本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法。

背景技術(shù)：

單核-巨噬細(xì)胞包括骨髓中的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞、以及組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞。人類外周血細(xì)胞主要分為無核細(xì)胞(主要為血紅細(xì)胞)和有核細(xì)胞(白細(xì)胞等)。單核細(xì)胞約占有核細(xì)胞總數(shù)的5％左右，由髓系造血祖細(xì)胞分化而來，是免疫系統(tǒng)中抗原遞呈細(xì)胞(apc細(xì)胞)的重要組分。

在人體外周循環(huán)血液中，白細(xì)胞分布在兩個(gè)地方，即循環(huán)池和儲存池，循環(huán)池就是流動血液中的白細(xì)胞，儲存池就是附著在血管壁，淋巴結(jié)，骨髓等處的白細(xì)胞，暫時(shí)不參與血液循環(huán)，但儲存池中的白細(xì)胞與循環(huán)池中的白細(xì)胞保持動態(tài)平衡。白細(xì)胞在人體循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)成熟分化并實(shí)現(xiàn)免疫學(xué)功能可以大致分為以下步驟：毛細(xì)血管中的單核細(xì)胞→透過血管壁進(jìn)入血管外組織→發(fā)現(xiàn)異源性物質(zhì)(細(xì)菌、病原體、腫瘤細(xì)胞等)→分化為成熟的巨噬細(xì)胞→吞噬并消化→將抗原遞呈到特定的細(xì)胞表面分子上→經(jīng)由淋巴管回流到外周血→完成抗原遞呈激活殺傷性免疫細(xì)胞。

作為機(jī)體抗擊外來病原侵襲和清楚自身非正常細(xì)胞機(jī)制的哨兵，巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)形成免疫應(yīng)答的重要環(huán)節(jié)，作用重大。在正常人體內(nèi)每時(shí)每刻都有向著腫瘤化(永生化、非正常凋亡)發(fā)展的細(xì)胞產(chǎn)生，正常的機(jī)體免疫機(jī)制可以通過上述過程，將其及時(shí)清除。由此可見無論健康人群還是癌癥患者體內(nèi)巨噬細(xì)胞對于腫瘤化細(xì)胞的吞噬作用，都是無時(shí)無刻不在進(jìn)行的，針對單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)腫瘤來源物質(zhì)(包括蛋白質(zhì)、核算、脂類等)的觀測，可以為我們提供一個(gè)監(jiān)控體內(nèi)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的嶄新視角，其應(yīng)用前景必然非常廣泛。

單核-巨噬細(xì)胞作為有核細(xì)胞的重要組分，實(shí)驗(yàn)室一般是通過其表面抗原分子cd14和cd16進(jìn)行檢測的，目前可以買到成熟的抗體。主要的臨床應(yīng)用集中在血細(xì)胞組成檢測和造血系統(tǒng)腫瘤(如：粒/單核細(xì)胞性白血病)方面的檢測中，為臨床診斷提供重要參考。但將其與實(shí)體腫瘤的監(jiān)控相聯(lián)系，就目前專利和文獻(xiàn)檢索來看，仍然缺少足夠多的系統(tǒng)性的相關(guān)研究，且尚未形成成熟產(chǎn)品，在中國大陸地區(qū)也沒有相關(guān)專利授權(quán)。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法以解決上述問題。

一種全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，包括以下步驟：

用cd14和cd16的抗體標(biāo)記出待檢測對象外周血中的cd14⁺cd16⁺細(xì)胞，去除除白細(xì)胞之外的大部分雜質(zhì)后用待檢測的抗腫瘤標(biāo)志物x的抗體標(biāo)記該腫瘤標(biāo)志物；

檢測x⁺cd14⁺cd16⁺細(xì)胞與cd14⁺cd16⁺的細(xì)胞數(shù)量并統(tǒng)計(jì)前者與后者細(xì)胞數(shù)量的比值。

目前已經(jīng)確定人類外周血中存在不同亞型的單核細(xì)胞。已知的主要根據(jù)cd14和cd16抗原的表達(dá)分為4個(gè)亞型：cd14⁺⁺cd16^－(g1亞型)，cd14⁺⁺cd16⁺(g2亞型)，cd14⁺cd16^－(g3亞型)，cd14⁺cd16⁺(g4亞型)。cd14⁺cd16⁺是其中最主要的亞型之一，其比其他亞型的單核細(xì)胞具有更強(qiáng)的吞噬能力，因而從本發(fā)明的原理角度來講，檢測cd14⁺cd16⁺亞型的單核細(xì)胞更有意義。

