本發(fā)明具體涉及一種基于水生動物攝食抑制度測定水污染物的方法。

背景技術(shù)：

水質(zhì)安全不僅關(guān)乎生態(tài)系統(tǒng)的健康，更關(guān)乎人類的生存和發(fā)展。近年來隨著人類活動的加劇，越來越多的污染物被直接或間接地排入環(huán)境水體，造成嚴重的水體污染。排入環(huán)境水體中污染物種類繁多，且一種污染物往往具有多種生物效應，傳統(tǒng)方法中借助水質(zhì)標準濃度限值評價水質(zhì)安全存在明顯不足。生物毒性測試能直觀反映水體中所有共存污染物的綜合毒性特征，己逐漸發(fā)展成為水質(zhì)安全評價的重要補充（徐建英，2014）。

目前應用較普遍的水生生物毒性測試標準方法主要有：藻類生長抑制試驗（72h）、枝角類（水蚤）急性毒性試驗（48h），魚類急性毒性試驗（96h）。

1981年，國際經(jīng)合組織（OECD）制定了藻類生長抑制試驗的國際標準方法，利用24、48、72、96h有毒物質(zhì)對藻類生長的半數(shù)抑制效應的質(zhì)量濃度（EC₅₀）來表征急性毒性作用的程度。試驗方法簡單，得到的結(jié)果也準確可靠，但試驗周期較長，需要重復，操作繁瑣（謝艷，2008）。

水蚤體形較小，以真菌、藻類、溶解性有機物及碎屑物為食物，繁殖能力強，分布較為廣泛，是國際上普遍應用的一種標準毒性測試生物。當水生環(huán)境受到污染時，水蚤的生長將受有毒物質(zhì)影響，水蚤的生殖和發(fā)育受到干擾，致使蚤類死亡。利用蚤類死亡率作為測試指標，實驗現(xiàn)象直觀，易觀察，但是測試靈敏度低，實驗時間長（李東，2007）。

魚類對水質(zhì)環(huán)境的變化很敏感，當水體中的有毒物質(zhì)達到一定的濃度時，就會引起魚類一系列的中毒反應，因此其被廣泛用于廢水和毒物的生物評價、監(jiān)測，進而以此為指標進行排放標準和質(zhì)量標準的制定及工業(yè)廢水的管理制度制定等。傳統(tǒng)的魚類毒性實驗主要是采用24h、48h、96h有毒物質(zhì)的質(zhì)量濃度的半數(shù)致死來代表急性毒性物質(zhì)的毒性程度，但是本檢測方法需要多次重復實驗及大量的實驗材料，實驗耗時較長（李東，2007），如GB/T 13267-1991《水質(zhì)物質(zhì)對淡水魚(斑馬魚)急性毒性測定方法》規(guī)定的實驗魚使用前至少馴養(yǎng)14天以上，試驗時間另需6-8天；GB/T21814-2008《工業(yè)廢水魚類急性毒性試驗》規(guī)定的試驗時間也要達到15天左右。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)對于生物毒性測試的方法費時費力，而水污染源監(jiān)控管理和突發(fā)水污染事件需要更為有效快速的方法作為應急使用，因此，建立一種試驗周期短，準確度更高的監(jiān)測方法有重要意義。

水生動物終身生活在水體中，攝食活動是所有生命活動的基礎(chǔ)。水生動物攝取食物需要通過多種感覺器來確認食物的方位和特征，化學感受器在這個過程中起到了重要作用。化學感受器主要包括嗅覺感受器和味覺感受器。水生動物嗅覺能接受水體中低濃度化學物質(zhì)的刺激，有感受氣味的能力，能區(qū)別化學物質(zhì)且極靈敏；味覺也較靈敏，如歲魚味蕾對糖的敏感性閾值是2×10^-5 mol/L，對鹽是4×10^-5mol/L，這比人對糖和鹽的閾值分別低512 倍和184 倍。影響水生動物選擇食物的行為，除食物的物理刺激如顆粒大小、形狀、光澤、顏色、硬度等因素外，水中環(huán)境的化學信息顯得特別重要，特別是底棲甲殼動物，由于其視覺較原始，化學感受器在甲殼動物的攝食過程中占重要地位?；瘜W受體直接與外界水環(huán)境接觸，意味著化學受體系統(tǒng)特別容易受水環(huán)境中化學物質(zhì)或因子，例如去污劑、工業(yè)廢物、原油、溫度、酸堿度等的損傷，導致水生動物攝食抑制（陳楠生，1992；曾端，2002；高強，2003）。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種基于水生動物攝食抑制度測定水污染物的方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種基于水生動物攝食抑制度測定水污染物的方法，包括下列步驟：將供試水生動物禁食輪蟲不少于3小時，然后轉(zhuǎn)入待測水中，放入適量輪蟲，讓供試水生動物攝食，然后觀察統(tǒng)計供試水生動物攝食輪蟲的數(shù)量，根據(jù)每尾水生動物攝食的輪蟲數(shù)量，計算得到無可觀察效應濃度和最低可觀察效應濃度。

