本發(fā)明涉及一種藥物組合物的鑒定方法，具體而言，涉及一種中藥制劑生發(fā)丸的檢測方法，屬于中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

脫發(fā)是指頭發(fā)脫落的現(xiàn)象。正常脫落的頭發(fā)都是處于退行期及休止期的毛發(fā)，由于進(jìn)入退行期與新進(jìn)入生長期的毛發(fā)不斷處于動態(tài)平衡，故能維持正常數(shù)量的頭發(fā)。病理性脫發(fā)是指頭發(fā)異?；蜻^度的脫落，其原因很多。腎虛使精血不足，精血不足導(dǎo)致頭發(fā)缺少營養(yǎng)供應(yīng)，會引起頭發(fā)脫落。

中藥生發(fā)丸主要用于肝腎不足所致須發(fā)早白，頭發(fā)稀疏、干枯、斑禿脫發(fā)。中藥生發(fā)丸為多種中藥的組合制劑，其主要包括以下原料藥：何首烏、補(bǔ)骨脂、牛膝、當(dāng)歸、茯苓、枸杞子、菟絲子、女貞子、墨旱蓮、桑椹、黑芝麻、熟地黃、桑寄生、核桃仁、沙苑子、蛇床子、紫河車、骨碎補(bǔ)、黃芪、制黃精、五味子、靈芝、地黃、側(cè)柏葉、苦參和山楂。生發(fā)丸中的原料藥何首烏補(bǔ)益精血、烏須發(fā)、補(bǔ)肝腎；當(dāng)歸養(yǎng)血、活血、補(bǔ)血，發(fā)為血之余，因而有生發(fā)作用；側(cè)柏葉涼血止血、生發(fā)烏發(fā)；女貞子滋肝補(bǔ)腎，烏須黑發(fā)、生發(fā)。

目前市面上存在多種不同中藥配方和制作工藝的生發(fā)丸，但缺乏對中藥制劑生發(fā)丸進(jìn)行鑒定的有效方法。生發(fā)丸是由二十六味中藥組成，雖然多種藥材都已存在確定的檢測方法，但其中，從中藥組合物中分離純化并且鑒定黑芝麻的方法還存在樣品純度低而檢測精度不高的弊端，同時，經(jīng)過檢索，并未發(fā)現(xiàn)能在同一分離純化和薄層色譜檢測條件下，對中藥組合物中的黑芝麻和蛇床子同時進(jìn)行檢測的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種中藥制劑生發(fā)丸的鑒定方法。

本發(fā)明的中藥制劑生發(fā)丸由如下中藥藥材組成：何首烏、鹽補(bǔ)骨脂、牛膝、當(dāng)歸、茯苓、枸杞子、鹽菟絲子、女貞子、墨旱蓮、桑椹、黑芝麻、熟地黃、桑寄生、核桃仁、沙苑子、蛇床子、紫河車、骨碎補(bǔ)、黃芪、制黃精、五味子、靈芝、地黃、側(cè)柏葉、苦參和山楂。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明中中藥制劑生發(fā)丸中的黑芝麻和蛇床子的檢測方法：

s1.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g或大蜜丸14g，研細(xì)或剪碎，加無水乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，加于中性氧化鋁柱上，加入無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；

s2.制備對照品溶液：另取蛇床子對照藥材0.2g、黑芝麻對照藥材0.4g，分別加無水乙醇20ml，同步驟s1制成黑芝麻對照藥材溶液和蛇床子對照藥材溶液，再取芝麻素對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的黑芝麻素對照溶液；

s3.檢測：照中國藥典2010年版一部附錄ⅵb薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取步驟s1制備的供試品溶液，步驟s2制備的黑芝麻對照藥材溶液、蛇床子對照藥材溶液及黑芝麻素對照溶液各5μl，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以環(huán)已烷－乙醚－乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置356nm紫外光燈下檢視；

s4.結(jié)果判定：步驟s1制得供試品色譜中，在與蛇床子對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，再于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，步驟s1制得供試品色譜中，在與黑芝麻對照藥材和芝麻素對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

優(yōu)選地，如上所述的的中藥制劑生發(fā)丸中芝麻和蛇床子的檢測方法，在步驟s3中，所述展開劑，環(huán)己烷、乙醚、乙酸乙酯的體積比為20:5.5:2.5。

