專利名稱：：免疫層析試驗用具的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種用可與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)檢測試樣中待測物的層析試驗用具，該層析試驗用具用于用全血進行的檢査。
背景技術：
：作為用可與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)檢測試樣中的待測物的試驗用具，可以舉出層析試驗用具。過去，這種層析試驗用具主要用于檢測血清試樣中的待測物，但近幾年，出現(xiàn)了用于全血的層析試驗用具。比如專利公開2000-258418號公報上公開了一種層析試驗用具，其具有血細胞分離部件，所述血細胞分離部件可去除全血中的血細胞成份、只讓血漿成份通過。在這種試驗用具中加入試樣(全血)，只有試樣中的血漿成份通過血細胞分離部件到達試劑部件，試樣中的紅細胞不能通過血細胞分離部件。血漿中的待測物和試劑部件中所含標記抗體結(jié)合形成復合物。復合物與血漿成份一同在展開層展開，被測定部件捕捉。捕捉到的復合物被已著色的標記抗體標記，因此通過視覺確認測定部件就能檢出試樣中的待測物。此時，試樣中的紅細胞不能通過血細胞分離部件，因此，不會因紅細胞的顏色而使測定部件的確認變得困難。然而，如專利公開2000-258418號公報上所述，按照試樣通過順序，使用配置有血細胞分離部件和試劑部件的層析試驗用具時，標記抗體會殘留在展開層，從而出現(xiàn)背景增強的問題。在層析試驗用具中，有無待測物的判斷是通過已被標記物標記的待測物被層析載體捕捉，用肉眼確認出現(xiàn)在測定部件的標記來實現(xiàn)的，因此，背景增強的話，測定部件的標記就難以識別，難以做出判斷。特別是當待測物極少時，測定部件的標記就會不鮮明，背景增強將無法正確識別標記，可能導致誤判斷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的范圍只由后附權利要求書所規(guī)定，在任何程度上都不受這一節(jié)
發(fā)明內(nèi)容的陳述所限。本發(fā)明提供一種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序，包括標記固定部件，其具有可與液體成份中所含待測物特異性結(jié)合的標記物；血細胞分離部件，用于分離試樣中的一定的血細胞成份和液體成份；及層析載體，固定可與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。所述標記固定部件具有添加試樣的加樣區(qū)。所述標記固定部件和所述血細胞分離部件由多孔材料構(gòu)成，所述標記固定部件的孔徑大于所述血細胞分離部件的孔徑。所述標記固定部件和所述血細胞分離部件在試驗用具水平放置的狀態(tài)下，呈垂直方向重疊配置。所述血細胞分離部件按照試樣通過順序，含有第一血細胞分離部件，通過讓所述液體成份比所述一定的血細胞成份更快地移動來分離所述一定的血細胞成份和液體成份；第二血細胞分離部件，通過捕捉一定的血細胞成份并讓液體成份通過來分離所述一定的血細胞成份和液體成份。所述層析試驗用具，還有用于吸收從層析載體通過的試樣中所含的液體成份的吸收部件。所述層析試驗用具，還有用于防止試樣中的液體成份蒸發(fā)的保護部件。本發(fā)明還提供一種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序，具有第一血細胞分離部件，用于分離試樣中一定的血細胞成份和液體成份；標記固定部件，其具有能與液體成份中所含的待測物特異性結(jié)合的標記物；第二血細胞分離部件，用于對第一血細胞分離部件分離過的血細胞成份和液體成份進行再分離；及層析載體，固定能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。所述第一血細胞分離部件通過使液體成份比一定的血細胞成份更快地移動來分離所述一定的血細胞成份和液體成份。所述第一血細胞分離部件由多孔材料制成。本發(fā)明再提供一種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序，具有第一血細胞分離部件，有能與液體成份所含待測物特異性結(jié)合的標記物，用于分離液體成份和一定的血細胞成份；第二血細胞分離部件，用于對第一血細胞分離部件分離過的液體成份和血細胞成份進行再分離；及層析載體，固定能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。-所述免疫層析試驗用具，第一血細胞分離部件具有添加試樣的加樣區(qū)。所述免疫層析試驗用具，第一血細胞分離部件和第二血細胞分離部件由多孔材料構(gòu)成，標記固定部件的孔徑大于第一血細胞分離部件的孔徑。