專利名稱：鋰診斷/測定試劑盒及鋰濃度測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鋰診斷/測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定鋰濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/工業(yè)/環(huán)境檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
20世紀(jì)40年代，Cade首次用鋰鹽治療躁狂癥成功，總有效率約70%，鋰鹽對躁狂和抑郁的復(fù)發(fā)有預(yù)防作用，也用于治療分裂情感性精神病。另外，鋰鹽可使雙相障礙維持治療階段的自殺行為減少86%，而當(dāng)停用鋰鹽后，自殺危險性會增加7.5倍。當(dāng)血鋰濃度達(dá)到或超過1.5mmol/L，會出現(xiàn)不同程度的中毒癥狀，血鋰濃度3.0mmo1 / L以上可危及生命。
近幾年，臨床實驗室多數(shù)方法學(xué)都有了新的發(fā)展，但鋰的測定方法基本維持火焰原子發(fā)射法、火焰原子吸收法及離子選擇電極法。原子吸收的方法是將稀釋的標(biāo)本吸入乙炔火焰中，利用空心陰極元素?zé)艄庠窗l(fā)出被測元素的特征輻射光，為火焰原子化器產(chǎn)生的樣品蒸汽中的待測元素基態(tài)原子所吸收。鋰在波長670.8 nm處的被吸光的特征輻射光的大小與標(biāo)本中的鋰濃度成正比。但目前國內(nèi)的臨床實驗室沒有統(tǒng)一的實驗方法和實驗操作規(guī)程，也很難在精神病醫(yī)院的實驗室中査找到其使用情況。
自然界中無游離鋰，因此實際指鋰離子或鋰鹽，而碳酸鋰是最重要的鋰化物。碳酸鋰被用于陶瓷釉料的生產(chǎn)、特種玻璃、鋁的熔煉和鋼鐵鑄造粉末。氫氧化鋰和氯化鋰應(yīng)用在潤滑劑、空調(diào)和干燥系統(tǒng)中。丁基鋰、鋰金屬、特種無機物和特種有機物，被用于制藥、合成橡膠等領(lǐng)域。鋰是一種稀有金屬，鋰電池就以它為主要原料,航空航天工業(yè)也離不開鋰。金屬鋰與鋰合金在核能發(fā)電、輕質(zhì)高比強合金、輕金屬焊接等諸多領(lǐng)域都有著廣闊
的開發(fā)利用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple Reaction)技術(shù)，計量/連續(xù)監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定鋰濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的鋰診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行鋰濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明鋰濃度測定方法原理如下
肌醇-l-磷酸+水肌醇-1-磷酸酶/1^2+/1^肌醇+磷酸根磷酸根+葡萄糖葡萄糖-6-磷酸酶葡萄糖-6-磷酸+水葡萄糖-6-磷酸+輔酶葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
葡糖酸內(nèi)酯磷酸+還原型輔酶這種方法應(yīng)用能被鋰抑制活性的肌醇-l-磷酸酶(inositol-l-phosphase;EC 3丄3.25)酶(偶)聯(lián)葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase; EC 3.1.3.9)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6畫phosphate dehydrogenase; EC 1.1.1.49)酶促反應(yīng)速率比色法。肌醇-l-磷酸酶(需要鎂離子激活其活性，鋰離子能抑制鎂離子的激活作用)酶解肌醇-l-磷酸反應(yīng)產(chǎn)生磷酸根，再通過(偶)聯(lián)合葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，比較對照及鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，可以測算鋰的濃度大小。實驗表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明鋰診斷/測定試劑盒較為理想
緩沖液100 mmol/L
穩(wěn)定劑500 mmol/L
輔酶3 mmol/L
氯化鎂0.6 mmol/L
肌醇-l-磷酸酶10000U/L
葡萄糖-6-磷酸酶12000 U/L
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶12000 U/L
肌醇-l-磷酸8 mmol/L
葡萄糖20 mmol/L
氯化鎂可以用其它鎂鹽取代；如硫酸鎂等。
本發(fā)明的鋰診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括
緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑
試劑1
緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、葡萄糖。
試劑2
緩沖液、穩(wěn)定劑、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-
磷酸脫氫酶。輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑試劑1
緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、葡萄糖。試劑2
緩沖液、穩(wěn)定劑、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。試劑3
緩沖液、穩(wěn)定劑、肌醇-l-磷酸酶。輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖在試劑l、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
無論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測定鋰濃度的方法，其輔酶可以是NADP+ 、 NAD+或thio- NAD+中的 一 種。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例子對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實施例一
本實施例的鋰診斷/測定試劑為單試劑，包括
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液 100mmol/L穩(wěn)定劑 500 mmol/L
輔酶 3 mmol/L氯化鎂
肌醇-l-磷酸酶 葡萄糖-6-磷酸酶 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶 肌醇-l-磷酸
0.6 mmol/L 10000U/L 12000 U/L 12000 U/L 8 mmol/L 20 mmol/L
試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進(jìn)行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用 前，加入純凈水，復(fù)溶后使用。
在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37。C，反應(yīng)時間10分鐘，起始吸光 度《0.1，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測對照及鋰樣品與 試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，延遲時間大約l 分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
分別加入對照及樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置 于生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。 實施例二
本實施例的鋰診斷/測定試劑為雙試劑，包括 試劑1
三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩沖液 穩(wěn)定劑 輔酶 氯化鎂 肌醇-l-磷酸 葡萄糖
100 mmol/L 50 mmol/L
3 mmol/L 0.6 mmol/L
8 mmol/L 20 mmol/L試劑2
(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液
100 mmol/L
穩(wěn)定劑
500 mmol/L
肌醇_1_磷酸酶
10000U/L
葡萄糖-6-磷酸酶
12000U/L
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
