本申請(qǐng)要求于2009年4月29日申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮?1/173,842的名稱(chēng)為“在外周血和外周血單核細(xì)胞中的甲硫氨酸氨肽酶過(guò)表達(dá)作為用于結(jié)腸直腸癌篩查、診斷和預(yù)后的標(biāo)記物”的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。

背景技術(shù)：

結(jié)腸直腸癌(CRC)在加拿大[1]是癌癥死亡的第三大原因，CRC從前惡性腺瘤性息肉緩慢發(fā)展而得到。由于癌癥發(fā)展緩慢，存在一個(gè)相當(dāng)大的窗口期，在此窗口期期間，該癌癥或其前期病變(腺瘤性息肉)都可以被檢測(cè)到。這就允許在前惡性和早期惡性階段進(jìn)行治療。超過(guò)90％的被診斷為局限性結(jié)腸直腸癌的患者存活超過(guò)五年。然而，CRC病例中的大多數(shù)在確診時(shí)已是晚期[2,3]。雖然CRC是第三最致命的癌癥，但是，如果如果在早期就治療則會(huì)有90％的生存幾率。盡管如此，每年全球超過(guò)60萬(wàn)人死于CRC[4]。這些數(shù)據(jù)表明存在一種對(duì)用于早期檢測(cè)CRC的可靠的篩查方法的緊急的未滿(mǎn)足的需求，該方法作為基于群體的CRC篩查方法可以很容易地被實(shí)現(xiàn)。

有效的篩查策略

篩查即個(gè)體的識(shí)別，在形成實(shí)際癥狀之前識(shí)別出誰(shuí)存在發(fā)展為CRC的風(fēng)險(xiǎn)，最常見(jiàn)的CRC篩查試驗(yàn)包括大便潛血試驗(yàn)(FOBT)，糞便免疫試驗(yàn)(FIT)，乙狀結(jié)腸鏡檢查和結(jié)腸鏡檢查[5-7]。由于低靈敏度或測(cè)試的侵入性，用于篩查的這些測(cè)試的依從率是有限的[8,9]。例如，雖然FOBT是成本有效和相對(duì)安全的，但是，假陽(yáng)性率高，這是因?yàn)槿缢幬锖惋嬍车纫蛩乜赡苡绊懡Y(jié)果。為了FOBT篩查，患者必須在家收集糞便樣品并將其送至實(shí)驗(yàn)室用于分析。低依從率的原因是糞便樣品收集的不愉快的感覺(jué)。例如，在加拿大馬尼托巴省進(jìn)行的第一輪CRC篩查期間，50-75歲之間的目標(biāo)人群的服從率僅為15％，而在加拿大的安大略省，服從率為為29.3％，然而，45.6％的目標(biāo)人群仍然逾期篩查[10]。乙狀結(jié)腸鏡檢查和結(jié)腸鏡檢查既昂貴又具有侵入性，并且結(jié)果和過(guò)程的風(fēng)險(xiǎn)取決于主治內(nèi)窺鏡醫(yī)師的專(zhuān)業(yè)知識(shí)[11]。

廣泛可用的生物標(biāo)記癌胚抗原(CEA)具有有限的靈敏度和特異性[12,13]。在基于群體的篩查過(guò)程中，血液檢查可能比大便或內(nèi)窺鏡檢查更容易被接受。成本效益好的血液檢測(cè)可鑒定CRC高風(fēng)險(xiǎn)的患者，并且提高患者對(duì)更強(qiáng)烈的和侵入性的診斷過(guò)程的依從性。

蛋白酶解和甲硫氨酸氨肽酶(MetAP)

蛋白酶解是一種重要的蛋白質(zhì)修飾，對(duì)于細(xì)胞的正常功能是必需的，并且蛋白酶解的改變已涉及各種癌癥。新生多肽的最常見(jiàn)的處理事件是發(fā)生在幾乎每一種蛋白質(zhì)上的氨基末端修飾。氨肽酶屬于金屬蛋白酶家族并且它們的功能是從肽或蛋白質(zhì)的未封閉的N末端去除氨基酸。

