專利名稱：：診斷急性冠狀動(dòng)脈綜合癥的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的檢測(cè)和/或診斷的方法、試劑盒和試劑。
背景技術(shù)：
：在美國(guó)心血管疾病是第一殺手。多數(shù)受害者死于心臟病發(fā)作，而從未去過(guò)急癥科。其中幸運(yùn)的患者可能主訴胸痛、頭痛、眩暈而趕緊去醫(yī)院。然而，并非所有患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的患者能得到準(zhǔn)確診斷。每年去醫(yī)院報(bào)告的數(shù)千例心臟病發(fā)作的患者被送回家。在美國(guó)有8,000,000人報(bào)告胸痛，其中本質(zhì)上為非心源性胸痛的3，000，000人被送回家，但這些人有40，000人患有心肌梗死。有5，000，000人由于疑似有心源性病因而留院察看，其中2，500，000人(50%)為非心源性，l，OOO，OOO人患有心肌梗死，1，200，000人患有不穩(wěn)定的心絞痛，而300,000人患有心搏驟停。這些數(shù)據(jù)為提高有ACS危險(xiǎn)的患者的篩選和診斷提供了初步的理論基礎(chǔ)。ACS的現(xiàn)行檢測(cè)法缺乏選擇性和靈敏度其中假陽(yáng)性和假陰性的頻率處于不理想的水平。因此，為心血管疾病的早期檢測(cè)和具體為心臟病發(fā)作的準(zhǔn)確診斷而開發(fā)額外的生物標(biāo)志物是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了ACS的快速檢測(cè)和/或準(zhǔn)確診斷的方法。通過(guò)檢測(cè)患者流體樣品中一個(gè)或兩個(gè)生物標(biāo)志物的濃度以實(shí)施所述方法。一個(gè)或兩個(gè)生物標(biāo)志物升高(或降低，如病例可能有)的濃度，其與"正常"的濃度(也就是未患有ACS的對(duì)照受試者)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，支持ACS陽(yáng)性的診斷。優(yōu)選，所述方法利用分析物或"生物標(biāo)志物"組，即樣品流體(如全血、血清、血漿或尿液)中發(fā)現(xiàn)的直達(dá)12種或更多種的物質(zhì)，幫助支持ACS陽(yáng)性或陰性的診斷。所述方法提供了在進(jìn)行準(zhǔn)確診斷中高達(dá)99%的準(zhǔn)確度。根據(jù)本發(fā)明，提供了一種在疑似患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的人受試者中診斷ACS的方法，所述方法包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中MMP-3的濃度；(c)如果所述流體樣品中醒P-3的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定醒P-3有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高的濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。通常，人受試者會(huì)主訴胸痛。大量流體樣品中任何一個(gè)都被檢測(cè)。優(yōu)選，所述流體樣品選自全血、血清、血漿或尿液。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)流體樣品中固P-3約1ng/mL或以上的檢測(cè)濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。本發(fā)明的另一方面，提供了一種在疑似患有ACS的人受試者中診斷急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的方法，所述方法包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中SGOT的濃度；(c)如果所述流體樣品中SG0T的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定SGOT有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的降低的濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)流體樣品中SGOT小于或等于約10ug/mL的檢測(cè)濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。本發(fā)明的又一方面涉及在疑似患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的人受試者中診斷ACS的方法，其包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中MMP-3和SGOT的濃度；(c)如果所述流體樣品中MMP-3和SGOT的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定有麗P-3統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度和SGOT有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的降低濃度一起支持ACS陽(yáng)性的診斷。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的所述方法進(jìn)一步包含檢測(cè)所述流體樣品中至少一個(gè)以下物質(zhì)的濃度白細(xì)胞介素-18(IL-18)、因子VII、細(xì)胞間粘附因子(ICAM-1)、肌酸激酶MB、單核細(xì)胞趨化蛋白-I(MCP-I)、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、組織金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶或其任何組合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)上述提到的除SG0T之外的所有分析物有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度，與對(duì)照濃度相比較，支持ACS陽(yáng)性的診斷。尤其，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)樣品流體中分析物的某些閾值濃度在ACS的檢測(cè)或診斷中是很重要的，包括IL-18(約300pg/mL以上)、因子VII(約320ng/mL以上)、ICAM-1(約170ng/mL以上)、肌酸激酶MB(約5ng/mL以上)、MCP-I(約275pg/niL以上)、肌紅蛋白(約30ng/mL以上)、C反應(yīng)蛋白(約11ug/mL以上)、T頂P-1(約120ng/mL以上)、鐵蛋白(約300ng/mL以上)和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(約2ng/mL以上)。已經(jīng)檢測(cè)到，其他生物標(biāo)志物在ACS陽(yáng)性或陰性的診斷程序中是很有用的。