優(yōu)選的，所述供試水生動物為魚、蝦、蟹。

優(yōu)選的，供試魚為0-15日齡魚苗，供試蝦為蚤狀幼體或糠蝦幼體，供試蟹為蚤狀幼體。

優(yōu)選的，每尾供試水生動物添加0.5-300mL待測水溶液。

優(yōu)選的，每尾供試水生動物添加0.5-100mL待測水溶液。

優(yōu)選的，每尾供試水生動物添加0.5-20 mL待測水溶液。待測水可以稀釋為不同濃度水溶液分別進行測試。

優(yōu)選的，水生動物幼體禁食輪蟲時間為3-48小時。

其中，禁食的目的在于：1）增強食欲，使抑制攝食試驗效果顯著；2）使之前攝食的輪蟲消化、排除，以免試驗前攝食的輪蟲干擾試驗結(jié)果。

優(yōu)選的，0-2日齡魚禁食時間為3-24h；3-15日齡供試魚禁食時間為3-48h。

優(yōu)選的，供試蝦蚤狀幼體禁食時間為3-24h，糠蝦幼體禁食時間為3-48h；供試蟹蚤狀幼體的禁食時間是3-48h。

優(yōu)選的，輪蟲的添加密度為1-200 個/ml待測水溶液。

優(yōu)選的，輪蟲的添加密度為2-100 個/ml待測水溶液。

優(yōu)選的，輪蟲的添加密度為5-70個/ml待測水溶液。

輪蟲是一種微小的多細胞動物，其種類繁多、廣泛分布于淡水、半咸水和海水中。輪蟲為魚蝦蟹早期幼體階段的適宜餌料，有大量文獻數(shù)據(jù)支持。

優(yōu)選的，供試水生動物攝食時的培養(yǎng)條件為：水溫20℃～28℃，液面照度為50 lux-500 lux。

優(yōu)選的，與供試水生動物試驗前飼養(yǎng)水比較，待測溶液的水溫變化范圍不宜超過2℃，鹽度變化范圍不宜超過2，pH值變化范圍不宜超過0.4。如待測溶液的水環(huán)境因子與試驗前供試水生動物飼養(yǎng)的水環(huán)境因子變化超出上述范圍，則在試驗的環(huán)境條件下馴養(yǎng)供試動物一定時間（24 h-48 h）。

優(yōu)選的，如待測水溶液的溶解氧飽和度低于60％時，對試驗待測溶液進行輕微充氣，充氣氣泡為60個/min～100個/min。如濃度組進行充氣，同樣對照組也應充氣。

優(yōu)選的，供試水生動物攝食時間為20-180分鐘。

優(yōu)選的，供試水生動物攝食時間為30-120分鐘。

優(yōu)選的，供試水生動物攝食時間為40-80分鐘。

咀嚼器為骨質(zhì)結(jié)構(gòu)，一般需2-3小時才能被消化，具體不同輪蟲種類或不同攝食動物消化時間有差異。所以攝食時間控制在水生動物充分攝食輪蟲且輪蟲的咀嚼器尚未被消化的時間段內(nèi)。

優(yōu)選的，待供試水生動物攝食完成后，采用固定液或麻醉劑使供試水生動物停止攝食和代謝，然后顯微鏡觀察供試水生動物。

這里的意義在于：1）停止攝食，魚胃腸道內(nèi)輪蟲不再增加；2）停止代謝，魚胃腸道內(nèi)輪蟲不再被消化，這樣即使3-5天后進行觀察，魚胃腸道內(nèi)輪蟲數(shù)量不變。