12000 U/L
試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體雙試劑，可以直接使用。 在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37'C，反應(yīng)時間10分鐘，起始吸光 度《0.1，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測對照及鋰樣品與 試劑l、試劑2的體積比例為2/20/5，反應(yīng)方向為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，延 遲時間大約1分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
分別加入對照及樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置 于生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。 實施例三
本實施例的鋰診斷/測定試劑為三試劑，包括 試劑1
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液 10Ommol/L 穩(wěn)定劑 50 mmol/L
輔酉每 3 mmol/L
氯化鎂 0.6 mmol/L
肌醇-l-磷酸 8mmol/L 葡萄糖 20 mmol/L
試劑2
(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液
100 mmol/L穩(wěn)定劑
500 mmol/L
葡萄糖-6-磷酸酶
12000U/L
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
12000 U/L
試劑3
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液
100mmol/L
穩(wěn)定劑
500 mmol/L
肌醇-l-磷酸酶
10000U/L
試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體三試劑，可以直接使用。 測定鋰濃度時，在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37'C，反應(yīng)時間10 分鐘，起始吸光度《0.1,測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測 對照及鋰樣品與試劑l、試劑2、試劑3的體積比例為4/40/5/5，反應(yīng)方向 為正反應(yīng)(上升反應(yīng))，延遲時間大約l分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。 分別加入對照及樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置 于生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。
申請人經(jīng)過實驗驗證，采用以上發(fā)明內(nèi)容中記載的測定方法均能達(dá)到 本發(fā)明的目的，鑒于測定步驟等情況與以上實施例類同，不另一一例舉。
總之，實驗證明釆用本發(fā)明的測定方法完全可以通過一般生化分析 儀器得出所需的測定結(jié)果——空白試劑吸光度變化(AA/min)《0.035; 吸光度時間反應(yīng)曲線應(yīng)呈直線上升；試劑可測有效(R》0.99)線形范圍可 達(dá)0.6mmol/L;試劑測試的不準(zhǔn)確度，其相對偏差不超過土5 %;試劑測試 的精密度(重復(fù)性)的變異系數(shù)(CV)《3.8%;試劑的靈敏度可達(dá)0.058 ± 0.029 AA/mmol/L——本發(fā)明靈敏度高、精確度好，線形范圍寬廣，足 以便于推廣應(yīng)用。
權(quán)利要求
1. 一種利用能被鋰抑制活性的酶比色法及酶聯(lián)法的鋰的濃度測定方法，其方法原理如下肌醇-1-磷酸+水 <u>肌醇-1-磷酸酶/Mg</u><u>2+</u><u>/Li</u><u>+</u> 肌醇+磷酸根磷酸根+葡萄糖 <u>葡萄糖-6-磷酸酶</u> 葡萄糖-6-磷酸+水葡萄糖-6-磷酸+輔酶 <u>葡萄糖-6-磷酸脫氫酶</u> 葡糖酸內(nèi)酯磷酸+還原型輔酶將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，比較對照及鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，測算出鋰的濃度大小測定結(jié)果。
2. —種鋰診斷/測定試劑盒，主要成分包括緩沖液20——500 mmol/L穩(wěn)定劑1——-4000 mmol/L輔酶l一6 mmol/L肌醇-l-磷酸酶1000———80000 U/L葡萄糖-6-磷酸酶IOOO-——80000 U/L葡萄糖-6-磷酸脫氫酶IOOO-——80000 U/L氯化鎂0.1——50 mmol/L肌醇-l-磷酸1—50 mmol/L葡萄糖l一50 mmol/L試劑成分的濃度不一定只限于上述范圍；在此范圍內(nèi)效果較好，在 此范圍外，試劑仍會反應(yīng)作用；其特征在于試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用； 也可以配制成液體試劑，直接使用。氯化鎂可以用其它鎂鹽取代。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖組成單劑試劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖組成雙劑試劑；試劑l，由緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、葡萄糖組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶組成。輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖在試劑1或試劑2中的位置可以不限。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖組成多劑試劑；試劑l，由緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、葡萄糖組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定劑、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶組成；試劑3，由緩沖液、穩(wěn)定劑、肌醇-l-磷酸酶組成。輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、肌醇-l-磷酸、葡萄糖在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特征在于還包括穩(wěn)定劑1~4000 mmol/L或0.1%-100%體積比。所述穩(wěn)定劑為硫酸銨(AmmoniaSulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethyleneglycol)及防腐劑中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用能被鋰抑制活性的酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的鋰診斷/測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定鋰濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬于醫(yī)學(xué)/工業(yè)/環(huán)境檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒主要成分包括緩沖液、輔酶、氯化鎂、肌醇-1-磷酸、葡萄糖、肌醇-1-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶及穩(wěn)定劑；通過分別將對照及鋰樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生一系列的酶促反應(yīng)，再將反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀下，檢測主波長340nm處吸光度上升的程度/速度，比較對照及鋰樣品吸光度上升的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。
文檔編號G01N21/31GK101464310SQ20071019210
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月19日
發(fā)明者王爾中 申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司