蛋白質(zhì)合成由起始密碼子啟動(dòng)，其在真核生物中是甲硫氨酸，而在原核生物中為甲酰甲硫氨酸。甲硫氨酸氨肽酶(MetAP)催化甲硫氨酸從新合成的蛋白質(zhì)的N末端去除[7]。甲硫氨酸的去除對(duì)進(jìn)一步N-末端修飾是必不可少的，所述進(jìn)一步N-末端修飾例如為乙酰化和豆蔻?；痆14,15]。在人類(lèi)中，MetAP以?xún)煞N亞型存在：分別由MetAPI和MetAP2基因所編碼的MetAPI和MetAP2。在底物特異性和表達(dá)控制中，這兩種亞型在結(jié)構(gòu)上彼此不同，因此，它們?cè)诠δ苌喜皇侨哂嗟?。MetAPI構(gòu)成性地被表達(dá)，而MetAP2與細(xì)胞增殖相關(guān)。MetAPI在細(xì)胞分裂方面具有潛在作用，如MetAPI的抑制作用導(dǎo)致海拉細(xì)胞以及HT-1080細(xì)胞系凋亡的誘導(dǎo)。MetAPI的新亞型，即MetAPI D已被確定。MetAPI D已被證明在CRC患者中過(guò)表達(dá)，并且其抑制作用導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)減少[16,17]。MetAP2除了具有氨肽酶催化活性之外，還具有正如Gupta等人之前所證明的額外功能[18]。具體地，它通過(guò)保護(hù)真核起始因子2的α-亞基(elF2)免于磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)翻譯[19]。elF2a的磷酸化導(dǎo)致減少的翻譯起始。MetAP2表達(dá)與細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)，并且非分裂細(xì)胞未顯示此蛋白質(zhì)的免疫檢測(cè)水平。MetAP2已顯示參與不同類(lèi)型腫瘤的生長(zhǎng)[20]。MetAP2切割新生c-Src的甲硫氨酸，從而暴露其N(xiāo)-末端甘氨酸殘基用于豆蔻?；?。

MetAP2已經(jīng)被證明在血管生成方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。血管生成是特別重要的，由于其對(duì)實(shí)體瘤和癌癥的發(fā)展是必要的。多個(gè)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)證明了，MetAP的抑制作用導(dǎo)致了腫瘤生長(zhǎng)的消退和血管生成[21,22]，MetAP2已經(jīng)被鑒定為血管生成抑制劑的分子靶標(biāo)，如煙曲霉素和卵假散囊菌素，其可結(jié)合至MetAP2并抑制其氨肽酶活性[21,23]。MetAP2被認(rèn)為在癌癥中具有作用(Wang等人，2008年)。以前的報(bào)告顯示了，MetAP2在結(jié)腸癌，乳腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌和肝癌中的過(guò)表達(dá)[24,25]。如由Tucker等人所報(bào)道的，MetAP2在癌癥中的作用方面，存在一些可用的信息，Tucker等人提出了：MetAP2異位表達(dá)引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化并促進(jìn)細(xì)胞增殖，由于MetAP2抑制劑可減少細(xì)胞轉(zhuǎn)化[26]。然而，MetAP2在荷瘤宿主的免疫反應(yīng)細(xì)胞中的表達(dá)還不清楚。最近，我們已經(jīng)確定NMT2亞型在CRC患者的PBMC中過(guò)表達(dá)。由于MetAP2是豆蔻?；纳嫌问录虼?，我們的興趣是研究CRC患者血液中的MetAP2的狀態(tài)。沒(méi)有關(guān)于MetAP2介入CRC患者的外周血、PB C和T細(xì)胞的報(bào)道。在此，這是MetAP2存在于外周血、PBMC和T細(xì)胞中的首次報(bào)道。這項(xiàng)研究表明，與健康對(duì)照組相比，MetAP2在CRC患者的外周血和PBMC中過(guò)表達(dá)了。

MetAP2和CRC

以前的研究使用IHC技術(shù)調(diào)查了MetAP2在源自CRC患者的腫瘤中的表達(dá)。MetAP2也已被報(bào)道顯示出在息肉里的中度染色。據(jù)認(rèn)為這種染色揭示了作為分子事件的一部分的MetAP2是上調(diào)的，所述分子事件發(fā)生在結(jié)腸組織的惡性形成期間[15]。Tucker等人也使用IHC技術(shù)研究了MetAP2在CRC樣品的惡性腺瘤中的表達(dá)[26]。這些樣品顯示了MetAP2中至強(qiáng)的染色性。Kanno等人發(fā)表的研究報(bào)道了MetAP2在生發(fā)中心B細(xì)胞中更高的表達(dá)以及它們的腫瘤配對(duì)物[27]。所述生發(fā)中心是B淋巴細(xì)胞增殖和通過(guò)抗原刺激經(jīng)歷終末分化的位點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種篩查結(jié)腸直腸癌(CRC)的方法，包括：

