專利名稱：：一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的定性及定量檢測(cè)方法，尤其涉及一種生物體內(nèi)微囊藻毒素MC-RR及其在代謝過(guò)程中與還原型谷胱甘肽GSH和半胱氨酸Cys的結(jié)合物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的定性及定量檢測(cè)方法。本發(fā)明方法適用于生物體內(nèi)微囊藻毒素MC-RR及其代謝產(chǎn)物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的定性及定量檢測(cè)，而且適用于研究微囊藻毒素在生物體中的累積、傳遞和代謝解毒以及對(duì)水產(chǎn)品的安全性進(jìn)行評(píng)估。
背景技術(shù)：
：隨著人類社會(huì)生產(chǎn)力的大幅提高及人口壓力的不斷增大，水體富營(yíng)養(yǎng)化引起藍(lán)藻水華頻發(fā)，并釋放有害次生代謝物，其中微囊藻毒素(microcystins，簡(jiǎn)稱MCs)是藍(lán)藻產(chǎn)生的一類對(duì)環(huán)境和淡水水體中的生物影響較大的肝毒素，肝臟是其主要的靶器官，同時(shí)MCs還具有腎毒性、遺傳毒性、胚胎及發(fā)育毒性(謝平.太湖藍(lán)藻的歷史發(fā)展與水華災(zāi)害.北京科學(xué)出版社，2008)。MCs可以通過(guò)飲用水，食物累積等途徑進(jìn)入人體，從而對(duì)人類健康造成威脅，俞順章等通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)飲用水中含有MCs的地區(qū)的肝炎和肝癌發(fā)病率明顯高于飲用無(wú)毒素的深井水人群(俞順章，趙寧，資曉林等.中華腫瘤雜志，2001(23):96-99)。微囊藻毒素直接導(dǎo)致人類死亡的事件1996年發(fā)生在巴西Caruaru透析中心，由于該中心使用了受微囊藻毒素污染的水作為腎透析用水，結(jié)果導(dǎo)致了116人中毒，52人死亡的嚴(yán)重后果(Jochimsen，E.M.，Carmichael，W.W.，AnJ.，NewEng.J.Med.，1998(338):873-878)。谷胱甘肽是一種小分子肽類物質(zhì)，廣泛存在于生物體內(nèi)，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸3個(gè)氨基酸組成，谷胱甘肽有還原型(GSH)和氧化型(GSSG)兩種形式，在生理?xiàng)l件下以還原型谷胱甘肽GSH占絕大多數(shù)。半胱氨酸(Cys)是一種生物體內(nèi)常見(jiàn)的氨基酸，可由體內(nèi)的蛋氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。MC-RR是亞熱帶湖泊中最為普遍的一種微囊藻毒素，當(dāng)生物體內(nèi)有MC-RR存在時(shí)，通過(guò)生物體自身的新陳代謝作用，MC-RR可與還原型谷胱甘肽GSH形成MC-RR-GSH結(jié)合物，并進(jìn)一步水解成水溶性更強(qiáng)的MC-RR-Cys結(jié)合物(Kondo，F(xiàn).，Ikai，Y.，Oka，H.，etal.，Chem.Res.Toxicol.1992(5):591，PflugmacherS，WiegandC，BeattieKA"etal.，EnvironmentalToxicologyandChemistry.2001(20):846-852)。目前對(duì)于MCs，其代謝產(chǎn)物及其解毒過(guò)程的研究多集中于體外實(shí)驗(yàn)，同時(shí)也局限于定性檢測(cè)，Kondo等人在1992年首次通過(guò)化學(xué)方法制備合成了微囊藻毒素-谷胱甘肽以及半胱氨酸結(jié)合產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品，研究了其毒性，并通過(guò)LC-FAB-MS在大小鼠肝臟中首次定性檢測(cè)到了微囊藻毒素-谷胱甘肽以及半胱氨酸結(jié)合產(chǎn)物(Kondo，F(xiàn).，Ikai，Y.，Oka，H.，etal.，Chem.Res.Toxicol.1992(5):591-596，Kondo，F(xiàn).，Matsumoto，H.，Yamada，S.，etal.，Chem.Res.Toxicol.1996(9):1355-1359)，Pflugmacher等通過(guò)液相色譜和基質(zhì)輔助激光解吸電離時(shí)間飛行質(zhì)譜定性鑒定了體外實(shí)驗(yàn)中通過(guò)酶催化形成的微囊藻毒素谷胱甘肽結(jié)合物(Pflugmacher,S.，Wiegand，C.，Obere線A.，etal.，Acta.1998(1425):527-533)。