腫瘤標(biāo)志物(tm)，是指特征性存在于惡性腫瘤細(xì)胞，或由惡性腫瘤細(xì)胞異常產(chǎn)生的物質(zhì)，或是宿主對腫瘤的刺激反應(yīng)而產(chǎn)生的物質(zhì)，并能反映腫瘤發(fā)生、發(fā)展，監(jiān)測腫瘤對治療反應(yīng)的一類物質(zhì)。當(dāng)cd14⁺cd16⁺細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞時(shí)，腫瘤標(biāo)志物便會在cd14⁺cd16⁺細(xì)胞富集，而cd14⁺cd16⁺細(xì)胞是在人體內(nèi)循環(huán)運(yùn)動的，因而可通過檢測cd14⁺cd16⁺細(xì)胞中腫瘤標(biāo)志物含量來方便的表征人體內(nèi)的腫瘤標(biāo)志物水平。

人體每天大約產(chǎn)生一萬個(gè)癌細(xì)胞，所以腫瘤標(biāo)志物的檢測結(jié)果不會是“零”，而是有個(gè)正常范圍。體內(nèi)有癌細(xì)胞，不意味著就會得癌癥，因?yàn)槿梭w正常的免疫功能可以及時(shí)將癌細(xì)胞吞噬。另外，并不是所有的腫瘤標(biāo)志物升高都是有臨床意義的，通常只有升高2倍以上才被醫(yī)生認(rèn)為有意義。所以說腫瘤標(biāo)志物的升高不一定意味著機(jī)體長了腫瘤。

此外，除了腫瘤，機(jī)體的某些非腫瘤疾病也會造成腫瘤標(biāo)志物的升高。例如，肝炎、肝硬化或者懷孕可導(dǎo)致甲胎蛋白(afp)的升高；前列腺炎和前列腺增生可引起前列腺特異性抗原(psa)的升高；肝功能異常會造成癌胚抗原(cea)等標(biāo)志物升高；腎功能不良會引起細(xì)胞角蛋白片段19(cyfra21-1)和鱗狀細(xì)胞癌抗原(scc)升高。

總而言之，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測腫瘤標(biāo)志物的含量指標(biāo)的方法，但是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中的醫(yī)學(xué)知識，無法推導(dǎo)出這種檢測的直接目的是用于檢測腫瘤，只能說腫瘤標(biāo)志物的含量指標(biāo)是檢測腫瘤的一個(gè)中間參數(shù)，是腫瘤的控制檢測中眾多參數(shù)中的一個(gè)，與疾病的診斷或健康狀況無直接必然聯(lián)系。

本領(lǐng)域技術(shù)人員可知，根據(jù)本發(fā)明提供的方法的原理，還可使用不同的抗體用來檢測寄生蟲、細(xì)菌或真菌感染及其他可被單核-巨噬細(xì)胞吞噬的抗原的全身水平的檢測。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，所述腫瘤標(biāo)志物x為tktl1和/或dnase1l1。

tktl1(transketolase1)為轉(zhuǎn)酮醇酶1，它、主要調(diào)節(jié)糖代謝途徑中的非氧化途徑，在多種腫瘤中高表達(dá)，其表達(dá)量與腫瘤的發(fā)展階段，侵襲和轉(zhuǎn)移，以及預(yù)后有密切關(guān)系。對腫瘤患者的營養(yǎng)搭配及后續(xù)的治療等方面有著重要的提示作用。

dnase1l1(deoxyribonucleasei-linke1)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用，但在腫瘤細(xì)胞中，正常的凋亡機(jī)制失效，dnase1l1活性受到抑制，但其大量表達(dá)并在腫瘤細(xì)胞中積累。其表達(dá)量可作為鑒別腫瘤細(xì)胞或凋亡機(jī)制異常細(xì)胞的指標(biāo)。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，所述去除除白細(xì)胞之外的大部分雜質(zhì)的方法為：

用裂解液裂解所述外周血中的紅細(xì)胞，并通過離心去上清的方法去除除白細(xì)胞之外的大部分雜質(zhì)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述裂解液含有8mm～12mmtris-hcl、8mm～12mmnah2po4和/或nahpo4、120mm～140mmnacl、體積百分?jǐn)?shù)為0.7％～1.3％的tritonx-100、8mm～12mmna4p2o7·10h2o，ph＝7.2～7.7；

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述裂解的溫度為0℃～4℃，時(shí)間為15min～25min。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述離心的條件為700g～900g，4min～6min。

