一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的gc-ms-ms測(cè)定方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC?MS?MS測(cè)定方法，本方法將改進(jìn)的QuEChERS樣品前處理方法和GC?MS?MS定性定量檢測(cè)方法相結(jié)合來(lái)測(cè)定蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量。使用含有1%甲苯的丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液代替乙腈作為提取液提取蔬菜中殘留的丁蟲(chóng)腈，d?SPE提取管凈化后氣相色譜?三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（GC?MS?MS）檢測(cè)。本方法平均回收率為81.3％～93.9%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.96％～8.20％%，定量限0.01mg/kg。具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。能滿(mǎn)足美國(guó)、日本、歐盟等國(guó)家對(duì)相應(yīng)食品安全檢測(cè)的0.01mg/kg殘留限量，即“一律標(biāo)準(zhǔn)”的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種蔬菜中Τ蟲(chóng)臘殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種蔬菜中下蟲(chóng)臘殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法，更具體地設(shè)及一種采 用改進(jìn)的Q址畑ERS方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理結(jié)合氣相色譜-Ξ重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS- MS)定性定量測(cè)定蔬菜中殘留的下蟲(chóng)臘含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 下蟲(chóng)臘（Flufiprole)，又名下締氣蟲(chóng)臘，化學(xué)名稱(chēng)為3-氯基-5-甲代締丙基氨基- 1-(2,6-二氯-4-Ξ氣甲基苯基）-4-Ξ氣甲基亞橫酷基化挫，是在氣蟲(chóng)臘的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)出 的活性高、殺蟲(chóng)譜廣且對(duì)人畜及水生生物安全的新型殺蟲(chóng)劑。CAS登錄號(hào)為704886-18-0,分 子量為491.23,結(jié)構(gòu)式為：
下蟲(chóng)臘是大連瑞澤農(nóng)藥股份有限公司自主創(chuàng)制的全新化合物，也是國(guó)內(nèi)唯一由農(nóng)藥生 產(chǎn)企業(yè)創(chuàng)制的具有國(guó)際知識(shí)產(chǎn)權(quán)的苯基化挫類(lèi)新型廣譜殺蟲(chóng)劑，并且獲得專(zhuān)利，專(zhuān)利證號(hào) (國(guó)際專(zhuān)利號(hào):口口7^獅3/00343;中國(guó)專(zhuān)利號(hào):02128312.5)。殺蟲(chóng)機(jī)理新穎、獨(dú)特、活性高，主 要是阻礙昆蟲(chóng)丫-氨基下酸控制的氯化物代謝，具有胃毒、觸殺及一定的內(nèi)吸作用，對(duì)菜青 蟲(chóng)、小菜蛾、懼蟲(chóng)、粘蟲(chóng)、褐飛風(fēng)、葉甲等具有很高的活性，〇.8mg/kg下有的就達(dá)到100%的致 死率?？蓱?yīng)用于水稻、棉花、蔬菜、玉米、果樹(shù)等作物上防治鱗翅目、銷(xiāo)翅目、半翅目等的幼蟲(chóng) 及成蟲(chóng)，如水稻二、Ξ化懼，棉鈴蟲(chóng)、椿象、小菜蛾、菜青蟲(chóng)潛葉蛹等均有高水平防效，持效期 長(zhǎng)，且對(duì)作物無(wú)藥害。
[0003] 經(jīng)中國(guó)農(nóng)藥南方創(chuàng)制中屯、浙江基地室內(nèi)生測(cè)試驗(yàn)，結(jié)果顯示5%下蟲(chóng)臘乳油對(duì)二化 懼LC50為0.07478，與銳勁特的活性化050為0.06725)相當(dāng)，是另一對(duì)照藥劑20%立挫憐乳油 的56.91倍;對(duì)小菜蛾LD50為0.03362，與銳勁特的活性化D50為0.03536)相當(dāng)，是另一對(duì)照 藥劑5%抑太保乳油的88.10倍。
[0004] 經(jīng)化學(xué)工業(yè)農(nóng)藥安全評(píng)價(jià)中屯、試驗(yàn)，下蟲(chóng)臘5%乳油急性經(jīng)口LD50為雄性大鼠〉 4640mg/kg，雌性大鼠>4640 mg/kg，經(jīng)皮LD50雌、雄大鼠均>2150 mg/kg，對(duì)眼睛為重度刺 激，對(duì)皮膚具有弱致敏性，對(duì)蠶的LC50巧000 mg/L，對(duì)蜜蜂高毒，鶴譜急性經(jīng)口雌雄均>2000 mg/kg，斑馬魚(yú)LC50(96小時(shí)）19.62 mg/L為低毒；原藥大鼠經(jīng)口、經(jīng)皮試驗(yàn)為低毒，皮刺、眼 刺試驗(yàn)為無(wú)刺激性，豚鼠致敏試驗(yàn)為弱致敏物，Ames試驗(yàn)及遺傳毒性試驗(yàn)為陰性。生物活性 測(cè)定試驗(yàn)和毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，下蟲(chóng)臘對(duì)鱗翅目等多種害蟲(chóng)具有較高的活性，特別是對(duì)水 稻、蔬菜等方面的害蟲(chóng)的活性顯現(xiàn)了很高的防治效果，該劑對(duì)魚(yú)的毒性為低毒級(jí)。
