一種養(yǎng)心中藥制劑指紋圖譜的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種養(yǎng)心中藥組合物制劑指紋圖譜測定方法，該方法采用超高壓液相色譜法測定一種養(yǎng)心中藥組合物制劑的指紋圖譜，該方法符合藥物制劑質(zhì)量控制的要求，可有效控制該養(yǎng)心中藥組合物制劑的質(zhì)量。
【專利說明】一種養(yǎng)心中藥制劑指紋圖譜的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到一種中藥組合物制劑指紋圖譜的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]專利ZL02146572.X公開了一種治療冠心病室性早搏的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物由人參、麥冬、山茱萸、丹參、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、土鱉蟲、甘松、黃連、南五味子、龍骨組成，由于中藥成分非常復(fù)雜，制成制劑后，在進行產(chǎn)品質(zhì)量控制時，只有對盡量多的成分進行鑒別和含量的測定，才更有利于保證藥品的安全有效，質(zhì)量的穩(wěn)定可控。
[0003]超高效液相色譜(UPLC)是分離科學(xué)中的一個全新類別，UPLC借助于HPLC (高效液相色法)的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。
[0004]與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC具有高壓、高速、高靈敏度的特點。UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它縮短了分析時間，同時減少了溶劑用量降低了分析成本。
[0005]超高效液相色譜儀尤其對中藥研究領(lǐng)域的發(fā)展是一個極大的促進。中藥的組分復(fù)雜，分離困難等問題都可以通過超高效液相色譜法逐漸解決。在同樣條件下，UPLC能分離的色譜峰比HPLC多出一倍還多。在同樣條件下，UPLC的分辨率能夠認(rèn)出更多的色譜峰。
[0006]中藥指紋圖譜是指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥材特性的共有峰的圖譜。指紋圖譜應(yīng)該具備指紋性，即:(1)專屬性強。指所制訂的指紋圖譜應(yīng)該是該中藥所獨有的、能與其它中藥相區(qū)別的，其反映的化學(xué)信息是具有高度的選擇性的；(2)穩(wěn)定性好。即中藥的指紋圖譜應(yīng)該是從某中藥的多批次中歸納出的共性，圖譜中的共有峰或特征峰應(yīng)相對穩(wěn)定；(3)重現(xiàn)性好。所制訂的指紋圖譜在規(guī)定條件下應(yīng)能再現(xiàn)指紋特征(如共有峰數(shù)目、大小、位置等)，其誤差應(yīng)在允許的范圍內(nèi)。只有這樣，所制訂的指紋圖譜才具有實用價值，才可以有效控制藥品的質(zhì)量。
[0007]采用UPLC指紋圖譜方法控制藥品質(zhì)量具有靈敏、快速、簡便、準(zhǔn)確等特點，通過優(yōu)選色譜條件測定藥品制劑的指紋圖譜，可以很好控制藥品質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種中藥組合物制劑指紋圖譜測定方法，該中藥組合物制劑是由如下重量份的原料藥制成:人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲35-150份、甘松45-200份、黃連25-90份、南五味子35-150份、龍骨75-300份，
其特征在于該方法采用超高壓液相色譜法，色譜條件及測定方法如下:
色譜條件:色譜柱為C18柱，柱溫20-50°C，流速0.2-0.8ml.mirT1，檢測波長203nm，流動相B為乙腈，A為0.1%磷酸；梯度洗脫:0?2min，1%?1%B，2?7min，1%?10%B，7?9min，10% ?12%B，9 ?26min，12% ?28%B，26 ?36min，28% ?60%B，36 ?42min，60% ?80%B，42 ?45min，80% ?80%B ；
供試品溶液的配制:取所述中藥組合物制劑0.5 g，精密稱定，加入60-85%的甲醇50ml，稱重，超聲45-60min，放置室溫，稱重，用60-85%的甲醇補足重量，混勻后離心，移取上清液，0.22um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
測定法:精密吸取供試品溶液0.5-1.5 μ 1，注入超高壓液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。
[0009]本發(fā)明指紋圖譜測定方法色譜條件優(yōu)選如下:所述色譜柱為Acquity UPLC HSSΤ3 C18,規(guī)格為 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ;柱溫為 35°C ;流速為 0.4 ml.mirT1 ；
供試品溶液的配制:取所述中藥組合物制劑0.5g，精密稱定，加入80%的甲醇50ml，稱重，超聲50min，放置室溫，稱重，用80%的甲醇補足重量，混勻后在4500rpm離心15分鐘，移取上清液，0.22um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
測定法:精密吸取供試品溶液I μ 1，注入超高壓液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。
[0010]本發(fā)明指紋圖譜測定方法，還同時對芍藥苷、丹酚酸B、五味子酯甲進行了含量測定。其中，芍藥苷的檢測波長為230nm、丹酚酸B的檢測波長為286nm、五味子酯甲的檢測波長為221nm。
[0011]本發(fā)明中藥組合物制劑的指紋圖譜測定方法，適用的中藥組合物制劑原料藥的重量比例優(yōu)選為:
人參89份、麥冬112份、山茱萸224份、丹參224份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鱉蟲75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
[0012]或者優(yōu)選為:
人參45份、麥冬112份、山茱萸224份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
[0013]或者優(yōu)選為:
