專利名稱：一種亮菌膠囊藥物的鑒別方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種亮菌膠囊藥物及其鑒別方法和質量標準檢測方法。
背景技術：
亮菌〔Armillarella tabescens (Scop. exFr) Sing)是一種能增強人體體質,提高免疫功能，并具有消炎、止痛、降酶、退黃及利膽作用的藥用真菌，其制劑臨床常用于治療急、慢性肝炎、遷延性肝炎、慢性膽管炎和膽囊炎及慢性、淺表性、萎縮性胃炎、中耳炎及放療化療引起的白細胞減少癥等。但現(xiàn)有制劑均為液體制劑，而無膠囊制劑，并且固體的亮菌提取物藥物的鑒別與檢測困難，重復性差，使得固體的亮菌膠囊藥物無法工業(yè)化生產(chǎn)與臨床應用。液體制劑的亮菌藥物，其存在的問題是有效藥物成分含量低，療效有待提高，且其保質期短，儲藏運輸及其服用均不方便，嚴重妨障了亮菌藥物的臨床使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種亮菌膠囊藥物，該種亮菌膠囊藥物的有效藥物成分含量高，療效好，保質期長，儲藏運輸及其服用均方便。本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的一種亮菌膠囊藥物，由亮菌發(fā)酵物制得，其特征在于膠囊藥物的每克內(nèi)容物中的多糖含量為以無水葡萄糖(C6H12O6)計彡60mg，多肽含量以牛血清白蛋白計彡60mg。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是藥物成分以固體方式存在于膠囊中，儲存運輸、攜帶及服用均很方便，且其藥物有效藥物成分含量高，不易變質，保質期長。上述的藥物的劑性為硬膠囊劑，內(nèi)容物為淺棕黃色或淺黃色粉末，氣清香。本發(fā)明的另一目的是提供一種上述亮菌膠囊藥物的質量標準檢測方法，該種質量標準檢測方法精密度高，重現(xiàn)性好、穩(wěn)定可靠，能夠很好控制產(chǎn)品質量以保證工業(yè)化生產(chǎn)的產(chǎn)品質量和臨床療效。本發(fā)明提供的一種亮菌膠囊藥物的質量標準檢測方法，分為多糖含量和多肽含量的測定兩項內(nèi)容，其特點是，所述的多糖含量的測定步驟為A、對照品溶液的制備取經(jīng)102°C -110°c干燥至恒重的無水葡萄糖對照品加水制成每Iml含無水葡萄糖0. 08-0. 12mg的溶液。B、供試品溶液的制備a、取亮菌膠囊藥物的內(nèi)容物，研細、精密稱定Ig左右并記錄稱取量；置量瓶中，加水35-45ml，置75-85°C恒溫水浴中加熱25-35分鐘，時時振搖，取出，冷至室溫，加水稀釋至50ml，搖勻；b、用脫脂棉濾過，棄去初始濾液，精密量取Iml濾液，置IOml離心管中，加無水乙醇6. 5-7. 5ml ；c、在旋渦混懸器上混合25-35秒，以每分鐘 2500-3000轉離心12-18分鐘；d、取沉淀加無水乙醇5. 5-6. 5ml，重復c步的步驟，再取沉淀加無水乙醇5. 5-6. 5ml，重復c步的步驟；e、將d步得到的沉淀用水轉至量瓶中，加水稀釋至IOOml搖勻，作為供試品溶液。C、標準曲線的制備精密量取對照品溶液0、0. 2,0. 4,0. 8,1. 0ml，分別置具塞試管中，各加水至1. Oml，再加3 %苯酚溶液0. 8-1. 3ml，搖勻，迅速加入硫酸4. 0-5. Oml，搖勻，放冷至室溫，以未量取對照品溶液的0管為空白，照分光光度法在490nm的波長處測定吸收度，計算出葡萄糖的量與對應的吸收度的回歸方程。D、測定精密量取供試品溶液1. 0ml，再加3%苯酚溶液0. 8-1. 2ml，搖勻，迅速加入硫酸4. 5ml，搖勻，放冷至室溫，以C步中的0管為空白，照分光光度法在490nm的波長處測定吸收度，根據(jù)測得的吸收度，再由C步的回歸方程計算出供試品的多糖含量；再根據(jù)B步記錄的藥物稱取量，計算出每克膠囊內(nèi)容物的多糖含量。