優(yōu)選的，固定液選自魯哥氏液或甲醛，麻醉劑選自丁香酚、間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽。

優(yōu)選的，供試水生動物攝食輪蟲數(shù)量以供試水生動物胃腸道內(nèi)未能被消化的輪蟲咀嚼器數(shù)量為準。

優(yōu)選的，設定5個等比濃度組和1個空白對照組，等比系數(shù)不宜大于2.0，每個試驗組設置2-4個重復，每個容器放10個供試水生動物。

優(yōu)選的，當待測水按相同等比系數(shù)稀釋為不同濃度梯度的水溶液進行測試時，從低濃度到高濃度依次比較試驗結(jié)果。當某濃度待測水溶液與對照比較供試生物攝食輪蟲數(shù)量存在顯著性差異，證明該濃度毒物對供試生物的攝食有抑制效應，該濃度即為最低可觀察效應濃度，前一個濃度為無可觀察效應濃度。為了結(jié)果更準確，在無可觀察效應濃度與最低可觀察效應濃度之間可以按相同等比系數(shù)進一步細分幾個濃度梯度進行測試。

具體的，先將對照組與最低濃度組試驗結(jié)果比較，如無顯著性差異，則比較下一個較高濃度；如該濃度有顯著性差異，則表明本濃度為最低可觀察效應濃度，前一個較低濃度為無可觀察效應濃度；如該濃度仍無顯著性差異，則依次與下一個較高濃度比較，直到比較出顯著性差異。如最高濃度為未經(jīng)稀釋的原液仍無顯著性差異，則表明該污染物無可觀察效應（即無毒）；當?shù)谝粋€濃度（最低濃度）就有顯著性差異，則需重新設置試驗，進一步降低濃度。

本發(fā)明方法還可以用于測定不明成分液體的生物毒性。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明建立了一種全新的方法，是基于水生動物攝食輪蟲的抑制度測定水污染物或水質(zhì)生物毒性。與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有以下優(yōu)點：

本發(fā)明方法所需時間短：試驗前水生動物饑餓3小時以上（如4小時），試驗時間40-80分鐘，觀察和統(tǒng)計約2-4小時，相對于常規(guī)水生動物急性毒性試驗（20天以上，其中馴養(yǎng)2周以上，試驗6-8天），大大縮短試驗時間。

本發(fā)明方法非常敏感：本發(fā)明選用水生動物對輪蟲的攝食作為指標，這種“攝食量”指標遠比“致死”指標敏感。輪蟲為魚蝦蟹早期幼體階段的適宜餌料，有大量文獻數(shù)據(jù)支持。

本發(fā)明方法操作簡便：試驗耗時短，無需長時間馴養(yǎng)水生實驗動物，試液配制簡便，用量較小。利用計數(shù)輪蟲反映攝食量是本發(fā)明的關(guān)鍵，無需解剖水生動物，采用壓片、顯微鏡觀察水生動物胃腸道攝食輪蟲即可，觀察計數(shù)直觀、簡便、準確，其它儀器設備均為水生態(tài)毒性試驗中的普通儀器設備，試驗操作易于掌握，試驗成本較低。

本方法簡便、快捷、可靠，可為水污染物和不明成分水質(zhì)的快速毒性評估鑒定提供技術(shù)支撐，有望替代現(xiàn)有的水生生物急性毒性試驗方法（24、48、96h），成為新的國家毒性試驗標準。

附圖說明

圖1為輪蟲咀嚼器；

圖2為活體輪蟲；

圖3為仔魚胃腸道攝食的輪蟲；

圖4為水基鉆井液對諸氏鯔蝦虎魚仔魚的攝食抑制毒性；

圖5為十二烷基硫酸鈉對諸氏鯔蝦虎魚仔魚攝食抑制毒性；

圖6為重鉻酸鉀對黑點青鱂仔魚攝食抑制毒性；

圖7為十二烷基硫酸鈉對黑點青鱂仔魚攝食抑制毒性；

圖8為重鉻酸鉀對斑馬魚攝食抑制毒性。

具體實施方式

專業(yè)術(shù)語：

1.最低可觀察效應濃度(lowest observed effect concentrations, LOEC)（引自GB/T 21828-2008）與對照組相比，對受試生物產(chǎn)生顯著（P<0.05）效應的最低受試物濃度。

