碳量子點標記抗體為示蹤物的雙抗原競爭法快檢試紙條的制作方法
【專利摘要】本實用新型提供一種碳量子點標記抗體為示蹤物的雙抗原競爭法快檢試紙條，包括依次排布的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水部，所述結合物墊為涂覆有碳量子點標記的，檢測目標物特異性抗體的纖維素膜；所述硝酸纖維素膜上依次包被有，能與以碳量子點標記的抗體特異結合的抗原或半抗原，和能與以碳量子點標記的抗體特異結合的第二抗體。本實用新型所提供的試紙條，可定性或定量檢測待檢樣品中的抗原（半抗原），提高了現(xiàn)有免疫層析快檢方法和技術的敏感性，可應用于多種抗原或半抗原的快速、高靈敏的檢測。
【專利說明】碳量子點標記抗體為示蹤物的雙抗原競爭法快檢試紙條
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種基于以碳量子點標記抗體為示蹤物建立的雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的快檢試紙條。
【背景技術】
[0002]免疫層析方法是一種快速診斷技術，具有攜帶方便、操作簡便、成本低廉的特點，目前最為常見的是膠體金試紙條，其一般可以在15分鐘內(nèi)讀取檢測結果，但該試紙條的靈敏度一般在納克級，相對較低，并且制作工藝復雜，穩(wěn)定性和重復性差。以碳量子點標記為示蹤物的免疫層析快檢是將具有高靈敏度的碳量子標記技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。碳量子點免疫分析技術具有靈敏度高、快速、準確、重復性好等優(yōu)點。如何能夠發(fā)揮試紙條現(xiàn)場快速檢測的優(yōu)勢，同時提高檢測的靈敏度，并對抗原或者抗體的濃度做定量分析，這些都是免疫層析檢測領域技術人員迫切需要解決的問題。
實用新型內(nèi)容
[0003]為了解決現(xiàn)有技術中存在的上述技術問題，本實用新型提出一種一種基于以碳量子點標記抗體為示蹤物建立的雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的快檢試紙條及其應用，本發(fā)明還涉及雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的方法。
[0004]本實用新型涉及一種以碳量子點標記抗體為示蹤物建立的雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的快檢試紙條。該試紙條包括依次排布的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水部，該結合物墊為涂覆有碳量子點標記的，檢測目標物特異性抗體的纖維素膜；該硝酸纖維素膜上依次包被有能與以碳量子點標記的抗體特異結合的抗原或半抗原(T線)和能與以碳量子點標記的抗體特異結合的第二抗體(C線)。
[0005]具體來講，該結合物墊為涂覆有碳量子點標記的，檢測目標物特異性抗體的玻璃纖維素膜；所述檢測目標物是指黃曲霉毒素抗原；所述檢測目標物特異性抗體是指黃曲霉毒素抗體。
[0006]本實用新型所提供的試紙條，可定性或定量檢測待檢樣品中的抗原或半抗原或，提高了現(xiàn)有免疫層析快檢方法和技術的敏感性，可應用于多種抗原或半抗原的快速、高靈敏的檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1本實用新型所提供試紙條的示意圖。
[0008]圖中:1:加樣區(qū)，2:觀測區(qū)，3:T線，4:C線，5:卡殼。
【具體實施方式】
[0009]下面結合附圖和具體實施例對本實用新型作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本實用新型并能予以實施，但所舉實施例不作為對本實用新型的限定。
[0010]本實用新型所使用的所有材料，包括抗原和抗體，都是現(xiàn)有技術中已經(jīng)存在，本領域技術人員根據(jù)現(xiàn)有技術能夠獲得的材料。本領域技術人員基于實施本實用新型目的需要，也可以從 申請人:處獲得這些材料。本實用新型的發(fā)明點在于這些現(xiàn)有技術在試紙條中的布局關系。