檢測(cè)甲硫氨酸氨肽酶2(MetAP2)在非腫瘤樣品中的水平，所述非腫瘤樣品來(lái)自存在發(fā)展為CRC風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體；并且

確定MetAP2水平是否高于閾值，

其中，高于閾值的MetAP2水平指示該個(gè)體被進(jìn)一步用于CRC檢查。

高于閾值的MetAP2水平可能表明該個(gè)體患有CRC。

所述非腫瘤樣品可為外周血或中性粒細(xì)胞或外周血單核細(xì)胞(PBMC)或淋巴細(xì)胞。

所述閾值可對(duì)應(yīng)于一個(gè)健康個(gè)體的MetAP2水平。

附圖說(shuō)明

圖1：8名癌癥受試者和7名對(duì)照受試者的染色MetAP2的平均IHC分?jǐn)?shù)。CRC樣品的平均IHC分?jǐn)?shù)為205±57.56，而對(duì)照樣品的平均IHC分?jǐn)?shù)為8.57±3.78。圖表上的條呈現(xiàn)數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

圖2：對(duì)于ID0023的CRC患者的外周血的免疫組織化學(xué)分析。用抗MetAP2抗體孵育PB細(xì)胞(棕色陽(yáng)性染色)。黑色箭頭指向陽(yáng)性染色的淋巴細(xì)胞，灰色箭頭指向陽(yáng)性染色的中性粒細(xì)胞。(20×)

圖3：對(duì)于ID0023的CRC患者的外周血的免疫組織化學(xué)分析。用抗MetAP2抗體孵育PB細(xì)胞。黑色箭頭指向陽(yáng)性染色的淋巴細(xì)胞，灰色箭頭指向陽(yáng)性染色的中性粒細(xì)胞。(40×)

圖4：對(duì)于ID0006的對(duì)照組健康受試者的外周血的免疫組織化學(xué)分析。用抗MetAP2抗體孵育PB細(xì)胞。黑色箭頭指向陰性染色的淋巴細(xì)胞。(40×)

圖5：對(duì)于ID0006的對(duì)照組患者的外周血的免疫組織化學(xué)分析。用抗MetAP2抗體孵育PB細(xì)胞。這是如圖4所示的ID0006的對(duì)照組受試者的不同視野?；疑^指向弱陽(yáng)性染色的中性粒細(xì)胞。(40×)

圖6：在CRC患者和健康受試者中的甲硫氨酸氨肽酶2(MetAP2)基因的表達(dá)譜。通過(guò)使用來(lái)自BioRad的已驗(yàn)證的PCR引物而進(jìn)行定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)，MetAP2基因在外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)在CRC患者(A17和A19)和健康受試者(C27和C4)中被測(cè)定。這些引物是MetAP2特異性的。MetAP2基因在CRC患者中的表達(dá)約為健康受試者的兩倍。

具體實(shí)施方式

除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有相同的含義，如本發(fā)明所屬于的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的那樣。雖然，與本文所述的那些相似或等同的任何方法和材料都可用于本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中，優(yōu)選的方法和材料現(xiàn)在被進(jìn)行詳細(xì)描述。下文所提到的所有公開(kāi)文本均通過(guò)引用而被并入本文。

我們之前的研究表明，NMT被過(guò)表達(dá)并且在CRC患者的外周血單核細(xì)胞(PBMC)中是活躍過(guò)度的。NMT以NMT1和NMT2存在。最近，我們已經(jīng)證明了，與健康對(duì)照受試者相比，其實(shí)是NMT2亞型在CRC患者的PBMC中過(guò)表達(dá)。我們的興趣是發(fā)現(xiàn)，此改變的NMT2在CRC患者的PBMC中的過(guò)表達(dá)是否也與MetAP2表達(dá)的改變相關(guān)，由于它是NMT2的上游目標(biāo)。我們的目標(biāo)是研究MetAP2在CRC患者的外周血和PBMC中的表達(dá)，并研究其是否能用作CRC篩查、診斷或預(yù)后的標(biāo)記物。