2.無可觀察效應濃度(no observed effect concentrations, NOEC) （引自GB/T 21828-2008）試驗中直接低于LECO的受試物設置濃度，即與對照組相比，對受試生物未產(chǎn)生顯著（P<0.05）效應的最高受試物設置濃度。

3.半數(shù)致死濃度 （half lethal concentration，LC₅₀）（引自GB/T 14920.2-2009）在一定觀察期內(nèi)，造成50%的受試生物死亡的毒物濃度。

發(fā)明原理

將經(jīng)饑餓處理的供試水生動物暴露于一系列含有不同濃度受試物的水溶液中，投喂過量輪蟲，一定時間后，麻醉或固定供試水生動物，觀察記錄供試水生動物胃腸道攝食輪蟲的數(shù)量，通過顯著性比較估算最低可觀察效應濃度(LOEC)和無可觀察效應濃度(NOEC)。

試驗步驟

（1）供試水生動物準備：

推薦斑馬魚（Danio rerio）、諸氏鯔蝦虎魚（Mugilogobius chulae）、青鳉（Oryzias latipes）、黑點青鳉（Oryzias melastigma）、稀有鮈鯽（Gobiocypris rarus）、劍尾魚（Xiphophorus helleri）、實驗紅鯽（Carassius auratus red variety）等海、淡水魚類，一般為孵出后0-15天魚苗；凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)、羅氏沼蝦（Macrobrachium rosenbergii）等蝦類，一般為蚤狀幼體或糠蝦幼體；中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)、鋸緣青蟹（Scylla serrata）等蟹類，一般為蚤狀幼體。選擇健康水生動物用于試驗。試驗前饑餓3小時以上。

（2）貯備液配制

參照有關(guān)毒性試驗標準配制貯備液，如GB/T 27861 化學品 魚類急性毒性試驗、GB/T 18420.2-2009海洋石油勘探開發(fā)污染物生物毒性 第2部分：檢驗方法等。低水溶性物質(zhì)的貯備液可以通過超聲分散或其他適合的物理方法配制，必要時可使用對魚毒性低的有機溶劑、乳化劑或分散劑來助溶。使用這些物質(zhì)時應加設助溶劑對照試驗，對照組助溶劑濃度應為試驗組使用助溶劑的最高濃度，并且不得超過100 mg / L 。

（3）試驗溶液配制

試驗容器可采用燒杯、水槽等玻璃容器。試驗溶液體積一般為10-200ml（根據(jù)實驗魚的大小調(diào)節(jié)）。用貯備液和稀釋水（用于飼養(yǎng)實驗魚的自然水）配制試驗溶液，一般設定5個等比濃度組和1個空白對照組，等比系數(shù)不宜大于2.0，每個試驗組應設2-4個重復，每個容器應放10個實驗魚。

（4）實驗魚移入

用膠頭滴管在馴養(yǎng)容器隨機吸取經(jīng)饑餓處理的仔魚，然后小心移入試驗容器。盡量減少分放實驗生物的時間，盡量減少魚苗移入過程中對各濃度組試驗溶液的稀釋。

（5）試驗的環(huán)境因子

試驗適宜的環(huán)境條件為：水溫20℃～28℃，光照（液面照度）50 lux-500 lux。與供試動物試驗前飼養(yǎng)水比較，水溫變化范圍不宜超過2℃，鹽度變化范圍不宜超過2，pH值變化范圍不宜超過0.4。如試驗的環(huán)境因子與試驗前供試動物飼養(yǎng)的水環(huán)境因子變化超出上述范圍，則在試驗的環(huán)境條件下馴養(yǎng)供試動物一定時間（24 h-48 h）。

