一種測(cè)定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法
【專利說(shuō)明】一種測(cè)定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法
[技術(shù)領(lǐng)域]
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種測(cè)定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘 留量的方法。
[【背景技術(shù)】]
[0002] 中藥主要由植物藥（根、莖、葉、果）、動(dòng)物藥（內(nèi)臟、皮、骨、器官等）和礦物藥組 成。因植物藥占中藥的大多數(shù)，所以中藥也稱中草藥。中國(guó)各地使用的中藥已達(dá)5000種左 右，把各種藥材相配伍而形成的方劑，更是數(shù)不勝數(shù)。
[0003] 然而，隨著中藥生產(chǎn)、銷售和使用越來(lái)越廣泛，中藥中農(nóng)藥殘留的問(wèn)題也漸漸顯 現(xiàn)，并引起各國(guó)相關(guān)部門的重視。中藥的農(nóng)藥殘留主要來(lái)源自三個(gè)方面，即種植過(guò)程中濫用 農(nóng)藥而造成的直接污染，環(huán)境污染引起的間接污染和采收、加工、貯存及運(yùn)輸過(guò)程產(chǎn)生的污 染。中草藥病蟲害種類繁多，用于中草藥的殺蟲劑種類也多不勝數(shù)，且不斷有新的殺蟲劑品 種被研制并投入使用。
[0004] 烯啶蟲胺殺蟲劑，是1995年日本武田藥品工業(yè)株式會(huì)社合成，繼吡蟲啉、啶蟲咪 之后開發(fā)的又一種新型產(chǎn)品，為新煙堿類殺蟲劑，具有獨(dú)特的化學(xué)與生物性質(zhì)。主要作用于 昆蟲神經(jīng)，對(duì)昆蟲的軸狀突觸受體具有神經(jīng)阻斷作用，與其它的新煙堿類化合物相似，用于 水稻、蔬菜、草藥等作物，對(duì)各種蚜蟲、粉虱、水稻葉蟬和薊馬顯示了卓越活性，具有高效、低 毒、內(nèi)吸和無(wú)交互抗性四大優(yōu)點(diǎn)，而且殺蟲譜較廣，殘留期較長(zhǎng)（以l〇〇mg/kg施用，可持續(xù) 15d)，對(duì)稻飛虱，在0. 5~0. 8mg/kg時(shí)，致死率仍可達(dá)100%，使用安全，害蟲不易產(chǎn)生抗體。 目前，在國(guó)內(nèi)已有8家農(nóng)藥企業(yè)取得了烯啶蟲胺原藥登記，含量為95%。烯啶蟲胺的合 成路線有4條，目前烯啶蟲胺的生產(chǎn)工藝主要由2-氯-5-氯甲基吡啶與乙胺胺化，得到 N-(6-氯-3-氯甲基吡啶）-N-乙胺，再與1，1-二氯-2-硝基乙烯、甲胺在堿性條件下縮 合，合成稀啶蟲胺原藥。
[0005] 作為低毒型殺蟲劑，烯啶蟲胺仍然對(duì)眼睛、皮膚等有刺激性。2014年8月開始實(shí)施 的GB2763-2014《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（簡(jiǎn)稱GB2763-2014)中雖沒有對(duì)中草藥中 烯啶蟲胺的最大殘留量做明確要求，但對(duì)油料和油脂及水果等食品明確規(guī)定了最大殘留限 量要求。
[0006] 對(duì)于烯啶蟲胺殘留量的檢測(cè)，已經(jīng)有一些相關(guān)的報(bào)道。如用帶堿熱離子檢測(cè)器或 高靈敏度氮磷檢測(cè)器（CPMA及CPMF)的氣相色譜儀檢測(cè)其殘留量；采用高效液相色譜法，高 效液相色譜-質(zhì)譜（或串聯(lián)質(zhì)譜）法測(cè)定其殘留量；還有采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)試其殘 留量等。但是這些方法針對(duì)的樣品基質(zhì)僅涉及蔬菜（如甘藍(lán)）、水果（如蘋果、桔子等）或 土壤，并沒有針對(duì)中草藥中烯啶蟲胺殘留量檢測(cè)的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。然而，因基質(zhì)復(fù)雜，中藥 中的重金屬、藥用成分均對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生很大的干擾，一般的檢測(cè)方法難以應(yīng)用于中草藥基質(zhì) 的檢測(cè)。因而建立一個(gè)方法，對(duì)中草藥中烯啶蟲胺的殘留量進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)是非常必要的。
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【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007] 本發(fā)明的目的就是要解決上述的不足而提供一種有機(jī)溶劑提取、液相色譜-串聯(lián) 質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法，不僅測(cè)定方法快速、簡(jiǎn)單，而且能 夠?qū)崿F(xiàn)中草藥中稀啶蟲胺殺蟲劑殘留量的準(zhǔn)確測(cè)定，最低定量濃度可達(dá)〇. 〇lmg/kg。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的設(shè)計(jì)一種測(cè)定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法，包括以下 步驟：
[0009] 1)樣品預(yù)處理：稱取適量樣品，將樣品粉碎并混合均勻，加入乙腈作為提取液，用 渦旋儀混勻，經(jīng)振蕩浸泡后，在恒溫下超聲提取，將樣品提取溶液離心過(guò)濾；
[0010] 2)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定所得的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度；