為了研究MetAP2在CRC患者的PBMC中的表達(dá)水平，一種已驗(yàn)證的單克隆抗-MetAP2抗體(可購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)的圣克魯斯生物技術(shù)有限公司)被用于確定MetAP2表達(dá)譜。免疫組織化學(xué)(IHC)技術(shù)被用于確定MetAP2在CRC患者的外周血涂片中的表達(dá)。IHC分析不僅提供了MetAP2表達(dá)方面的信息，而且實(shí)現(xiàn)了MetAP2在該血涂片里的各種細(xì)胞中的定位。IHC分?jǐn)?shù)或者H分?jǐn)?shù)被給予MetAP2在來(lái)自CRC患者的外周血涂片中的表達(dá)水平，并且與來(lái)自健康的對(duì)照受試者的血涂片相比較。IHC分?jǐn)?shù)通過(guò)強(qiáng)度(以0-3等級(jí)劃分)與陽(yáng)性細(xì)胞百分比(0-100％)相乘而被計(jì)算出來(lái)，所以得出最小的IHC＝0而最大的IHC＝300。我們的研究揭示了MetAP2在非腫瘤組織中與健康受試者相比的過(guò)表達(dá)，所述非腫瘤組織例如為CRC患者的外周血，PBMC，中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。

因此，其能夠用作CRC的篩查、診斷或預(yù)后的生物標(biāo)記物，正如本文所討論的那樣。

使用IHC技術(shù)以評(píng)估MetAP2在CRC腫瘤組織中的表達(dá)已被早期的研究所實(shí)施。MetAP2顯示了在來(lái)自CRC患者的息肉里的中度染色，表明了以下事實(shí)：作為分子事件的一部分的MetAP2是上調(diào)的，所述分子事件發(fā)生在結(jié)腸組織的惡性形成期間[15]。Tucker等人[26]也使用IHC技術(shù)以確定MetAP2在結(jié)腸直腸腫瘤樣品的惡性腺瘤中的表達(dá)，并且他們的研究顯示了MetAP2中至強(qiáng)的染色。

本研究是顯示了MetAP2在CRC患者的外周血，中性粒細(xì)胞，PBMC和淋巴細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)的第一次調(diào)查研究。

我們還調(diào)查了外周血細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞的類(lèi)型，其顯示出強(qiáng)度染色的模式。我們研究的結(jié)果表明，MetAP2在來(lái)自CRC患者的外周血的淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中顯示出陽(yáng)性的染色。在我們的研究中，如本文所述，我們通過(guò)提供IHC分?jǐn)?shù)量化了MetAP2的表達(dá)，

如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的，MetAP2在CRC患者的外周血和PBMC中的過(guò)表達(dá)是令人驚訝的。MetAP2在如外周血等非腫瘤組織或如PBMC、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等免疫反應(yīng)細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)建立了其在CRC發(fā)病和發(fā)展方面的潛在作用。盡管不希望受到特定理論或假設(shè)的約束，值得注意的是，鑒于以下事實(shí)：PBMC通常由70％T細(xì)胞組成，有可能的是，MetAP2在CRC患者的PBMC中高比例的過(guò)表達(dá)意味著在大量的潛在不同抗原特異性的T細(xì)胞中而非只特異于CRC的T細(xì)胞中的這種酶的過(guò)表達(dá)。MetAP2在CRC驅(qū)動(dòng)的克隆擴(kuò)增的CRC特異性T細(xì)胞中專(zhuān)有地過(guò)表達(dá)，可能不是最受歡迎的情況，雖然這種可能性目前不能排除。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種篩查結(jié)腸直腸癌(CRC)的方法，包括：

檢測(cè)甲硫氨酸氨肽酶2(MetAP2)在非腫瘤樣品中的水平，所述非腫瘤樣品來(lái)自存在發(fā)展為CRC風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體或者有患CRC風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體；并且

確定MetAP2水平是否高于閾值，

其中，高于閾值的MetAP2水平指示該個(gè)體被用于CRC檢查，

例如，可以進(jìn)一步對(duì)該個(gè)體進(jìn)行CRC篩查，或者可實(shí)施額外的測(cè)試以確認(rèn)該個(gè)體患有CRC。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種篩查結(jié)腸直腸癌(CRC)的方法，包括：

