專利名稱：熒光標(biāo)記大麻性別基因特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)及方法，具體涉及大麻性別基因特異片 段檢驗(yàn)系統(tǒng)及方法。
背景技術(shù)：
大麻是一種古老的栽培植物，是世界上許多國(guó)家重要的經(jīng)濟(jì)作物，但因其 含有毒性成分——四氫大麻酚(THC)和大麻二醇(CBD)，已被聯(lián)合國(guó)禁毒公 約列為毒品。大麻為雌雄異株植物，雄性植株中不含THC和CBD或含量很少， 雌性植株二者含量則相對(duì)較高，因此認(rèn)為雌性植株具有藥用價(jià)值和作為毒品的 濫用潛力。然而大麻雌雄植株在幼苗時(shí)期難以區(qū)分，只有當(dāng)植株開(kāi)花后才能辨 認(rèn)，從而錯(cuò)過(guò)了鏟除毒品原植物的最佳時(shí)期。因此大麻性別的鑒別、特別是早 期鑒別對(duì)于打擊毒品犯罪具有重大意義。
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，大麻性別檢驗(yàn)技術(shù)也在飛速發(fā)展，早期是通過(guò)大麻 外部形態(tài)及生理生化特征的差異鑒別大麻性別，相繼發(fā)展到由細(xì)胞水平的差異 和目前在DNA分子水平上研究大麻性別。從上世紀(jì)90年代至本世紀(jì)初國(guó)內(nèi)外 學(xué)者用擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)或隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA (RAPD)技術(shù) 對(duì)大麻性別進(jìn)行鑒定，找到了相應(yīng)的大麻性別的AFLP標(biāo)記和RAPD標(biāo)記并進(jìn) 行了序列測(cè)定或轉(zhuǎn)化為可靠性穩(wěn)定性更好的SCAR(sequence characterized amplified regions)標(biāo)記。這些DNA分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于雌雄異株植物的性別鑒 別，相對(duì)于形態(tài)及生理生化特征的鑒別提高了鑒別結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
RAPD標(biāo)記技術(shù)是Williams等(19卯)提出的，其原理是用含有10個(gè)堿基隨 機(jī)序列組成的寡核苷酸做引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得長(zhǎng)度不同的多態(tài)性DNA片 段。它具有設(shè)計(jì)引物無(wú)須知道序列信息，不需要DNA探針，合成一套引物，可 用于不同生物，技術(shù)簡(jiǎn)便，成本較低等優(yōu)點(diǎn)。由于這些優(yōu)點(diǎn)，使該技術(shù)在動(dòng)植 物及人類基因定位和作圖研究中都得到了廣泛的應(yīng)用。如在大麻性別研究中 Sakamoto等(1995)用15個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增得到一條700 bp的雄性特異帶；Hong Shao等(2003)用15個(gè)隨機(jī)引物對(duì)大麻雌雄株進(jìn)行了 RAPD分子標(biāo)記，其中有一個(gè)引物擴(kuò)增出雌株特異條帶，找到了與雌性相關(guān)的特異標(biāo)記。但RAPD標(biāo)記 技術(shù)的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差，每個(gè)標(biāo)記提供的信息量少，不能鑒別雜合子和純合子， 檢測(cè)受反應(yīng)條件的影響較大，結(jié)果可靠性低。
