本發(fā)明涉及一種銀納米輔助濁點(diǎn)萃取測(cè)定煙草中的亞硝酸鹽方法。屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

硝酸鹽和亞硝酸鹽是煙草中一類重要的含氮化合物，其含量的多少不但直接影響煙葉的吃味和品質(zhì)，還會(huì)影響其他含氮化合物的形成和含量。其中，亞硝酸鹽更是煙草特有亞硝胺的直接前體物，它的含量與煙草特有亞硝胺的含量呈顯著相關(guān)。隨著人們對(duì)煙草特有亞硝胺的日益關(guān)注，如何快速準(zhǔn)確地對(duì)硝酸鹽和亞硝酸鹽進(jìn)行定量分析也顯得愈發(fā)重要。目前煙草中硝酸鹽的測(cè)定有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T 296-2009煙草及煙草制品中硝酸鹽的測(cè)定-連續(xù)流動(dòng)法。方法原理是用水萃取試樣，萃取液中的硝酸鹽在堿性條件下與硫酸肼－硫酸銅溶液反應(yīng)生成亞硝酸鹽。亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酰胺反應(yīng)生成重氮化合物，在酸性條件下，重氮化合物與N－(1－萘基)－乙二胺二鹽酸發(fā)生偶合反應(yīng)生成一種紫紅色配合物，其最大吸收波長(zhǎng)為520nm，用比色計(jì)測(cè)定。研究小組之前將濁點(diǎn)萃取技術(shù)應(yīng)用于亞硝酸鹽的測(cè)定，產(chǎn)生了好的技術(shù)效果，申請(qǐng)了相關(guān)發(fā)明專利CN104458712A、CN104280383A。本發(fā)明是對(duì)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)的改進(jìn)，將NO₂^-與I^-反應(yīng)形成的I₃^-與陽離子染料形成離子對(duì)進(jìn)行銀納米輔助濁點(diǎn)萃取，與一般的濁點(diǎn)萃取比較，具有萃取率更高、萃取時(shí)間縮短，檢測(cè)靈敏度更高的優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間短的銀納米輔助濁點(diǎn)萃取測(cè)定煙草中的亞硝酸鹽方法。

本發(fā)明的一種銀納米輔助濁點(diǎn)萃取測(cè)定煙草中的亞硝酸鹽方法，包括以下步驟：

(1)亞硝酸鹽工作曲線的制作：將亞硝酸鹽0.01～2.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，加入KI試劑，染料溶液，pH緩沖溶液，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入制備的銀納米溶液及非離子表面活性劑，加熱，待溶液變混濁后，停止加熱，放入冰浴，離心分相，取出表面活性劑相，進(jìn)行紫外分光光度法測(cè)定。

(2)煙草樣品亞硝酸鹽測(cè)定：稱取0.5～1.0g(準(zhǔn)確到0.1mg)于250mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50～100mL高純水，具塞后置于超聲波發(fā)生器中超聲30～60min。靜置，離心分離，加入活性炭，混合均勻，濾紙過濾除去活性炭，取出20mL脫色后的溶液，移到50mL離心管中，加入KI試劑，染料溶液，pH緩沖溶液，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入制備的銀納米溶液及非離子表面活性劑，加熱，待溶液變混濁后，停止加熱，放入冰浴，離心分相，取出表面活性劑相，進(jìn)行紫外分光光度法測(cè)定，代入步驟(1)回歸方程計(jì)算煙草樣品中亞硝酸鹽含量。

所述的碘化鉀試劑濃度為0.5～2mmol/L。

所述的染料包括孔雀石綠、結(jié)晶紫中之一種，濃度為1～5×10^-5mol/L。

所述的緩沖溶液為pH 4Britton-Robinson緩沖溶液。

所述的銀納米的制備：20g黃芩中加入200mL高純水，煮沸30min，冷卻至室溫，過濾得到黃芩水提物；取10mL黃芩水提物加入0.05mol/L的AgNO₃溶液10mL，攪拌30min，得到銀納米溶液；銀納米溶液加入量為0.2～0.5mL。

所述的非離子表面活性劑包括Triton X-100，Triton X-114，體積百分比濃度為0.1～0.2％。

所述的加熱溫度為40～60℃，加熱時(shí)間為10～20min。

所述的冰浴時(shí)間為5～10min。

所述的離心時(shí)間5～15min，離心速率3000～6000r/min。

所述的加入活性炭的量為0.5～1g。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

1.本發(fā)明利用NO₂^-與I^-反應(yīng)形成的I₃^-與陽離子染料形成離子對(duì)有色化合物，進(jìn)行銀納米輔助濁點(diǎn)萃取，紫外分光光度法間接測(cè)定煙草中的亞硝酸鹽，方法簡(jiǎn)單。

2.由于染料與I₃^-形成離子對(duì)化合物顏色敏感，用于NO₂^-的檢測(cè)，靈敏度高。

3.由于銀納米是通過天然產(chǎn)物提取物均勻還原形成的，與非離子表面活性劑進(jìn)行輔助濁點(diǎn)萃取離子對(duì)有色化合物，具有萃取率高、萃取時(shí)間短，濁點(diǎn)溫度低，檢測(cè)靈敏度高的特點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。

實(shí)施例1

1、銀納米的制備：20g黃芩中加入200mL高純水，煮沸30min，冷卻至室溫，過濾得到黃芩水提物；取10mL黃芩水提物加入0.05mol/L的AgNO₃溶液10mL，攪拌30min，得到銀納米溶液。

