專利名稱：高純度山茶苷a的制備及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物單體制備領(lǐng)域，具體涉及一種高純度山茶苷A的制備及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
化學(xué)對照品又稱標(biāo)準(zhǔn)品，是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、質(zhì)量檢測和質(zhì)量控制的實物對照，中藥化學(xué)對照品的研究，是中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究的一個非常重要的部分，對產(chǎn)品的質(zhì)量評價，特別是在藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制中，中藥化學(xué)對照品起著極其重大的作用，是中藥質(zhì)量控制的基礎(chǔ)與核心。山茶苷A是一種黃酮類化學(xué)成分，是植物活性成分之一，也是許多植物和藥品標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。目前尚未相應(yīng)的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，國內(nèi)外對山茶苷A中藥化學(xué)對照品的系統(tǒng)研究未見報道，參照中藥化學(xué)對照品(供含量測定用)的技術(shù)要求，對山茶苷A化學(xué)對照品進(jìn)行研究，建立山茶苷A化學(xué)對照品的批量提取工藝、純度與含量以及雜質(zhì)檢查的分析測定方法，從而建立山茶苷A化學(xué)對照品的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，為其作為中藥化學(xué)對照品以及藥材和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)基礎(chǔ)和保證。山茶苷A作為植物、藥材及其產(chǎn)品的化學(xué)對照品，是質(zhì)量控制的技術(shù)關(guān)鍵，眾多企業(yè)、科研和檢驗部門都需要高純度的山茶苷A對照品，其市場需求很大，由于山茶苷A在藥材中的含量低，提取分離技術(shù)要求很高、難度很大。本發(fā)明進(jìn)行山茶苷A中藥化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品制備及其質(zhì)量控制技術(shù)研究，解決高純度山茶苷A化學(xué)對照品的問題，對中藥現(xiàn)代化的作用是顯而易見的，具有重大的實際意義和學(xué)術(shù)價值。山茶苷A是從亮葉楊桐葉植物分離得到的活性物質(zhì)，從公開文獻(xiàn)所知，已有文獻(xiàn)報道山茶苷A的提取方法，如1.題名亮葉楊桐葉中山茶苷A的分離純化及其抗氧化性能的研究作者袁爾東，寧正祥，劉本國，榻景益等，華南理工大學(xué)輕工與食品學(xué)院刊名食品工業(yè)科技，2008，(4) :212 - 21文摘:采用大孔樹脂法對亮葉楊桐葉中山茶苷A進(jìn)行分離純化。結(jié)果顯示，采用DlOl樹脂，以3. Omg/mL流速上樣，以無水乙醇3. Omg/mL流速洗脫，獲得山茶苷A精制品的純度可達(dá)91.7%。2.題名亮葉楊桐葉黃酮類提取物的鑒定及其抗氧化活性研究作者劉本國，戰(zhàn)宇，寧正祥，高建華，許克勇刊名林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2008，28 (I) 6 - 10.文摘為了開發(fā)亮葉楊桐——這種中國特有的植物，采用傳統(tǒng)的有機溶劑提取法獲得了亮葉楊桐葉的黃酮類提取物(FE)。高效液相色譜(HPLC)和多級串聯(lián)電噴霧質(zhì)譜(ESI -MSn)的分析表明，亮葉楊桐葉的主要黃酮類化合物為山茶苷A，其在FE中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為51. 19%± I. 13%。3.山茶苷A和山茶苷B的制備方法和用途，中國專利申請(專利)號200810062110. 5申請(專利權(quán))人浙江大學(xué)地址浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號摘要一種高純度山茶苷A和山茶苷B的制備方法，以石崖茶為原料，用水醇溶劑系統(tǒng)提取，減壓濃縮，以中極性有機溶劑萃取脫脂，水相繼續(xù)濃縮石崖茶總黃酮，將總黃酮經(jīng)水醇系統(tǒng)重結(jié)晶得到山茶苷A，將總黃酮用碳酸鉀是山茶苷A轉(zhuǎn)化成山茶苷B后通過離子交換層析或直接用水醇系統(tǒng)重結(jié)晶，得到山茶苷B。本發(fā)明設(shè)計合理，制備工藝簡便，生產(chǎn)成本底，得率及純度高，經(jīng)過液-液萃取后采用重結(jié)晶法即可獲得高純度的山茶苷A和B，避開了常用的柱層析方法，有效降低有機溶劑消耗及能耗，減少環(huán)境污染，適于工業(yè)
化生產(chǎn)。上述方法從不同角度論述了山茶苷A的提取分離，分離純度較高，但純度均未達(dá)到中藥化學(xué)對照品的要求，即純度大于98%，且沒有山茶苷A純度與質(zhì)量控制方法，無法滿足高純度山茶苷A化學(xué)對照品的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為了克服現(xiàn)有的山茶苷A純度低、收率低或生產(chǎn)成本高的不足，以及無系統(tǒng)的山茶苷A的提取純化與質(zhì)量控制方法，提供一種高純度山茶苷A的制備及其質(zhì)量控制方法，該方法制備得到的山茶苷A純度高、質(zhì)量好，可以作為化學(xué)對照品或標(biāo)準(zhǔn)品，保證質(zhì)量控制。本發(fā)明是從山茶科楊桐屬植物亮葉楊桐Adinandra nitida Merr. ex Li的葉子中經(jīng)提取、分離、精制、純化而制得的山茶苷A，其化學(xué)名、分子式、結(jié)構(gòu)式如下