圖l為本發(fā)明一實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖2為比較例1的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖3為本發(fā)明其他實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖4為本發(fā)明其他實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖5為本發(fā)明其他實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖6為本發(fā)明其他實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖7為本發(fā)明其他實施方式的免疫層析試驗用具的結(jié)構(gòu)截面圖。圖8為使用全血作為試樣時，實施例l和比較例l的試驗用具隨時間推移的試樣展開狀態(tài)的照片。圖9為使用血清作為試樣時，實施例l和比較例l的試驗用具隨時間推移的試樣展開狀態(tài)的照片。具體實施方式-下面，參考附圖詳細說明本發(fā)明的層析試驗用具的實施方式。1.層析試驗用具的結(jié)構(gòu)圖l為本發(fā)明一實施方式的層析試驗用具(以下也稱"試驗用具")的結(jié)構(gòu)截面圖。如圖1所示，試驗用具1按照己添加的試樣S通過的順序，主要由標記固定部件2、第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件4、層析載體5和吸收部件7構(gòu)成。試樣S供用本實施方式的試驗用具檢查試樣S中是否含有待測物用。試樣S如果含有血細胞成份和液體成份，也可以是血液本身。試樣S可以將血液在展開溶劑中稀釋、制備，也可以從血液去除一部分成份來制備。血細胞成份包括如紅細胞、白細胞、血小板等。液體成份當試樣S是血液時，為血液中的血漿。當將血液在展開溶劑中稀釋、制備試樣S時，液體成份是血液中的血漿和展開溶劑。一般來說，在層析試驗用具的一定部位(比如圖1的加樣區(qū)10)添加試樣，所添加的試樣就會在各部件依次移動、出現(xiàn)在層析載體上，在層析載體上展開(移動)后到達判斷區(qū)6。在本說明書的說明中，在如圖l所示將試驗用具l水平放置的狀態(tài)下，試樣在層析載體上展開的方向(圖1的箭頭A方向)稱為"試樣展開方向"，與試樣展開方向相對的垂直方向(圖1的箭頭B方向)稱為"垂直方向"。標記固定部件2有可與待測物特異性結(jié)合的標記物。第一血細胞分離部件3通過使試樣S中所含液體成份比紅細胞和白細胞等一定的血細胞成份更快速地移動，來分離一定血細胞成份和液體成份。第二血細胞分離部件4通過捕捉血細胞成份且讓液體成份通過，來分離一定的血細胞成份和液體成份。層析載體5將能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物固定在判斷區(qū)6。如圖1所示，標記固定部件2和第一血細胞分離部件3在試驗用具1水平放置的狀態(tài)下，沿垂直方向上下重疊配置，因此只在接觸面3a的垂直方向接觸。第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4在接觸面4a接觸。第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4之間配置有密封部件9，用于防止試樣S從第一血細胞分離部件3沿試樣展開方向進入第二血細胞分離部件4。第二血細胞分離部件4和層析載體5沿試樣展開方向和垂直方向接觸配置。層析載體5的試樣展開方向下游一側(cè)與層析載體5接觸地配置有吸收部件7。上述第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件4、層析載體5、吸收部件7均貼在由塑料、紙或玻璃等構(gòu)成的襯底8上。試驗用具1被保護膜11~13覆蓋著。下面就各組成部件進行詳細說明。標記固定部件2標記固定部件2含有能與試樣S中的液體成份所含的待測物特異性結(jié)合的標記物。此標記固定部件2，在試驗用具l中，配置在試樣S最先通過的位置，有添加試樣S的加樣區(qū)IO。在此，"待測物"的種類沒有特別限定，只要含在人等動物的血液中且不會被后述第二血細胞分離部件4過濾掉的均可。舉例來說，作為待測物有抗原、抗體、激素、激素受體、凝集素、凝集素結(jié)合型糖質(zhì)、藥物或其代謝物、藥物受體、核酸及其片段、變異體和組合等。作為待測物，具體而言可以是細菌、原生生物和真菌等細胞、病毒、蛋白質(zhì)、多糖類等，如除上述流感病毒外，還有副流感病毒、RS病毒、肺炎支原體、輪狀病毒、杯狀病毒、冠狀病毒、腺病毒、腸道病毒、皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、重癥急性呼吸器癥候群病原病毒、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、瘧原蟲、及消化器官疾病、中樞神經(jīng)疾病、出血熱等各種疾病的病原體、這些病原體的代謝物、癌胚抗原和CyFRA等腫瘤標記物、激素等。使用狗血時，作為待測物還可以列舉出絲蟲抗原。用貓血時，作為待測物還可例舉出貓白血病病毒、貓免疫缺陷病毒及其抗體等。標記固定部件2所含有的標記物是能與上述待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)。作為這種標記物比如可以利用能與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)與有色粒子的結(jié)合物。作為能與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)，比如當待測物是抗原或抗體時，可以使用能通過與該抗原或抗體的抗原抗體反應而結(jié)合的抗原或抗體。此外，還可以使用能基于類似配體受體結(jié)合的生物學的親和性與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)。有色粒子比如可列舉出有色膠乳粒子、金等金屬膠體等。如此，通過用有色粒子標記能與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)，即可用肉眼確認試樣中有無待測物。此標記固定部件2可以使用無紡布和多孔材料等各種素材。尤以使用玻璃纖維、纖維素纖維等多孔材質(zhì)的材料為宜。當后述第一血細胞分離部件3使用多孔材料時，用于標記固定部件2的多孔材料孔徑最好大于第一血細胞分離部件3的孔徑。這種結(jié)構(gòu)可以使試樣易于滲入標記固定部件2，使試樣在標記固定部件2處充分展開之后再移動到第一血細胞分離部件3，從而提高展開效率。而且，由于標記固定部件2的孔徑比第一血細胞分離部件3的孔徑大，試樣可以充分滲入標記固定部件2之后，慢慢移動到第一血細胞分離部件3，因此試樣接觸標記固定部件2的時間加長，標記物的洗提更加充分。標記固定部件2最好與后述第一血細胞分離部件3沿垂直方向上下重疊配置。這種結(jié)構(gòu)會使?jié)B透到標記固定部件2的大部分試樣S因自重而移向第一血細胞分離部件3，從而能夠使更多的試樣最終到達層析載體5的判斷區(qū)6，更精確地檢測出待測物。第一血細胞分離部件3第一血細胞分離部件3通過使試樣S中所含液體成份比紅細胞和白細胞等血細胞成份更快地移動來分離血細胞成份和液體成份。更具體地說，第一血細胞分離部件3由多孔材料構(gòu)成，其孔的孔徑和血細胞(特別是紅細胞)差不多大或略大一點點。用這種材料，試樣S所含液體成份可以順暢地從細孔通過，而紅細胞和白細胞等一定的血細胞成份卻不能順暢地從細孔通過，因此，液體成份在第一血細胞分離部件3的展開速度比血細胞成份快。所以，血細胞成份與液體成份得以分離。血液中所含血細胞因其種類不同大小也各異。故試樣中可能含有各種大小的血細胞成份。比如，當試樣含人的全血時，試樣中可能含有的血細胞及其大小如下白細胞中淋巴細胞為615um，單核細胞為1218um，中性細胞為1012um，嗜堿性細胞為1015tim，嗜酸性細胞為1015iim，紅細胞為78ym，血小板為l4um。血小板等較小血細胞成份可能會以與紅細胞等較大血細胞成份差不多的速度在第一血細胞分離部件3中移動。然而，即使血小板出現(xiàn)在判斷區(qū)6，判斷區(qū)6也不會因血小板的顏色而變得難以判斷，對檢測結(jié)果產(chǎn)生的影響很小，因此，不會給本實施方式的作用效果造成很大影響。紅細胞等血細胞的大小因動物種類而多種多樣。比如與人的紅細胞大小相比，狗的紅細胞大小約為80%，貓的紅細胞大小約為50%。因此，第二血細胞分離部件4根據(jù)血樣的動物種類的紅細胞大小適當選擇細孔的尺寸。第一血細胞分離部件3可以使用紙色譜法和薄層色譜法中使用的膜。比如，可以使用硝化纖維素、尼龍(比如作為置換基可以有羧基和烷基的、導入了氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料的膜。具體而言，可以使用MF1(橫向流動，Whatman公司)、LF1(橫向流動，Whatman公司)、FUSI0N5(Whatman公司)等市售品。第一血細胞分離部件3，最好為膜狀，是向試樣展開方向移動試樣，并向試樣展開方向分離試樣的部件。第一血細胞分離部件3的結(jié)構(gòu)和用第一血細胞分離部件3進行試樣分離的方向無特別限定。比如第一血細胞分離部件3可以是塊狀，也可以是向垂直方向分離試樣S的部件。在第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4之間，設置有防止試樣S沿試樣展開方向從第一血細胞分離部件3進入第二血細胞分離部件4的密封部件9。