本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)和分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種電化學(xué)傳感器及其檢測(cè)方法，具體地涉及一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

β-腎上腺素受體激動(dòng)劑是屬于苯乙醇胺類衍生物，有包括克倫特羅(CLB)在內(nèi)的20多個(gè)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相類似的化合物，因可提高動(dòng)物蛋白質(zhì)含量而曾經(jīng)被用作動(dòng)物飼料添加劑。因β-腎上腺素受體激動(dòng)劑具有導(dǎo)致人體產(chǎn)生內(nèi)分泌紊亂、染色體畸變及惡性腫瘤甚至致死等危害，目前我國(guó)和世界上大多數(shù)國(guó)家都明文禁止此類化合物用作飼料添加劑。

目前，β-腎上腺素受體激動(dòng)劑類藥物殘留的檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和熒光免疫法(FIA)等。

色譜法是β-腎上腺素受體激動(dòng)劑殘留的主要檢測(cè)方法，但是色譜法檢測(cè)成本高、操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)、不適合大量樣品的快速檢測(cè)；而免疫法的核心是抗體，具有特異性強(qiáng)、樣品前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但抗體的特異性識(shí)別也決定了它的致命缺點(diǎn)：即一種抗體檢測(cè)一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑，無法檢測(cè)其它的同類型化合物；因此一個(gè)樣品如需檢測(cè)多種β-激動(dòng)劑的殘留量需要使用多種檢測(cè)產(chǎn)品，大大提高了檢測(cè)成本和工作時(shí)間，失去了快速篩選的意義。此外，不斷出現(xiàn)的新的β-激動(dòng)劑替代品由于缺乏相應(yīng)的抗體及針對(duì)性檢測(cè)技術(shù)，極容易造成漏檢。

β-腎上腺素受體在人體中主要分布于骨骼肌、肝臟血管平滑肌、心肌和脂肪細(xì)胞等部位，能與β-腎上腺素受體激動(dòng)劑結(jié)合而引起腺苷酸環(huán)化酶(AC)的活化，生成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，活化蛋白激酶A(PKA)，從而實(shí)現(xiàn)舒張平滑肌、促進(jìn)脂肪代謝等作用。β-腎上腺素受體能與所有β-腎上腺素受體激動(dòng)劑相結(jié)合，甚至包括未被發(fā)現(xiàn)的β-腎上腺素受體激動(dòng)劑，只是結(jié)合強(qiáng)弱有所不同，這種對(duì)β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的寬譜識(shí)別性使得其在實(shí)現(xiàn)β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)方面有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器，所述的傳感器可用于β-激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)。

本發(fā)明的另一目的還在于提供一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留電化學(xué)檢測(cè)方法，所述的方法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、成本低，同時(shí)具有非常高的靈敏度(pg級(jí))和很寬的線性范圍(10^-2～10²ng/ml)，可應(yīng)用于食品中多種β-激動(dòng)劑的檢測(cè)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器，包括基底玻碳電極，其特征在于，所述的基底玻碳電極表面修飾納米金顆粒，將巰基乙酸自組裝在所述的納米金顆粒表面，采用N-溴代琥珀酰亞胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)活化羧基后，β-腎上腺素受體通過酰胺鍵偶聯(lián)到電極表面修飾的納米金顆粒上；

所述的β-腎上腺素受體為人源β₂-腎上腺素受體重組蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:1。

所述電化學(xué)傳感器采用以下方法制備：首先將經(jīng)過打磨、拋光和超聲清洗的基底玻碳浸入氯金酸溶液中，采用恒電位法將氯金酸電化學(xué)還原為納米金顆粒，并沉積于玻碳電極表面；再將玻碳電極置于質(zhì)量濃度為0.5％的巰基乙酸水溶液中，通過自組裝的方法在納米金顆粒表面修飾巰基乙酸；再將玻碳電極置于含有0.05mol/L的N-溴代琥珀酰亞胺(NHS)和0.05mol/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液(MES)中，活化羧基；在上述活化羧基后的玻碳電極表面滴涂濃度為0.5mg/L的人源β₂-腎上腺素受體重組蛋白，4℃條件下反應(yīng)，制得所述的β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器。