紅細(xì)胞由于沒有細(xì)胞核，在較為溫和的裂解條件下即可被裂解，在本發(fā)明優(yōu)選的裂解條件下，白細(xì)胞不被裂解或極少被裂解。裂解后的紅細(xì)胞隨其它雜蛋白溶于上清中被一起離心除去。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，所述抗cd14和cd16的抗體為具有不同熒光顏色的熒光抗體；

當(dāng)所述抗腫瘤標(biāo)志物x的抗體為熒光抗體時(shí)，其熒光顏色與所述抗cd14和cd16的抗體的熒光顏色不同；

當(dāng)所述所述抗腫瘤標(biāo)志物x的抗體為非熒光抗體時(shí)，其對應(yīng)的熒光二抗的熒光顏色與所述抗cd14和cd16的抗體的熒光顏色不同。

由于在分析結(jié)果時(shí)，需要分析x⁺cd14⁺cd16⁺細(xì)胞與cd14⁺cd16⁺的細(xì)胞數(shù)量的比值，所以三種蛋白的熒光顏色必然是不同的。

優(yōu)選的，所述熒光二抗為f(ab')2抗體。本發(fā)明需要標(biāo)記cd14⁺cd16⁺細(xì)胞胞漿內(nèi)部的tktl1和/或dnase1l1抗原，由于f(ab')2抗體沒有fc段，穿透細(xì)胞膜的能力更強(qiáng)，特異性更好，因而優(yōu)選f(ab')2抗體用作熒光二抗。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，所述用抗cd14和cd16的抗體標(biāo)記出所述外周血中的cd14⁺cd16⁺細(xì)胞的具體方法為：

向所述外周血中加入抗cd14和cd16的熒光抗體，避光孵育10min～20min后加入固定劑進(jìn)行固定；

優(yōu)選的，所述固定劑為甲醛和甲醇的混合溶液；且以體積百分?jǐn)?shù)計(jì)，加入固定劑后反應(yīng)體系中所述甲醛的終濃度為0.4％～0.6％，所述甲醛的終濃度為0.15％～0.19％。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，所述用抗腫瘤標(biāo)志物x的抗體標(biāo)記腫瘤標(biāo)志物x的具體方法為：

將抗體標(biāo)記腫瘤標(biāo)志物x的抗體與封閉打孔試劑一起加入去除除白細(xì)胞之外的大部分雜質(zhì)后的反應(yīng)體系中；

所述封閉打孔試劑為0.008g/ml～0.012g/ml的bsa和體積百分?jǐn)?shù)為0.7％～1.3％的tritonx-100溶液；所述封閉打孔試劑的添加量為每100μl外周血樣本添加40μl～60μl封閉打孔試劑。

優(yōu)選的，如上所述的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法，在步驟3)中，所述檢測x⁺cd14⁺cd16⁺細(xì)胞與cd14⁺cd16⁺的細(xì)胞數(shù)量的方法為流式細(xì)胞儀檢測法或熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測法。

流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，fcm)是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測得多個(gè)參數(shù)。通過使用流式細(xì)胞術(shù)對cd14⁺cd16⁺及x⁺cd14⁺cd16⁺陽性細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行檢測，可以快速、精度地評價(jià)全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平。

熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測法可以快速、精確地識別并計(jì)數(shù)細(xì)胞群之中的細(xì)胞。在插入玻片之后，熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀即可自動對細(xì)胞進(jìn)行對焦并計(jì)數(shù)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

1)、本發(fā)明提供的全局腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平的檢測方法利用單核-巨噬細(xì)胞的特性，可方便快速的實(shí)現(xiàn)全身范圍的腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平監(jiān)控。

2)、通過對紅細(xì)胞裂解液及裂解時(shí)間、離心力大小、封閉打孔時(shí)間參數(shù)的確定，建立了穩(wěn)定規(guī)范的技術(shù)流程。

3)、利用流式細(xì)胞儀檢測法或熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測法對結(jié)果進(jìn)行計(jì)算統(tǒng)計(jì)，操作快速、精確。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為流式細(xì)胞術(shù)的部分結(jié)果圖；圖1a為總體單核細(xì)胞，圖1br2框出的范圍為cd14⁺cd16⁺細(xì)胞；

圖2為實(shí)施例1的部分檢測結(jié)果圖；圖2a為對照組，圖2b為dnase1l1，圖2c為tktl1；

圖3為實(shí)施例2的部分檢測結(jié)果圖；圖3a為對照組，圖3b為dnase1l1，圖3c為tktl1。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例1

1、取外周血血液樣本2，吸取200ul，加入抗體anti-cd14-fitc(bd公司，貨號555397)40ul，anti-cd16-apc(bd公司，貨號561304)10ul，室溫避光孵育15min；