優(yōu)選地，如上所述的的中藥制劑生發(fā)丸中芝麻和蛇床子的檢測方法，在步驟s1中，所述中性氧化鋁柱中氧化鋁規(guī)格為100~200目，用量為5g，氧化鋁柱的柱內(nèi)徑為1cm。

本發(fā)明中中藥制劑生發(fā)丸中骨碎補(bǔ)的檢測方法：

a.制備供試品溶液：取本品水蜜丸10g或大蜜丸14g，研細(xì)或剪碎，加水60ml，水浴加熱30分鐘，放冷，超聲處理20分鐘使完全溶散，抽濾，濾液加乙醚50ml振搖提取，分取水溶液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至1～2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次乙酸乙酯用量為30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，上清液作為供試品溶液；

b.制備對照品溶液：另取骨碎補(bǔ)對照藥材0.5g，加水20ml，水浴加熱30分鐘，濾過，濾液加乙酸乙酯30ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為骨碎補(bǔ)對照藥材溶液，再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為柚皮苷對照溶液；

c.檢測：照中國藥典2010年版一部附錄ⅵb薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取步驟a制得供試品溶液、步驟b制得骨碎補(bǔ)對照藥材溶液和柚皮苷對照溶液各5μ1，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以體積比10:4:5:3的乙酸乙酯－丙酮-醋酸－水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外光燈下檢視；

d.結(jié)果判定：步驟a制得供試品色譜中，在與骨碎補(bǔ)對照藥材和柚皮苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明首先通過對中藥制劑生發(fā)丸中的當(dāng)歸、何首烏、牛膝、骨碎補(bǔ)、補(bǔ)骨脂、蛇床子、黑芝麻、黃芪、苦參的有效成分進(jìn)行分離純化，再經(jīng)過薄層色譜檢測的方法，以對中藥制劑生發(fā)丸進(jìn)行鑒定。薄層色譜檢測方法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于中藥藥材檢測，但現(xiàn)有對中藥藥材黑芝麻的薄層色譜檢測方法主要針對黑芝麻藥材，對組合藥物中黑芝麻的檢測精確度偏低。本發(fā)明通過對中藥制劑生發(fā)丸的研磨、超聲處理，并通過無水乙醇提取及中性氧化鋁柱的柱層析方法，分離純化中藥制劑生發(fā)丸中黑芝麻的相關(guān)成分，使用羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠g薄層板，通過薄層色譜法對其中黑芝麻進(jìn)行檢測。本發(fā)對中藥制劑生發(fā)丸中黑芝麻有效成分的分離方法，同樣適用于蛇床子，并通過統(tǒng)一使用環(huán)已烷－乙醚－乙酸乙酯展開劑可同時對中藥制劑生發(fā)丸中的黑芝麻和蛇床子進(jìn)行薄層色譜檢測，簡化操作，減少成本。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述：

實(shí)施例1：

本發(fā)明中中藥制劑生發(fā)丸的制備：

分別取何首烏30g，鹽補(bǔ)骨脂15g，牛膝15g，當(dāng)歸10g，茯苓10g，枸杞子30g，鹽菟絲子20g，女貞子30g，墨旱蓮30g，桑椹30g，黑芝麻30g，熟地黃15g，桑寄生30g，核桃仁30g，沙苑子15g，蛇床子15g，紫河車3g，骨碎補(bǔ)15g，黃芪30g，制黃精30g，五味子15g，靈芝15g，地黃15g，側(cè)柏葉30g，苦參10g，山楂30g共二十六味藥，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，泛丸或制丸，干燥，制成水蜜丸；或加煉蜜100～120g制成大蜜丸，即得。

實(shí)施例2：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的黑芝麻和蛇床子：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g，研細(xì)，加無水乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，加于中性氧化鋁柱（100~200，5g，內(nèi)徑1cm）上，用無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取蛇床子對照藥材0.2g、黑芝麻對照藥材0.4g，分別加無水乙醇20ml，同步驟a制成蛇床子和黑芝麻對照藥材溶液；再取芝麻素對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為黑芝麻素對照品溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、蛇床之對照藥材溶液、黑芝麻對照藥材溶液和黑芝麻素對照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以環(huán)已烷－乙醚－乙酸乙脂（20︰5.5︰2.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與蛇床子對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。再于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與黑芝麻對照藥材和芝麻素對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

