專(zhuān)利名稱(chēng)：一種腫瘤標(biāo)志物foxp3自身抗體及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于制備腫瘤早期診斷試劑和開(kāi)發(fā)治療腫瘤的靶向藥物。
背景技術(shù)：
大量研究表明，血清或血漿中的腫瘤相關(guān)抗原能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，在腫瘤患者血清中既存在腫瘤抗原，也存在針對(duì)該腫瘤抗原的自身抗體。因此，既可以利用抗體檢測(cè)腫瘤抗原，也可以利用抗原檢測(cè)腫瘤自身抗體，但利用腫瘤自身抗體檢測(cè)腫瘤的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測(cè)腫瘤要高得多。很多腫瘤相關(guān)抗原不僅在腫瘤患者體內(nèi)存在，在正常人體內(nèi)也存在，因此檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原作為診斷依據(jù)可信性差。而自身抗體在正常人體內(nèi)含量很低檢測(cè)不到或根本不存在，若體內(nèi)自身抗體水平明顯增高，則表明體內(nèi)存在異常免疫情況，表明體內(nèi)相關(guān)抗原水平發(fā)生波動(dòng)，預(yù)示疾病的存在或原有疾病加重。近年來(lái)的研究表明，在惡性腫瘤體積發(fā)展到可用現(xiàn)代影像學(xué)技術(shù)檢出之前3-5 年，患者血中可出現(xiàn)高濃度的腫瘤相關(guān)抗原自身抗體。因此,檢測(cè)血中腫瘤相關(guān)抗原自身抗體具有預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和早期診斷腫瘤的重要價(jià)值。是腫瘤臨床診斷領(lǐng)域的重點(diǎn)發(fā)展方向之一。在國(guó)外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報(bào)道的抗體檢測(cè)方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達(dá)50%以上。其主要原因是由于每一種腫瘤相關(guān)抗原自身抗體在患者中的陽(yáng)性檢測(cè)率平均在10%左右。如何提高診斷試劑敏感度是當(dāng)前需要亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當(dāng)腫瘤標(biāo)志物的自身抗體，然后與現(xiàn)有已知的自身抗體組合成具有敏感度高和特異性強(qiáng)的診斷試劑盒。腫瘤可通過(guò)各種直接或間接的機(jī)制來(lái)逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)控。一系列的研究已經(jīng)證明，調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞與腫瘤免疫逃避機(jī)制密切相關(guān)。在肺癌、乳腺癌、卵巢癌以及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的黑色素瘤患者的外周血淋巴細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中，存在Treg細(xì)胞比例增高現(xiàn)象。Treg通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞直接接觸或通過(guò)細(xì)胞因子的釋放，對(duì)效應(yīng)性CD4+/CD8+T 細(xì)胞活化和增殖發(fā)揮抑制作用。其效應(yīng)機(jī)制主要是抑制CD4+T細(xì)胞增生、抑制腫瘤特異性抗原激活的⑶4+效應(yīng)細(xì)胞分泌IL-2，抑制⑶8+IFN 2C和TNF2A產(chǎn)生，并在腫瘤微環(huán)境中能限制CTLs細(xì)胞毒性顆粒釋放，使腫瘤細(xì)胞逃逸免疫殺傷。本發(fā)明中的F0XP3為T(mén)reg細(xì)胞的主要表面標(biāo)志物。F0XP3是叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員，早期被發(fā)現(xiàn)特異地表達(dá)在⑶4+⑶25+調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞表面，與其發(fā)育和功能密切相關(guān)，在一定程度上可以反映CD4+/CD25+調(diào)節(jié)性 Treg細(xì)胞的水平和功能活性。隨后的研究發(fā)現(xiàn)F0XP3在肺癌、黑色素瘤細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞中都有表達(dá)。同時(shí)F0XP3是Treg細(xì)胞發(fā)育的一個(gè)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，雖然有個(gè)別研究顯示F0XP3在少量的⑶4+/⑶25-T細(xì)胞和⑶8+Treg細(xì)胞上也有表達(dá)，但目前F0XP3仍然被認(rèn)為是⑶4+/⑶25+調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞的一個(gè)最特異標(biāo)志。越來(lái)越多的證據(jù)表明⑶4+/⑶25+ 調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞可能在腫瘤免疫逃逸中起了關(guān)鍵作用。本發(fā)明通過(guò)自行設(shè)計(jì)的F0XP3抗原表位多肽,檢測(cè)腫瘤患者血清及血漿中自身抗體水平并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的試劑,預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性，并為腫瘤新藥研究提供可靠的數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)一種腫瘤標(biāo)志物F0XP3自身抗體。本發(fā)明同時(shí)公開(kāi)了 F0XP3自身抗體的用途。本發(fā)明提供的一種腫瘤標(biāo)志物F0XP3自身抗體的氨基酸序列為EIYHWFTRMFAFFRNHPATffKNAIRHNLSLHKD 純度> 95 %，pH > 7. O。本發(fā)明所述的F0XP3抗原多肽在制備預(yù)測(cè)腫瘤早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明利用自行設(shè)計(jì)的F0XP3蛋白的線性多肽，采用ELISA法檢測(cè)肺癌和食管癌患者血清及血漿中抗F0XP3蛋白的特異性自身IgG抗體。自身IgG抗體水平升高表明腫瘤患者體內(nèi)F0XP3蛋白的表達(dá)量增加，預(yù)示患者可能出現(xiàn)原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤，可以預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)生與復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性，指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)腫瘤的早期診斷。F0XP3蛋白質(zhì)氨基酸序列見(jiàn)Tab. ITab. I F0XP3抗原多肽序列表
權(quán)利要求
1.一種腫瘤標(biāo)志物F0XP3自身抗體，其特征在于氨基酸序列為EIYHWFTRMFAFFRNHPA TffKNAIRHNLSLHKD 純度> 95%，pH > 7. O。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤標(biāo)志物F0XP3自身抗體在制備預(yù)測(cè)腫瘤早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。
全文摘要
一種腫瘤標(biāo)志物FOXP3自身抗體及應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)基因FOXP3的抗原氨基酸序列。應(yīng)用FOXP3多肽抗原檢測(cè)肺癌和食管癌患者血中相應(yīng)的特異性自身抗體，這種自身抗體可作為為腫瘤標(biāo)志物評(píng)估肺癌和食管癌發(fā)生的危險(xiǎn)度。這種抗原多肽及其抗體可用于制備腫瘤早期診斷試劑和開(kāi)發(fā)治療腫瘤的靶向藥物。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102603892SQ201210041128
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月22日
發(fā)明者關(guān)松磊, 劉寶剛, 孫世龍, 尉軍, 李光輝 申請(qǐng)人:尉軍