AFLP標(biāo)記技術(shù)是由Zabeau和Vos于1993年創(chuàng)立的，該技術(shù)結(jié)合了 RFLP 技術(shù)和RAPD技術(shù)的特點(diǎn)，使用人工接頭(adaptor)與基因組DNA限制性內(nèi)切酶 酶切片段連接并以此為DNA模板，合成系列3， 一末端，隨機(jī)變化三個(gè)堿基且 與人工接頭系列互補(bǔ)PCR引物進(jìn)行特異條件擴(kuò)增，通過(guò)變性PAGE電泳檢測(cè)后 可獲得多態(tài)性圖譜，AFLP技術(shù)革新是繼RFLP、 SSR和RAPD之后近幾年來(lái)， 發(fā)展最快的DNA分子標(biāo)記技術(shù)，在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)、漁業(yè)、醫(yī)學(xué)等生命科 學(xué)領(lǐng)域中正得到廣泛應(yīng)用。如在大麻性別研究中Giuseppe等(2002)對(duì)雄和雌 的BSA(bulked segregant analysis)進(jìn)行AFLP分析，表明大麻雄性染色體的存在。 V.M.Cristiana Molitemil (2004)利用意大利的雌雄異株栽培種大麻品種 Fibranova，對(duì)大麻的性別差異進(jìn)行了形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)研究。但AFLP技術(shù) 需進(jìn)行酶切位點(diǎn)和構(gòu)建人工接頭等，前期技術(shù)建立較復(fù)雜。
SCAR分子標(biāo)記是1993年由Paran和Michelmore提出的基于PCR技術(shù)的單 基因位點(diǎn)多態(tài)性遺傳標(biāo)記，SCAR分子標(biāo)記是在序列未知的DNA標(biāo)記(RAPD， AFLP等)基礎(chǔ)上，對(duì)其特異產(chǎn)物進(jìn)行回收、克隆和測(cè)序，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基 序列重新設(shè)計(jì)特異引物，并以此引物對(duì)基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得。新的 SCAR引物一般是在原來(lái)標(biāo)記引物的基礎(chǔ)上延長(zhǎng)了 IO個(gè)左右堿基，不僅加強(qiáng)了 與模板的特異性結(jié)合，而且提高了退火溫度，提高了轉(zhuǎn)化后新標(biāo)記檢測(cè)的專一 性。SCAR具有已知序列，標(biāo)記共顯性且簡(jiǎn)單易用、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。如Otto T6rjek等(2002)利用20條RAPD引物對(duì)雌雄異株和雌雄同株大麻栽培種進(jìn) 行分子標(biāo)記，其中有2個(gè)引物產(chǎn)生了與雄性植株的特異帶。將這兩條帶進(jìn)行了 分離、克隆和測(cè)序，并轉(zhuǎn)換為了SCAR標(biāo)記，通過(guò)F2檢測(cè)這兩個(gè)標(biāo)記與雄性表 現(xiàn)型緊密連鎖，通過(guò)F2的遺傳分析確定它們?cè)赮染色體上。
從檢測(cè)的角度來(lái)看，AFLP標(biāo)記、RAPD標(biāo)記和SCAR標(biāo)記在國(guó)內(nèi)主要采用 聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染技術(shù)或瓊脂糖電泳EB染色技術(shù)分析，相對(duì)于可應(yīng)用熒 光毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測(cè)的熒光標(biāo)記大麻性別特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)具有操作步驟多、耗時(shí)、靈敏度低，丙烯酰胺、EB染料試劑等對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康和環(huán)境等危害
較大，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員技術(shù)水平要求較高等缺點(diǎn)。特別是AFLP標(biāo)記和RAPD 標(biāo)記的電泳圖譜的譜帶較多，結(jié)果不簡(jiǎn)單易判，給檢驗(yàn)人員在分析識(shí)別時(shí)造成 了一定的難度，可能造成誤判或漏判，這是法庭科學(xué)鑒定中的最嚴(yán)重的錯(cuò)誤。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為了克服現(xiàn)有AFLP標(biāo)記、RAPD標(biāo)記和SCAR標(biāo)記的上述缺 點(diǎn)，本發(fā)明提供一種操作簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)時(shí)間短、結(jié)果可靠直觀、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度短 的大麻性別基因檢驗(yàn)系統(tǒng)及方法。