[0011] 3)根據(jù)所得的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度，計(jì)算樣品中烯啶蟲胺的殘留量。
[0012] 步驟1)中，樣品為中草藥固體樣品，稱取3g樣品于50mL旋蓋離心管中，加入30mL 乙腈，用禍旋儀混勾2min，振蕩浸泡30min后，再于40°C超聲萃取30min，禍旋2min后，以 6000r/min轉(zhuǎn)速離心lOmin，上清液過(guò)0. 20μm的聚四氟乙稀濾膜。
[0013] 步驟2)中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的測(cè)定條件為：
[0014] 1)液相色譜儀采用EclipseplusC18色譜柱，柱長(zhǎng)為150mm，柱內(nèi)徑為2. 1mm，顆 粒內(nèi)徑為3. 5μπι;
[0015] 2)液相流動(dòng)相采用2mM醋酸銨水溶液和甲醇；
[0016] 3)串聯(lián)質(zhì)譜儀采集選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正模式掃描模式，掃描離子對(duì)為271.D225. 2， 27L1>126· 0,27L1>56· 1，其中離子對(duì) 27L1>225· 2 用于定量。
[0017] 液相色譜儀中，柱溫箱溫度為40°C，載氣流速為0. 4mL/min，進(jìn)樣體積為2μL。 串聯(lián)質(zhì)譜儀中，離子源為ESI電噴霧離子源，采集方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，干燥氣溫度為 350°C，鞘氣溫度為375°C，干燥氣流速為6mL/min，噴霧針壓力為40psi，鞘氣流速為10mL/ min，毛細(xì)管電壓為正模式3000V，倍增管電壓為300V。
[0018] 步驟2)中，根據(jù)化合物在色譜柱上的保留時(shí)間及各化合物特有的質(zhì)譜圖和離子 對(duì)峰度比，進(jìn)行定性分析，對(duì)于經(jīng)定性分析確認(rèn)為陽(yáng)性的農(nóng)藥，采用外標(biāo)法定量，最終結(jié)果 經(jīng)過(guò)基質(zhì)樣品加標(biāo)回收率進(jìn)行校正。
[0019] 步驟3)中，根據(jù)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度，計(jì)算得到中 草藥樣品中稀啶蟲胺的殘留量，其最低定量濃度為〇. 〇lmg/kg。
[0020] 本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果：本發(fā)明是一項(xiàng)針對(duì)中草藥樣品經(jīng)有 機(jī)溶劑提取，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定其中烯啶蟲胺殘留量的方法，不僅測(cè)定 方法快速、簡(jiǎn)單，而且能夠?qū)崿F(xiàn)中草藥中烯啶蟲胺殘留量的準(zhǔn)確測(cè)定，并可達(dá)到很低的檢出 限；本發(fā)明解決了目前對(duì)于中草藥樣品類型，沒有方法準(zhǔn)確測(cè)定其中烯啶蟲胺殘留量的問(wèn) 題，值得推廣應(yīng)用。
[【附圖說(shuō)明】]
[0021] 圖1是本發(fā)明的實(shí)施例1中使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)銀杏葉中烯啶蟲 胺殘留量所得的MRM色譜圖。
[【具體實(shí)施方式】]
[0022] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域中對(duì)中草藥中烯啶蟲胺殘留量的測(cè)定，其原理為：將中 草藥樣品中的烯啶蟲胺經(jīng)有機(jī)溶劑提取，再由液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定烯啶蟲胺的 殘留量。
[0023] 其中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的測(cè)定條件為：
[0024] 1)液相色譜柱采用EclipseplusC18色譜柱，規(guī)格為柱長(zhǎng)150mm，柱內(nèi)徑2. 1mm， 顆粒內(nèi)徑3. 5μm;
[0025] 2)液相色譜使用的流動(dòng)相采用2mM醋酸銨水溶液和甲醇；
[0026] 3)串聯(lián)質(zhì)譜儀采集選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正模式掃描模式，掃描離子對(duì)為271.D225. 2， 27L1>126· 0,27L1>56· 1，其中離子對(duì) 27L1>225· 2 用于定量。
[0027] 實(shí)施例1:銀杏葉中烯啶蟲胺的測(cè)定
[0028] 1.樣品的制備：
[0029] 將銀杏葉樣品用食品料理器粉碎，混合均勻后于潔凈干燥樣品袋中密封保存。準(zhǔn) 確稱取3g混合均勾的銀杏葉試樣（精確至0.Olg)于50mL旋蓋離心管中，加入30mL乙腈， 用渦旋儀混勻2min。將離心管置于搖床上振搖30min，充分浸泡試樣，再于40°C超聲萃取 30min，禍旋2min后以6000轉(zhuǎn)速離心lOmin。上層清液經(jīng)0. 20μm的聚四氟乙稀濾膜過(guò)濾， 用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。
[0030] 2.設(shè)定儀器參數(shù)：
[0031] 1)液相色譜儀檢測(cè)條件
[0032]色譜柱：EclipseplusC18, 2.ImmX150mm，3. 5μm
[0033] 柱溫箱溫度：40°C
[0034]載氣流速：0·4m