采用所述的多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器，本發(fā)明還涉及一種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑多殘留電化學(xué)檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)電化學(xué)檢測(cè)傳感器的制備：

首先對(duì)玻碳電極進(jìn)行打磨、拋光和超聲清洗；然后將納米金顆粒修飾于電極表面，再通過自組裝將巰基乙酸修飾在納米金顆粒表面，最后采用NHS/EDC活化羧基后將β-腎上腺素受體通過酰胺鍵偶聯(lián)到電極表面修飾的納米金顆粒上；

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：配制一組包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的含有不同已知濃度的游離β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液；

(3)工作曲線的建立：將所述電化學(xué)傳感器分別浸入步驟(2)中配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液中孵育，用Tris-HCl緩沖溶液沖洗電化學(xué)傳感器，置于含有K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液中進(jìn)行電化學(xué)阻抗譜(EIS)掃描，測(cè)得結(jié)果以Nyquist圖表示；代入Randles等效電路模型，計(jì)算出電化學(xué)傳感器電極表面的電荷轉(zhuǎn)移電阻(R_ct)；將激動(dòng)劑濃度為零時(shí)所得的R_ct值記為R₀，含有β-腎上腺素受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)溶液的R_ct值記為R_x，R_ct變化的百分比值(％)等于R₀與R_x的差值與R₀的百分比值，即(R₀-R_x)/R₀×100(％)；將所述R_ct變化的百分比值與β-腎上腺素受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)數(shù)值lgC繪制成(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC工作曲線，或采用線性回歸法得到(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC線性回歸方程；

(4)β-腎上腺素受體激動(dòng)劑濃度的檢測(cè)：

配制含β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的待測(cè)樣品的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液，相同條件下按照步驟(3)對(duì)電化學(xué)傳感器進(jìn)行孵育和電化學(xué)阻抗譜(EIS)掃描，計(jì)算得到R_ct變化的百分比值(％)，根據(jù)(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC工作曲線或線性回歸方程，計(jì)算得到β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的濃度。

所述β-腎上腺素受體激動(dòng)劑包括但不限于克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、特步他林、齊帕特羅和非諾特羅。

將本發(fā)明提供的電化學(xué)傳感器及其檢測(cè)方法用于多種β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的檢測(cè)，其檢出限分別為：克倫特羅3.5pg/ml，沙丁胺醇6.0pg/ml，萊克多巴胺8.5pg/ml，特步他林6.2pg/ml，齊帕特羅8.2pg/ml，非諾特羅9.3pg/ml；檢測(cè)線性范圍分別為：克倫特羅為0.01～100ng/ml，沙丁胺醇和特步他林為0.03～150ng/ml，萊克多巴胺為0.05～150ng/ml，齊帕特羅和非諾特羅為0.05～200ng/ml。

有益效果：本發(fā)明所述的電化學(xué)傳感器是一種β-腎上腺素受體共價(jià)修飾的高靈敏β-激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器，所述的電化學(xué)傳感器采用電化學(xué)阻抗法，以K₃[Fe(CN)₆]為探針，測(cè)量檢測(cè)對(duì)象中β-腎上腺素受體激動(dòng)劑與電化學(xué)傳感器結(jié)合后電化學(xué)阻抗的變化?；讦?腎上腺素受體對(duì)β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的寬譜識(shí)別性，能實(shí)現(xiàn)對(duì)包括但不限于克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、特步他林、齊帕特羅和非諾特羅等β-激動(dòng)劑的檢測(cè)。所述的電化學(xué)傳感器快速、高效、靈敏度極高、檢測(cè)范圍大，所述的方法具有非常低的檢出限(3.5～9.3pg/ml)和很寬的線性范圍(0.01～100ng/ml或0.05～200ng/ml)。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。本發(fā)明的保護(hù)范圍并不以具體實(shí)施方式為限，而是由權(quán)利要求加以限定。

附圖說明

圖1為本發(fā)明所述電化學(xué)傳感器在含有不同濃度的克倫特羅(a)0ng/ml，(b)0.01ng/ml，(c)0.1ng/ml，(d)1ng/ml，(e)10ng/ml，(f)50ng/ml，(g)100ng/ml的孵育液中孵育后，在含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(濃度為0.1mol/L)中的EIS曲線圖。

