專利名稱：一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒及其制備方法。
背景技術：
現(xiàn)有技術中的瓊脂糖凝膠電泳板的配置方法，其厚度往往超過3mm，不僅影響蛋白質遷移率，還影響染色效果，因為太厚染料不易滲透進去，蛋白質條帶往往形成空泡，對掃描定量結果直接造成影響；另外，脫色時間也很長。此外，超薄型瓊脂糖電泳膠板(厚度< Imm)，如通過齒狀加樣模具在膠板上留下凹槽來加樣會導致電泳膠板破損，無法使用。從而導致采用瓊脂糖凝膠電泳板不適用于分離血清蛋白類的診斷試劑盒，而使得現(xiàn)有產(chǎn)品中價格均較高。

發(fā)明內容
針對現(xiàn)有技術存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒及其制備方法。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案如下一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其包括一超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，其厚度< Imm ;—帯有等距微孔的加樣薄膜；染色剤。作為ー種優(yōu)選方案，所述超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板寬度與加樣薄膜寬度比為I I. I I. 5。作為進ー步優(yōu)選方案，所述微孔的數(shù)量為5 10個。作為進ー步優(yōu)選方案,所述微孔為長條形,長為2 7mm,寬0. 3 0. 8mm ;最佳為長 5mm,寬 0. Smnin作為進ー步優(yōu)選方案，所述染色劑為0. 1%氨基黑10B。制備上述超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，包括以下步驟d)制備超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，將I %的瓊脂糖用沸水浴融化后且冷卻至60°C左右，倒入長10cm、寬7cm,厚0. 8mm的塑料模板中，用一直尺或三角尺的ー邊將凝膠拉平，待凝固后，將ー裁成與膠板同樣大小的保險薄膜貼于凝膠板上，放置塑料盒中；e)制備加樣薄膜，取ー張教學用投影膠片，裁取長10cm，寬2cm的長條狀，在其中間位置用手術刀片刻制8個線狀排列的加樣微孔,微孔長5mm,寬0. 5mm,兩孔間隔3. 5mm ；f)放置染色劑，包裝。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明采用自制的塑料薄板作為模具，所制備的瓊脂糖板厚度為く 1mm，甚至可達0. 8mm，電泳通電順暢，染色時間縮短，且染色完全，脫色時間極短，蛋白質分離的分辨率很高，且與加樣薄膜配套使用點樣以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的鋸齒物理成孔后點樣，操作更簡便，且根據(jù)膠板寬度已預先配置相應的已刻制的長條狀微孔，加樣時，可將這膜緊貼于瓊脂糖膠板上，將血清點在各孔上，吸收幾分鐘后取掉即可，點樣效果極佳；通過試劑盒適用范圍實驗結果可知，本發(fā)明提供的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類可精確的檢測出白蛋白、a I-球蛋白、a 2-球蛋白、￠-球蛋白和Y-球蛋白。鑒于血清蛋白電泳圖譜是了解患者血清蛋白質全貌的有價值的方法，可用為初篩實驗。如急性炎癥或急性時相反應時常以a I、a 2區(qū)帶加深為特征；妊娠型a I區(qū)帶增高，伴有P區(qū)帶增高；腎病綜合征、慢性腎小球腎炎時呈現(xiàn)白蛋白下降，a 2、^球蛋白升高；缺鐵性貧血時可由于轉鐵蛋白的升高而呈現(xiàn)3區(qū)帶增高，而慢性肝病或肝硬變呈現(xiàn)白蛋白顯著降低，Y球蛋白升高2 3倍，示免疫球蛋白多克隆高，甚至可見P-Y橋，還可在Y區(qū)呈現(xiàn)細而密的寡克隆區(qū)??；單克隆免疫球蛋白異常癥(M蛋白血癥)則在電泳區(qū)帶區(qū)呈現(xiàn)致密而深染，高度集中的蛋白克隆增生區(qū)帶(M蛋白區(qū)帯)。因此，分析血清蛋白電泳分離圖譜，有助于對疾病的正確診斷，其應用前景十分廣闊。


圖I為本發(fā)明提供的制備超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板的模具示意圖；圖2為本發(fā)明提供的制備超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板與加樣薄膜配套使用時的示意圖；圖3為本發(fā)明提供的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒的結構示意圖。
