專利名稱：中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的快篩方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測量領(lǐng)域，具體涉及利用物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行定性檢測。

背景技術(shù)：
鹽酸西布曲明(sibturamine hydrochloride，sth)，其結(jié)構(gòu)如式I所示，是一種作用于中樞神經(jīng)的減肥藥，其主要機(jī)制為抑制去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺的再攝取而增強(qiáng)飽食感。由于它有可能引起心動過速、早搏次數(shù)增多、血壓升高、頭痛、失眠、口干、便秘等不良反應(yīng)，禁用于神經(jīng)性食欲缺乏癥、心律失常、心衰、冠心病、嚴(yán)重肝腎功能不全、未能控制的高血壓患者以及對本品過敏的人群，而16歲以下的兒童用藥的安全性尚未確定。因此，該藥在使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)適應(yīng)證，并在醫(yī)生指導(dǎo)下遵照藥品說明書的規(guī)定使用。至今，國家食品藥品監(jiān)督管理局所批準(zhǔn)的含西布曲明成分的西布曲明類藥品均為處方藥，諸如諾美亭、曲美、可秀、澳曲輕等藥品。由于這類藥品價(jià)格低廉，且確有一定的抑食減肥功效，近年來屢被一些不法商家加入到中草藥減肥產(chǎn)品(經(jīng)常標(biāo)榜其產(chǎn)品成分均為純植物或純中藥成分)中以增強(qiáng)其減肥效果，牟取暴利。消費(fèi)者在不知情的情況下服用了含有鹽酸西布曲明的中草藥減肥產(chǎn)品，有可能產(chǎn)生嚴(yán)重的后果，危害消費(fèi)者的身體健康。因此有必要建立一種快速篩查中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的方法。

中國專利申請“一種檢測鹽酸西布曲明的方法及其應(yīng)用”(200810028617.9)公開了一種中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的快速篩查方法，該方法由以下步驟組成向待檢樣品中加入乙酸乙酯，輕搖使其溶散，靜置，取上清；加入體積濃度為3％(原文是3體積％)的磷酸溶液，輕搖使兩相混合，放置分層，取下層溶液；加入硫氰酸鉻銨溶液，若出現(xiàn)粉紅色沉淀，則可初步判斷該樣品中含有鹽酸西布曲明。該方法中所用的硫氰酸鉻銨溶液穩(wěn)定性較差，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，且硫氰酸鉻銨的水溶性較差，在實(shí)驗(yàn)室外配制比較麻煩，不利于工作人員在藥店、藥廠的現(xiàn)場檢測。另外，本發(fā)明人采用上述方法對市售21個(gè)品種的中草藥減肥產(chǎn)品共37個(gè)批次進(jìn)行了檢測，共檢出了9批陽性，但經(jīng)高效液相色譜確認(rèn)僅5批是含有鹽酸西布曲明，即上述方法檢測37個(gè)樣品就出現(xiàn)了4個(gè)假陽性，準(zhǔn)確性較低。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是改善現(xiàn)場篩查中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的可操作性以及提高檢測準(zhǔn)確性。
本發(fā)明解決上述問題的技術(shù)方案是 中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的快篩方法，該方法由以下步驟組成 (1)向待檢樣品中加入4～8倍體積的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清液，過濾； (2)往濾液中加入乙酸乙酯體積1/4～1/2的0.3～0.5mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，往下層溶液加入濃度為75g/L的重鉻酸鉀溶液，若下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，則說明樣品中含有鹽酸西布曲明。
本發(fā)明所述的快篩方法，其中步驟(3)所述的往下層溶液加入重鉻酸鉀溶液的方式可以是沿容器壁緩慢滴入，也可以是采用注射器將所加入的重鉻酸鉀溶液直接注至所述的下層溶液，前者更適于現(xiàn)場實(shí)施。
本發(fā)明方法中，所述的重鉻酸鉀溶液最好是封裝在棕色玻璃瓶內(nèi)，并保存于陰涼處，以進(jìn)一步延長其穩(wěn)定性；當(dāng)待檢樣品為顆?；蚱瑒r(shí)，需要將其粉碎后再加乙酸乙酯溶解。
鹽酸西布曲明的N原子在酸液中易于與質(zhì)子結(jié)合形成銨正離子的傾向，并具有季銨鹽類特性，故可與重鉻酸鉀定量形成沉淀，反應(yīng)如式(1)所示。本發(fā)明方法以重鉻酸鉀作為鹽酸西布曲明的沉淀劑，不僅具有反應(yīng)迅速、靈敏、特異性高的特點(diǎn)，還克服了現(xiàn)有技術(shù)所用沉淀劑硫氰酸鉻銨溶液配制比較麻煩且性質(zhì)不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，有利于在藥店或藥廠現(xiàn)場篩查中草藥減肥產(chǎn)品是否摻雜鹽酸西布曲明。