本發(fā)明提供一種熒光標(biāo)記大麻性別基因特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)，其中，所述檢 驗(yàn)系統(tǒng)是以熒光標(biāo)記的DM016為雄性引物、以熒光標(biāo)記的DM029為雌性引物、 并以待測(cè)大麻DNA為模板的PCR反應(yīng)系統(tǒng)，其中所述引物序列如下
DM016: (F) 5'FAM畫GCCCAAGTTGCTGCTGAG3， (R) 5，CCCACCGTTTAGGGAGCA3'
DM029: (K) 5,FAM-AGCCTGTCTAAGAGTGGG3， (R) 5'ACGTTGTTGCTCGTAAAT3，
本發(fā)明通過(guò)以待測(cè)大麻DNA為模板、以熒光標(biāo)記的DM016為雄性引物、以 熒光標(biāo)記的DM029為雌性引物的PCR反應(yīng)系統(tǒng)，成功的擴(kuò)增出可用于大麻性別 鑒定的長(zhǎng)度較短的基因片段，此方法操作簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)時(shí)間短、結(jié)果可靠直觀。
本發(fā)明還提供上述檢驗(yàn)系統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，其中
PCR反應(yīng)體系的初始變性條件92-98'C， 2-11分鐘；
變性條件91-97°C， 30秒鐘-2分鐘
退火54-66 °C, 30秒鐘-2分鐘，30循環(huán)；
延伸條件69-75匸，l分鐘；
終延伸72"C,2分鐘;
保溫4'C維持
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳測(cè)得各產(chǎn)物的片段長(zhǎng)度，得到待測(cè)植物性別檢測(cè)結(jié)果。
其中優(yōu)選條件為
PCR反應(yīng)體系的初始變性條件95°C， 11分鐘；變性條件94。C，30秒鐘； 退火6(TC，30秒鐘，30循環(huán)； 延伸條件72'C，1分鐘； 終延伸72"C，2分鐘； 保溫4'C維持。
所述電泳采用熒光毛細(xì)管電泳技術(shù)檢測(cè)。
大麻是雌雄異株植物，其為二倍體，染色體數(shù)20條，18條為常染色體，2 條為性染色體，大麻的性別主要由遺傳物質(zhì)決定，含有一個(gè)X和一個(gè)Y染色體 的植株一般為雄株，含有兩個(gè)X染色體的植株一般為雌株，但受環(huán)境等因素的 影響，大麻的性別又表現(xiàn)出具有一定的可變性。
本發(fā)明檢測(cè)毒品植物大麻基因組中性染色體上的特異片段，是用聚合酶鏈 反應(yīng)在一個(gè)反應(yīng)中使用熒光標(biāo)記引物同時(shí)擴(kuò)增兩個(gè)特異DNA片段來(lái)進(jìn)行大麻的 性別和初步的種屬鑒定。
本發(fā)明以GENEBANK中的大麻X、 Y染色體上的DNA序列為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)多 對(duì)引物，經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)挑選出具有對(duì)大麻性別特異型、擴(kuò)增效率和特異性高的 雄雌性引物各一對(duì)。實(shí)驗(yàn)表明該對(duì)引物具有組織同一性，在區(qū)分大麻雄性和雌 性植株方面具有良好的表現(xiàn)特征，并且在對(duì)大麻近親植物和大麻類毒品中經(jīng)常 參雜的植物桑、谷子、煙草、苜蓿、水稻、罌粟的種屬檢驗(yàn)中表現(xiàn)出種屬特 異性。
本發(fā)明提供的同時(shí)鑒別雌、雄性大麻的熒光標(biāo)記大麻X、 Y染色體引物的復(fù) 合擴(kuò)增體系，將用于復(fù)合擴(kuò)增分析的大麻雄、雌性寡核苷酸引物混合在同一個(gè) 試管內(nèi)。復(fù)合擴(kuò)增體系中的大麻性別片段被位于該基因兩側(cè)的一對(duì)引物擴(kuò)增， 其中每對(duì)引物中有一條引物的5'端進(jìn)行FAM熒光標(biāo)記。擴(kuò)增產(chǎn)物為129個(gè)堿基 和238個(gè)堿基，控制在300個(gè)堿基以內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對(duì)高度降解、腐敗檢材(如大麻 煙、大麻脂)的檢測(cè)。大麻雄、雌性植株檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。
本發(fā)明首先在國(guó)內(nèi)研制出大麻性別片段、并在單一反應(yīng)中復(fù)合擴(kuò)增的熒光 標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。為毒品原植物大麻的早期性別鑒別、為禁毒鏟毒、維護(hù)社 會(huì)穩(wěn)定提供了 一個(gè)有力的工具。經(jīng)過(guò)研究篩選出的DM016和DM029兩對(duì)性別鑒定引物組合，其中DM016 的擴(kuò)增片段是238bp， DM029的擴(kuò)增片段是129bp，目的片段相差lOObp左右， 適合用同一種熒光標(biāo)記，并且擴(kuò)增產(chǎn)物片段較小實(shí)現(xiàn)了高靈敏度和檢測(cè)抗腐敗 樣品的目的。兩者在實(shí)驗(yàn)中的最佳退火溫度均是60°C，引物間無(wú)穩(wěn)定的二聚體 或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，其復(fù)合擴(kuò)增效率高，靈敏度強(qiáng)，能夠滿足大麻性別鑒別的需要。 大麻雄、雌性植株檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。
本發(fā)明在國(guó)內(nèi)首先研制出大麻雄、雌性特異片段的熒光復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)體系， 其所使用的毛細(xì)管電泳檢測(cè)設(shè)備在全國(guó)大多數(shù)法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室都已裝備，較易 推廣和應(yīng)用于全國(guó)毒品原植物大麻的早期性別鑒別和禁毒鏟毒的實(shí)際案件中。
用DM016、 DM029兩對(duì)引物分別對(duì)內(nèi)蒙、山西、甘肅、新疆、云南、貴 州、安徽等八個(gè)不同產(chǎn)地的大麻雄、雌性樣本進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，八個(gè)產(chǎn)地雄、 雌性大麻的擴(kuò)增片段大小一致。測(cè)序結(jié)果表明雄性擴(kuò)增片段序列與GENEBANK 中提供的序列比對(duì)一致，說(shuō)明擴(kuò)增片段在大麻植物中具有很好的穩(wěn)定性。雌性 擴(kuò)增產(chǎn)物在擴(kuò)增片段的第30個(gè)堿基與GENEBANK中的堿基不同，存在突變， 但不影響結(jié)果判定。
在對(duì)大麻近親植物和大麻類毒品中經(jīng)常參雜的植物桑、谷子、煙草、苜 蓿、水稻、罌粟的種屬檢驗(yàn)中本復(fù)合擴(kuò)增體系結(jié)果表現(xiàn)出種屬特異性。
本發(fā)明的檢驗(yàn)系統(tǒng)適合中國(guó)范圍內(nèi)種植的大麻。


圖1大麻性別種屬特異性檢測(cè)結(jié)果(瓊脂糖電泳) 從左至右依次為Kb為空白對(duì)照；
l一7:桑、谷子、煙草、苜蓿、水稻、罌粟、大麻雄性樣本； 圖2大麻性別種屬特異性檢測(cè)結(jié)果(熒光電泳)
從上至下依次為l雌性大麻；2雄性大麻；3小麥；4桑葉;5煙葉;6核 桃葉；7月季葉；8柿子葉； 圖3使用熒光標(biāo)記大麻性別特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)大麻雄、雌性植株檢測(cè)結(jié) 果(3100基因分析儀電泳)； 從上至下依次為大麻雌性樣本、大麻雄性樣本-,圖4使用熒光標(biāo)記大麻性別特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)大麻煙檢測(cè)結(jié)果(橫坐標(biāo) 為堿基數(shù)、縱坐標(biāo)為相對(duì)熒光強(qiáng)度)； 本發(fā)明的有益效果如下
1、 靈敏度好，利于檢驗(yàn)涉毒案件中常遇到的腐敗干枯檢材。
2、 準(zhǔn)確率高