2、加入200ul固定劑室溫避光孵育8min；所述固定劑的成分為：體積百分?jǐn)?shù)為0.8％的甲醛，體積百分?jǐn)?shù)為的0.30％甲醇；

3、加裂解液3ml到樣品中，渦旋震蕩混勻，避光孵育15min，裂解紅細(xì)胞；所述裂解液含有8mmtris-hcl、8mmnah2po4和/或nahpo4、140mmnacl、體積百分?jǐn)?shù)為1.3％的tritonx-100、8mmna4p2o7·10h2o，ph＝7.2；

4、700g離心6min，去除上清；緩慢倒掉上清，用紙吸取殘留液體，渦旋震蕩重懸細(xì)胞；

5、加入80ul封閉打孔試劑，指彈混勻；

所述封閉打孔試劑為0.012g/ml的bsa和體積百分?jǐn)?shù)為1.3％的tritonx-100溶液；

6、將上述溶液體系平分為兩份，分別加入anti-tktl1(rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa000505)和anti-dnase1l1抗體(rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa072635)，指彈混勻，避光孵育20min；抗體的添加比例均為1:1000；

7、分別加入2mlpbs(8g/lnacl、0.2g/lkcl、1.4g/lna2hpo4、0.27g/lkh2po4)洗，渦旋混勻，800g離心5min，去上清，洗2～3次，洗完后重懸細(xì)胞；

8、分別加入2ulanti-rabbit-peantibody(donkeypolyclonal，abcam公司，貨號ab7007)，避光孵育10min；

9、分別加入2mlpbs洗，渦旋混勻，800g離心5min，去上清，洗2～3次，洗完后重懸細(xì)胞；

10、分別用500ulpbs重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測。

實(shí)施例2

1、取外周血血液樣本2，吸取200ul，加入抗體anti-cd14-fitc(bd公司，貨號555397)40ul，anti-cd16-apc(bd公司，貨號561304)10ul，室溫避光孵育15min；

2、加入200ul固定劑室溫避光孵育6min；所述固定劑的成分為：體積百分?jǐn)?shù)為1.2％的甲醛，體積百分?jǐn)?shù)為的0.38％甲醇；

3、加裂解液3ml到樣品中，渦旋震蕩混勻，避光孵育15min，裂解紅細(xì)胞；所述裂解液含有12mmtris-hcl、12mmnah2po4和/或nahpo4、120mmnacl、體積百分?jǐn)?shù)為0.7％的tritonx-100、12mmna4p2o7·10h2o，ph＝7.7；

4、900g離心4min，去除上清；緩慢倒掉上清，用紙吸取殘留液體，渦旋震蕩重懸細(xì)胞；

5、加入120ul封閉打孔試劑，指彈混勻；

所述封閉打孔試劑為0.008g/ml的bsa和體積百分?jǐn)?shù)為0.7％的tritonx-100溶液；

6、將上述溶液體系平分為兩份，分別加入anti-tktl1(rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa000505)和anti-dnase1l1抗體(rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa072635)，指彈混勻，避光孵育15min；抗體的添加比例均為1:1000；

7、分別加入2mlpbs(8g/lnacl、0.2g/lkcl、1.4g/lna2hpo4、0.27g/lkh2po4)洗，渦旋混勻，800g離心5min，去上清，洗2～3次，洗完后重懸細(xì)胞；

8、分別加入2ulanti-rabbit-peantibody(donkeypolyclonal，abcam公司，貨號ab7007)，避光孵育10min；

9、分別加入2mlpbs洗，渦旋混勻，800g離心5min，去上清，洗2～3次，洗完后重懸細(xì)胞；

10、分別用500ulpbs重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測。

對實(shí)施例1～2的結(jié)果進(jìn)行檢測。統(tǒng)計(jì)時(shí)，先從所有的單核細(xì)胞(圖1a)中框出cd14⁺cd16⁺的細(xì)胞(圖1b，r2框出的范圍)；再從r2框中框出cd14⁺cd16⁺dnase1l1⁺或cd14⁺cd16⁺tktl1⁺的細(xì)胞(圖2和圖3)；其中，對照組(圖2a和圖3a)的做法為，將anti-tktl1或anti-dnase1l1抗體替換為同種屬來源的igg抗體；其余步驟與實(shí)驗(yàn)組一致。

表1實(shí)施例1和實(shí)施例2檢測結(jié)果(gci值)