密封部件9只要能防止試樣進入，對其結(jié)構(gòu)和材料無特別限定。作為密封部件，具體地說也可以使用ARcare系列(Adhesives公司)等市售品。在本實施方式中，第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4在接觸面4a直接接觸，但在第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4之間，也可以設置其他不妨礙試樣S從第一血細胞分離部件3移動到第二血細胞分離部件4的部件。第二血細胞分離部件4第二血細胞分離部件4是通過捕捉紅細胞并讓液體成份通過，來分離紅細胞和白細胞等血細胞成份與液體成份的部件。第二血細胞分離部件4配置于第一血細胞分離部件的試樣展開方向下游一側(cè)。第二血細胞分離部件4由具有規(guī)格小于待捕捉的血細胞(如紅細胞)的細孔的多孔材料構(gòu)成。以這種結(jié)構(gòu)，待捕捉的血細胞無法通過細孔，從而被第二血細胞分離部件4捕捉。多孔材料中的細孔大小也可以從該多孔材料部件的上面向下逐漸變小。此時，在所述多孔材料部件的上側(cè)細孔比較大，試樣易于擴散，在充分擴散的狀態(tài)下試樣到達該多孔材料部件的下側(cè)規(guī)格較小一側(cè)的細孔，血細胞成份被此細孔捕捉，因而得以進行有效的分離。由于設置有第二血細胞分離部件4，試樣中的液體成份先從第一血細胞分離部件排出通過第二血細胞分離部件，而試樣中一定的血細胞成份遲于液體成份到達第二血細胞分離部件。因此，在第二血細胞分離部件因試樣中一定的血細胞成份發(fā)生堵塞之前，液體成份通過第二血細胞分離部件，從而使液體成份順利排出到層析載體，可迅速檢查。第二血細胞分離部件4也可以使用市場銷售的過濾膜。作為市場銷售的過濾膜，比如有BTSSP100、BTSSP200、BTSSP300(VerticalFlowType,PALL公司)等。第二血細胞分離部件4，最好為膜狀，向垂直方向移動試樣，并向垂直方向分離試樣。第二血細胞分離部件4的結(jié)構(gòu)和用第二血細胞分離部件4分離試樣的方向無特別限定。比如，第二血細胞分離部件4也可以是塊狀，也可是向試樣展開方向分離試樣的部件。層析載體5、判斷區(qū)6層析載體5是將能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物固定在判斷區(qū)6的部件。捕捉物只要是能與待測物特異性結(jié)合的物質(zhì)均可。作為這種待測物與捕捉物的特異性結(jié)合，可以舉出抗原抗體反應的結(jié)合及配體受體結(jié)合等基于生物學親和性的結(jié)合。比如當待測物是抗原時，可以使用與抗原相對的抗體作為標記物和捕捉物。此時，作為標記物使用的抗體和作為捕捉物使用的抗體，最好是分別識別抗原的不同部位(表位)。比如當待測物是抗體時，可以使用與抗體相對的抗原作為捕捉物使用，可以使用能與抗體特異性結(jié)合的物質(zhì)(抗體)作為標記物。層析載體5可以使用硝化纖維素、尼龍(比如作為置換基可以有羧基和烷基的、導入了氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料。吸收部件7可以使用纖維素和玻璃纖維等各種材料。吸收部件7吸收部件7通過吸收從層析載體5通過的試樣中的液體成份，來促進試樣的展開，配置在層析載體5的試樣展開方向下游。吸收部件7只要是可以通過毛細管現(xiàn)象吸收液體成份的材料就行，無特別限定，比如可以使用無紡布和多孔材料。吸收部件7也可以省略。此時，比如也可以通過延長層析載體5來促進試樣展開。保護膜ll、12、13本實施方式所涉及的試驗用具1具備防止試樣S所含的液體成份蒸發(fā)的保護組件，比如保護膜ll、12、13。保護膜ll配置于試驗用具l的試樣展開方向上游一側(cè)，配置在上游一側(cè)的保護膜ll覆蓋著標記固定部件2的下游一側(cè)的邊緣、第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4。保護膜12配置在試驗用具1的試樣展開方向下游一側(cè)，覆蓋吸收部件7。保護膜13配置在保護膜11和保護膜12之間，覆蓋包含判斷區(qū)6的層析載體5。配置在試樣展開方向上游一側(cè)和下游一側(cè)的保護膜ll、12可以使用同一種材料。覆蓋層析載體5的保護膜13最好使用透明或半透明的材料，以免妨礙對判斷區(qū)6的目測。有了這些保護膜ll、12、13，就可以防止試樣所含的液體成份蒸發(fā)，提高試樣的展開效率。也可以用不妨礙目測判斷區(qū)6的一種材料作為保護膜11、12、13。2.層析試驗用具的使用方法等下面用圖l詳細說明本實施方式中試驗用具l的使用方法和試驗用具l所起的作用。檢査時配置試驗用具l的方向無特別限定。試驗用具l可以在水平放置狀態(tài)下使用，也可以在垂直放置的狀態(tài)下使用。下面以試驗用具l在水平放置的狀態(tài)下使用為例進行說明。