這些生物標(biāo)志物，除那些已經(jīng)公開的之外，還包括前列腺特異抗原(游離)、白介素-3(IL-3)、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1-P(MIP-I-e)、癌胚抗原、白介素-13(IL-13)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、免疫球蛋白E(IgE)、脂肪酸結(jié)合蛋白、上皮中性粒細(xì)胞活化肽(ENA-78)、白介素-1-P(IL-1-P)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、e-2微球蛋白、脂蛋白(a)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(醒P-9)、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、白介素-7(工L-7)、瘦素和白介素-6(IL-6)。本文也描述了用于在診斷程序中評(píng)價(jià)某些生物因子重要性的不同技術(shù)。其中一種所述技術(shù)是將編寫的結(jié)果投影至相鄰圖(proximitymap)上，從而受試者的檢測(cè)濃度與其他受試者(之前被診斷為患有ACS).的檢測(cè)濃度集群的相鄰性有助于ACS陽(yáng)性的診斷。其他技術(shù)包括一個(gè)或多個(gè)統(tǒng)計(jì)方法的應(yīng)用(例如線性回歸分析法、分類樹分析法、啟發(fā)式輪轂Bayes分析法等)。本文還提供了一種試劑盒，其包含用于檢測(cè)流體樣品中分析物組濃度的試劑，該分析物組包括麗P-3、SGOT和一個(gè)或多個(gè)IL-18、因子VII、ICAM-工、肌酸激酶MB、MCP-1、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、HMP-1、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶。所述試劑包括抗給定分析物組的成員的抗體。而且，所述試劑被固定至一個(gè)底物上，該底物包括一個(gè)二維陣列、一個(gè)微孔板或多重微珠套件(multiplebeadsets)。本方法進(jìn)一步包含通過(guò)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)方法(如線性回歸分析法、分類樹分析法或啟發(fā)式輪轂Bayes分析法)，將患者血液中一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)生物標(biāo)志物的濃度與一個(gè)或多個(gè)對(duì)照樣品中同樣生物標(biāo)志物的濃度相比較。所述統(tǒng)計(jì)的方法可以是，且通常是通過(guò)計(jì)算機(jī)程序來(lái)完成，如通過(guò)商購(gòu)的統(tǒng)計(jì)分析軟件。一個(gè)實(shí)施方案中，所述的統(tǒng)計(jì)方法為分類樹分析法，如CART(分類和回歸樹)。患者或受試者(根據(jù)所述方法依靠生物標(biāo)志物組檢測(cè)他們的流體樣品)的結(jié)果被投影至相鄰圖上。具體患者的生物標(biāo)志物濃度結(jié)果與至少兩個(gè)人(他們之前診斷為患有心臟病發(fā)作和正常)中一個(gè)的相鄰支持ACS陽(yáng)性或陰性的診斷。.本發(fā)明提供了一種制備的制造物，其包含對(duì)至少一個(gè)和SGOT有特異性的結(jié)合試劑，優(yōu)選上述兩個(gè)生物標(biāo)志物一起。更優(yōu)選，提供了一種試劑盒，其包含對(duì)麗P-3、SG0T、IL-18、因子VII、ICAM-I、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、TIMP-工、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶有特異性的結(jié)合試劑。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，每種結(jié)合試劑被固定在一個(gè)底物上。例如，抗醒P-3、SG0T和本文所述的其他生物標(biāo)志物的單克隆抗體被獨(dú)立固定至一個(gè)或多個(gè)底物的一個(gè)或多個(gè)表面上的一個(gè)或多個(gè)離散的位置。該底物可以是包含一個(gè)可識(shí)別的生物標(biāo)志物的微珠，其中每個(gè)結(jié)合試劑與包含一個(gè)不同的可識(shí)別生物標(biāo)志物的微珠連接，而不是與連接著不同結(jié)合試劑的微珠連接。所述可識(shí)別的生物因子包括熒光化合物、量子點(diǎn)等。另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)患者心臟病發(fā)作的發(fā)生的方法，其包含檢測(cè)至少一個(gè)MMP-3和SG0T的濃度。又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種預(yù)測(cè)心血管疾病發(fā)生的方法，其包含檢測(cè)患者血中兩個(gè)或更多個(gè)標(biāo)志物及時(shí)在兩個(gè)或更多個(gè)點(diǎn)的濃度變化，其中在患者血中介于兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間觀察到的畫P-3的濃度增加、SG0T的濃度降低或兩者一起可預(yù)測(cè)心血管疾病的發(fā)生。在考慮本文所述的說(shuō)明書之后，本發(fā)明的其他方面對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。圖1是患者的相鄰圖的投影，依靠列于右手邊緣的生物標(biāo)志物組檢測(cè)所述患者的流體樣品。所述相鄰圖分析的結(jié)果表明用位于圖左手邊(紅色或淡灰色的點(diǎn))的患有心臟病發(fā)作(或ACS)的受試者和位于圖右手邊(藍(lán)色或深灰色的點(diǎn))的未患有心臟病發(fā)作的受試者，考慮所列出的所有生物標(biāo)志物提供了ACS的準(zhǔn)確診斷約98%的準(zhǔn)確度。圖2是患者的相鄰圖的投影，依靠列于右手邊緣的生物標(biāo)志物組檢測(cè)所述患者的流體樣品。所述相鄰圖分析的結(jié)果表明用位于圖左手邊(紅色或淡灰色的點(diǎn))的患有心臟病發(fā)作(或ACS)的受試者和位于圖右手邊(藍(lán)色或深灰色的點(diǎn))的未患有心臟病發(fā)作的受試者，考慮所列出的所有生物標(biāo)志物將提供ACS的準(zhǔn)確診斷約97y0的準(zhǔn)確度。圖3是患者的相鄰圖的投影，依靠列于右手邊緣的生物標(biāo)志物組(所述生物標(biāo)志物中組織因子和vWF的結(jié)果從分析中被排除)檢測(cè)所述患者的流體樣品。所述相鄰圖分析的結(jié)果表明用位于圖左手邊(紅色或淡灰色的點(diǎn))的患有心臟病發(fā)作(或ACS)的受試者和位于圖右手邊(藍(lán)色或深灰色的點(diǎn))的未患有心臟病發(fā)作的受試者，考慮所列出的所有生物標(biāo)志物將提供ACS的準(zhǔn)確診斷約99%的準(zhǔn)確度。圖4是患者的相鄰圖的投影，依靠列于右手邊緣的生物標(biāo)志物組檢測(cè)所述患者的流體樣品。所述相鄰圖分析的結(jié)果表明用位于圖左手邊(紅色或淡灰色的點(diǎn))的患有心臟病發(fā)作(或ACS)的受試者和位于圖右手邊(藍(lán)色或深灰色的點(diