專利名稱：一種提取具柄植物葉片維管束汁液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物學(xué)領(lǐng)域，具體是涉及一種提取具柄植物葉片維管束汁液的方法。
背景技術(shù)：
刺吸式口器害蟲利用其口針插入到寄主植物篩管的維管束中吸食汁液獲取營(yíng)養(yǎng) (Gerling, D. and M. Lindenbaum. Host-plant related behavior of Be脂'57'fl to6fl"'. WPRS Bull., 1991， 14:83~88.)(劉光杰，Wilkins RM, Saxena R C.白背飛虱對(duì)不同抗蟲稻株 糖類物質(zhì)的利用.昆蟲學(xué)報(bào)，1995， 38 (4) : 421 427)，因此，為了準(zhǔn)確分析寄主 營(yíng)養(yǎng)與刺吸式口器害蟲的關(guān)系，就必須準(zhǔn)確地獲得植物維管束汁液。
傳統(tǒng)的提取植物維管束汁液的方法主要用"蚜蟲吻針?lè)?，即利用一種蚜蟲讓其刺 入植物葉片中，然后用刀切斷其口針，從而使汁液沿著口針流出。這種方法主要存在以 下幾個(gè)問(wèn)題①蚜蟲存在寄主選擇，它不能按人們的要求刺入所有的植物葉片，即它的 使用對(duì)象存在局限；②由于口針較細(xì)，而且是利用膨壓使維管束汁液流出，因此汁液的 量比較少；③蚜蟲口針刺入葉片的過(guò)程中要分泌唾液，這將不可避免地造成對(duì)樣品的污 染。
另一方面，由于直接獲取寄主植物篩管中的汁液比較困難，在寄主植物與刺吸式口 器害蟲關(guān)系的研究中，目前主要應(yīng)用寄主植物全葉片、寄主植物葉片莖部傷流液等為分 析研究對(duì)象，也有的以人工詞料飼養(yǎng)法進(jìn)行研究，這些間接取樣的分析方法造成了較大 的試驗(yàn)誤差。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有提取植物維管束汁液方法的局限性、易污染及誤差大的不足，本發(fā)明
提供了一種用壓力法直接獲取具柄植物葉片維管束汁液的方法，有效地解決了問(wèn)題。 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種提取具柄植物葉片維管束汁液的
方法，包括以下步驟
(1)樣品收集前處理用潔凈、鋒利的刀片沿葉片外緣0.5 lcm處環(huán)切，打開(kāi)葉 緣維管束；保留3~8cm的葉柄，多余葉柄用刀片切除；在距葉柄端部0.5~lcm處半環(huán)切，切出篩管部分。
(2)將處理過(guò)的植物葉片放入壓力室內(nèi)，葉柄留在壓力室外，然后對(duì)壓力室內(nèi)加 壓，使葉片篩管內(nèi)汁液從葉柄切口處流出，收集從篩管切口處流出的汁液。
上述步驟(2)中所說(shuō)的對(duì)壓力室內(nèi)加壓，是用鋼瓶裝高壓氣體對(duì)壓力室進(jìn)行加壓， 工作壓力1.0 5kpa，優(yōu)選1.5 3.5kpa 。所說(shuō)的高壓氣體優(yōu)選惰性氣體，如氮?dú)?、氦氣等?br> 本發(fā)明方法適用于的所有的具有葉柄的植物葉片的維管束汁液收集，包括但不限 于棉花。
本發(fā)明的核心技術(shù)是利用"壓力室"產(chǎn)生的壓力將具柄植物葉片維管束汁液壓出。 本發(fā)明方法與"蚜蟲吻針?lè)?相比，適用范圍寬，獲得樣品量大，樣品無(wú)污染；與"植 物全葉片法"相比，試驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非有另外說(shuō)明， 一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理 解的含義。
下面結(jié)合具體的實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施 例只是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。所 用試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用 相同試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。
實(shí)施例一棉花葉片維管束汁液收集
選大田棉花葉片若干，在葉柄基部用刀片切斷，放在瓷盤中用濕紗布保濕，外包黑 布避光。