(1)試樣S的添加首先向加樣區(qū)10添加試樣S。此時，試樣S中是否含待測物尚且不明。下面，假設試樣S中含有待測物進行說明。在以下說明中，以使用全血作為試樣S為例進行說明。加樣區(qū)10是在試驗用具1添加試樣的部分。所謂加樣區(qū)IO，是指使用說明書、試驗用具l本身、或裝試驗用具l的容器等上的顯示指定為應該添加試樣部位的部位。在本實施方式的試驗用具l中，加樣區(qū)IO在標記固定部件2的試樣展開方向的最上游處。添加到加樣區(qū)10的試樣S滲入標記固定部件2內(nèi)，因毛細管現(xiàn)象而依次沿第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件4、層析載體5和吸收部件7移動。(2)復合物的形成移動到加樣區(qū)10的試樣S滲入標記固定部件2中，一邊洗提固定在標記固定部件2中的標記物，一邊因毛細管現(xiàn)象在標記固定部件2中移動。標記固定部件2有能與待測物特異性結(jié)合的標記物，因此，當試樣S中含有待測物時，待測物與標記物特異性結(jié)合形成復合物。形成的復合物與試樣S中的液體成份一起在標記固定部件2中移動，移動到與標記固定部件2在垂直方向上下重疊的第一血細胞分離部件3。未形成復合物狀態(tài)(浮游于液體成份中的狀態(tài))的待測物和標記物也隨試樣S—起移動到第一血細胞分離部件3。(3)第一血細胞分離部件進行的分離已通過標記固定部件2的試樣S進入第一血細胞分離部件3，在第一血細胞分離部件3內(nèi)被層析式地分離。第一血細胞分離部件3通過使試樣S所含液體成份比血細胞成份移動更快來分離血細胞成份和液體成份，因此試樣S中的液體成份先從第一血細胞分離部件3排出。試樣S中的血細胞成份在液體成份之后從第一血細胞分離部件3排出。從第一血細胞分離部件3排出的試樣S經(jīng)過第一血細胞分離部件3與第二血細胞分離部件4的接觸部位移動到第二血細胞分離部件4。在本實施方式中，第一血細胞分離部件3與第二血細胞分離部件4之間，配置有密封部件9，所述密封部件9用于防止試樣S從試樣展開方向進入第二血細胞分離部件4。以此，由于第一血細胞分離部件3與第二血細胞分離部件4只在接觸面4a垂直方向有接觸，所以從第一血細胞分離部件3排出的試樣S沿垂直方向進入第二血細胞分離部件4。在本實施方式中，分離血細胞成份的第二血細胞分離部件4，如后所述沿垂直方向分離血細胞成份，所以通過如上配置密封部件9，限制試樣S進入第二血細胞分離部件4的方向，可以更恰當?shù)厥沟诙毎蛛x部件4分離血細胞成份。(4)第二血細胞分離部件進行的分離已移動到第二血細胞分離部件4的試樣S沿垂直方向在第二血細胞分離部件4移動。第二血細胞分離部件4過濾式地分離試樣S。紅細胞等血細胞成份被第二血細胞分離部件4捕捉，液體成份不被捕捉而從第二血細胞分離部件4排出。以此，試樣S中所含紅細胞和白細胞等血細胞成份被作為過濾式分離部件的第二血細胞分離部件4所捕捉，無法到達判斷區(qū)6，因此判斷區(qū)6不會被紅細胞顏色染成紅色，不會影響判斷。在本實施方式中，因配置有根據(jù)移動速度分離血細胞成份的第一血細胞分離部件3，故液體成份最先進入第二血細胞分離部件4，血細胞成份遲于液體成份進入。第二血細胞分離部件4雖然捕捉血細胞，但同時具有讓液體成份通過的功能，因此，最先進入第二血細胞分離部件4的液體成份能夠原樣從第二血細胞分離部件4順利排出。而血細胞成份遲于液體成份進入第二血細胞分離部件4，在大部分液體成份排出后在第二血細胞分離部件4被捕捉。因此，不會在液體成份通過前因血細胞成份被第二血細胞分離部件4捕捉而使第二血細胞分離部件4堵塞，液體成份能夠順暢地通過第二血細胞分離部件4。從第二血細胞分離部件4排出的試樣S中所含的液體成份經(jīng)過第二血細胞分離部件4和層析載體5的接觸部位移動到層析載體5。如上所述，試樣S中可能含有各種大小不一的血細胞成份。試樣S中所含的比紅細胞和白細胞等血細胞成份小的血細胞成份，如血小板可能在第二血細胞分離部件4中未被捕捉，與液體成份一起通過。然而，即使血小板出現(xiàn)在判斷區(qū)6，判斷區(qū)6的判斷也不會因血小板顏色而受影響，對檢測結(jié)果的影響很小，因此，即使血小板與液體成份一起通過了第二血細胞分離部件4，對本實施方式的作用和效果也不會有重大影響。(5)檢査結(jié)果的判斷已移動到層析載體5的試樣S中所含的液體成份因毛細管現(xiàn)象在層析載體5中展開。此層析載體5將能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物固定在判斷區(qū)6。因此，當液體成份到達判斷區(qū)6時，固定在判斷區(qū)6的捕捉物與液體成份中的待測物或待測物和標記物的復合物特異性結(jié)合，被固定在判斷區(qū)6。待測物和標記物的復合物一旦被固定到判斷區(qū)6，標記物的標記就顯現(xiàn)在判斷區(qū)6。