2、亞硝酸鹽工作曲線的制作：取濃度為1.0mg/L的NO₂^-標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑1mL，2.5×10^-3mol/L結(jié)晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液1mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.2mL及5％非離子表面活性劑Triton X-114 2mL，加熱至45℃，10min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴5min，4000r/min離心10min后分相，取出表面活性劑相，450nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，得到回歸方程y＝0.4196x-0.04，相關(guān)系數(shù)r＝0.9989。

3、煙草樣品測(cè)定：稱取0.5g煙葉粉末(準(zhǔn)確到0.1mg)于250mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50mL高純水，具塞后置于超聲波發(fā)生器中超聲30min。靜置，4000r/min離心15min，加入0.5g活性炭，混合均勻，濾紙過濾除去活性炭，取出20mL脫色后的溶液，移到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑1mL，2.5×10-3mol/L結(jié)晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液1mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.2mL及5％非離子表面活性劑Triton X-114 2mL，加熱至45℃，10min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴5min，4000r/min離心5min后分相，取出表面活性劑相，450nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，代入步驟2回歸方程計(jì)算煙草樣品中亞硝酸鹽含量為18.23mg/kg。

實(shí)施例2

1、銀納米的制備按實(shí)施例1。

2、亞硝酸鹽工作曲線的制作：取濃度為1.0mg/L的NO₂^-標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑2mL，2.5×10^-3mol/L孔雀石綠溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液2mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.5mL及5％非離子表面活性劑Triton X-100 3mL，加熱至60℃，15min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴10min，6000r/min離心5min后分相，取出表面活性劑相，600nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，得到回歸方程y＝0.1245x-0.009，相關(guān)系數(shù)r＝0.9965。

3、煙草樣品測(cè)定：稱取1.0g煙葉粉末(準(zhǔn)確到0.1mg)于250mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100mL高純水，具塞后置于超聲波發(fā)生器中超聲60min。靜置，6000r/min離心10min，加入1.0g活性炭，混合均勻，濾紙過濾除去活性炭，取出20mL脫色后的溶液，移到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石綠溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液2mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.5mL及5％非離子表面活性劑Triton X-100 3mL，加熱至60℃，15min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴10min，6000r/min離心5min后分相，取出表面活性劑相，600nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，代入步驟2回歸方程計(jì)算煙草樣品中亞硝酸鹽含量為25.21mg/kg。

實(shí)施例3

1、銀納米的制備按實(shí)施例1。

2、亞硝酸鹽工作曲線的制作：取濃度為1.0mg/L的NO₂^-標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑2mL，2.5×10^-3mol/L孔雀石綠溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液2mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.5mL及5％非離子表面活性劑Triton X-114 3mL，加熱至40℃，20min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴8min，5000r/min離心7min后分相，取出表面活性劑相，600nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，得到回歸方程y＝0.5210x-0.007，相關(guān)系數(shù)r＝0.9978。

3、煙草樣品測(cè)定：稱取1.0g煙葉粉末(準(zhǔn)確到0.1mg)于250mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100mL高純水，具塞后置于超聲波發(fā)生器中超聲40min。靜置，6000r/min離心10min，加入1.0g活性炭，混合均勻，濾紙過濾除去活性炭，取出20mL脫色后的溶液，移到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑2mL，2.5×10-3mol/L孔雀石綠溶液2mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液2mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.5mL及5％非離子表面活性劑Triton X-114 3mL，加熱至40℃，20min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴8min，5000r/min離心7min后分相，取出表面活性劑相，600nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，代入步驟2回歸方程計(jì)算煙草樣品中亞硝酸鹽含量為32.62mg/kg。

實(shí)施例4

1、銀納米的制備按實(shí)施例1。

2、亞硝酸鹽工作曲線的制作：取濃度為1.0mg/L的NO₂^-標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0002、0.001、0.002、0.01、0.02、0.04mL到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑1mL，2.5×10^-3mol/L結(jié)晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液1mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.2mL及5％非離子表面活性劑Triton X-100 2mL，加熱至55℃，20min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴10min，3000r/min離心20min后分相，取出表面活性劑相，450nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，得到回歸方程y＝0.1246x-0.004，相關(guān)系數(shù)r＝0.9991。

3、煙草樣品測(cè)定：稱取0.5g煙葉粉末(準(zhǔn)確到0.1mg)于250mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50mL高純水，具塞后置于超聲波發(fā)生器中超聲50min。靜置，3000r/min離心20min，加入0.5g活性炭，混合均勻，濾紙過濾除去活性炭，取出20mL脫色后的溶液，移到50mL離心管中，加入0.05mol/L的KI試劑1mL，2.5×10-3mol/L結(jié)晶紫溶液1mL，pH 4.0Britton-Robinson緩沖溶液1mL，用高純水稀釋到刻度，混勻，加入步驟1制備的銀納米溶液0.2mL及5％非離子表面活性劑Triton X-100 2mL，加熱至55℃，20min后，溶液變混濁，停止加熱，放入冰浴10min，3000r/min離心20min后分相，取出表面活性劑相，450nm處進(jìn)行光度法測(cè)定吸光度，代入步驟2回歸方程計(jì)算煙草樣品中亞硝酸鹽含量為12.15mg/kg。