圖2為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與克倫特羅濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線圖。

圖3為本發(fā)明所述電化學(xué)傳感器在含有不同濃度的萊克多巴胺(a)0ng/ml，(b)0.05ng/ml，(c)0.1ng/ml，(d)1ng/ml，(e)10ng/ml，(f)50ng/ml，(g)150ng/ml的孵育液中孵育后，在2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(濃度為0.1mol/L)中的EIS曲線圖。

圖4為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與萊克多巴胺濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線圖。

圖5為本發(fā)明所述電化學(xué)傳感器在含有不同濃度的齊帕特羅(a)0，(b)0.05ng/ml，(c)0.1ng/ml，(d)1ng/ml，(e)10ng/ml，(f)50ng/ml，(g)200ng/ml的孵育液中孵育后，在2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(濃度為0.1mol/L)中的EIS曲線圖。

圖6為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與齊帕特羅濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線圖。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例中，采用電化學(xué)阻抗法進(jìn)行β-激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)，所采用的電化學(xué)傳感器是一種β-腎上腺素受體共價(jià)修飾的高靈敏β-激動(dòng)劑多殘留檢測(cè)電化學(xué)傳感器，所述的β-腎上腺素受體為人源β₂-腎上腺素受體重組蛋白，其氨基酸序列為(SEQ ID NO:1)：

MGQPGNGSAFLLAPNRSHAPDHDVTQQRDEVWVVGMGIVMSLIVLAIVFGNVLVITAIAKFERLQTVTNYFITSLACADLVMGLAVVPFGAAHILMKMWTFGNFWCEFWTSIDVLCVTASIETLCVIAVDRYFAITSPFKYQSLLTKNKARVIILMVWIVSGLTSFLPIQMHWYRATHQEAINCYANETCCDFFTNQAYAIASSIVSFYVPLVIMVFVYSRVFQEAKRQLQKIDKSEGRFHVQNLSQVEQDGRTGHGLRRSSKFCLKEHKALKTLGIIMGTFTLCWLPFFIVNIVHVIQDNLIRKEVYILLNWIGYVNSGFNPLIYCRSPDFRIAFQELLCLRRSSLKAYGNGYSSNGNTGEQSGYHVEQEKENKLLCEDLPGTEDFVGHQGTVPSDNIDSQGRNCSTNDSLL。

實(shí)施例1電化學(xué)傳感器的制備

將直徑為3mm的玻碳電極用0.3μm的氧化鋁粉末在拋光絨布上打磨，依次用無水乙醇-蒸餾水(V/V＝1/1)、蒸餾水超聲清洗30s，再用蒸餾水沖洗干凈。將上述電極插入質(zhì)量濃度為1％的氯金酸溶液中進(jìn)行恒電位電化學(xué)沉積(電壓為-0.2V，沉積時(shí)間60s)，用蒸餾水沖洗干凈后浸入質(zhì)量濃度為0.5％的巰基乙酸溶液中，置于冰箱中4℃過夜。將上述電極用蒸餾水沖洗干凈后置于含有0.05mol/L的N-溴代琥珀酰亞胺(NHS)和0.05mol/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液(MES)中，活化羧基60分鐘。在上述活化羧基后的電極表面滴涂50μL人源β₂腎上腺素受體重組蛋白(0.5mg/L)，置于冰箱中4℃過夜，得到β₂腎上腺素受體重組蛋白/納米金修飾電極(β₂AR-Au-GCE)，即電化學(xué)傳感器。

實(shí)施例2電化學(xué)傳感器對(duì)克倫特羅(CL)的檢測(cè)