3對(duì)于微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的體內(nèi)體外定量研究則少有報(bào)道，由于MC-RR及其代謝產(chǎn)物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys在生物樣品中的濃度通常很低，干擾物質(zhì)多，目前沒(méi)有任何方法能同時(shí)定性定量檢測(cè)這三種物質(zhì)，因而需建立可靠、穩(wěn)定的定量分析方法，并通過(guò)有效的富集、分離和純化過(guò)程實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高專屬性分析，為進(jìn)一步研究MC-RR在生物體內(nèi)的代謝及其解毒過(guò)程奠定基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，該發(fā)明方法能同時(shí)定性和定量檢測(cè)生物樣品中的微囊藻毒素MC-RR及其代謝產(chǎn)物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys，檢測(cè)結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，靈敏度高。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案，該方案按照以下步驟進(jìn)行1、微囊藻毒素MC-RR及其代謝產(chǎn)物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的提取生物組織器官樣品冷凍干燥后，置于碾缽中磨細(xì)，然后在乙酸-乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)水溶液中，用超聲破碎儀使組織器官細(xì)胞破碎，釋放出待測(cè)物，然后在12000r/min下離心lOmin，移取上清液至干凈容器中避光保存。按照上述步驟重復(fù)提取兩次，合并三次上清液；2、富集、分離與純化將步驟1所得上清液用強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱(規(guī)格為3cc/60mg)實(shí)現(xiàn)富集和分離，收集的洗脫液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，再用100v/v^的甲醇分三次溶解樣品并轉(zhuǎn)入離心管，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到的固體殘?jiān)萌ルx子水溶解并定容，用于分析測(cè)定；3、定性分析HPLC-MS聯(lián)用，根據(jù)MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰的質(zhì)荷比m/z進(jìn)行定性；色譜條件流動(dòng)相A為0.05v/v^的甲酸，B為0.05v/v^的甲酸乙腈溶液；流速020.Omin為0.2mL/min，20.0125.Omin為0.3mL/min;色譜柱C18，100mmX2.lmmID，3.5iim;柱溫40.(TC;樣品盤溫度10.(TC;進(jìn)樣體積為10ilL;洗脫程序Omin:95v/v%A，5%v/v%B，1.Omin:65v/v%A，35v/v%B，17.Omin:55v/v%A，45v/v%B，17.5min:30v/v%A，70v/v%B，18.Omin:5v/v%A，95v/v%B，20.Omin:5v/v%A，95v/v%B，20.Olmin:95v/v%A，5v/v%B，25.Omin:95v/v%A，5v/v%B;質(zhì)譜條件電噴霧離子化(ESI);正離子模式；噴針電壓為4.5KV;透鏡電壓MC-RR為55.50V，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys為45.50V;自動(dòng)增益控制打開(kāi)；鞘氣流速為20單位，該單位為美國(guó)FinniganLCQ系統(tǒng)定義，從0-100;輔助氣關(guān)閉；毛細(xì)管溫度均為250°C;4、定量分析使用外標(biāo)法，用色譜峰面積定量，配制MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys混合標(biāo)樣系列水溶液，MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度范圍均為0.012.5iig/mL，在與待測(cè)物同樣的色譜條件下直接進(jìn)樣，分別以MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由其回歸方程對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量。本發(fā)明方法中所有冷凍干燥條件均為在_651:，真空度為0.lmbar的真空冷凍干燥機(jī)中干燥48h。本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比有以下優(yōu)點(diǎn)和效果1、同時(shí)定性和定量檢測(cè)生物樣品中的MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys;2、對(duì)MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的定性和定量檢測(cè)結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，靈敏度高；3、首次檢測(cè)到急性染毒鳙魚(yú)體內(nèi)MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的存在。圖1和圖2分別為空白魚(yú)肝臟加標(biāo)后的提取液和水溶液加標(biāo)直接進(jìn)樣的總離子流色譜圖。