[0011]本實用新型所提供的基于以碳量子點標記抗體為示蹤物建立的雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的快檢試紙條，其制備方法簡述如下:
[0012]在聚氯乙烯(PVC)膠板上順次相互搭接貼上樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙。將PVC膠板及其貼附的材料切割成4_寬度的層析試紙條。裝入卡殼內(nèi)，卡殼上開窗口，分為加樣區(qū)和發(fā)光區(qū)。樣品墊位于加樣區(qū)，硝酸纖維素膜位于發(fā)光區(qū)。
[0013]本實用新型提供用于以碳量子點標記抗體為示蹤物建立的雙抗原競爭法檢測待檢樣品中抗原或半抗原的快檢試紙條，所述樣品墊為纖維素膜；所述結合物墊為涂覆有以碳量子點標記的，檢測目標物抗體的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜上包被有兩條線，分別為T線，即能與碳量子點標記抗體特異結合的抗原或半抗原，也就是與檢測目標物相同的抗原或半抗原；C線，即能與碳量子點標記抗體特異結合的第二抗體。
[0014]本實用新型所提供試紙條的應用示例如下:
[0015]本實用新型所提供試紙條，在加樣區(qū)上加入待檢樣品后，如果待檢樣品中含有與碳量子點標記的抗體特異結合的抗原或半抗原，則形成復合物，在虹吸作用下向試紙條的另一端方向運動，運動到硝酸纖維素膜上，被膜上包被的抗原或半抗原(與檢測目標物相同)競爭結合、滯留(T線)，在此處形成發(fā)光的條帶，待檢樣品中抗原或半抗原的含量越高發(fā)光反應越弱；反之則越強。在C線處出現(xiàn)發(fā)光條帶，則表明該檢測系統(tǒng)的檢測結果有效；若C線處沒有發(fā)光條帶，則表明該檢測系統(tǒng)失效，檢測結果判定為無效。
[0016]繪制檢測目標物的濃度與碳量子點發(fā)光的光強標準曲線，可以對待檢樣品中抗原或半抗原濃度做定量分析。
[0017]使用本實用新型所提供試紙條進行特異性抗原或半抗原的檢測，其靈敏度可以達到500pg/ml。該試紙條易于制備，使用方便快捷，將普通免疫檢測由幾小時縮短到幾分鐘，而靈敏度卻要高于一般膠體金試紙條的和現(xiàn)有技術公開的化學發(fā)光試紙條。本實用新型所提供的試紙條可廣泛應用于各種生物抗原或半抗原的檢測。
[0018]檢測試紙條的制備:
[0019]1、將能與待檢抗原或半抗原特異性結合的抗體用碳二亞胺(EDC)方法鏈接到碳量子點(CNP)上，分離、純化后稀釋至工作濃度，涂于玻璃纖維結合物墊上，37度干燥2小時后備用。
[0020]2、將能與蛋白質(zhì)特異結合的硝酸纖維素膜粘附到PVC膠板的中間位置上備用。
[0021]3、采用三維平面劃膜儀將所需要的T線抗原、C線抗體，分別按照濃度為0.2?
0.5mg/mL左右包被在硝酸纖維素膜上。儀器參數(shù)設置為I微升/厘米，T線和C線的寬度間隔為4毫米；37度2小時備用。
[0022]4、按順序分別將樣品墊，結合物墊粘附到PVC膠板上硝酸纖維素膜的一端，再將吸水紙粘附到PVC膠板上硝酸纖維素膜上的另一端；在切條機上將PVC膠板及其貼附的材料切成4_寬度的層析試紙條備用。[0023]5、將切割好的試紙條，裝在卡殼內(nèi)，卡殼上開有加樣區(qū)和發(fā)光區(qū)，樣品墊對準加樣區(qū)，T線和C線區(qū)域?qū)拾l(fā)光區(qū)。
[0024]6、將組裝好的試紙條裝在鋁箔袋中密封常溫保存，備用。
[0025]抗原檢測
[0026]具體操作步驟如下:
[0027]滴加3滴樣品(100 μ I)于加樣孔(樣品墊)中，10分鐘之后進行測量。
[0028]結果判斷:
[0029]當T線和C線均發(fā)光時，根據(jù)T線發(fā)光的強度判斷檢測目標物的濃度大小。
[0030]當C線處未顯示出發(fā)光條帶時表明該檢測系統(tǒng)無效。
[0031]繪制被檢測物的濃度與碳量子點發(fā)光的光強標準曲線，可以對待檢樣品中抗原或半抗原濃度做定量分析。
[0032]實施例1:黃曲霉毒素BI的檢測
[0033]試紙條的制備如下:
[0034]1、將抗黃曲霉毒素B1抗體用碳二亞胺(EDC)方法鏈接到碳量子點(CNP)上，分離、純化后稀釋至工作濃度，涂于玻璃纖維結合物墊上，37度干燥2小時后備用；