檢測(cè)甲硫氨酸氨肽酶2(MetAP2)在非腫瘤樣品中的水平，所述非腫瘤樣品來(lái)自存在發(fā)展為CRC風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體或者有患CRC風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體；并且

確定MetAP2水平是否高于閾值，

其中，高于閾值的MetAP2水平指示該個(gè)體患有CRC。

在一些實(shí)施例中，非腫瘤樣品為外周血、中性粒細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞(PBC)和/或淋巴細(xì)胞。

在一些實(shí)施例中，所述閾值對(duì)應(yīng)于一個(gè)健康個(gè)體的MetAP2水平。如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的，此對(duì)照水平不需要每次都確定或重復(fù)。

具有發(fā)展為結(jié)腸直腸癌風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體可以是年齡超過(guò)50歲的任何個(gè)體和/或可以是具有結(jié)腸直腸癌家族史的個(gè)體或者被認(rèn)為具有較高可能性發(fā)展為此疾病的個(gè)體。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的，此方法可被用于篩查具有高于閾值水平的MetAP2水平的個(gè)體和結(jié)果為其應(yīng)該用其他嚴(yán)格的方法進(jìn)行結(jié)腸直腸癌檢查的個(gè)體。然而，所述方法也可被用于根據(jù)其外周血樣品或外周血單核細(xì)胞中的MetAP2水平診斷或識(shí)別具有結(jié)腸直腸癌的個(gè)體。

類(lèi)似地，所述方法可被用于結(jié)腸直腸癌的預(yù)后，以特別高的MetAP2水平，可以指示特別侵襲性的癌癥階段。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的，用于結(jié)腸直腸癌的篩查外周血樣品的能力表示出相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的顯著改善，其正如本文所述，現(xiàn)有技術(shù)往往遭受低的依從率。具體地，篩查外周血樣品的能力意味著可在為高血脂、糖尿病以及其它疾病所進(jìn)行的日常或年度血液檢測(cè)過(guò)程中篩查個(gè)體的結(jié)腸直腸癌。

用于篩查個(gè)體患有CRC或有發(fā)展為CRC風(fēng)險(xiǎn)的血液中生物標(biāo)記物的識(shí)別是有吸引力的，由于其不但會(huì)提升依從率，而且會(huì)降低診斷后生活似是而非的惡化。如上所述，MetAP2已被研究并已在實(shí)體瘤組織中得到了識(shí)別；然而，之前并沒(méi)有MetAP2在人血液中存在方面的報(bào)道。對(duì)MetAP2在造血中的重要作用的報(bào)道已在斑馬魚(yú)模型中得到證實(shí)[28]；然而，之前并沒(méi)有研究報(bào)道過(guò)人血細(xì)胞或任何血細(xì)胞前體或者它們的血系中的MetAP。本文是證明MetAP2存在于人外周血，PBMC，嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞(特別是T淋巴細(xì)胞)中的首次報(bào)道。

MetAP2也被證明是造血干細(xì)胞啟動(dòng)和增殖所必需的[28]。作者證明了，通過(guò)使用煙曲霉素治療和嗎啉代基因敲除，MetAP2活性能夠顯著減少斑馬魚(yú)發(fā)育中確定的造血和擾動(dòng)的血管生成。研究還發(fā)現(xiàn)這些處理方法減少了造血干內(nèi)的MetAP2水平和在富集的CD34+細(xì)胞中的祖細(xì)胞(HSPC)活性，這表明MetAP2在造血方面的重要作用。從這些觀察結(jié)果，可以得出以下結(jié)論：MetAP2可在維持HSPC活性中發(fā)揮細(xì)胞自主作用。MetAP2在血細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)可表明造血細(xì)胞中的MetAP2活性/表達(dá)在CRC中被改變并且在外周血和/或PBMC中是反映的。然而，HSPC中在MetAP2活性/表達(dá)方面改變的可能性是CRC的發(fā)展和/或進(jìn)展不能排除的原因。