中文名山茶苷A
化學(xué)名芹菜素一5 — 0 — a — L —吡喃鼠李糖基(I — 4) — 6" — 0 —乙?；? — D —批喃葡萄糖式(apigenin-5-0- a -L-rhamnosyl- (I — 4) _6 " -acetyl- 3 -D-glucoside)
英文名Camellianin A ；
分子式C29H32O15 ;結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種高純度山茶苷A的制備方法，其特征在于包括以下工藝過程取山茶科楊桐屬植物亮葉楊桐的干燥葉子，粉碎，每公斤亮葉楊桐的干燥葉子用5 - 10倍重量的50 -90% w/w的乙醇的提取2 — 8次，濾過，合并濾液，回收乙醇，得浸膏，經(jīng)硅膠柱層析，用醋酸乙酯-甲醇梯度洗脫，收集含山茶苷A的流分，薄層色譜TLC檢測合并，濃縮，氯仿一甲醇重結(jié)晶，即得純度為重量含量80 90%的山茶苷A粗結(jié)晶；將粗結(jié)晶用制備高效液相色譜法分離純化，色譜柱為C 一 18柱，利用乙腈-水為流動相洗脫，流速為5 10 mL/min,檢測波長為330nm，柱溫為25°C — 35°C，收集山茶苷A組分，并對所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測，合并保留時間相同而且純度在90% - 98%之間和純度大于 98%以上的山茶苷A，減壓濃縮，得到純度90% - 98%之間以及大于98%以上的山茶苷A ； 所述的醋酸乙酯-甲醇配比為100:0 60:40 ; 所述的氯仿-甲醇配比為5:1 5:5; 所述的制備高效液相色譜法的流動相乙腈-水配比為15:85 50:50 ; 所述的分析HPLC條件為色譜柱為C 一 18柱；流動相為乙腈0. 2%磷酸溶液=20:80 50:50 ;檢測波長為 330nm ;流速為 O. 6 mL/min I. 5mT,/miη。
2.如權(quán)利要求I所述的高純度山茶苷A的質(zhì)量控制方法，其特征在于采用薄層色譜分析方法或HPLC分析方法，所述的薄層色譜分析方法薄層板聚酰胺薄膜；3種展開劑系統(tǒng)系統(tǒng)(I)乙醇-丙酮-水重量比例7:5:6，系統(tǒng)(2)甲醇-冰醋酸-水重量比例9:0. 5:0. 5，系統(tǒng)(3)乙醇-水重量比例1:1 ;點樣取本品適量，用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一聚酰胺薄膜上，按不同的點樣量梯度點樣，點樣量分別為O. 5微克、I微克、3微克、5微克、10微克；置展開缸分別展開，展距15cm;定位噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外燈(365nm)下檢視；結(jié)果在薄層色譜中，可見藍(lán)色的單一的熒光斑點，3種展開劑系統(tǒng)，5個不同濃度的梯度點樣，均為單一斑點，未見雜質(zhì)斑點。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度山茶苷A的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的液相色譜方法色譜條件色譜柱C — 18,4. 6X 250mm, 10微米；流速0. 6 — I. 5ml/min ;進(jìn)樣量10 20微升；面積歸一化法定量；系統(tǒng)條件(I)流動相甲醇-O. 2%磷酸溶液重量比例46:54-60:40 ;檢測波長330nm ;系統(tǒng)條件(2)流動相乙腈一 O. 2%磷酸溶液重量比例21:79 — 50:50 ;檢測波長330nm ;系統(tǒng)條件(3)流動相乙腈一 O. 2%磷酸溶液重量比例21:79 — 50:50 ;檢測波長260nm ； 含量與純度測定精密稱取于105°C干燥至恒重的對照品適量，加80%甲醇水溶液制成每Iml含Img的溶液，在測定條件下，進(jìn)樣20微升，注入液相色譜儀，用2個流動相溶劑系統(tǒng)分別記錄色譜圖至主成分的出峰保留時間的2. 5倍以上，用面積歸一化法計算含量，結(jié)果系統(tǒng)測定對照品含量在均98%以上；雜質(zhì)檢查，分別在不同系統(tǒng)記錄的色譜圖中，除溶劑峰外，雜質(zhì)峰面積總和結(jié)果均小于2. 0% ； 峰純度檢測取對照品適量，按流動相系統(tǒng)，在高效液相色譜儀上，用二極管陣列DAD檢測器進(jìn)行峰純度檢查，山茶苷A的HPLC色譜峰>98%，其色譜峰紫外吸收光譜圖，三維圖譜以及5點光譜圖完全重合，表明為單一純物質(zhì)峰。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以山茶科楊桐屬植物亮葉楊桐為原料，提供一種高純度山茶苷A的制備方法、檢測方法與用途，其方法是先將山茶科楊桐屬植物亮葉楊桐粉碎，用乙醇加熱回流提取，乙醇提取物經(jīng)硅膠柱層析，用醋酸乙酯-甲醇混合溶劑洗脫，用薄層色譜檢測，收集含有山茶苷A的洗脫液，合并，減壓濃縮，重結(jié)晶，得到山茶苷A粗結(jié)晶。再用反相硅膠C－18柱制備高效液相法分離，對所收集的每一份洗脫液利用分析型高效液相色譜檢測，合并保留時間相同而且純度在90%～98%之間和98%以上的山茶苷A組分，減壓濃縮，即可分別得到純度在90%～98%之間的山茶苷A和純度大于98%的山茶苷A組分，并采用薄層色譜和液相色譜進(jìn)行質(zhì)量控制。該方法不僅能提高山茶苷A純度，而且能降低生產(chǎn)成本。
文檔編號G01N30/90GK102628839SQ201210040708
公開日2012年8月8日 申請日期2012年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月22日
發(fā)明者蘭太進(jìn), 劉元, 劉布鳴, 宋志釗, 張寧寧, 黃艷 申請人:廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院