[0035]2、將樣品墊、CNP-Ab結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙按照順序，依次相互搭接貼在PVC膠板上；
[0036]3、采用三維平面劃膜儀將所要包被的T和C線的抗體，按照濃度為0.2?0.5mg/mL包被在硝酸纖維素膜上，T線為與碳量子點標記抗體相結合的抗原，C線為與碳量子點標記抗體特異結合的第二抗體，儀器參數(shù)設置為I微升/厘米，C和T線的寬度間隔為4毫米；
[0037]4、將PVC膠板及其貼附的材料切成4mm寬度的層析試紙條；
[0038]5、將切割好的試紙條，裝在卡殼內(nèi)，卡殼上開有加樣區(qū)和顯色區(qū)，樣品墊對準加樣區(qū)，T線和C線區(qū)域?qū)曙@色區(qū)；
[0039]6、將組裝好的試紙條裝在鋁箔袋中，內(nèi)裝一個干燥劑和滴管，進行密封常溫保存。
[0040]本實用新型所提供試紙條用于檢測黃曲霉毒素BI
[0041]具體操作步驟如下:
[0042](I):將待檢樣品(食用油、花生、奶粉等食品)適量，用氯仿、乙醇萃取后，在含有乙醇:水(2:8)的溶液中進行試驗。
[0043](2):滴加3滴實際樣品100 μ I于加樣孔中，10分鐘之后，放置于蛋白凝膠成像儀上進行讀出。
[0044]結果判斷:
[0045]T線出的抗原或半抗原和待檢樣品中的抗原或半抗原，與量子點標記的抗體競爭結合，樣品中待檢測抗原或半抗原的含量越高，T線發(fā)光就越弱，反之就越強。
[0046]C線發(fā)光表示實驗有效，C線不發(fā)光表示實驗無效。
[0047]測量、繪制出標準曲線并計算出待檢樣品的實際含量。
[0048]黃曲霉毒素BI標準溶液的配制是將黃曲霉毒素B1首先溶解在甲醇溶液中，配制成10ng/mL甲醇溶液，然后用體積含量10%甲醇的磷酸緩沖溶液稀釋，稀釋后黃曲霉毒素 BI 溶液的濃度分別為 0ng/mL、0.lng/mL、0.3ng/mL、0.5ng/mL、l.0ng/mL、3.0ng/mL 和
5.0ng/mLo[0049]滴加3滴標準溶液100 μ L于加樣孔中，10分鐘之后，放置于蛋白凝膠成像儀上進行讀出，測定每個檢測卡的熒光光譜，記錄其最大熒光強度；再以熒光強度與黃曲霉毒素標準溶液的濃度為坐標繪制標準工作曲線。
[0050]滴加3滴未知濃度的黃曲霉毒素B1溶液100 μ L于加樣孔中，10分鐘之后，放置于蛋白凝膠成像儀上進行讀出，測定每個檢測卡的熒光光譜，記錄其最大熒光強度，得到樣品的最大熒光強度，然后通過繪制的標準工作曲線讀取樣品中黃曲霉毒素B1的濃度。
[0051]米用所制備的試紙條對黃曲霉毒素B1含量在15ng/mL以上的20份樣本和黃曲霉毒素B1含量在15ng/mL以下的20份樣本進行了檢測，符合率均為100%。
[0052]以上所述實施例僅是為充分說明本實用新型而所舉的較佳的實施例，本實用新型的保護范圍不限于此。本【技術領域】的技術人員在本實用新型基礎上所作的等同替代或變換，均在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。
【權利要求】
1.碳量子點標記抗體為示蹤物的雙抗原競爭法快檢試紙條，包括依次排布的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水部，其特征在于，所述結合物墊為涂覆有碳量子點標記的，檢測目標物特異性抗體的纖維素膜；所述硝酸纖維素膜上依次包被有，能與以碳量子點標記的抗體特異結合的抗原或半抗原，和能與以碳量子點標記的抗體特異結合的第二抗體。
2.權利要求1所述試紙條，其特征在于，所述結合物墊為涂覆有碳量子點標記的，檢測目標物特異性抗體的玻璃纖維素膜。
3.權利要求1所述試紙條，其特征在于，所述檢測目標物是指黃曲霉毒素抗原。
4.權利要求1所述試紙條，其特征在于，所述檢測目標物特異性抗體是指黃曲霉毒素抗體。
5.權利要求1-4任一項所述試紙條，其特征在于，所述試紙條還包括卡殼。
【文檔編號】G01N33/558GK203561637SQ201320682691
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權日:2013年10月31日
【發(fā)明者】侯淑霞, 王萬霞 申請人:北京玖佳宜科技有限公司