采自不同產(chǎn)地的336份大麻樣本，經(jīng)過(guò)檢測(cè)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)并分析基因型和表 型一致率達(dá)到95%以上。
3、 具有種屬特異性
在對(duì)大麻近親植物和大麻類毒品中經(jīng)常參雜的植物桑、谷子、煙草、苜
蓿、水稻、罌粟的種屬檢驗(yàn)中表現(xiàn)出種屬特異性(圖l、圖2)。
具體實(shí)施例方式
在下面的實(shí)施例中進(jìn)一步說(shuō)明了本發(fā)明，這并不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例
使用熒光標(biāo)記大麻性別特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)寧夏回族自治區(qū)固原市禁毒支 隊(duì)繳獲的大麻煙進(jìn)行檢驗(yàn)。
一、以硅珠法提取大麻煙樣品中的DNA，使用試劑和具體操作如下
1、試劑配制
Tris/NaCl (TES)消化緩沖液100mM Tris-HCL， 500mMNaCl， 2%SDS， 50mMDTT， 0.25mg/mL Proteinase K, lOmMEDTA， PH 8.0
吸附液12g GuSCN溶于10mL 0.1M Tris-HC1(PH6.4)，加入0.8mL 0.5M EDTA(PH 8.0)和0.5mLTriton-X100
漂洗液1: 12g GuSCN溶于10mL O.IM Tris-HC1(PH6.4)
漂洗液2: 50mM Tris-HCL， 10mMEDTA， 0.15mM NaCl(PH6.5)。用時(shí)取 30mL加入無(wú)水乙醇70rnL。
硅珠懸浮液lmL去離子水加入0.06g硅珠。
2、 DNA提取步驟
1 )取大麻煙約50mg研磨成粉末轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中加入400^L Tris/NaCl (TES)消化緩沖液，56'C消化2小時(shí)，期間每半小時(shí)震蕩混勻一次。2) 消化完畢后13000rpm離心2分鐘，取上清液300pL置于新1.5mL離心 管中，加入三倍體積的吸附液，震蕩混勻，56。C保溫15分鐘。
3) 取出離心管5000rpm離心15分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到另一新1.5mL離心 管中，加入硅珠懸液40uL,混勻后吸附1小時(shí)，期間每10分鐘混勻一次。
4) 將離心管5000rpm離心10分鐘，棄去上清液。加入500uL漂洗液1連 同硅珠轉(zhuǎn)移到新1.5mL離心管中，5000rpm離心IO分鐘，棄去上清液。
5) 加入500uL漂洗液2，震蕩洗滌，5000rpm離心IO分鐘，棄上清廢液。 重復(fù)此步驟兩次。
6) 打開(kāi)離心管蓋，室溫下?lián)]發(fā)干燥硅珠10 15分鐘。
7) 加入TE緩沖液50uL， 56°。孵育15分鐘，其間振蕩1次。
8) 12000rpm離心2分鐘，取上清進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或4。C保存?zhèn)溆谩?二、使用熒光標(biāo)記大麻性別特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行PCR反應(yīng)。
1、 PCR反應(yīng)體系
總體系 25
去離子水 13.6pL
10xPCR GOLD Buffer 2.5|iL
dNTP(2.5醒ol/L;) 2.0(xL
Mg2+(25mmol/L) 2單
雄性Primer(5^imol/L) 各LO(xL
雌性Primer(5拜ol/L) 各0.85^L
Taq Gold DNA聚合酶5U^iL 0.2pL
模板DNA l.OpL
2、 PCR反應(yīng)循環(huán)程序
1) 將PCR擴(kuò)增管置于熱循環(huán)儀上。
2) 使用下面推薦的程序進(jìn)行熱循環(huán)。
AB公司9600和9700熱循環(huán)儀的擴(kuò)增程序: 初始變性條件為95°C， ll分鐘;
變性條件為94°C， 30秒鐘；退火條件為6CTC， 30秒鐘，30循環(huán)； 延伸條件72°C， l分鐘； 終延伸72°C， 2分鐘； 保溫4t:維持；
3)擴(kuò)增后的樣品應(yīng)盡快檢測(cè)，否則應(yīng)密封避光保存在-2(TC。
三、 擴(kuò)增產(chǎn)物用ABI PRISM 3100遺傳分析儀檢測(cè)