具體實施例方式下面結合實施例及對比例對本發(fā)明作進ー步詳細、完整地說明。實施例I.制備超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒a)制備超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，將I %的瓊脂糖用沸水浴融化后且冷卻至60°C左右，倒入長10cm、寬7cm,厚0. 8mm的塑料模板(如圖I所示)中，用一直尺或三角尺的一邊將凝膠拉平，待凝固后，將ー裁成與膠板同樣大小的保險薄膜貼于凝膠板上，放置塑料盒中；b)制備加樣薄膜，取ー張教學用投影膠片，裁取長10cm，寬2cm的長條狀，在其中間位置用手術刀片刻制8個線狀排列的加樣微孔，微孔長5mm，寬0. 5mm，兩孔間隔3. 5mm(如圖2所示);c)放置染色劑，包裝。圖3為本發(fā)明提供的超薄型糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類試劑盒的結構示意圖，其中包括瓊脂糖凝膠板I、加樣膜2、染色劑3、厚度合適的海綿4和包裝盒5。2.試劑盒使用方法(I)取一超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，揭去表面膜放一旁待用，將加樣膜條根據(jù)點樣位置緊貼于膠板表面，要求無氣泡。(2)點樣取患者血清各3 U I點樣于孔中，等待3分鐘以使血清吸收。(3)電泳點樣端接負極，電壓150V電泳30min。
(4)染色將膠板鋪于平皿內，吸2mL染色劑加于膠板上，將前面的表面膜鋪于其上，染色15min。(5)將膜棄去，膠板用脫色液(根據(jù)說明書自配)浸泡，直至背景透明。(6)掃描用掃描儀定量各蛋白質條帶百分比。3.試劑盒性能檢測3. I待檢血清蛋白白蛋白a I-球蛋白a 2-球蛋白 球蛋白Y-球蛋白3. 2精密度試驗3. 2. I批內精密度試驗取一血清在同張凝膠板上點樣8份，電泳后掃描求得結果。分別計算均值(X)，標準差(S)，變異系數(shù)(CV)。如表I所示。表I批內精密度試驗結果
權利要求
1.一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于，它包括一超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，其厚度< Imm ;—帶有等距微孔的加樣薄膜；染色劑。
2.根據(jù)權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于所述超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板寬度與加樣薄膜寬度比為I : I. I I. 5。
3.根據(jù)權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于所述微孔的數(shù)量為5 10個。
4.根據(jù)權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于所述微孔為長條形，長為2 7mm,寬0. 3 0. 8mm。
5.根據(jù)權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于所述染色劑為0. 1%氨基黑10B。
6.根據(jù)權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，其特征在于它還包括一包裝盒。
7.制備權利要求I所述的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，包括以下步驟 a)制備超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，將I%的瓊脂糖用沸水浴融化后且冷卻至60°C左右，倒入長10cm、寬7cm，厚0. 8mm的塑料模板中，用一直尺或三角尺的一邊將凝膠拉平，待凝固后，將一裁成與膠板同樣大小的保險薄膜貼于凝膠板上，放置塑料盒中； b)制備加樣薄膜，取一張教學用投影膠片，裁取長10cm，寬2cm的長條狀，在其中間位置用手術刀片刻制8個線狀排列的加樣微孔,微孔長5mm,寬0. 5mm,兩孔間隔3. 5mm ； c)放置染色劑，包裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類診斷試劑盒，它包括一超薄瓊脂糖凝膠電泳膠板，其厚度＜1mm；一帶有等距微孔的加樣薄膜；染色劑。本發(fā)明采用自制的塑料薄板作為模具，所制備的瓊脂糖板厚度為＜1mm，甚至可達0.8mm，電泳通電順暢，染色時間縮短，且染色完全，脫色時間極短，蛋白質分離的分辨率很高，且與加樣薄膜配套使用點樣以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的鋸齒物理成孔后點樣，操作更簡便，且根據(jù)膠板寬度已預先配置相應的已刻制的長條狀微孔，點樣效果極佳；通過試劑盒適用范圍實驗結果可知，本發(fā)明提供的超薄型瓊脂糖凝膠電泳膠板分離血清蛋白類可精確的檢測出白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白；本發(fā)明提供了一種臨床上有關血清蛋白電泳分離圖譜的分析產(chǎn)品，有助于對疾病的正確診斷，其應用前景十分廣闊。
文檔編號G01N27/453GK102759559SQ20121026137
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月26日 優(yōu)先權日2012年7月26日
發(fā)明者于嘉屏 申請人:上海迪安醫(yī)學檢驗所有限公司