本發(fā)明的一種亮菌膠囊藥物的質量標準檢測方法，其中多肽含量的測定方法為A、對照品溶液的制備取牛血清白蛋白對照品，加水制成每Iml含0. 25-0. 35mg的溶液。B、供試品溶液的制備取亮菌膠囊藥物的內(nèi)容物，研細、精密稱定Ig左右，并記錄稱取量；置于量瓶中，加水35-45ml，置75-85°C恒溫水浴中加熱25-35分鐘，時時振搖，取出，冷至室溫，加水稀釋至50ml，搖勻；用脫脂棉濾過，棄去初始濾液，精密量取2ml濾液，置于量瓶中，加水稀釋至100ml，搖勻。C、福林酚試液的配制福林酚甲液的配制a、取酒石酸鉀鈉0.4-0. 6g，加水50ml溶解，b、取硫酸銅 0. 4-0. 6g，加水60ml溶解，c、取氫氧化鈉8_12g與碳酸鈉45_55g，加水400ml溶解，臨用前分別取a、b、c三種溶液按1 1 8混勻。福林酚試液乙液的配制將上述福林酚甲液加水稀釋8倍。D、標準曲線的制備精密量取對照品溶液0、0. 2,0. 4,0. 8,1. 0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加福林酚試液甲液1.0ml，搖勻，室溫放置8-12分鐘后，加入福林酚試液乙液4. Oml，搖勻，于50-60°C水浴中保溫4_7分鐘，取出，放冷至室溫；以未量取對照品溶液的0管為空白，照分光光度法在650nm的波長處測定吸收度，并計算出牛血清白蛋白的量與對應的吸收度的回歸方程。E、測定精密量取供試品溶液1. 0ml，再加福林酚試液甲液1. 0ml，搖勻，室溫放置 8-12分鐘后，加入福林酚試液乙液4. 0ml，搖勻，于50_60°C水浴中保溫4_7分鐘，取出，放冷至室溫；以D步中的0管為空白，照分光光度法在650nm的波長處測定吸收度，再由D步的回歸方程計算出供試品溶液的多肽含量；再根據(jù)B步記錄的藥物稱取量，計算出每克膠囊內(nèi)容物的多肽含量。以下的實驗證明，本發(fā)明的上述質量標準檢測方法，精密度符合要求，重現(xiàn)性好， 樣品在4小時內(nèi)測定含量穩(wěn)定。該質量標準檢測方法，能夠很好控制產(chǎn)品質量。1、供試藥物樣品穩(wěn)定性試驗采用本發(fā)明的質量標準檢測方法對本發(fā)明的一批亮菌膠囊藥物樣品5份，制成多糖及多肽測定的供試品溶液，每間隔60分鐘測定其多糖含量
4和多肽含量，結果如下表:
測定時間0分鐘60分鐘120分鐘180分鐘240分鐘RSD多糖含量78. 678. 478. 578. 478. 70. 17%多肽含量72. 372. 472. 172. 272. 10. 18%多糖RSD = 0. 17%多肽 RSD = 0. 18%表明供試品溶液在4小時內(nèi)含量穩(wěn)定。2、精密度試驗取亮菌膠囊8份，每份5粒，分別測定其多糖和肽含量，結果如下
表
樣品號12345678RSD多糖含量78. 578. 678. 378. 478. 778. 578. 478. 50. 16%多肽含量72. 172. 472. 372. 272. 172. 372. 272. 30. 92%多糖RSD = 0. 16% (N = 8)多肽 RSD = 0. 92% (N = 8)表明本發(fā)明的質量標準檢測方法精密度符合要求。3、重現(xiàn)性試驗取同一批藥物樣品6份，每份5粒，分別測定其多糖和肽含量，結果如下表
樣品號123456RSD多糖含量78. 678. 578. 478. 778. 378. 50. 18%多肽含量72. 372. 272. 472. 172. 372. 20. 15%多糖 RSD = 0. 18% (N = 6)多肽 RSD = 0. 15% (N = 6)表明本發(fā)明的質量標準檢測方法重現(xiàn)性好。4、中試生產(chǎn)三批次產(chǎn)品質量情況的實際檢驗按照本發(fā)明的質量標準檢測方法對本發(fā)明的的亮菌膠囊藥物，取中試生產(chǎn)的三個批次產(chǎn)品進行了檢驗，結果均符合規(guī)定要求，見下表。