圖1中自上而下依次為一級(jí)總離子流色譜圖，MC-RR-GSH，MC-RR-Cys和MC-RR的二級(jí)總離子流色譜圖，圖2中自上而下依次為一級(jí)總離子流色譜圖，MC-RR-GSH，MC-RR-Cys和MC-RR的二級(jí)總離子流色譜圖。圖3為急性染毒鳙魚(yú)注射入MC-RR后48h內(nèi)其肝臟中MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的含量變化情況。由圖1和圖2可以看出，魚(yú)肝臟中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的測(cè)定；由圖3可以看出，注射了MC-RR的健康鳙魚(yú)體內(nèi)通過(guò)代謝作用能自發(fā)生成MC-RR-GSH禾口MC-RR-Cys。具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1:一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，其步驟是1、微囊藻毒素MC-RR及其代謝產(chǎn)物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的提取取冷凍干燥的魚(yú)肝臟樣品50mg，于碾缽中磨細(xì)后置于離心管中，加入5mL5v/v%的乙酸-EDTA水溶液，其中EDTA濃度為0.01mol/L。于(TC下用超聲破碎儀持續(xù)超聲35min，然后在12000r/min下離心10min，移取上清液至干凈容器中避光保存。按照上述步驟再重復(fù)提取兩次，合并以上三次上清液得溶液I，所用冰乙酸和乙二胺四乙酸二鈉均為分析純；2、待測(cè)物的富集、分離與純化將步驟1獲得的溶液I加入已預(yù)先活化的強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱(規(guī)格3cc/60mg)中進(jìn)行富集，待富集完畢后，依次用3mL2v/v^的甲酸，3mL90v/v^的甲醇淋洗，最后用10mL含15v/v^濃氨水的甲醇溶液洗脫。洗脫液收集于25mL圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，再用lmL100v/v%甲醇分三次溶解樣品并轉(zhuǎn)入1.5mL離心管，再次蒸干，得到的固體殘?jiān)萌ルx子水溶解并定容至100i!L，用于分析測(cè)定，所用甲酸，甲醇和濃氨水均為分析純；3、定性分析HPLC-MS聯(lián)用，根據(jù)MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰的質(zhì)荷比m/z進(jìn)行定性；本發(fā)明方法所用MC-RR為市售環(huán)境分析用固體標(biāo)準(zhǔn)品，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys標(biāo)準(zhǔn)品參照文獻(xiàn)方法合成(Kondo，F(xiàn).，Ikai，Y.，Oka，H.，etal.，Chem.Res.Toxicol.1992(5):592)。配制MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度均為1.0yg/mL的混合標(biāo)樣水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定性分析。MC-RR及其代謝物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的電噴霧離子化二級(jí)質(zhì)譜裂解特征離子見(jiàn)表1，MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的母離子分別為520.06,673.61和580.56。表1MC-RR及其代謝物MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的ESI二級(jí)質(zhì)譜裂解特征離子5VIC.-RRMC-RR網(wǎng)GSHMC-RR-Cys碎片離7m/z碎片離子m/z碎片離子m/z+1038.12[M+H+1345.73[M+H]+1159.562+673.61[M+2H]2+580.56fM+H.-134]+904.59[M+3H]]+449.49[M—CO+H]+1131.342+608.91[M—C9H0+2H2+513.282+505.21Mdha-S!I+2II產(chǎn)452.38[M—GSH+2H]2+519.87[M—Gly+H20+2H]2+550.232+443.22[M—Cys+2H—CO產(chǎn)504.84+H]+十285.12[MeAsp-Arg+H]+284.72[MeAsp-Arg+H]+285.05135.40[M—C9H0—NH3+H]+im.03[M—CpHnOm+Hf1008.304、定量分析使用外標(biāo)法，用色譜峰面積定量，配制MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys混合標(biāo)樣系列水溶液，MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度范圍均為0.012.5iig/mL，在與待測(cè)物同樣的色譜條件下直接進(jìn)樣，分別以MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由其回歸方程對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量。