人參90份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150份、赤芍100份、土鱉蟲100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。
[0014]本發(fā)明中藥組合物的指紋圖譜測定方法中，該中藥組合物制劑的活性成分可由下列步驟制成:
a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，濃縮，烘干，粉碎成細(xì)粉；
b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過，濃縮成浸膏；
c)土鱉蟲粉碎成細(xì)粉；
d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮成浸膏；
e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟c)所得的藥物細(xì)粉，烘干，粉碎成細(xì)粉，加入步驟a)所得藥物細(xì)粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
[0015]本發(fā)明中藥組合物制劑的指紋圖譜測定方法中，適用該中藥組合物制劑的劑型優(yōu)選為片劑、膠囊劑、口服液或顆粒劑。
[0016]本發(fā)明中藥組合物制劑的指紋圖譜測定方法，適用的該中藥組合物膠囊劑的制備方法優(yōu)選為:
(I)、人參加8倍量70%乙醇回流提取三次，第一次3小時，以后每次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，烘干，粉碎成80目粉；
(2)、五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松加8倍量70%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過，回收乙醇；
(3)、土鰲蟲粉碎成80目粉；
(4)、麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水9倍量煎煮2次，合并提取液，濾過，與步驟(2)的提取液合并，濃縮，與步驟(1)、(3)粉混勻，烘干，粉碎成80目粉，裝膠囊即得。
[0017]上述中藥組合物的其他劑型按比例稱取原料藥后，采用常規(guī)的制備方法制備，例如，范碧亭《中藥藥劑學(xué)》(上海科學(xué)出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學(xué)可接受的常規(guī)劑型。
[0018]為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》，上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版中各劑型記載的輔料)。
[0019]本發(fā)明方法測定該中藥組合物指紋圖譜從多個方面評價該方法的可行性，評價方法如下:
1、儀器與試藥
美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower3色譜工作站(ACQUITY UPLC H CLASS) ;KQ5200B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);分析天平(AG135，METTLER TO- LED0)；LXJ-1I B低速大容量多管離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。
[0020]磷酸(色譜級，批號20120104，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；甲醇(分析純，批號20120110，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜級，F(xiàn)isher);實驗用水為超純水。
[0021]本發(fā)明中藥組合物膠囊劑由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供(按照實施例1的方法制備)，共十批(批號 Sl:1201005; 2，S2:1203031 ； S3:1101042 ； S4:1201002 ；S5:1106042 ； S6:1107006 ； S7:1106047 ；S8:1103003 ；S 9: 1111018 ;S10:1109017);丹酚酸 B (111562-201111)、芍藥苷(110736-201136)、五味子酯甲(111529-200604)均購于中國藥品生物制品鑒定所。
[0022]2 方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱為 Waters Acquity UPLC HSS T3 C18 (2.1 mmXIOO mm，1.8 um)，柱溫 35 °C,流速0.4ml.min—1，檢測波長203 nm，進樣1 ul，流動相B為乙腈，A為0.1%磷酸，梯度洗脫:O ~2min，1% ~1%B，2 ~7min，1% ~10%B，7 ~9min，10% ~12%B，9 ~26min，12% ~28%B，26 ~36min，28% ~60%B，36 ~42min，60% ~80%B，42 ~45min，80% ~80%B。
[0023]2.2對照品溶液制備
采用外標(biāo)法，稱取芍藥苷適量，精密稱定，用25%甲醇配制成芍藥苷濃度為0.15mg.mr1的溶液；稱取丹酚酸B適量，精密稱定，用水配制成丹酚酸B濃度為0.6 mg.mF1的溶液；稱取五味子酯甲適量，精密稱定，用甲醇配制成濃度為0.05 mg.mr1的溶液。
[0024]2.3供試品溶液制備
取本發(fā)明藥物組合物膠囊內(nèi)容物0.5g，精密稱定，加入80%的甲醇50ml，稱重，超聲50min,放置室溫,稱重,用80%的甲醇補足重量,混勻后在4500rpm離心15分鐘,移取上清液，0.22um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
[0025]2.4方法學(xué)考察
2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系
茍藥苷(0.15 mg.mr1)、丹酹酸B (0.6 mg.mr1)、五味子酯甲(0.05 mg.mr1)被分別稀釋成一系列濃度，UPLC分析，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，濃度(X)為橫坐標(biāo)，得到3個標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0026]表1 線性方程和線性范圍
