專利名稱：：高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種有效的新型濁點萃取體系分離富集阿維菌素和伊維菌素的方法，屬于分析化學(xué)中痕量生物大分子的分離富集和分析測定
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：濁點萃取(CloudPointExtration,CPE)是近年來出現(xiàn)的一種新興的液一液萃取技術(shù)，它不使用揮發(fā)性有機溶劑，不影響環(huán)境。它以中性表面活性劑膠束水溶液的溶解性和濁點現(xiàn)象為基礎(chǔ)，通過改變實驗參數(shù)引發(fā)相分離，將疏水性物質(zhì)與親水性物質(zhì)分離。同經(jīng)典的液一液萃取技術(shù)相比，該萃取技術(shù)具有如下優(yōu)點(1)應(yīng)用范圍廣，萃取效率高，富集因子較大；(2)不使用有毒、有害的有機溶劑，適應(yīng)了綠色分析技術(shù)發(fā)展的需要，而且所需的表面活性劑的量僅為mg級，從而可以把對環(huán)境產(chǎn)生污染的有機物質(zhì)控制在最低限度；(3)操作簡單方便；(4)易于與一些儀器分析方法聯(lián)用等。該技術(shù)最早由Watanabe(WatanabeH,TanakaH,Talanta,1978,25:585_589)等提出，用于金屬螯合物合物的分離，Bordier(BordierTM,Biol.Chem.,1981,2561604-1607)等最早將其應(yīng)用于生物學(xué)領(lǐng)域，用于生物大分子的分離純化。濁點萃取技術(shù)其基本原理為在一定溫度范圍內(nèi)，表面活性劑易溶于水成為澄清的溶液，而當(dāng)溫度升高(或降低)到一定程度時，表面活性劑在水中的溶解度反而減小，會在水溶液中出現(xiàn)混濁、析出或分層的現(xiàn)象。這種混濁溶液靜置一段時間(或離心)后形成兩液相，一相為量少為富含被萃取物的表面活性劑相，另一相為大量且表面活性劑膠束濃度為臨界膠束濃度的水相。上述過程是可逆的，當(dāng)溫度向著相反方向變化時，即可恢復(fù)為均相溶液。在兩性離子表面活性劑體系中，當(dāng)溫度低于濁點溫度時會引發(fā)分相分離，而當(dāng)溫度高于濁點溫度則成為均相溶液，而在非離子表面活性劑體系中正好相反。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種有效的新型濁點萃取體系分離富集阿維菌素和伊維菌素的方法。本發(fā)明高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法，其特征在于采用Trionx-114為表面活性劑，并結(jié)合高效液相色譜進行測定其主要步驟為a.設(shè)計確定最佳濁點萃取條件；其中包括有(1)ρΗ值的選擇，(2)Tri0nx-114濃度的選擇，(3)水浴溫度和時間的選擇；b.在上述最佳條件下對阿維菌素和伊維菌素測定和研究；c.在上述最佳條件下并結(jié)合高效液相色譜法進行水樣中痕量阿維菌素和伊維菌素含量的測定。本發(fā)明方法可延伸用于測定除水之外的條件環(huán)境樣品、食品和藥物分析中的阿維菌素和伊維菌素的測定。本發(fā)明方法的優(yōu)點如下(1)本發(fā)明提供了一種新的濁點萃取體系，實驗證明本發(fā)明方法能有效地富集阿維菌素和伊維菌素，且本方法安全、簡便、快捷和高效。(2)本發(fā)明的濁點萃取體系富集后的所得的富集因子較大，且與高效液相色譜法結(jié)合后所有效地提高該儀器的測定靈敏度，獲得理想的檢出限。具體實施例方式現(xiàn)將本發(fā)明的具體實施例敘述于后。實施例1本實施例中主要是通過項實驗來獲得數(shù)據(jù)的。本實施例的實驗步驟如下(1)設(shè)計確定最佳濁點萃取條件準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)溶液至50ml離心管中，依次加入定量表面活性劑TrionX-114，用二次蒸餾水定容至50mL。搖勻后恒溫水浴，加熱一定時間后，趁熱離心3，500r/min分離5min，在冰浴中冷卻至接近0°C，使表面活性劑相變成粘滯的液相后棄去水相，然后向表面活性劑富集相中加入一定量的含甲醇或乙腈，用高效液相色譜-紫外檢測器測定所加阿維菌素和伊維菌素的含量。按照所設(shè)定的實驗步驟，優(yōu)化濁點萃取的實驗條件如下①PH值的選擇；②TrionX-114用量的選擇；③水浴溫度和時間的選擇。(2)在上述最佳實驗條件下對阿維菌素和伊維菌素的分析特性進行測定和研究。(3)在上述最佳實驗條件并結(jié)合高效液相色譜法進行水樣中痕量阿維菌素和伊維菌素的含量測定。本實施例中所測結(jié)果如下A、按照(1)中所述實驗室步驟尋找測定阿維菌素和伊維菌素的最優(yōu)實驗條件檢測波長為245nm，流動相流速為1.5ml/min，其中阿維菌素的保留時間為6.4分鐘，伊維菌素的保留時間為13.0分鐘。阿維菌素和伊維菌素的優(yōu)化實驗條件總結(jié)歸納見表1。物質(zhì)ΓρΗTrionX-114用量(％)溫度(°C)~時間(分鐘)阿維菌素TTo036020伊維菌素TTo036020B、本發(fā)明方法用于測定阿維菌素和伊維菌素的分析特性研究，其所得結(jié)果見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>C、將本發(fā)明方法用于測定實驗水樣中的阿維菌素和伊維菌素，并進行回收實驗室，其中江水采自長江(湖北荊州)；自來水、湖水采自長江水產(chǎn)研究所(湖北荊州)。測定結(jié)果見表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法，其特征在于采用TrionX-114為表面活性劑，并結(jié)合高效液相色譜同時測定阿維菌素和伊維菌素，其主要步驟為a.設(shè)計確定最佳濁點萃取條件；其中包括有(1)表面活性劑濃度的選擇，(2)加熱溫度和時間的選擇，(3)pH的選擇；b.在上述最佳條件下對阿維菌素和伊維菌素的分析特性進行測定和研究；c.在上述最佳條件下并結(jié)合高效液相色譜法進行水樣中阿維菌素和伊維菌素含量的測定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法，其特征在于所述的方法還可延伸用于測定除水樣之外的環(huán)境樣品、食品和藥物分析中的阿維菌素和伊維菌素的測定。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法，其特征在于流動相為乙腈水=9010(ν/ν)04.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-濁點萃取測定阿維菌素和伊維菌素含量的方法，其特征在于所述的方法是同時測定阿維菌素和伊維菌素。全文摘要本發(fā)明涉及一種有效的新型濁點萃取體系分離富集阿維菌素和伊維菌素的方法，屬于分析化學(xué)中痕量生物大分子的分離富集和分析測定
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明方法利用TrionX-114為表面活性劑來分離富集痕量的阿維菌素和伊維菌素，并結(jié)合高效液相色譜法進行測定。本發(fā)明方法能有效富集痕量阿維菌素和伊維菌素，并且該方法安全，簡便、快捷和高效。另外，本發(fā)明經(jīng)濁點萃取體系富集后的所得富集因子較大，且與高效液相色譜法結(jié)合后能有效提高該儀器的測定靈敏度，可獲得理想的檢出限。文檔編號G01N30/02GK101806780SQ200910060758公開日2010年8月18日申請日期2009年2月16日優(yōu)先權(quán)日2009年2月16日發(fā)明者毛濤,艾曉輝,袁科平申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所