實(shí)施例2:本發(fā)明方法的選擇性、準(zhǔn)確性、精密度和靈敏度考察1、方法選擇性取經(jīng)HPLC-MS檢測(cè)的空白魚(yú)肝臟冷凍干燥的樣品50mg，將50iiLMC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度均為1PgmL—1的水溶液添加入該空白樣品中，依實(shí)施例1的方法步驟進(jìn)行操作，得到與相同濃度的MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys混合水溶液直接進(jìn)樣基本相同的二級(jí)總離子流色譜圖。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，魚(yú)肝臟樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)物的測(cè)定，見(jiàn)圖1和圖2;2、方法校準(zhǔn)曲線取經(jīng)HPLC-MS檢測(cè)的空白魚(yú)肝臟冷凍干燥的樣品50mg，按實(shí)施例1中步驟1和步驟2方法操作，得到一系列提取凈化的基質(zhì)濃縮液樣品。在以上樣品中依次加入不同濃度的MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys，配制成相當(dāng)于各待測(cè)物在魚(yú)肝臟中的濃度為0.02，0.l，O.2，1.0，2.0，5.Oilg.g—1的系列混合水溶液，建立校準(zhǔn)曲線。分別以MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)得到校準(zhǔn)曲線。MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys在肝臟的校準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)表2:表2MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的校準(zhǔn)曲線(X:濃度Pgg—、Y:峰面積)6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3、加標(biāo)回收率取經(jīng)HPLC-MS檢測(cè)的空白魚(yú)肝臟冷凍干燥的樣品50mg，分別加入低、中、高三個(gè)濃度(分別為0.2，1.0，5.0iigg-0的三種待測(cè)物，每個(gè)濃度進(jìn)行3個(gè)樣本分析。通過(guò)比較，以上處理組色譜峰面積與含待測(cè)物量相同的標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣所得峰面積之比計(jì)算各濃度點(diǎn)的平均方法回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。表3MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys在魚(yú)肝臟樣品中的加標(biāo)回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>4、方法的精密度分別配制MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys低、中、高三個(gè)濃度(分別為0.2，1.0，5.0iig'g—0的魚(yú)肝臟質(zhì)量控制樣品(QC)，同時(shí)配制兩組樣品，一組樣品每一濃度分析5次，另一組樣品連續(xù)測(cè)定3天，每天1次。從而求得本測(cè)定方法的精密度，以變異系數(shù)表示。結(jié)果見(jiàn)表4:表4魚(yú)肝臟中MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys測(cè)定的精密度<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>5、方法檢測(cè)限和定量限在經(jīng)HPLC-MS檢測(cè)的空白魚(yú)肝臟中加標(biāo)，測(cè)定7個(gè)重復(fù)的低濃度空白加標(biāo)，加標(biāo)濃度一般為預(yù)期方法檢測(cè)限(MDL)值的15倍，并按照方法的全過(guò)程進(jìn)行處理和測(cè)定，再計(jì)算7次測(cè)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)差SD，加標(biāo)濃度為0.02iigg—、計(jì)算方法如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中置信度t(n—la=。.。d為99%，自由度為n-l時(shí)的t值查表可得，為2.896，n為重復(fù)分析的樣品數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表5:表5.加標(biāo)肝臟樣品中的MC-RR，MC-RR-GSH及MC-RR-Cys的檢測(cè)限和定量限分析物MC-RR(ng.g-')MC-RR-GSH(ng.g")MC-RR-Cys(ngf1)ML)L475LOQ101813實(shí)施例3:健康鳙魚(yú)急性染毒實(shí)驗(yàn)—批健康鳙魚(yú)禁食48h后從腹腔注射入MC-RR水溶液，MC-RR的注射劑量為50iig/kg體重，分別收集注射后1、3、12、24和48h的鳙魚(yú)肝臟樣品。