【權(quán)利要求】
1.一種中藥組合物制劑指紋圖譜測定方法，該中藥組合物制劑是由如下重量份的原料藥制成:人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲35-150份、甘松45-200份、黃連25-90份、南五味子35-150份、龍骨75-300份，其特征在于該方法采用超高壓液相色譜法，色譜條件及測定方法如下: 色譜條件:色譜柱為C18柱，柱溫20-50 °C，流速0.2-0.8 ml.mirT1，檢測波長201-205nm，流動相B為乙腈，A為0.1%磷酸；梯度洗脫:0~2min, 1%~1%B，2~7min，1% ~10%B, 7 ~9min, 10% ~12%B, 9 ~26min, 12% ~28%B, 26 ~36min, 28% ~60%B, 36 ~42min, 60% ~80%B, 42 ~45min, 80% ~80%B ； 供試品溶液的配制:取所述中藥組合物制劑0.5 g，精密稱定，加入60-85%的甲醇50ml，稱重，超聲45-60min，放置室溫，稱重，用60-85%的甲醇補足重量，混勻后離心，移取上清液，0.22um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液； 測定法:精密吸取供試品 溶液0.5-1.5 iil，注入超高壓液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述色譜柱為AcquityUPLCHSS T3 C18，規(guī)格為 2.1mmX 100mm, 1.8um ;柱溫為 35 °C ;流速為 0.4 ml.mirT1 ;檢測波長為203nm ； 供試品溶液的配制:取本發(fā)明藥物組合物制劑0.5g，精密稱定，加入80%的甲醇50ml，稱重，超聲50min,放置室溫,稱重,用80%的甲醇補足重量,混勻后在4500rpm離心15分鐘，移取上清液，0.22um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液； 測定法:精密吸取供試品溶液I U 1，注入超高壓液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。
3.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于同時對芍藥苷、丹酚酸B、五味子酯甲進行了含量測定，芍藥苷的檢測波長為230nm、丹酚酸B的檢測波長為286nm、五味子酯甲的檢測波長為221nm。
4.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑是由如下重量的原料藥制成: 人參89份、麥冬112份、山茱萸224份、丹參224份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鱉蟲75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
5.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑由下列重量的原料藥制成: 人參45份、麥冬112份、山茱萸224份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
6.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑由下列重量的原料藥制成: 人參90份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150份、赤芍100份、土鱉蟲100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。
7.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑的活性成分由下列步驟制成: a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，濃縮，烘干，粉碎成細(xì)粉；b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過，濃縮成浸膏；c)土鱉蟲粉碎成細(xì)粉；d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮成浸膏；e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟c)所得的藥物細(xì)粉，烘干，粉碎成細(xì)粉，加入步驟a)所得藥物細(xì)粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
8.如權(quán)利要求1或2所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑的劑型為片劑、膠囊劑、口服液或顆粒劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的指紋圖譜測定方法，其特征在于所述膠囊劑由以下步驟組成:(1)、人參加8倍量70%乙醇回流提取三次，第一次3小時，以后每次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，烘干，粉碎成80目粉；(2)、五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松加8倍量70%乙醇回流提取3次，第一次3小時，以后每次2小時，合并提取液，濾過，回收乙醇；(3)、土鱉蟲粉碎成80目粉；(4)、麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水9倍量煎煮2次，合并提取液，濾過，與步驟(2)的提取液合并，濃縮，與步驟(1)、(3)粉混勻，烘干，粉碎成80目粉，裝膠囊即得。
【文檔編號】G01N30/86GK103675168SQ201210329419
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月8日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月8日
【發(fā)明者】姜新剛, 李葉雙, 賈繼明, 宋劍, 蔡艷, 王貴金, 馬桂云 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司