比如，如果標記物是有色粒子標記的物質(zhì)，則該有色粒子的顏色顯現(xiàn)在判斷區(qū)6，可以確認試樣S中存在待測物。另外，可能有兩種情況一種是待測物與標記物結(jié)合后待測物與捕捉物結(jié)合，還有一種是待測物與捕捉物結(jié)合后待測物與標記物結(jié)合。已通過判斷區(qū)6的液體成份從層析載體5排出，被吸收部件7吸收。通過此吸收部件7吸收液體成份，來促進液體成份的移動。本實施方式的試驗用具l如上所述，按試樣S通過的順序，由標記固定部件2、第一血細胞分離部件3構(gòu)成，因此，添加至加樣區(qū)10的試樣S包括足量的液體成份滲入標記固定部件2內(nèi)，充分洗提固定在標記固定部件2的標記物，之后逐漸向第一血細胞分離部件3移動。因此，從第一血細胞分離部件3排出的試樣S中的液體成份以在時間上均勻的濃度含有標記物，不會含有過高濃度的標記物。通過標記固定部件2的試樣S也可能含有成塊狀的標記物，但這種標記物或在通過第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4時受物理性阻礙而分散，或在第二血細胞分離部件4被過濾，因此，不會出現(xiàn)在層析載體5。在層析載體5移動的試樣S中所含液體成份不會含有過高濃度的標記物或混有標記物塊，試樣S中的液體成份可以很順暢地在層析載體5移動。因此，使用本實施方式的試驗用具，標記物殘留在層析載體5上的情況減少，可以減弱背景。在本說明書中所謂"背景"，指由于標記物殘留或停滯在層析載體上而產(chǎn)生的除判斷區(qū)外的層析載體上的非特異性標記的程度。比如，當標記物是己被著色物質(zhì)時，背景是指除判斷區(qū)外的層析載體的著色程度。因此，在標記物是已被著色物質(zhì)的情況下，所謂背景強，是指除判斷區(qū)外的層析載體的著色程度高，所謂背景弱，是指除判斷區(qū)外的層析載體的著色程度低。使用本實施方式的試驗用具1可以使試樣S所含標記物的濃度變得均勻，從而得以提高試樣S的展開速度，縮短檢查時間。在本實施方式中，標記固定部件2有加樣區(qū)10。采取這種結(jié)構(gòu)可以使每個單位時間內(nèi)接觸標記固定部件2的試樣S更多，可以使在層析載體5處展開的液體成份中的標記物濃度在所經(jīng)過的時間前后更加均勻。因此含有標記物的液體成份得以更加順暢地在層析載體移動，背景更加減弱。本實施方式中的試驗用具1將標記固定部件2配置在試樣S最先接觸的位置，這就可以延長從試樣S與標記物接觸后到到達判斷區(qū)6的時間，即反應時間。從而得以充分標記試樣S的液體成份中所含的待測物，感度更好。在上述實施方式中，采用的是配備有防止試樣S中的液體成份蒸發(fā)的保護膜11-13的結(jié)構(gòu)，但也可以如圖3所示，省略此保護膜1113。在上述實施方式中，標記固定部件2和第一血細胞分離部件3沿垂直方向上下重疊配置，僅在接觸面3a垂直方向接觸，但不限于這種結(jié)構(gòu)，也可以如圖4所示，標記固定部件2和第一血細胞分離部件3在試樣展開方向和垂直方向接觸。在上述實施方式中，作為分離試樣中的血細胞成份的血細胞分離部件，采用的是使用第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4的結(jié)構(gòu)，但不限于這種結(jié)構(gòu)，也可以僅使用其中之一。比如也可以如圖5所示，將只具備第二血細胞分離部件4的試驗用具作為血細胞分離部件。這種結(jié)構(gòu)也可以阻止紅細胞向?qū)游鲚d體5移動，所以不會影響在判斷區(qū)6確認判斷結(jié)果。在上述實施方式中，按試樣通過順序，試驗用具l的結(jié)構(gòu)由標記固定部件2、第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4構(gòu)成，但不限于這種結(jié)構(gòu)。比如也可以如圖6所示，將標記固定部件2配置于第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件4之間?；蛘?，也可以如圖7所示，不使用標記固定部件2，取而代之使用固定標記物的第一血細胞分離部件3。如上所述，第一血細胞分離部件3由具有大小與血細胞差不多或比血細胞略大一點的微細孔的多孔材料構(gòu)成，因此，雖然包括紅細胞在內(nèi)的一定的血細胞成份的移動會受到第一血細胞分離部件3的阻礙，但液體成份卻可以順暢地在第一血細胞分離部件3移動。g卩，即使結(jié)構(gòu)如圖6或圖7所示，也可以使排出到層析載體5的液體成份中的標記物濃度在各時間段上很均勻，因此可以讓足量的液體成份與標記物接觸，背景會大幅減弱。如果像過去的層析試驗用具那樣，讓試樣按血細胞分離部件、標記固定部件的順序通過，則添加的試樣會因毛細管現(xiàn)象從血細胞分離部件一點一點地流入標記固定部件，一邊洗提標記物一邊在試驗用具上展開。