2[R4N+]Cl-+K2Cr2O7→[R4N]2·Cr2O7↓+2KCl (1) 為了更好地理解本發(fā)明，下面將通過以下實(shí)驗(yàn)和分析對本發(fā)明進(jìn)一步闡明本發(fā)明具有的技術(shù)效果。
一、本發(fā)明方法的方法學(xué)考察 1、有機(jī)溶劑的選擇 有機(jī)溶劑在本發(fā)明方法中起到從中草藥產(chǎn)品中提取鹽酸西布曲明的作用，需要符合以下條件必須很好地溶解鹽酸西布曲明，但又不宜與之有太強(qiáng)的結(jié)合，否則不利于無機(jī)酸溶液對其萃??；與無機(jī)酸溶液互不相溶；對環(huán)境和操作者沒有危害。乙酸乙酯與鹽酸西布曲明極性相近，相似相溶，但由于它們之間是通過范德華力結(jié)合的，容易在酸性環(huán)境下分離，因此選擇乙酸乙酯作為提取鹽酸西布曲明用的有機(jī)溶劑。
2、萃取溶劑的選擇 本發(fā)明方法中萃取溶劑的作用的將鹽酸西布曲明從有機(jī)相轉(zhuǎn)移到無機(jī)相中，以便與沉淀劑反應(yīng)。稀硫酸與有機(jī)溶劑乙酸乙酯的相容性非常差，且可奪取其中的大部分鹽酸西布曲明，還具有不易揮發(fā)穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，因此選擇稀硫酸作為萃取溶劑。以下為稀硫酸濃度的確定實(shí)驗(yàn) 精密稱取濃度為鹽酸西布曲明對照品10.05mg，置10ml的量瓶中，加乙酸乙酯適量使溶解，搖勻，稀釋至刻度，制得1.005mg/ml的對照品溶液。
于6支玻瓶中分別加入對照品溶液1ml，再分別在各管中加入0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mol/L的硫酸溶液各1ml，振搖，靜置使分層，沿瓶壁往下層液中滴入重鉻酸鉀試液4～5滴，結(jié)果以0.3～0.5mol/L的硫酸溶液為萃取液即可產(chǎn)生沉淀，故選擇以0.3～0.5mol/L的硫酸溶液為萃取液。
3、沉淀劑的選擇 鹽酸西布曲明在酸液中具有季銨鹽類特性，故可與硫氰酸鉻銨、重鉻酸鉀、鐵氰化鉀等形成沉淀，因重鉻酸鉀試液性質(zhì)較硫氰酸鉻銨、鐵氰化鉀試液穩(wěn)定，不需新鮮配制，經(jīng)試驗(yàn)，配制后在室溫保存三個(gè)月的重鉻酸鉀試液仍不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故選擇重鉻酸鉀試液作為沉淀劑。本發(fā)明方法采用已配制六個(gè)月的重鉻酸鉀溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，仍不影響結(jié)果判斷；而采用僅配制三天的硫氰酸鉻銨溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，則出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象(備注中國藥典2005年版二部附錄“硫氰酸鉻銨試液”配制方法取硫氰酸鉻銨0.5g，加水20ml，振搖1小時(shí)后，濾過，即得。本液應(yīng)臨用新制，配成后48小時(shí)內(nèi)使用)。
4、最低檢測限的確定 在6支玻瓶中，每支分別加入濃度為0.5150mg/ml的鹽酸西布曲明對照品溶液0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml，即依次含鹽酸西布曲明0.2575、0.3090、0.3605、0.4120、0.4635、0.5150mg，加入乙酸乙酯使至1ml，再各加入1ml 0.3mol/L H2SO4溶液，混勻，靜置待上述混合液分為兩層后，分別沿容器壁緩慢加入濃度為7.5％重鉻酸鉀溶液4滴，結(jié)果第5支玻瓶產(chǎn)生的沉淀即可檢視，即試管反應(yīng)的最低檢出限為0.4635mg。
二、本發(fā)明方法檢測市售商品的效果實(shí)驗(yàn) 1、供試品市售各種品牌的中草藥減肥產(chǎn)品供103個(gè)批次，產(chǎn)品名和生產(chǎn)批號見表1。
2、采用本發(fā)明方法對供試品進(jìn)行檢測，同時(shí)采用薄層色譜和高效液相色譜檢測對照。
(1)薄層色譜方法 將供試品(膠囊劑1粒；片劑1片；袋泡茶、顆粒劑等固體制劑約1/2包；液體制劑約1/2次服用量，片劑、顆粒劑需預(yù)先研碎或壓碎)，置具塞試管中，加乙醇2ml，振搖約1分鐘，過濾，作為供試品溶液。取鹽酸西布曲明對照品適量，加乙醇適量使溶解，制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。
照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一高效硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，日光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，則判定樣品中疑似含有鹽酸西布曲明。