[0005] 如E化ERS(如ick、Easy、化eap、Effective、Rugged、Safe)，是近年來(lái)國(guó)際上最新發(fā) 展起來(lái)的一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的快速樣品前處理技術(shù)，由美國(guó)農(nóng)業(yè)部Anastassiades教授 等于2003年開(kāi)發(fā)的。原理是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到 除雜凈化的目的。傳統(tǒng)的QuECh邸S方法的步驟可W簡(jiǎn)單歸納為：（1)樣品粉碎；（2)單一溶 劑乙臘提取分離；（3)加入MgS〇4等鹽類(lèi)除水；（4)加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)等吸附劑 除雜；（5)上清液進(jìn)行GC-MS、LC-MS檢測(cè)。Q址化邸S方法有W下優(yōu)勢(shì)：（1)回收率高，對(duì)大多 數(shù)農(nóng)藥品種的回收率大于85%; (2)分析速度快，能在6小時(shí)內(nèi)完成70-80個(gè)樣品的處理；（4) 溶劑使用量少，污染??；巧)操作簡(jiǎn)便，無(wú)需良好訓(xùn)練和較高技能便可很好地完成；（6)樣品 制備過(guò)程中使用很少的玻璃器皿，裝置簡(jiǎn)單。傳統(tǒng)的Q址化ERS方法也有兩點(diǎn)不足之處：（1) 僅使用乙臘作為提取溶液，因此，提取液不能直接進(jìn)行氣相色譜或氣相色譜-質(zhì)譜分析；（2) 使用GCB吸附色素的同時(shí)也吸附了部分具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，因此，具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥回 收率偏低。
[0006] 目前關(guān)于下蟲(chóng)臘的檢測(cè)方法尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)頒布。近幾年，有學(xué)者利用GC-ECD和GC- MS技術(shù)對(duì)蔬菜稻谷等基質(zhì)中的下蟲(chóng)臘進(jìn)行了檢測(cè)，取得了不錯(cuò)的效果。其中在2009年，曹維 強(qiáng)等利用GC-MS檢測(cè)渡菜中的下蟲(chóng)臘，定量限為0.05mg/kg;2014年，田宏哲等利用GC-ECD檢 測(cè)玉米中的下蟲(chóng)臘，定量限為0.0 lmg/kg。但是，W上兩種方法有其局限性，GC-MS法的靈敏 度比較低，無(wú)法滿(mǎn)足美國(guó)、日本、歐盟等國(guó)家對(duì)相應(yīng)食品安全檢測(cè)的O.Olmg/kg殘留限量，即 "一律標(biāo)準(zhǔn)"的技術(shù)要求;GC-EC的去的靈敏度雖然較高，但GC法抗干擾能力差，易出現(xiàn)假陽(yáng)性 的缺點(diǎn)無(wú)法克服。另外，利用W上兩種方法，前處理都比較繁瑣，不能夠完成對(duì)于大批量樣 品的快速檢測(cè)工作，因此，一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的方法亟待 開(kāi)發(fā)出來(lái)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，而提供一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏度 高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的蔬菜中下蟲(chóng)臘殘留量的測(cè)定方法。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種蔬菜中下蟲(chóng)臘殘留量的GC- MS-MS測(cè)定方法，包括如下步驟： (1) 提取及凈化，準(zhǔn)確稱(chēng)取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱(chēng)取10.00 g (精確至0.01 g)均質(zhì)試樣，加入50 mL提取液(加入1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機(jī)高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制，將不含下蟲(chóng)臘的同種類(lèi)基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)處理， 配制成至少3個(gè)濃度的下蟲(chóng)臘系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算，將步驟(2)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè) 定，W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，測(cè)得樣品液中下蟲(chóng)臘的色譜 峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中下蟲(chóng)臘含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計(jì)算得到樣品中下蟲(chóng)臘殘留量。
[0009]測(cè)得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間（RT)分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保 留時(shí)間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間相差在± 0.05min內(nèi)，并且該峰同時(shí)具有定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。若上述兩個(gè)條 件不能同時(shí)滿(mǎn)足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0010] 分析條件為：色譜柱：TR-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25皿;進(jìn) 樣口溫度250°C ;載氣：氮?dú)猓?gt; 99. 999%);不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級(jí)離子監(jiān)測(cè)（5觀）模式;定量離子對(duì)為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對(duì)為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0011] 試樣中被測(cè)農(nóng)藥殘留量W質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計(jì)算。
[0012] P--標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A--樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； As--農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m-一試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于Img/kg時(shí)，保留兩位有效數(shù)字。
