手持端吸水材料墊，硝酸纖維素藥膜，金標(biāo)纖維墊，樣品纖維 墊，在金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，在硝酸纖維素藥膜上印制有條 狀的且與試紙條長度方向垂直的檢測線和質(zhì)控線，從手持端到加樣端，硝酸纖維素藥膜依 次包被有檢測登革NS1抗原的質(zhì)控線C線和檢測線T線。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述試紙條金標(biāo)纖維墊上包 被有膠體金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2,檢測線T線上包被有抗登革NS1單抗1，質(zhì)控線C線上包 被有抗鼠 IgG多抗。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被膠體 金標(biāo)記的抗登革NS1單抗2的標(biāo)記濃度為10-20ug/ml，所述檢測線T線上包被抗登革NS1單抗 1的包被濃度為1.0-2 . Omg/ml，所述質(zhì)控線C線上包被抗鼠 IgG多抗的包被濃度為1.0-2·Omg/ml〇4. 一種快速檢測登革病毒NS1抗原膠體金試劑盒，其特征在于:包括權(quán)利要求1-3任一 所述的膠體金檢測試紙條。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的膠體金檢測試劑盒，其特征在于，還包括由盒體和盒蓋構(gòu)成的 盒封閉體，所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的膠體金檢測試劑盒，其特征在于，所述盒蓋上設(shè)有加樣孔和結(jié) 果觀察孔；當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖 維墊;對應(yīng)于結(jié)果觀察孔處為硝酸纖維素藥膜。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的膠體金檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為長方形、橢圓 形、半圓形或圓角矩形。
【文檔編號】G01N33/569GK205679623SQ201620249476
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年3月29日 公開號201620249476.3, CN 201620249476, CN 205679623 U, CN 205679623U, CN-U-205679623, CN201620249476, CN201620249476.3, CN205679623 U, CN205679623U
【發(fā)明人】楊恒林, 秦成峰, 聶麗芳
【申請人】云南省寄生蟲病防治所, 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所, 藍(lán)十字生物藥業(yè)（北京）有限公司