(2)HPLC方法 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀(55∶45，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1)為流動相；檢測波長為223nm；DAD190～400nm；柱溫40℃。理論板數(shù)按鹽酸西布曲明計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 取鹽酸西布曲明對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 若供試品為片劑，研細(xì)，精密稱定約1片量；若供試品為膠囊劑，取出內(nèi)容物研細(xì)，精密稱定約1粒量；若為顆粒劑、袋泡茶等固體制劑，研磨粉碎，精密稱定約1/2包量；若供試品為口服液，量取1/2次服用量；分別置100ml量瓶中，加乙醇適量，超聲處理2分鐘，放冷至室溫，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
結(jié)果判斷 供試品色譜中不得呈出與對照品保留時(shí)間一致的色譜峰。如出現(xiàn)與對照品保留時(shí)間一致的色譜峰，則應(yīng)采用二極管陣列檢測器進(jìn)行檢測，若該色譜峰與對照品的紫外吸收光譜相同，則可判斷含有鹽酸西布曲明。
3、結(jié)果 結(jié)果如表1所示，在103批供試品中，本發(fā)明方法檢出62批陽性，41批陰性。通過薄層色譜和高效液相色譜進(jìn)一步確認(rèn)發(fā)現(xiàn)，，其中61批為真陽性，1批假陽性，38批真陰性，3批假陰性，由以上數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可知，本發(fā)明方法靈敏度、正確率和特異度如下 靈敏度Se＝真陽性/(真陽性+假陰性)＝61/(61+3)＝0.95 正確率AR＝(真陽性+真陰性)/總數(shù)＝(61+38)/103＝0.96 特異度Sp＝真陰性/(真陰性+假陽性)＝38/(38+1)＝0.97 由此可見，本發(fā)明方法具有很高的準(zhǔn)確性。
表1 103批供試品采用三種方法檢測鹽酸西布曲明的結(jié)果 三、本發(fā)明方法與200810028617.9專利申請所述方法的比較 (1)綠婷減肥膠囊(膠囊劑，標(biāo)示遵義康神王生物科技有限公司生產(chǎn)，批號200805191共3批次，批號20080519 2共1批次。) 采用已申請的專利“一種檢測鹽酸西布曲明的方法及其應(yīng)用”(200810028617.9)方法進(jìn)行快篩，判斷為鹽酸西布曲明初篩陽性。經(jīng)采用本發(fā)明方法進(jìn)行快篩，判斷為初篩陰性，最終結(jié)果采用液-質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行確認(rèn)，判斷為陰性，與本發(fā)明方法判斷結(jié)果一致，而200810028617.9專利申請的快篩結(jié)果為假陽性。
(2)綠婷減肥膠囊(膠囊劑，標(biāo)示遵義康神王生物科技有限公司生產(chǎn)，批號200904091。) 采用本發(fā)明方法進(jìn)行快篩，判斷為初篩陽性，最終結(jié)果采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器進(jìn)行確認(rèn)，判斷為陽性，與本發(fā)明方法判斷結(jié)果一致。
說明2008年生產(chǎn)的4批次綠婷減肥膠囊未檢出鹽酸西布曲明，2009年生產(chǎn)的1批次綠婷減肥膠囊則檢出鹽酸西布曲明，由此說明造假分子的造假趨勢是與時(shí)俱進(jìn)的，并不是一成不變的。
(3)新維亭(片劑，標(biāo)示湖南泰爾制藥有限公司生產(chǎn)，批號20080815) 采用已申請專利方法進(jìn)行快篩，判斷為鹽酸西布曲明初篩陽性。經(jīng)采用本發(fā)明方法進(jìn)行快篩，判斷為初篩陰性，最終結(jié)果采用液-質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行確認(rèn)，判斷為陰性，與本發(fā)明方法判斷結(jié)果一致，而200810028617.9專利申請的快篩結(jié)果為假陽性。
由此可見本發(fā)明方法與200810028617.9專利申請所記載方法相比具有更高的準(zhǔn)確度。

具體實(shí)施例方式 例1膠囊劑的檢測 待檢樣品綠婷減肥膠囊(標(biāo)示遵義康神王生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20090409 1)，高效液相檢測結(jié)果每粒含鹽酸西布曲明7.8mg。
本發(fā)明方法檢測 (1)取膠囊內(nèi)容物0.369，加入2mL的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清夜，過濾； (2)往濾液中加入加入乙酸乙酯體積一半的0.3mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，沿容器壁緩慢加入濃度為75g/L重鉻酸鉀溶液4滴。
結(jié)果判讀下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，說明樣品中含有鹽酸西布曲明，與高效液相色譜檢測結(jié)果一致。