[0013] 本發(fā)明所具有的有益效果： 1、本發(fā)明采用改進(jìn)的如E化ERS方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，樣品前處理提取和凈化步驟使 用含有1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶液代替乙臘作為提取液，直接提取凈化后 去上清液直接進(jìn)樣而不需要溶劑轉(zhuǎn)換，克服了乙臘不能直接進(jìn)GC-MS-MS的缺陷，同時(shí)克服 了具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥回收率偏低的問(wèn)題。
[0014] 2、本發(fā)明采用氣相色譜-Ξ重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS-MS)定性定量測(cè)定蔬菜中 殘留的下蟲(chóng)臘含量，平均回收率為81.3%~93.9%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)為3.42%~ 8.20 % %，靈敏度高、重復(fù)性好。
[001引 3、本發(fā)明檢出限O.OOlmg/kg，定量檢出限O.Olmg/kg，能夠簡(jiǎn)便、快速、定性定量準(zhǔn) 確的蔬菜中下蟲(chóng)臘殘留量，能滿(mǎn)足美國(guó)、日本、歐盟等國(guó)家對(duì)相應(yīng)食品安全檢測(cè)的O.Olmg/ kg殘留限量，即"一律標(biāo)準(zhǔn)"的技術(shù)要求，將為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出口貿(mào)易健康 發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。。
【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1下蟲(chóng)臘標(biāo)準(zhǔn)溶液的GC-MS-MS二級(jí)掃描色譜圖； 圖2為不含下蟲(chóng)臘的芹菜樣品的GC-MS-MS二級(jí)掃描色譜圖； 圖3為添加濃度為O.Olyg/mL的下蟲(chóng)臘芹菜基質(zhì)GC-MS-MS二級(jí)掃描色譜圖； 圖4為W不含下蟲(chóng)臘的芹菜空白樣品為基質(zhì)配制的下蟲(chóng)臘標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。 具體實(shí)施例
[0017]下列實(shí)施例是對(duì)發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不僅限于此。
[001引實(shí)施例中使用的儀器： Trace 1310型氣相色譜-TSQ 8000型Ξ重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)化ermo公司）； Sartorius電子天平（千分之一，北京賽多利斯天平有限公司）；IKA T18 Basic均質(zhì)器(德 國(guó)IKA公司）;MS 3基本型滿(mǎn)旋混合器（IKA，Germany)。
[0019]農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品： 標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自天津農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中屯、（質(zhì)量濃度均為lOOug/mL)。丙酬、 甲苯(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙酸乙醋（分析純，天津市廣成化學(xué)試劑有限 公司），乙酸鋼、氯化鋼(分析純，天津博迪化工股份有限公司）。
[0020] 單標(biāo)儲(chǔ)備液的配制：各取ImL標(biāo)準(zhǔn)品置于lOmL容量瓶中，用丙酬定容至刻度，配成 質(zhì)量濃度為10 mg/L的單標(biāo)儲(chǔ)備液，于一20°c冰箱中膽存?zhèn)溆谩?br>[0021] 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液：用空白樣品基質(zhì)溶液配成不同濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用 于制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，不同種類(lèi)蔬菜制得不同種類(lèi)的基質(zhì)校正工作溶液?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶 液現(xiàn)配現(xiàn)用。供試蔬菜:芹菜、黃瓜和番茄，購(gòu)自本地超市。
[0022] 實(shí)施例1芹菜中下蟲(chóng)臘殘留量的GC-MS-MS檢測(cè)： (1) 提取及凈化:準(zhǔn)確稱(chēng)取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱(chēng)取10.00 g (精確至0.01 g)均質(zhì)芹菜試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機(jī)高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:將不含下蟲(chóng)臘的同種類(lèi)基質(zhì)空白芹菜樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、〇. 02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的下蟲(chóng)臘系列混合 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè) 定，W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，測(cè)得樣品液中下蟲(chóng)臘的色譜 峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中下蟲(chóng)臘含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計(jì)算得到樣品中下蟲(chóng)臘殘留量。