當試驗溶液的溶解氧飽和度低于60％時，宜對試驗溶液進行輕微充氣，充氣氣泡為60個/min～100個/min。如濃度組進行充氣，同樣對照組也應充氣。

（6）飼喂

每1 ml試驗溶液投喂約1-100個輪蟲。為了避免投喂輪蟲時帶入較多水體，稀釋了試驗溶液，導致結(jié)果不準確。因此，投喂時盡量濃縮輪蟲，減少水，限定每個試驗容器投喂體積不超過0.2 mL。

（7）供試動物固定

中性甲醛固定液（以pH 7.2～7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制，配制后應密封并保存在陰涼處，保存時間不超過一個月。3%中性甲醛固定液配方：蒸餾水925 mL，加入無水磷酸氫二鈉6.5 g，及磷酸二氫鈉4.0 g，充分溶解后加入甲醛(40%)溶液75 mL。5%中性甲醛固定液配方：蒸餾水875 mL，加入無水磷酸氫二鈉6.5 g，及磷酸二氫鈉4.0 g，充分溶解后加入甲醛(40%)溶液125 mL）40-80分鐘時用吸管吸出存活個體置于酶標板或離心管中，加入魯哥氏液或4%中性甲醛固定液（3%～5%）固定。

（8）觀察和記錄

用膠頭滴管吸取固定的供試動物，滴于載玻片上，必要時在魚苗周圍滴一滴生理鹽水或清水，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余的水。在40或100目生物顯微鏡（或體視鏡）下，逐尾觀察并計數(shù)供試動物胃腸道內(nèi)的輪蟲。輪蟲個數(shù)以未能被消化的輪蟲咀嚼器數(shù)量為準。其中圖1為輪蟲咀嚼器；圖2為活體輪蟲；圖3為仔魚胃腸道攝食的輪蟲。

（9）數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

無可觀察效應濃度(NOEC)、最低可觀察效應濃度(LOEC)的計算參考GB/T 21805-2008“化學品藻類生長抑制試驗”9.14統(tǒng)計分析。

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。

實施例1

材料和方法

受試物：某水基鉆井液；實驗魚：7日齡諸氏鯔蝦虎魚仔魚；試驗水溫：25℃，稀釋水：天然海水。

濃度設置：對照組為0 mg/L，試驗組濃度由低至高分別為4000、8000、16000、32000、64000 mg/L，分別記為濃度1-5。

試驗程序：將試驗前饑餓12小時的實驗魚移入試驗容器，每容器含試驗溶液50ml、10尾魚苗，投喂褶皺臂尾輪蟲，投喂量為每ml試驗溶液投喂輪蟲20個。完成投喂后開始計時，1小時后固定實驗魚，壓片、光學顯微鏡下觀察每尾魚苗胃腸道攝食輪蟲數(shù)，SPSS計算LOEC和NOEC。

試驗結(jié)果

結(jié)果見圖4和表1。

由圖4可知：該水基鉆井液對魚的攝食抑制呈現(xiàn)效應關(guān)系，8000 mg/L該水基鉆井液濃度組魚苗攝食輪蟲個數(shù)顯著少于對照組，且隨著毒物濃度升高，魚苗攝食輪蟲個數(shù)呈下降趨勢，表明濃度為8000 mg/L以上的該水基鉆井液顯著抑制諸氏鯔蝦虎魚的攝食。

表1 T檢驗結(jié)果

由表1可知：濃度1（4000 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P =0.168> 0.05，樣品對蝦虎魚的攝食抑制毒性與對照組差異不顯著。濃度2（8000 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P = 0.001< 0.05，樣品對蝦虎魚的攝食抑制毒性與對照組差異顯著。即該水基鉆井液對諸氏鯔蝦虎魚仔魚攝食抑制毒性NOEC和LOEC分別為4000和8000 mg/L，比該水基鉆井液對諸氏鯔蝦虎魚仔魚半致死濃度（LC₅₀）大于32000 mg/L敏感。

其中，半致死濃度（LC₅₀）是利用毒物導致供試生物急性死亡的數(shù)據(jù)統(tǒng)計得到的，有些毒物對供試生物攝食、生長、發(fā)育、生殖等有不良效應（如致突變、致畸、致癌或慢性致死），急性毒性試驗結(jié)果卻不能反映出來，因此水生生物急性毒性試驗的半致死濃度（LC₅₀）指標不夠敏感。