因此，排到層析載體的試樣中標記物的濃度會在剛排到層析載體時過高，其后隨著試樣向?qū)游鲚d體排出，漸漸降低，時間上變得不均勻。加之，已通過標記固定部件的試樣照原樣排到層析載體，因此，洗提到試樣中的標記物在未充分散開的狀態(tài)下排到層析載體。這樣，先排到層析載體的試樣中含有的高濃度標記物處于未充分散開的狀態(tài)，試樣將無法順暢地在層析載體上移動，可能出現(xiàn)標記物殘留或停滯在層析載體上，而使背景增強的情況。此點，比如圖l所示層析試驗用具，添加的試樣比起血細胞分離部件來先接觸標記固定部件，每單位時間能夠增加接觸標記固定部件的試樣。因此，排到層析載體的試樣中的標記物濃度在各時間上能夠保持均勻，不會有試樣中的標記物濃度過高的情況。況且，標記物洗提到試樣中后才通過血細胞分離部件，因通過血細胞分離部件時的物理性阻力，標記物將充分分散在試樣中。因此，試樣能夠順暢地在層析載體移動，從而減少標記物在層析載體的殘留或停滯，背景得以減弱。[實施例]1.實施例l的試驗用具的制作如圖l所示制作實施例l的試驗用具。部件的規(guī)格見表l。各部件間的重疊如圖l所示。如圖1所示，此實施例l的試驗用具按試樣通過的順序由標記固定部件2、第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件4、層析載體5和吸收部件7構(gòu)成。標記固定部件2有添加試樣S的加樣區(qū)10?？祃]<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2.比較例l的試驗用具的制作如圖2所示制作比較例l的試驗用具。比較例l的試驗用具與實施例l的試驗用具不同，按試樣通過順序由第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件4和標記固定部件2構(gòu)成。隨著標記固定部件2位置的變更，在比較例l的試驗用具中，添加試樣的加樣區(qū)10設置在第一血細胞分離部件3。比較例l除這一點外，其他結(jié)構(gòu)都與實施例l的試驗用具相同。3.效果確認實驗下面，用下述方法進行實驗，以驗證本發(fā)明的效果。3—1.背景減弱效果的確認使用實施例l的試驗用具和比較例l的試驗用具，在各自的加樣區(qū)加入100"L全血并在試驗用具1上展開，觀察出現(xiàn)在層析載體5上的背景。其結(jié)果如圖8所示。圖8是顯示在實施例1和比較例1的試驗用具中隨時間推移的試樣展開情況的照片。從圖8也可看出，實施例1的試驗用具從加樣開始3分鐘后、5分鐘后、IO分鐘后、15分鐘后的每個時刻的標記物在層析載體5上的殘留均比比較例l的試驗用具少。特別是從加樣開始5分鐘后標記物在層析載體5上的殘留用肉眼看不到，背景己經(jīng)減到無限弱的水平。另一方面，比較例1的試驗用具在從加樣開始3分鐘后、5分鐘后、IO分鐘后、15分鐘后的每個時刻，標記物在層析載體5上有殘留，比實施例1背景強。此結(jié)果證實了用本實施例l的試驗用具檢查全血時，殘留在層析載體5上的標記物減少，背景減弱。與上述實驗同樣，用實施例l的試驗用具和比較例l的試驗用具，分別在各自的加樣區(qū)加入含有HBs抗原的血清100uL并在試驗用具l上展開，觀察出現(xiàn)在層析載體5上的背景。實施例l和比較例l的標記固定部件2含有已用標記物標記的可與HBs抗原特異性結(jié)合的物質(zhì)所生成的物質(zhì)，判斷區(qū)6固定有可與HBs抗原特異性結(jié)合的物質(zhì)。其結(jié)果如圖9所示。圖9是顯示在實施例1和比較例1的試驗用具中隨時間推移的試樣展開情況的照片。從圖9也可看出，實施例1的試驗用具在從加樣開始3分鐘后、5分鐘后、IO分鐘后、15分鐘后的每個時刻的標記物在層析載體5上的殘留均比比較例l的試驗用具少，背景減弱。另一方面，比較例1的試驗用具在從加樣開始3分鐘后、5分鐘后、IO分鐘后、15分鐘后的每個時刻，標記物在層析載體5上殘留很多，比實施例l背景強。在15分鐘后的時刻，比較例l和實施例l背景已無很大差異，但如圖9所示，實施例1的判斷區(qū)6比比較例1的判斷區(qū)6顏色深且鮮明。由此結(jié)果證實，用本實施例l的試驗用具檢査血清時，殘留在層析載體5上的標記物減少，背景減弱。由以上證實，使用本實施例l的試驗用具無論全血、血清等試樣種類如何，均可減弱背景。因此，使用本實施例l的試驗用具誤判的危險性低，可得出更正確的檢査結(jié)果。3—2.展開速度的效果確認下面，進行以下實驗，以確認使用本實施例的試驗用具時的展開速度。用實施例l的試驗用具和比較例l的試驗用具，在各自的加樣區(qū)分別添加全血100iiL并在試驗用具l上展開，計量加樣后到試樣出現(xiàn)在層析載體5上所需時間以及加樣后到試樣到達吸收部件7所需時間。此實驗分別用采自不同生物的全血進行三次。其結(jié)果如表2—l和表2—2所示?？?