[0023] 測(cè)得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間（RT)分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保 留時(shí)間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間相差在± 0.05min內(nèi)，并且該峰同時(shí)具有定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。若上述兩個(gè)條 件不能同時(shí)滿(mǎn)足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0024] 分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進(jìn) 樣口溫度250°C ;載氣：氮?dú)猓?gt; 99. 999%);不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°C;掃描方式:二級(jí)離子監(jiān)測(cè)（SRM)模式;定量離子對(duì)為:403~238.77,碰撞電壓 25eV，定性離子對(duì)為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0025]試樣中被測(cè)農(nóng)藥殘留量W質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計(jì)算。
[00%] P一一標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A一一樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； As一一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m--試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于Img/kg時(shí)，保留兩位有效數(shù)字。
[0027] W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如 表1。
[002引表1芹菜空白基質(zhì)中下蟲(chóng)臘的標(biāo)準(zhǔn)曲線
加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含下蟲(chóng)臘的芹菜中加入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個(gè)濃度水平的下蟲(chóng)臘標(biāo)準(zhǔn)溶液，待 農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測(cè)液用測(cè) 定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線性范 圍之內(nèi)。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平 行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，下蟲(chóng)臘 的平均回收率為84.1 %~93.4%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.42%~6.38 %，說(shuō)明本發(fā)明 方法的回收率較高，重復(fù)性好。
[0029]表2下蟲(chóng)臘的回收率和重復(fù)性（n = 6)
實(shí)施例2黃瓜中下蟲(chóng)臘殘留量的GC-MS-MS檢測(cè)： (1)提取及凈化:準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0g氯化鋼和1 .Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱(chēng)取10.00 g (精確至ο.01 g)均質(zhì)黃瓜試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機(jī)高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:將不含下蟲(chóng)臘的同種類(lèi)基質(zhì)空白黃瓜樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L六個(gè)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的下蟲(chóng) 臘系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè) 定，W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，測(cè)得樣品液中下蟲(chóng)臘的色譜 峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中下蟲(chóng)臘含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計(jì)算得到樣品中下蟲(chóng)臘殘留量。
[0030] 測(cè)得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間（RT)分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保 留時(shí)間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間相差在± 0.05min內(nèi)，并且該峰同時(shí)具有定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。若上述兩個(gè)條 件不能同時(shí)滿(mǎn)足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0031] 分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進(jìn) 樣口溫度250°C ;載氣：氮?dú)猓?gt; 99. 999%);不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級(jí)離子監(jiān)測(cè)（5觀）模式;定量離子對(duì)為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對(duì)為:421~314.98，碰撞電壓2〇6乂。
[0032] 試樣中被測(cè)農(nóng)藥殘留量W質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計(jì)算。
[0033] P--標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A--樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； As--農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m-一試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于Img/kg時(shí)，保留兩位有效數(shù)字。