收集的樣品于_20°C下密封保存，隨后冷凍干燥備用。按照本發(fā)明方法建立的定性和定量分析方法分別測(cè)定不同時(shí)間急性染毒的鳙魚(yú)肝臟中的MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys，結(jié)果見(jiàn)圖3。權(quán)利要求一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，其步驟是①、稱取冷凍干燥的生物組織樣品，于碾缽中磨細(xì)后置于離心管中，按照0.1mL/mg的比例加入5v/v％的乙酸-EDTA水溶液，其中EDTA濃度為0.01mol/L，于0℃下超聲破碎3～5min，然后在12000r/min下離心，移取上清液至干凈容器中避光保存，再重復(fù)提取兩次，合并得溶液I；②、將溶液I加入已預(yù)先活化的強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱中進(jìn)行富集，待富集完畢后，依次用2v/v％的甲酸，90v/v％的甲醇淋洗，最后用含15v/v％濃氨水的甲醇溶液洗脫，洗脫液收集于圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，再用100v/v％的甲醇分三次溶解樣品并轉(zhuǎn)入離心管，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到的固體殘?jiān)萌ルx子水溶解并定容，用于分析測(cè)定；③、定性分析HPLC-MS聯(lián)用，根據(jù)MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰的質(zhì)荷比m/z進(jìn)行定性；色譜條件流動(dòng)相A為0.05v/v％的甲酸，B為0.05v/v％的甲酸乙腈溶液；流速0～20.0min為0.2mL/min，20.01～25.0min為0.3mL/min；色譜柱C18，100mm×2.1mmID，3.5μm；柱溫40.0℃；樣品盤溫度10.0℃；進(jìn)樣體積為10μL；洗脫程序0min95v/v％A，5％v/v％B，1.0min65v/v％A，35v/v％B，17.0min55v/v％A，45v/v％B，17.5min30v/v％A，70v/v％B，18.0min5v/v％A，95v/v％B，20.0min5v/v％A，95v/v％B，20.01min95v/v％A，5v/v％B，25.0min95v/v％A，5v/v％B；質(zhì)譜條件電噴霧離子化；正離子模式；噴針電壓為4.5KV；透鏡電壓MC-RR為55.50V，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys為45.50V；自動(dòng)增益控制打開(kāi)；鞘氣流速為20個(gè)單位；輔助氣關(guān)閉；毛細(xì)管溫度均為250℃；④、定量分析使用外標(biāo)法，用色譜峰面積定量，配制MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys混合標(biāo)樣系列水溶液，MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys濃度范圍均為0.01～2.5μg/mL，在與待測(cè)物同樣的色譜條件下直接進(jìn)樣，分別以MC-RR，MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由其回歸方程對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種生物體內(nèi)微囊藻毒素及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，該方法包括下列步驟1、將冷凍干燥的生物組織樣品磨細(xì)，然后加入提取液超聲破碎以提取待測(cè)物；2、將步驟1所得提取液經(jīng)強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱進(jìn)行富集，洗脫，然后將洗脫液處理成待測(cè)物的水溶液，用于分析測(cè)定；3、HPLC-MS聯(lián)用對(duì)待測(cè)物定性；4、外標(biāo)法對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量。本發(fā)明方法能同時(shí)定性和定量檢測(cè)生物樣品中的MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys，檢測(cè)結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，靈敏度高，應(yīng)用該方法首次檢測(cè)到了急性染毒鳙魚(yú)體內(nèi)MC-RR、MC-RR-GSH和MC-RR-Cys的存在。文檔編號(hào)G01N30/02GK101788538SQ20101002895公開(kāi)日2010年7月28日申請(qǐng)日期2010年1月11日優(yōu)先權(quán)日2010年1月11日發(fā)明者何君,吳來(lái)燕,張偉,梁高道,謝平,鄧旭偉,陳雋,馬志梅申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所