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融合蛋白二硫鍵配對(duì)分析方法與流程

文檔序號(hào):11824159閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種融合蛋白二硫鍵配對(duì)分析方法,依次包括如下步驟:1)、去除融合蛋白的N-糖;2)、對(duì)除去N-糖的融合蛋白進(jìn)行變性處理;3)、在非還原條件下使用特異性酶酶解變性處理后的融合蛋白;4)、將酶解后的所述融合蛋白分成兩份樣品,對(duì)其中一份樣品進(jìn)行還原,對(duì)另一份樣品不進(jìn)行還原,兩份樣品均終止酶解;5)、對(duì)終止酶解后的樣品的二硫鍵肽段進(jìn)行質(zhì)量肽譜圖分析。

2.如權(quán)利要求1所述的方法,其中,步驟1)中使用肽N-糖苷酶F去除所述融合蛋白的N-糖。

3.如權(quán)利要求1所述的方法,其中,步驟2)中使用鹽酸胍溶液對(duì)去除了N-糖的融合蛋白進(jìn)行變性處理。

4.如權(quán)利要求1所述的方法,其中,步驟3)中所述特異性酶包括胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶。

5.如權(quán)利要求1所述的方法,其中,步驟5)中使用ESI-Q-TOF MS方法進(jìn)行分析。

6.如權(quán)利要求4所述的方法,其中,胰蛋白酶﹕融合蛋白為1﹕25(wt/wt)。

7.如權(quán)利要求4所述的方法,其中,胰凝乳蛋白酶﹕融合蛋白為1﹕50(wt/wt)。

8.如權(quán)利要求4所述的方法,其中,特異性酶酶解變性后的融合蛋白孵育時(shí)間為4小時(shí),孵育溫度為37℃。

9.如權(quán)利要求5所述的方法,其中,所述ESI-Q-TOF MS分析采用以下方法實(shí)現(xiàn):將融合蛋白肽段樣品用50mM NH4HCO3,pH8.0溶液稀釋至1.5-2mg/mL;然后使用色譜柱分離,進(jìn)行Q-TOF質(zhì)譜分析。

10.如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述融合蛋白是rhCTLA4-Ig。

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