NOEC和LOEC一般采用除死亡外其它指標獲得，如攝食、行為、生殖、生長、發(fā)育、生物標記物等等。本發(fā)明方法快速、操作簡便、低成本，獲得的NOEC和LOEC數(shù)據(jù)比LC₅₀敏感，具有現(xiàn)實的指導意義。

實施例2

材料和方法

受試物：十二烷基硫酸鈉（SDS）；實驗魚：7日齡諸氏鯔蝦虎魚仔魚；試驗水溫：25℃，稀釋水：天然海水。

濃度設置：對照組為0 mg/L，試驗組1-5濃度由低至高分別為0.12、0.18、0.3、0.4、0.6 mg/L。

試驗程序：將試驗前饑餓6小時的實驗魚移入試驗容器，每容器含試驗溶液50ml、10尾魚苗，投喂褶皺臂尾輪蟲，投喂量為每ml試驗溶液投喂輪蟲10個。完成投喂后開始計時，1小時后固定實驗魚，壓片、光學顯微鏡下觀察每尾魚苗胃腸道攝食輪蟲數(shù)，SPSS計算LOEC和NOEC。

試驗結(jié)果

結(jié)果見圖5和表2。

十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate, SDS) 是常用的陰離子表面活性劑，大量存在于各類洗滌劑和去污粉中，隨著生活污水的排放，對環(huán)境造成了一定的危害；同時它也是生化、免疫檢測方面常用的蛋白質(zhì)變性劑，毒性較大，為美國試驗材料協(xié)會(ASTM) 推薦的生物毒性試驗方法中常用標準毒物之一（鄭琰晶，2006）。

由圖5可知：十二烷基硫酸鈉（SDS）對魚的攝食抑制呈現(xiàn)效應關(guān)系，當十二烷基硫酸鈉（SDS）濃度低于0.18 mg/L時，曲線較平緩，表明低于0.18 mg/L濃度的SDS對諸氏鯔蝦虎魚仔魚攝食輪蟲無明顯抑制；當SDS濃度從0.18 mg/L升高到0.6 mg/L的過程中，仔魚攝食輪蟲個數(shù)顯著下降，SDS抑制仔魚攝食效應明顯。

表2 T檢驗結(jié)果

由表2統(tǒng)計結(jié)果顯示，濃度2（0.18 mg/L）與對照組之間方差不齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P =0.899> 0.05，樣品對蝦虎魚的攝食毒性與對照組差異不顯著。濃度3（0.3 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P = 0.000< 0.05，樣品對蝦虎魚的攝食毒性與對照組差異顯著。即SDS對諸氏鯔蝦虎魚仔魚攝食抑制毒性NOEC和LOEC分別為0.18和0.3 mg/L，比其對同日齡諸氏鯔蝦虎魚半致死濃度（LC₅₀）大于0.72 mg/L敏感。

實施例3

材料和方法

受試物：重鉻酸鉀；實驗魚：4日齡黑點青鱂；試驗水溫：25℃，稀釋水：天然海水。

濃度設置：對照組為0 mg/L，試驗組濃度由低至高分別為0.125、0.25、0.5、1、2 mg/L。

試驗程序：將試驗前饑餓12小時的實驗魚移入試驗容器，每容器含試驗溶液50 ml、10尾魚苗，投喂褶皺臂尾輪蟲，投喂量為每ml試驗溶液投喂輪蟲10個。完成投喂后開始計時，1小時后固定實驗魚，壓片、光學顯微鏡下觀察每尾魚苗胃腸道攝食輪蟲數(shù)，SPSS計算LOEC和NOEC。

試驗結(jié)果

結(jié)果見圖6和表3。

重鉻酸鉀是一種有毒且有致癌性的強氧化劑，“被國際癌癥研究機構(gòu)劃歸為第一類致癌物質(zhì)”，在實驗室和工業(yè)生產(chǎn)中都有很廣泛的應用，“如鉻鐵冶煉、耐火材料、電鍍、制革、顏料和化工等工業(yè)生產(chǎn)排放含鉻的廢氣、廢水和廢渣等，對水體、土壤、大氣有殘留與蓄積作用”，對環(huán)境和人體有嚴重危害，故評定其毒性具有重要作用（黎東怡，2014）。