—1〗出現(xiàn)在層析載體上所需的時間(秒)實施例l的試驗用具比較例l的試驗用具標本l19132標本224108標本318138康2—2]到達吸收部件所需時間(秒)實施例l的試驗用具比較例l的試驗用具標本l189391<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>從表2—1和表2—2得知，當使用實施例l的試驗用具時，添加的試樣出現(xiàn)在層析載體5上所需的時間和添加的試樣到達吸收部件7所需的時間均比比較例l的試驗用具所需時間短。下面，與上述同樣，用實施例l的試驗用具和比較例l的試驗用具，在各自的加樣區(qū)分別添加血清100nL并在試驗用具l上展開，計量加樣后到試樣出現(xiàn)在層析載體5上所需時間以及加樣后到試樣到達吸收部件7所需時間。此實驗分別用釆自不同生物的血清進行三次。其結(jié)果如表3—1和表3—2所示。出現(xiàn)在層析載體上所需的時間(秒)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>從表3—l和表3_2得知，實施例1的試驗用具從添加試樣到出現(xiàn)在層析載體5上所需的時間和到達吸收部件7所需的時間均比比較例1的試驗用具所需時間短。由以上證實，使用本實施例l的試驗用具無論全血、血清等試樣種類如何，均可提高試樣的展開速度。因此，使用本實施例l的試驗用具可以實現(xiàn)更加快速的檢查。權利要求1.一種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序，包括標記固定部件，有能與液體成份中所含的待測物特異性結(jié)合的標記物；血細胞分離部件，用于分離試樣中一定的血細胞成份和液體成份；及層析載體，固定能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。2.權利要求1所述層析試驗用具，其特征在于所述標記固定部件具有添加試樣的加樣區(qū)。3.權利要求1所述層析試驗用具，其特征在于所述標記固定部件和所述血細胞分離部件由多孔材料構(gòu)成，所述標記固定部件的孔徑大于所述血細胞分離部件的孔徑。4.權利要求1所述層析試驗用具，其特征在于所述標記固定部件和所述血細胞分離部件在試驗用具水平放置的狀態(tài)下，呈垂直方向重疊配置。5.權利要求l所述層析試驗用具，其特征在于所述血細胞分離部件按照試樣通過的順序包括，第一血細胞分離部件，通過讓液體成份比一定血細胞成份更快地移動來分離所述一定血細胞成份和液體成份；第二血細胞分離部件，通過捕捉一定血細胞成份并讓液體成份通過來分離所述一定的血細胞成份和液體成份。6.權利要求1所述層析試驗用具，還具有用于吸收已從層析載體通過的試樣中所含液體成份的吸收部件。7.權利要求1所述層析試驗用具，還具有用于防止試樣中的液體成份蒸發(fā)的保護部件。8.—種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序具有第一血細胞分離部件，用于分離試樣中一定的血細胞成份和液體成份；標記固定部件，具有能與液體成份所含待測物特異性結(jié)合的標記物；第二血細胞分離部件，用于對第一血細胞分離部件已分離過的血細胞成份和液體成份進行再分離；及層析載體，固定能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。9.權利要求8所述層析試驗用具，其特征在于第一血細胞分離部件通過使液體成份比一定血細胞成份更快地移動來分離所述一定的血細胞成份和液體成份。10.權利要求8所述層析試驗用具，其特征在于第一血細胞分離部件由多孔材料制成。11.—種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序具有第一血細胞分離部件，有能與液體成份所含待測物特異性結(jié)合的標記物，用于分離液體成份和一定的血細胞成份；第二血細胞分離部件，用于對第一血細胞分離部件已分離過的液體成份和血細胞成份進行再分離；及層析載體，固定能與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。12.權利要求ll所述層析試驗用具，其特征在于第一血細胞分離部件具有添加試樣的加樣區(qū)。13.權利要求ll所述層析試驗用具，其特征在于第一血細胞分離部件和第二血細胞分離部件由多孔材料構(gòu)成，標記固定部件的孔徑大于第一血細胞分離部件的孔徑。全文摘要一種層析試驗用具，按照含血細胞成份和液體成份的試樣通過的順序，包括標記固定部件，有可與液體成份中所含待測物特異性結(jié)合的標記物；血細胞分離部件，用于分離試樣中一定的血細胞成份和液體成份；及層析載體，固定有可與待測物特異性結(jié)合的捕捉物。文檔編號G01N33/543GK101545903SQ20091012917公開日2009年9月30日申請日期2009年3月27日優(yōu)先權日2008年3月27日發(fā)明者真鍋智子申請人:希森美康株式會社