[0034] W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如 表3。
[0035] 表3黃瓜空白基質(zhì)中下蟲(chóng)臘的標(biāo)準(zhǔn)曲線
加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含下蟲(chóng)臘的黃瓜中加入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個(gè)濃度水平的下蟲(chóng)臘標(biāo)準(zhǔn)溶液，待 農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測(cè)液用 測(cè)定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線性 范圍之內(nèi)。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平 平行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，下 蟲(chóng)臘的平均回收率為81.3 %~90.1 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.12 %~8.20 %，說(shuō)明本 發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性好。
[0036] 表4下蟲(chóng)臘的回收率和重復(fù)性（n = 6)
實(shí)施例3番茄中下蟲(chóng)臘殘留量的GC-MS-MS檢測(cè)： (1) 提取及凈化:準(zhǔn)確稱(chēng)取5. Og氯化鋼和1.Og乙酸鋼于lOOmL離屯、管中，再稱(chēng)取10.00 g (精確至0.01 g)均質(zhì)番茄試樣，加入50 mL提取液（1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合 溶液），勻漿機(jī)高速勻漿提取1 min，4000r/min離屯、5min，取上清液lOmL于d-Sro凈化管 (15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB)中，充分震蕩 1 min后靜置 30min，靜置完成后，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:將不含下蟲(chóng)臘的同種類(lèi)基質(zhì)空白番茄樣品按上述步驟（1) 處理，配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的下蟲(chóng)臘系列混 合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算:將步驟(2)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè) 定，W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在 相同條件下將步驟（1)中凈化后的樣品液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，測(cè)得樣品液中下蟲(chóng)臘的色譜 峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中下蟲(chóng)臘含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計(jì)算得到樣品中下蟲(chóng)臘殘留量。
[0037] 測(cè)得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間（RT)分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保 留時(shí)間（RT)相比較，如果樣品溶液中某組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間相差在± 0.05min內(nèi)，并且該峰同時(shí)具有定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。若上述兩個(gè)條 件不能同時(shí)滿(mǎn)足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[003引分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進(jìn) 樣口溫度250°C ;載氣：氮?dú)猓?gt; 99. 999%);不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，W每分鐘15°C的速度升至150°C，然后W每分鐘 6°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI模式，能量70eV;離子 源溫度230°(：;掃描方式:二級(jí)離子監(jiān)測(cè)（5觀）模式;定量離子對(duì)為:403~238.77，碰撞電壓 25eV，定性離子對(duì)為:421~314.98，碰撞電壓206乂。
[0039] 試樣中被測(cè)農(nóng)藥殘留量W質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位W毫克每千克(mg/kg)表示，按下式 計(jì)算。
[0040] P一一標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L); A一一樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； As一一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積； V一一提取溶劑總體積，單位為毫升(mL); m--試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于Img/kg時(shí)，保留兩位有效數(shù)字。
[0041] W標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如 表5。
[0042] 表5番茄空白基質(zhì)中下蟲(chóng)臘的標(biāo)準(zhǔn)曲線