以前的研究調(diào)查了人結(jié)腸癌細(xì)胞系中的NMT和MetAP2之間的關(guān)系。Colo320、Colo201和Colo205中高水平的NMT和MetAP2由Selvakumar等人所觀察到[24]。酶的表達(dá)和活性隨細(xì)胞密度而變化(培養(yǎng)皿中細(xì)胞的匯合或細(xì)胞數(shù))。對(duì)于NMT和MetAP，更高的酶活性和表達(dá)在低細(xì)胞密度(10％)下被觀察到，而Src表達(dá)水平在低密度細(xì)胞中大大降低。該結(jié)果被解釋為一種指示，作為分子事件的早期階段的一部分的NMT和MetAP上調(diào)，所述分子事件發(fā)生在癌蛋白的過(guò)度產(chǎn)生期間。

并沒(méi)有MetAP2在血液中表達(dá)方面的報(bào)道。我們的研究顯示，MetAP2血液中的表達(dá)可作為一種新的潛在分子標(biāo)記物，用于以驗(yàn)血的形式篩查CRC。用于CRC檢測(cè)的驗(yàn)血還可相較于現(xiàn)有的非特異性測(cè)試提升依從率。

來(lái)自8個(gè)癌癥患者和7個(gè)健康個(gè)體的外周血樣品的PBMC對(duì)MetAP2染色。結(jié)果分別列于表1和表2中。如淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等PBMC里的不同類(lèi)型的細(xì)胞沒(méi)有差別評(píng)分，這些分?jǐn)?shù)僅代表所有PBMC以及中性粒細(xì)胞的平均值。

對(duì)來(lái)自CRC患者與對(duì)照患者的樣品的血液實(shí)施IHC分?jǐn)?shù)的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。對(duì)于CRC患者(平均值＝205，標(biāo)準(zhǔn)偏差＝57.56983)和健康對(duì)照(平均值＝8.57，標(biāo)準(zhǔn)偏差＝3.78)的IHC分?jǐn)?shù)的顯著差異，t＝6.27×10^-7，p＜0.001被觀察到。來(lái)自CRC患者的血液樣品中的MetAP2的IHC分?jǐn)?shù)表明相對(duì)于健康對(duì)照24倍之高的表達(dá)。

以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)該實(shí)施例進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

參考文獻(xiàn)：

1.Canadian Cancer Society's Steering Committe on Statistics.Canadian Cancer Statistics 2012.2012。

2.Manitoba CC:Cancer in Manitoba:Incidence and Mortality Annual Stastical Report2004:1-67。

3.Anonymous:Population screening for colorectal cancer.Drug and Therapeutics Bulletin 2006,44:65-68。

4.Canadian Cancer Society's Steering Committee.2010.Canadian Cancer Statistics2010.2010:1-127。

5.Colorectal cancer screening.Recommendation statement from the Canadian Task Force on Preventive Health Care.CMAJ 2001,165(2):206-208。

6.Colorectal cancer screening.Recommendation statement from the Canadian task force on preventive health care.Can Fam Physician 2001，47:1811-1813，1815。

7.Winawer S,Fletcher R,Rex D,Bond J,Burt R,Ferrucci J,Ganiats T,Levin T,Woolf S,Johnson D et al:Colorectal cancer screening and surveillance:clinical guidelines and rationale-Update based on new evidence.Gastroenterology 2003,124(2):544-560。8.Moayyedi P:Colorectal cancer screening lacks evidence of benefit.Cleve Clin J Med 2007,74(8):545,549-550,552passim。

9.Nicholson FB,Barro JL,Atkin W,Lilford R,Patnick J,Williams CB,Pignone M,Steele R,Kamm MA:Review article:Population screening for colorectal cancer.Aliment Pharmacol Ther 2005,22(11-12):1069-1077。

10.Rabeneck L,Tinmouth JM,Paszat LF,Baxter NN,Marrett LD,Ruco A,Lewis N,Gao J:Ontario's ColonCancerCheck:Results from Canada's First Province-Wide Colorectal Cancer Screening Program.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2014,23(3):508-515。

11.Baxter NN,Goldwasser MA,Paszat LF,Saskin R,Urbach DR,Rabeneck L:Association of colonoscopy and death from colorectal cancer.Ann Intern Med 2009,150(1):1-8。

12.Duffy MJ,van Dalen A,Haglund C,Hansson L,Klapdor R,Lamerz R,Nilsson O,Sturgeon C,Topolcan O:Clinical utility of biochemical markers in colorectal cancer:European Group on Tumour Markers(EGTM)guidelines.Eur J Cancer 2003,39(6):718-727。