將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的含有一系列不同已知濃度的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液(pH為8.0，體積為50μL)中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行電化學(xué)阻抗譜(EIS)掃描，結(jié)果以Nyquist圖表示(如附圖1所示)。代入Randles等效電路模型，計(jì)算出其電極表面的電荷轉(zhuǎn)移電阻(R_ct)；將克倫特羅濃度為零時(shí)所得的R_ct值記為R₀，含有一定濃度的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)所得的R_ct值記為R_x，計(jì)算R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)，以(R₀-R_x)/R₀×100(％)對(duì)克倫特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC(克倫特羅濃度C的單位為ng/ml)作圖可得(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC工作曲線(如附圖2所示)。采用線性回歸法得到(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC線性回歸方程：Y＝39.48071+9.95057X(其中Y為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)，X為克倫特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC)，克倫特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC在-2.0～2.0范圍內(nèi)(即克倫特羅的濃度在0.01～100ng/ml范圍內(nèi))與(R₀-R_x)/R₀×100(％)成正比，線性相關(guān)系數(shù)為0.99651。以大于噪音信號(hào)3倍的阻抗信號(hào)對(duì)應(yīng)的濃度為最低檢出限，重復(fù)5次以上實(shí)驗(yàn)得出，上述方法的最低檢出限為3.5pg/ml。

實(shí)施例3電化學(xué)傳感器對(duì)萊克多巴胺(RAC)的檢測(cè)

將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的含有一系列不同已知濃度的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的Tris-HCl緩沖溶液(pH為8.0，體積為50μL)中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行EIS掃描，結(jié)果以Nyquist圖表示(如附圖3所示)。代入Randles等效電路模型，計(jì)算出其電極表面的電荷轉(zhuǎn)移電阻(R_ct)；將萊克多巴胺濃度為零時(shí)所得的R_ct值記為R₀，含有一定濃度的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)所得的R_ct值記為R_x，以與實(shí)施例2中相同的方法將(R₀-R_x)/R₀×100(％)對(duì)萊克多巴胺的濃度對(duì)數(shù)值lgC(萊克多巴胺濃度C的單位為ng/ml)作圖可得(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC工作曲線(如附圖4所示)。采用線性回歸法得到(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC線性回歸方程：Y＝37.03335+10.19632X(其中Y為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)，X為克倫特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC)，萊克多巴胺的濃度對(duì)數(shù)值lgC在-1.301～2.176范圍內(nèi)(即萊克多巴胺的濃度在0.05～150ng/ml范圍內(nèi))與(R₀-R_x)/R₀×100(％)成正比，線性相關(guān)系數(shù)為0.99655。以大于噪音信號(hào)3倍的阻抗信號(hào)對(duì)應(yīng)的濃度為最低檢出限，重復(fù)5次以上實(shí)驗(yàn)得出，上述方法的最低檢出限為8.5pg/ml。

實(shí)施例4電化學(xué)傳感器對(duì)齊帕特羅(ZIP)的檢測(cè)

將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的含有一系列不同已知濃度的齊帕特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的Tris-HCl緩沖溶液(pH為8.0，體積為50μL)中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行EIS掃描，結(jié)果以Nyquist圖表示(如附圖5所示)。代入Randles等效電路模型，計(jì)算出其電極表面的電荷轉(zhuǎn)移電阻(R_ct)；將齊帕特羅濃度為零時(shí)所得的R_ct值記為R₀，含有一定濃度的齊帕特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)所得的R_ct值記為R_x，以與實(shí)施例2中相同的方法將(R₀-R_x)/R₀×100(％)對(duì)齊帕特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC(齊帕特羅濃度C的單位為ng/ml)作圖可得(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC工作曲線(如附圖6所示)。采用線性回歸法得到(R₀-R_x)/R₀×100(％)-lgC線性回歸方程：Y＝39.74209+7.03228X(其中Y為R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)，X為齊帕特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC)，齊帕特羅的濃度對(duì)數(shù)值lgC在-1.301～2.301范圍內(nèi)(即齊帕特羅的濃度在0.05～200ng/ml范圍內(nèi))與(R₀-R_x)/R₀×100(％)成正比，線性相關(guān)系數(shù)為0.99409。以大于噪音信號(hào)3倍的阻抗信號(hào)對(duì)應(yīng)的濃度為最低檢出限，重復(fù)5次以上實(shí)驗(yàn)得出，上述方法的最低檢出限為8.2pg/ml。