加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含下蟲(chóng)臘的番茄中加入入0.01、0.05和0.2111肖/1^3個(gè)濃度水平的下蟲(chóng)臘標(biāo)準(zhǔn)溶液， 待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定，0.2mg/kg添加濃度的樣品待測(cè)液 用測(cè)定前，用1%甲苯的丙酬、乙酸乙醋同體積比混合溶劑將凈化定容液稀釋至殘留量在線 性范圍之內(nèi)。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水 平平行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可W看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上， 下蟲(chóng)臘的平均回收率為84.9%~93.9%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.96%~5.96%，說(shuō)明 本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性好。
[0043] 表6下蟲(chóng)臘的回收率和重復(fù)性（n = 6)
數(shù)據(jù)表明，將實(shí)施例方法配制的ο .01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L六種濃度基質(zhì)匹 配標(biāo)準(zhǔn)溶液W待測(cè)物定量離子的峰面積(y)對(duì)質(zhì)量濃度(x，mg/L)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到下蟲(chóng)臘 在Ξ種蔬菜中含量的線性方程及相關(guān)系數(shù)。結(jié)果顯示，下蟲(chóng)臘在0. 01~0.5 mg/L范圍內(nèi)線 性關(guān)系良好，其相關(guān)系數(shù)(r2 )均大于0. 95。在空白基質(zhì)中添加0. 01、0.05、0.2Ξ個(gè)濃度的 標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行提取、凈化、上機(jī)檢測(cè)。下蟲(chóng)臘的定量限化0D)為0.01 mg/kg， 方法的靈敏度可滿(mǎn)足國(guó)際農(nóng)藥殘留的監(jiān)控要求。
[0044]上述實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限 定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的 各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法，其特征在于，所述方法包括以下步 驟:1)提取及凈化:準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量氯化鈉和乙酸鈉于離心管中，再稱(chēng)取均質(zhì)試樣，加入提 取液后勻漿機(jī)高速勻漿提取1 min后離心處理取上清液于d-SPE凈化管中，充分震蕩后靜 置，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)；2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制:將不含丁蟲(chóng)腈的同種 類(lèi)基質(zhì)空白樣品按上述步驟1)處理，配制成至少3個(gè)濃度的丁蟲(chóng)腈系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； 3)測(cè)定和結(jié)果計(jì)算，將步驟2)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件 下將步驟1)中凈化后的樣品液進(jìn)行GC-MS-MS測(cè)定，測(cè)得樣品液中丁蟲(chóng)腈的色譜峰面積，代 入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中丁蟲(chóng)腈含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到 樣品中丁蟲(chóng)臆殘留量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法，其特征在于： 步驟1)中所述的提取液為丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法，其特征在于， 步驟1)所述的提取液為加入1%甲苯的丙酮、乙酸乙酯同體積比混合溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方法，其特征在于： 步驟1)中準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0g氯化鈉和1 .Og乙酸鈉于lOOmL離心管中，再稱(chēng)取10.00 g(精確至 0.01 g)均質(zhì)試樣，加入50 mL提取液，勾衆(zhòng)機(jī)高速勾衆(zhòng)提取1 min，4000r/min離心5min，取 上清液 10mL于d-SPE凈化管（15mL Tube，900mg MgS04/450mg PSA/300mg C18/50mg GCB) 中，充分震蕩1 min后靜置30min，靜置完成后，取適量上清液過(guò)濾置于進(jìn)樣瓶中待測(cè)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4任意一項(xiàng)所述的一種蔬菜中丁蟲(chóng)腈殘留量的GC-MS-MS測(cè)定方 法，其特征在于，步驟3)中GC-MS-MS分析條件為:色譜柱:TR-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi) 徑0.25mm，膜厚0.25μπι;進(jìn)樣口溫度250 °C ;載氣:氦氣（2 99.999%);不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣 量：lyL;恒流模式，流速1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C，保持2min，以每分鐘15°C的速度升 至150°C，然后以每分鐘6°C的速度升至280°C，保持10min;傳輸線溫度:250°C ;電離模式:EI 模式，能量70eV;離子源溫度230°C;掃描方式:二級(jí)離子監(jiān)測(cè)（SRM)模式;定量離子對(duì)為： 403~238.77，碰撞電壓25eV，定性離子對(duì)為:421~314.98，碰撞電壓20eV。
【文檔編號(hào)】G01N27/62GK105823835SQ201610137096
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年3月11日
【發(fā)明人】官帥, 陳子雷, 董嶄, 李慧冬, 方麗萍, 杜紅霞
【申請(qǐng)人】山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所