13.Ouyang DL,Chen J J,Getzenberg RH,Schoen RE:Noninvasive testing for colorectal cancer:a review.Am J Gastroenterol 2005,100(6):1393-1403。

14.Selvakumar P,Lakshmikuttyamma A,Shrivastav A,Das SB,Dimmock JR,Sharma RK:Potential role of N-myristoyltransferase in cancer.Prog Lipid Res 2007,46(1):1-36。

15.Selvakumar P,Lakshmikuttyamma A,Dimmock JR,Sharma RK:Methionine aminopeptidase 2 and cancer.Biochim Biophys Acta 2006,1765(2):148-154。

16.Mauriz JL,Martin-Renedo J,Garcia-Palomo A,Tunon MJ,Gonzalez-Gallego J:Methionine aminopeptidases as potential targets for treatment of gastrointestinal cancers and other tumours.Curr Drug Targets 2010,11(11):1439-1457。

17.Leszczyniecka M,Bhatia U,Cueto M,Nirmala NR,Towbin H,Vattay A,Wang B,Zabludoff S,Phillips PE:MAP1 D,a novel methionine aminopeptidase family member is overexpressed in colon cancer.Oncogene 2006,25(24):3471-3478。

18.Datta B,Chakrabarti D,Roy AL,Gupta NK:Roles of a 67-kDa polypeptide in reversal of protein synthesis inhibition in heme-deficient reticulocyte lysate.Proc Natl Acad Sci USA 1988,85(10):3324-3328。

19.Ray MK,Datta B,Chakraborty A,Chattopadhyay A,Meza-Keuthen S,Gupta NK:The eukaryotic initiation factor 2-associated 67-kDa polypeptide(p67)plays a critical role in regulation of protein synthesis initiation in animal cells.Proc Natl Acad Sci USA 1992,89(2):539-543。

20.Boxem M,Tsai CW,Zhang Y,Saito RM,Liu JO:The C.elegans methionine aminopeptidase 2 analog map-2 is required for germ cell proliferation.FEBS Lett 2004,576(1-2):245-250。

21.Griffith EC,Su Z,Turk BE,Chen S,Chang YH,Wu Z,Biemann K,Liu JO:Methionine aminopeptidase(type 2)is the common target for angiogenesis inhibitors AGM-1470 and ovalicin.Chem Biol 1997,4(6):461-471。

22.Chun E,Han CK,Yoon JH,Sim TB,Kim YK,Lee KY:Novel inhibitors targeted to methionine aminopeptidase 2(MetAP2)strongly inhibit the growth of cancers in xenografted nude model.Int J Cancer 2005,114(1):124-130。

23.Sin N,Meng L,Wang Q,Wen JJ,Bornmann WG,Crews CM:The anti-angiogenic agent fumagillin covaiently binds and inhibits the methionine aminopeptidase,MetAP-2.Proc Natl Acad Sci USA 1997,94(12):6099-6103。

24.Selvakumar P,Lakshmikuttyamma A,Lawman Z,Bonham K,Dimmock JR,Sharma RK:Expression of methionine aminopeptidase 2,N-myristoyltransferase,and N-myristoyltransferase inhibitor protein 71 in HT29.Biochem Biophys Res Commun 2004,322(3):1012-1017。

25.Sheen IS,Jeng KS,Jeng WJ,Jeng CJ,Wang YC,Gu SL,Tseng SY,Chu CM,Lin CH,Chang KM:Fumagillin treatment of hepatocellular carcinoma in rats:an in vivo study of antiangiogenesis.World J Gastroenterol 2005,11(6):771-777。

26.Tucker LA,Zhang Q,Sheppard GS,Lou P,Jiang F,McKeegan E,Lesniewski R,Davidsen SK,Bell RL,Wang J:Ectopic expression of methionine aminopeptidase-2 causes cell transformation and stimulates proliferation.Oncogene 2008,27(28):3967-3976。

27.Kanno T,Endo,H.,Takeuchi,K.,Morishita,Y.,Fukayama,M.,Mori,S.:High expression of methionine aminopeptidase type 2 in germinal center B cells and their neoplastic counterparts.Laboratory Investigation 2002,82:893-901。

28.Ma AC,Fung TK,Lin RH,Chung Ml,Yang D,Ekker SC,Leung AY:Methionine aminopeptidase 2 is required for HSC initiation and proliferation.Blood 2011，118(20):5448-5457。