由圖6可知：重鉻酸鉀濃度由0 mg/L至2.000 mg/L的升高過程中，攝食輪蟲個數(shù)逐漸下降，重鉻酸鉀對魚的攝食抑制呈現(xiàn)劑量效應關(guān)系。

表3黑點青鱂T檢驗結(jié)果

由表3可知：濃度2（0.25 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P =0.234> 0.05，樣品對黑點青鱂的攝食毒性與對照組差異不顯著。濃度3（0.5 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P = 0.015< 0.05，樣品對黑點青鱂的攝食毒性與對照組差異顯著。即重鉻酸鉀對黑點青鱂仔魚攝食抑制毒性NOEC和LOEC分別為0.25和0.5 mg/L，比其對同日齡黑點青鱂的半致死濃度（LC₅₀）大于18.38 mg/L敏感。

實施例4

材料和方法

受試物：十二烷基硫酸鈉（SDS）；實驗魚：2日齡黑點青鱂；試驗水溫：25℃，稀釋水：天然海水。

濃度設置：對照組為0 mg/L，試驗組濃度由低至高分別為0.18、0.30、0.40、0.60、0.90mg/L。

試驗程序：將試驗前饑餓12小時的實驗魚移入試驗容器，每容器含試驗溶液50ml、10尾魚苗，投喂褶皺臂尾輪蟲，投喂量為每ml試驗溶液投喂輪蟲10個。完成投喂后開始計時，1小時后固定實驗魚，壓片、光學顯微鏡下觀察每尾魚苗胃腸道攝食輪蟲數(shù)，SPSS計算LOEC和NOEC。

試驗結(jié)果見圖7，表4。

由圖7可知：十二烷基硫酸鈉濃度由0 mg/L至0.90 mg/L的升高過程中，攝食輪蟲個數(shù)逐漸下降，十二烷基硫酸鈉對黑點青鱂仔魚的攝食抑制呈現(xiàn)劑量效應關(guān)系。

表4 黑點青鱂T檢驗結(jié)果

由表4可知：濃度2（0. 30 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P =0.054> 0.05，樣品對黑點青鱂的攝食毒性與對照組差異不顯著。濃度3（0.40 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P = 0.044< 0.05，樣品對黑點青鱂的攝食毒性與對照組差異顯著。即SDS對黑點青鱂仔魚攝食抑制毒性NOEC和LOEC分別為0.30和0.40 mg/L，比其對同日齡黑點青鱂半致死濃度（LC₅₀）大于2.17 mg/L敏感。

實施例5

材料和方法

受試物：重鉻酸鉀；實驗魚：6日齡斑馬魚；試驗水溫：25℃，稀釋水：曝氣24小時以上的自來水。

濃度設置：對照組為0 mg/L，試驗組濃度由低至高分別為0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/L。

試驗程序：將試驗前饑餓24小時的實驗魚移入試驗容器，每容器含試驗溶液50ml、10尾魚苗，投喂萼花臂尾輪蟲，投喂量為每ml試驗溶液投喂輪蟲10個。完成投喂后開始計時，1小時后固定實驗魚，壓片、光學顯微鏡下觀察每尾魚苗胃腸道攝食輪蟲數(shù)，SPSS計算LOEC和NOEC。

試驗結(jié)果見圖8和表5。

由圖8可知：重鉻酸鉀濃度由0 mg/L至0.90 mg/L的升高過程中，攝食輪蟲個數(shù)逐漸下降。重鉻酸鉀對斑馬魚的攝食抑制呈現(xiàn)劑量效應關(guān)系。

表5 斑馬魚T檢驗結(jié)果

由表5可知：濃度1（0.25 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P =0.618> 0.05，樣品對斑馬魚的攝食毒性與對照組差異不顯著。濃度2（0.5 mg/L）與對照組之間方差齊次，雙側(cè)檢驗顯著性概率P = 0.025< 0.05，樣品對斑馬魚的攝食毒性與對照組差異顯著。即重鉻酸鉀對斑馬魚仔魚攝食抑制毒性NOEC和LOEC分別為0.25和0.5 mg/L，比其對同日齡斑馬魚仔魚的半致死濃度大于7.8 mg/L敏感。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。