實(shí)施例3：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的骨碎補(bǔ)：

a.制備供試品溶液：取本品水蜜丸10g，研細(xì)，加水60ml，水浴加熱30分鐘，放冷，超聲處理20分鐘使完全溶散，抽濾，濾液加乙醚50ml振搖提取，分取水溶液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)ph值至1～2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次乙酸乙酯用量為30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，上清液作為供試品溶液；

b.制備對照品溶液：另取骨碎補(bǔ)對照藥材0.5g，加水20ml，水浴加熱30分鐘，濾過，濾液加乙酸乙酯30ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為骨碎補(bǔ)對照藥材溶液，再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為柚皮苷對照溶液；

c.檢測：照中國藥典2010年版一部附錄ⅵb薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取步驟a制得供試品溶液、步驟b制得骨碎補(bǔ)對照藥材溶液和柚皮苷對照溶液各5μ1，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以體積比10:4:5:3的乙酸乙酯－丙酮-醋酸－水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365nm紫外光燈下檢視；

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與骨碎補(bǔ)對照藥材和柚皮苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

實(shí)施例4：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的當(dāng)歸：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g，研細(xì)，加水60ml，水浴加熱30分鐘，放冷，超聲處理20分鐘使完全溶散，抽濾，濾液加乙醚50ml振搖提取，分取乙醚液，用2％碳酸鈉溶液30ml振搖提取，分取碳酸鈉溶液，緩緩加入稀鹽酸調(diào)ph值至1，加乙醚30ml振搖提取，分取乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取當(dāng)歸對照藥材0.2g，加水20ml，同步驟（1）制成當(dāng)歸對照藥材溶液。再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄vib）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、當(dāng)歸對照藥材溶液、阿魏酸對照藥品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（10∶4∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與當(dāng)歸對照藥材和阿魏酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；再噴以新制的1％三綠化鐵-1％鐵氰化鉀（1:1）混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

實(shí)施例5：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的何首烏：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g，研細(xì)，加水60ml，水浴加熱30分鐘，放冷，超聲處理20分鐘使完全溶散，抽濾，取藥渣，加鹽酸1ml，拌勻，加三氯甲烷50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸至近干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，上清液作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取何首烏對照藥材0.5g，加鹽酸10滴，三氯甲烷30ml，同步驟a制成何首烏對照藥材溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、何首烏對照藥材溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）－甲酸乙酯－甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，分別置自然光和紫外光燈(365nm)下檢視。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)。

本發(fā)明中中藥制劑生發(fā)丸中補(bǔ)骨脂的檢測方法：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸7g，研細(xì)，加乙酸乙酯40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，加于中性氧化鋁柱（100～200目，5g，1cm）上，以乙酸乙酯洗脫50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素對照品溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素對照品溶液各5μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(4：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

實(shí)施例6：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的黃芪：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g，研細(xì)，加水100ml，水浴加熱1小時，放冷，超聲處理20分鐘使完全溶散，濾過，濾液用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌兩次，每次50ml，分取正丁醇液，用正丁醇飽和的水50ml洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為黃芪甲苷對照品溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、黃芪甲苷對照品溶液各2μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13：7：2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈(365nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

實(shí)施例7：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的苦參：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸10g，研細(xì)，加濃氨試液2ml，拌勻，加三氯甲烷30ml，浸泡12小時，再超聲處理30分鐘，濾過，藥渣用三氯甲烷20ml分次洗滌，合并三氯甲烷液，用稀鹽酸振搖提取2次，每次20ml，合并稀鹽酸溶液，用氨試液調(diào)節(jié)ph至10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取苦參對照藥材0.4g，加濃氨試液0.5ml，拌勻，同法制成苦參對照藥材溶液。再取苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液，作為苦參堿對照品溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取對照品溶液、苦參對照藥材溶液、苦參堿對照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（60∶8∶0.3）為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)泡和20分鐘，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。

d.結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

實(shí)施例8：

本發(fā)明鑒別方法檢測中藥制劑生發(fā)丸中的牛膝：

a.制備供試品溶液：取中藥制劑生發(fā)丸水蜜丸15g，研細(xì)，加無水乙醇50ml，回流提取30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，加鹽酸1ml，水解1小時，放冷，濾過，濾液用石油醚（60～90℃）振搖提取2次，每次30ml，合并石油醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

b.制備對照品溶液：另取牛膝對照藥材0.5g，加無水乙醇20ml，同步驟a成牛膝對照藥材溶液。

c.檢測：照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅵb）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、牛膝對照藥材溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（40∶1）為展開劑，飽和30分鐘，展開，取出，晾干，噴以2%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。