例2片劑的檢測 待檢樣品美麗來果蔬纖維千點(diǎn)蘋果醋咀嚼片(標(biāo)示南昌康大生物科技有限公司生產(chǎn)，批號090503) 高效液相色譜檢測結(jié)果含鹽酸西布曲明7.9mg。
本發(fā)明方法檢測 (1)取所述片劑1.0g，壓碎，加入3mL的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清，過濾； (2)往濾液中加入乙酸乙酯體積一半的0.3mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，采用注射器往下層溶液注入濃度為75g/L重鉻酸鉀溶液4滴。
結(jié)果判讀下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，說明樣品中含有鹽酸西布曲明，與高效液相色譜檢測結(jié)果一致。
例3軟膠囊的檢測 待檢樣品極速瘦身螺旋藻減肥膠囊(沙淇)(標(biāo)示陜西天龍生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號20080121)。
高效液相色譜檢測結(jié)果每粒含鹽酸西布曲明2.8mg。
本發(fā)明方法檢測 (1)取軟膠囊內(nèi)容物0.47g，加入2mL的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清，過濾； (2)往濾液中加入乙酸乙酯體積一半的0.3mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，先將一玻璃棒插至下層溶液，再沿玻璃棒緩慢加入濃度為75g/L重鉻酸鉀溶液5滴。
結(jié)果判讀下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，說明樣品中含有鹽酸西布曲明，與高效液相色譜檢測結(jié)果一致。
例4茶劑的檢測 待檢樣品御生堂減肥茶(標(biāo)示北京御生堂生物工程有限公司生產(chǎn)，批號080401 305)。
高效液相色譜檢測結(jié)果不含鹽酸西布曲明。
本發(fā)明方法檢測 (1)取待檢樣品0.50g，中加入3mL的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清液，過濾； (2)往濾液中加入1mL的0.4mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，沿容器壁緩慢加入濃度為75g/L重鉻酸鉀溶液5滴。
結(jié)果判讀下層溶液無黃色沉淀，說明樣品中不含有鹽酸西布曲明，與高效液相色譜檢測結(jié)果一致。
例5沖劑的檢測 待檢樣品橙魔沖劑(標(biāo)示長沙泰康生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20090326)。
高效液相色譜檢測結(jié)果不含鹽酸西布曲明。
本發(fā)明方法檢測 (1)取所述沖劑1.0936g，壓碎，加入4mL的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清液，過濾； (2)往濾液中加入1mL的0.5mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置； (3)待上述混合液分為兩層后，采用注射器往下層溶液注入濃度為75g/L重鉻酸鉀溶液4滴。
結(jié)果判讀下層溶液無黃色沉淀，說明樣品中不含鹽酸西布曲明，與高效液相色譜檢測結(jié)果一致。
權(quán)利要求
1.中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的快篩方法，該方法由以下步驟組成
(1)向待檢樣品中加入4～8倍體積的乙酸乙酯，振搖使其溶散，靜置，取上清，過濾；
(2)往濾液中加入乙酸乙酯體積1/4～1/2的0.3～0.5mol/L的硫酸溶液，振搖使兩相混合，靜置；
(3)待上述混合液分為兩層后，往下層溶液加入濃度為75g/L的重鉻酸鉀溶液，若下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，則說明樣品中含有鹽酸西布曲明。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)所述的往下層溶液注入重鉻酸鉀溶液的方式是沿容器壁緩慢滴入。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中草藥減肥產(chǎn)品中摻雜鹽酸西布曲明的快篩方法，該方法先用乙酸乙酯將樣品中的酯溶成分溶出，然后用稀硫酸萃取，最后以重鉻酸鉀溶液為沉淀劑劑進(jìn)行檢測，若下層溶液出現(xiàn)黃色沉淀，則說明樣品中含有鹽酸西布曲明。本發(fā)明方法以重鉻酸鉀作為鹽酸西布曲明的沉淀劑，具有反應(yīng)迅速、靈敏、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定期長的優(yōu)點(diǎn)，有利于在藥店或藥廠現(xiàn)場快速篩查。
文檔編號G01N21/82GK101762581SQ20101001920
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月5日
發(fā)明者楊文紅, 黃諾嘉, 黃奕濱 申請人:廣東省汕頭市藥品檢驗(yàn)所