其中，表格中檢測值分別為：

對照組：(cd14⁺cd16⁺igg⁺÷cd14⁺cd16⁺)×1000；

dnase1l1組：(cd14⁺cd16⁺dnase1l1⁺÷cd14⁺cd16⁺)×1000；

tktl1組：(cd14⁺cd16⁺tktl1⁺÷cd14⁺cd16⁺)×1000；

最終值即gci(globlecancerationindex，全局癌變指數(shù))值，其算法為各組的檢測值減去對照組的檢測值。

正常和疾病的分界線值是通過大量的臨床數(shù)據(jù)確定的，前期的數(shù)據(jù)是

tktl1：小于119正常，大于119分有腫瘤風(fēng)險(xiǎn)；

dnase1l1：0-100正常，100-130建議全面檢測，130以上有腫瘤風(fēng)險(xiǎn)；

最終結(jié)果綜合tktl1與dnase1l1兩組的綜合gci值進(jìn)行考量。

實(shí)施例3

1、取待測對象外周血血液樣本200ul，加入抗體anti-cd14-fitc(bd公司，貨號555397)40ul，anti-cd16-apc(bd公司，貨號561304)10ul，室溫避光孵育15min；

2、加入200ul固定劑室溫避光孵育5min；所述固定劑的成分為：體積百分?jǐn)?shù)為1％的甲醛，體積百分?jǐn)?shù)為的0.35％甲醇；

3、加裂解液3ml到樣品中，渦旋震蕩混勻，避光孵育15min，裂解紅細(xì)胞；所述裂解液含有10mmtris-hcl、10mmnah2po4和/或nahpo4、130mmnacl、體積百分?jǐn)?shù)為1％的tritonx-100、10mmna4p2o7·10h2o，ph＝7.5；

4、800g離心5min，去除上清；緩慢倒掉上清，用紙吸取殘留液體，渦旋震蕩重懸細(xì)胞；

5、加入100ul封閉打孔試劑，指彈混勻；

所述封閉打孔試劑為0.01g/ml的bsa和體積百分?jǐn)?shù)為1％的tritonx-100溶液；

6、將上述溶液體系平分為兩份，加入熒光標(biāo)記的anti-tktl1(抗體購自rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa000505，自己加熒光標(biāo)記)和熒光標(biāo)記的anti-dnase1l1抗體(抗體購自rabbitpolyclonal，sigma，貨號hpa072635，自己加熒光標(biāo)記)，指彈混勻，避光孵育15～20min；抗體的添加比例均為1:1000；注意熒光標(biāo)記的anti-tktl1和熒光標(biāo)記的anti-dnase1l1抗體的應(yīng)該顏色與anti-cd14-fitc和anti-cd16-apc(bd公司，貨號561304)的熒光顏色不同。

7、加入2mlpbs(8g/lnacl、0.2g/lkcl、1.4g/lna2hpo4、0.27g/lkh2po4)洗，渦旋混勻，800g離心5min，去上清，洗2～3次，洗完后重懸細(xì)胞；

8、用500ulpbs重懸細(xì)胞，取30ul樣品滴在載玻片上，用另一張雙凹片進(jìn)行涂片，熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測。

實(shí)施例3的統(tǒng)計(jì)原理與實(shí)施例1和2一樣，對照組為將熒光標(biāo)記的anti-tktl1或熒光標(biāo)記的anti-dnase1l1抗體替換為同種屬來源的熒光標(biāo)記的igg抗體。

表2實(shí)施例3檢測結(jié)果(gci值)

實(shí)驗(yàn)例

取外周血血液樣本4平分為四組，每組3份，用實(shí)施例1～3及對比例中記載的方法進(jìn)行檢測，每組重復(fù)三次；其中對比例的設(shè)置方式為：在實(shí)施例3的基礎(chǔ)上去除加裂解液裂解紅細(xì)胞并離心去除雜質(zhì)的步驟，其余操作同實(shí)施例3(即用全血進(jìn)行檢測)。

表3檢測結(jié)果(gci值)

從上表可知，實(shí)施例1～3中記載的方法檢測穩(wěn)定性較好，且重復(fù)性好，而對比例三次檢測的浮動較大，且最終值遠(yuǎn)低于實(shí)施例，推測可能的原因是由于沒有去除雜質(zhì)，抗體非特異性結(jié)合較多，導(dǎo)致cd14⁺cd16⁺值上升，而腫瘤標(biāo)志物的抗體配合f(ab')2抗體特異性更好一些，所以cd14⁺cd16⁺x⁺變化不大，進(jìn)而使得gci值整體下降，造成假陰性。

最后應(yīng)說明的是：以上各實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。