1.一種利用一階導(dǎo)數(shù)紫外分光光度法測定殼寡糖脫乙酰度的方法,其特征在于:包括如下步驟:
1)以濃度為0.3-1.0mol/L的鹽酸溶液作為空白溶劑,配置一系列濃度的N-乙酰-D-葡萄糖胺標(biāo)準(zhǔn)溶液,以空白溶劑為參比,測定不同濃度的N-乙酰-D-葡萄糖胺標(biāo)準(zhǔn)溶液在200-206nm波長范圍內(nèi)的紫外吸光度值A(chǔ),根據(jù)N-乙酰-D-葡萄糖胺的濃度和ΔA/Δλ繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中,ΔA=Aλ+1—Aλ-1,λ為203-205nm,Δλ=2nm;
2)取殼寡糖樣品,用空白溶劑溶解后,以空白溶劑為參比,在200-206nm波長處測定其紫外吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算殼寡糖樣品中N-乙酰-D-葡萄糖胺的濃度,并根據(jù)以下公式計算殼寡糖樣品的脫乙酰度:
式中,D.D%為脫乙酰度,%;C1為殼寡糖樣品濃度,μg/mL;C2為殼寡糖樣品中N-乙酰-D-葡萄糖胺的濃度,μg/mL;M1為203,N-乙酰-D-葡萄糖胺的分子量;42為N-乙酰-D-葡萄糖胺的分子量與D-氨基葡萄糖胺的分子量之差。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用一階導(dǎo)數(shù)紫外分光光度法測定殼寡糖脫乙酰度的方法,其特征在于:所述空白溶劑的濃度為0.3mol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用一階導(dǎo)數(shù)紫外分光光度法測定殼寡糖脫乙酰度的方法,其特征在于:步驟1)中,N-乙酰-D-葡萄糖胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為1.60μg/mL、20.0μg/mL、32.0μg/mL、40.0μg/mL、64.0μg/mL、80.0μg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用一階導(dǎo)數(shù)紫外分光光度法測定殼寡糖脫乙酰度的方法,其特征在于:步驟1)中,λ為204nm。