權利要求
1.一種亮菌膠囊藥物的鑒別方法，所述亮菌膠囊藥物由亮菌發(fā)酵物制得，膠囊藥物的每克內(nèi)容物中的多糖含量為以無水葡萄糖(C6H12O6)計彡60mg，多肽含量以牛血清白蛋白計 ^ 60mg ；所述的亮菌膠囊藥物的鑒別方法為取膠囊內(nèi)容物lg，加蒸餾水40-60ml加熱溶解，脫脂棉過濾；取濾液1. 8-2. 3ml，加茚三酮試液0. 5ml，加熱后，呈藍紫色則判定內(nèi)容物含有亮菌藥物。
2.一種亮菌膠囊藥物的鑒別方法，所述亮菌膠囊藥物由亮菌發(fā)酵物制得，膠囊藥物的每克內(nèi)容物中的多糖含量為以無水葡萄糖(C6H12O6)計>60mg，多肽含量以牛血清白蛋白計 ^ 60mg ；所述的亮菌膠囊藥物的鑒別方法為A、取膠囊內(nèi)容物研細、稱取0.9-1. Ig,置量瓶中，加水35ml-45ml，置75°C _85°C恒溫水浴中加熱25-35分鐘，時時振搖，取出，放冷至室溫，加水稀釋至50ml，搖勻；B、將A步的溶液用脫脂棉濾過，棄去初始濾液，精密量取Iml濾液，置IOml離心管中， 加無水乙醇6. 5-7. 5ml，在旋渦混懸器上混合25-35秒，以每分鐘2500-3000轉離心12-18 分鐘；C、取B步的沉淀加水2ml使溶解，移至試管中，加15%甲萘酚乙醇溶液1_3滴，試管壁加0. 7-1. 5ml濃硫酸，兩液接界處若成紫紅色環(huán)，則判定內(nèi)容物含有亮菌藥物。
3.一種亮菌膠囊藥物的鑒別方法，所述亮菌膠囊藥物由亮菌發(fā)酵物制得，膠囊藥物的每克內(nèi)容物中的多糖含量為以無水葡萄糖(C6H12O6)計>60mg，多肽含量以牛血清白蛋白計 ^ 60mg ；所述的亮菌膠囊藥物的鑒別方法，其步驟為A、取膠囊內(nèi)容物1.5g，加水40-60ml，煮沸12-18分鐘，趁熱用脫脂棉濾過，濾液放冷， 加乙醚18-23ml振搖提取，分取乙醚液，用脫脂棉濾過，濾液揮干，殘渣加無水乙醇0. 5ml溶解，作為供試品溶液；B、另取亮菌甲素對照品，加無水乙醇制成每Iml含8-12ug的溶液，作為對照品溶液；C、按照照薄層色譜法試驗，吸取上述A、B步的兩種溶液各8-12ul，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以配比為8 2 0.5 10的正丁醇-甲醇-濃氨試液-水的上層液為展開劑， 展開，取出，晾干，在紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜圖相應的位置上，呈相同顏色的熒光斑點，則判定供試膠囊內(nèi)容物中含有亮菌藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種亮菌膠囊藥物的鑒別方法，所述亮菌膠囊藥物由亮菌發(fā)酵物制得，膠囊藥物的每克內(nèi)容物中的多糖含量為以無水葡萄糖(C6H12O6)計≥60mg，多肽含量以牛血清白蛋白計≥60mg；所述的亮菌膠囊藥物的鑒別方法為取膠囊內(nèi)容物1g，加蒸餾水40-60ml加熱溶解，脫脂棉過濾；取濾液1.8-2.3ml，加茚三酮試液0.5ml，加熱后，呈藍紫色則判定內(nèi)容物含有亮菌藥物。該種亮菌膠囊藥物的鑒別方法在不需要定量分析的情況下，可以方便地對該藥物進行簡單的鑒別和判定，尤其適合基層醫(yī)院使用。
文檔編號G01N21/79GK102353675SQ20111019412
公開日2012年2月15日 申請日期2006年6月28日 優(yōu)先權日2006年6月28日
發(fā)明者楊興明 申請人:四川隆盛藥業(yè)有限責任公司