實(shí)施例5豬肉樣品中加標(biāo)沙丁胺醇(SAL)的測(cè)定

1)豬肉樣品的加標(biāo)處理：稱取1±0.0050g豬肉于到10ml的樣品管中，加入沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)液，和3ml乙腈-丙酮提取液(V：V＝4：1)，混合物超聲振蕩30分鐘，于2000r/m下離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至氮吹管中，殘?jiān)?ml的相同提取液重復(fù)提取1次，上清液合并在氮吹管中。提取物在氮吹條件下于50℃溫度下濃縮蒸發(fā)，濃縮物加入1ml的Tris-HCl緩沖液溶解后用于電化學(xué)分析。

2)豬肉樣品中加標(biāo)沙丁胺醇的測(cè)定：分別取等量的不同豬肉提取液樣品，加入Tris-HCl緩沖液混合配成總體積為50μl的孵育液。將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入孵育液中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行EIS掃描，采用與實(shí)施例2中相同的方法計(jì)算得到R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)。

以與實(shí)施例2中相同的方法獲得R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與沙丁胺醇濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線，并計(jì)算添加沙丁胺醇的濃度，檢測(cè)回收率結(jié)果如表1。

表1為電化學(xué)傳感器檢測(cè)加標(biāo)豬肉中的沙丁胺醇濃度的回收率

實(shí)施例6雞肉樣品中加標(biāo)特步他林(TER)的測(cè)定

1)雞肉樣品的加標(biāo)處理：稱取1±0.0050g雞肉于到10ml的樣品管中，加入特步他林標(biāo)準(zhǔn)液，和3ml乙腈-丙酮提取液(V：V＝4：1)，混合物超聲振蕩30分鐘，于2000r/m下離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至氮吹管中，殘?jiān)?ml的相同提取液重復(fù)提取1次，上清液合并在氮吹管中。提取物在氮吹條件下于50℃溫度下濃縮蒸發(fā)，濃縮物加入1ml的Tris-HCl緩沖液溶解后用于電化學(xué)分析。

2)雞肉樣品中加標(biāo)特步他林的測(cè)定：分別取等量的不同雞肉提取液樣品，加入Tris-HCl緩沖液混合配成總體積為50μl的孵育液。將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入孵育液中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行EIS掃描，采用與實(shí)施例2中相同的方法計(jì)算得到R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)。

以與實(shí)施例2中相同的方法獲得R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與特步他林濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線，并計(jì)算添加特步他林的濃度，檢測(cè)回收率結(jié)果如表2。

表2為電化學(xué)傳感器檢測(cè)加標(biāo)雞肉中的特步他林濃度的回收率

實(shí)施例7豬肝樣品中加標(biāo)非諾特羅的測(cè)定

1)豬肝樣品的加標(biāo)處理：稱取1±0.0050g豬肝于到10ml的樣品管中，加入非諾特羅標(biāo)準(zhǔn)液，和3ml乙腈-丙酮提取液(V：V＝4：1)，混合物超聲振蕩30分鐘，于2000r/m下離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至氮吹管中，殘?jiān)?ml的相同提取液重復(fù)提取1次，上清液合并在氮吹管中。提取物在氮吹條件下于50℃溫度下濃縮蒸發(fā)，濃縮物加入1ml的Tris-HCl緩沖液溶解后用于電化學(xué)分析。

2)豬肝樣品中加標(biāo)非諾特羅的測(cè)定：分別取等量的不同豬肝提取液樣品，加入Tris-HCl緩沖液混合配成總體積為50μl的孵育液。將實(shí)施例1制備的電化學(xué)傳感器浸入孵育液中，在37℃孵育30min，用Tris-HCl緩沖液沖洗后置于含有2mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]的KCl溶液(0.1mol/L)中進(jìn)行EIS掃描，采用與實(shí)施例2中相同的方法計(jì)算得到R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)。

以與實(shí)施例2中相同的方法獲得R_ct變化的百分比值(R₀-R_x)/R₀×100(％)與非諾特羅濃度對(duì)數(shù)值lgC的工作曲線，并計(jì)算添加非諾特羅的濃度，檢測(cè)回收率結(jié)果如表3。

表3為電化學(xué)傳感器檢測(cè)加標(biāo)豬肝中的非諾特羅濃度的回收率