1、 按1: 100比例混合內(nèi)標(biāo)(LIZ-500, AB公司)和去離子甲酰胺配制成 上樣混合物，振蕩混合均勻。
2、 向96孔板的每孔中加入15pL上樣混合物和lpL擴(kuò)增產(chǎn)物，快速離心， 避免產(chǎn)生氣泡。
3、 95。C變性3分鐘，立即放在冰上冷卻3分鐘，之后將96孔板置于ABI PRISM 3100遺傳分析儀中盡快電泳。
四、 檢驗(yàn)結(jié)果
使用3100型遺傳分析儀對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)后，采用GeneMapper ID3.2 (AB公司)軟件分析后得到各產(chǎn)物的片段長(zhǎng)度(圖4)。
獲得結(jié)果證明所繳獲的大麻煙均是由雌性大麻植株制備而來(lái)，說(shuō)明此大麻 煙是有組織的種植、與辦案單位偵查結(jié)果相一致。
權(quán)利要求
1.一種熒光標(biāo)記大麻性別基因特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)，其特征在于所述檢驗(yàn)系統(tǒng)是以熒光標(biāo)記的DM016為雄性引物、以熒光標(biāo)記的DM029為雌性引物并以待測(cè)大麻DNA為模板的PCR反應(yīng)系統(tǒng)，其中所述引物序列如下DM016(F)5’FAM-GCCCAAGTTGCTGCTGAG3’ (R)5’CCCACCGTTTAGGGAGCA3’DM029(F)5’FAM-AGCCTGTCTAAGAGTGGG3’ (R)5’ACGTTGTTGCTCGTAAAT3’。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)系統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，其特征在于 PCR反應(yīng)體系的初始變性條件92-98°C， 2-11分鐘； 變性條件91-97。C,30秒鐘-2分鐘；退火54-66°C, 30秒鐘-2分鐘，30循環(huán); 延伸條件:69-75。C， 1分鐘； 終延伸72。C，2分鐘； 保溫4'C維持；PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳測(cè)得各產(chǎn)物的片段長(zhǎng)度，得到待測(cè)植物性別檢測(cè)結(jié)果。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢驗(yàn)系統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，其特征在于 PCR反應(yīng)體系的初始變性條件95i:，ll分鐘； 變性條件94。C,30秒鐘;退火6CTC， 30秒鐘，30循環(huán); 延伸條件72"C,1分鐘； 終延伸72i:，2分鐘； 保溫4'C維持；PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳測(cè)得各產(chǎn)物的片段長(zhǎng)度，得到待測(cè)植物性別檢測(cè)結(jié)果。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2、 3所述的檢驗(yàn)系統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，其特征在于 所述電泳采用熒光毛細(xì)管電泳技術(shù)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種熒光標(biāo)記大麻性別基因特異片段檢驗(yàn)系統(tǒng)，其中，所述檢驗(yàn)系統(tǒng)是以熒光標(biāo)記的DM016為雄性引物、以熒光標(biāo)記的DM029為雌性引物并以待測(cè)大麻DNA為模板的PCR反應(yīng)系統(tǒng)。本發(fā)明同時(shí)提供該檢驗(yàn)系統(tǒng)的檢驗(yàn)方法。
文檔編號(hào)G01N21/64GK101525666SQ200910081869
公開(kāi)日2009年9月9日 申請(qǐng)日期2009年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月14日
發(fā)明者濤 馮, 政 凃, 季安全, 穎 張, 張貴芹, 彭建雄, 徐小玉, 董林芳, 黎 裴, 佳 郭 申請(qǐng)人:公安部物證鑒定中心