用潔凈、鋒利的刀片沿葉片外緣0.5 lcm處環(huán)切，打開(kāi)葉緣維管束；保留3~8cm 的葉柄，多余葉柄用刀片切除；在距葉柄端部0.5~1011處半環(huán)切，切出篩管部分。將處 理過(guò)的棉花葉片放入壓力室內(nèi)，葉柄留在壓力室外，加壓，使葉片篩管內(nèi)汁液從葉柄切 口處流出，收集從篩管切口處流出的汁液。抽取液放入-37'C的冰箱中保存、待測(cè)。壓 力室工作氣體為鋼瓶裝氮?dú)?，工作壓?.0 5kpa。
棉花葉片維管束汁液中可溶性糖含量分析比較
以國(guó)抗22和常規(guī)棉親本泗棉3號(hào)為研究對(duì)象，分析、比較轉(zhuǎn)基因棉與常規(guī)棉親本之間維管束汁液中可溶性糖含量的差異。 1.1供試棉花
供試棉花品種為國(guó)抗22、泗棉3號(hào)。 1.2可溶性糖測(cè)定
采用蒽酮法。取一定量上述收集的維管束汁液，加入3ml蒽酮試劑，90'C加熱15min， 在620nm處測(cè)定光密度。取10 50u g葡萄糖采用同樣方法測(cè)定光密度，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)Bt基因棉花國(guó)抗22葉片維管束汁液中可溶性糖含量明顯低于常規(guī) 棉親本泗棉3號(hào)，其中，苗期和花鈴期分別低63.1%和低26.2%。
葉片維管束組織中可溶性糖含量隨著棉花生育進(jìn)程的推進(jìn)而增加。研究發(fā)現(xiàn)，棉花 苗期葉片維管束汁液中可溶性糖含量相對(duì)較低，花鈴期葉片維管束汁液中含量迅速提 高，如國(guó)抗22棉花花鈴期的可溶性糖含量是苗期的3.3倍。
實(shí)施例二與實(shí)施例一基本相同，不同之處在于，用潔凈、鋒利的刀片沿葉片外緣 0.5 lcm處環(huán)切，打開(kāi)葉緣維管束；保留6cm左右的葉柄，多余葉柄用刀片切除；在距葉 柄端部0.5 lcm處半環(huán)切，切出篩管部分。將處理過(guò)的棉花葉片放入壓力室內(nèi)，葉柄留在 壓力室外，加壓，使葉片篩管內(nèi)汁液從葉柄切口處流出，收集從篩管切口處流出的汁液。 抽取液放入-37'C的冰箱中保存、待測(cè)。壓力室工作氣體為鋼瓶裝氮?dú)?，工作壓?1.5 3.5kpa。
權(quán)利要求
1. 一種提取具柄植物葉片維管束汁液的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)樣品收集前處理用潔凈、鋒利的刀片沿葉片外緣0.5～1cm處環(huán)切，打開(kāi)葉緣維管束；保留3～8cm長(zhǎng)的葉柄，多余葉柄用刀片切除；在距葉柄端部0.5～1cm處半環(huán)切，切出篩管部分。(2)將上述處理過(guò)的植物葉片放入壓力室內(nèi)，葉柄留在壓力室外，然后對(duì)壓力室內(nèi)加壓，使葉片篩管內(nèi)汁液從葉柄切口處流出，收集從篩管切口處流出的汁液。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的提取具柄植物葉片維管束汁液的方法，其特征在于，步 驟(2)中所說(shuō)的對(duì)壓力室內(nèi)加壓，是用鋼瓶裝高壓氣體對(duì)壓力室進(jìn)行加壓，壓力為 1.0 5kpa。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所說(shuō)的提取具柄植物葉片維管束汁液的方法，其特征在于，所 說(shuō)的高壓氣體是惰性氣體。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物學(xué)領(lǐng)域，具體是涉及一種提取具柄植物葉片維管束汁液的方法。所說(shuō)的提取具柄植物葉片維管束汁液的方法，是先用潔凈、鋒利的刀片沿葉片外緣0.5～1cm處環(huán)切，打開(kāi)葉緣維管束；保留3～8cm的葉柄，多余葉柄用刀片切除；在距葉柄端部0.5～1cm處半環(huán)切，切出篩管部分；再將處理過(guò)的植物葉片放入壓力室內(nèi)，葉柄留在壓力室外，然后對(duì)壓力室內(nèi)加壓，使葉片篩管內(nèi)汁液從葉柄切口處流出，收集從篩管切口處流出的汁液。本發(fā)明方法具有適用范圍寬，獲得樣品量大，樣品無(wú)污染，試驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N1/28GK101290274SQ200810024869
公開(kāi)日2008年10月22日 申請(qǐng)日期2008年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月8日
發(fā)明者周福才 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)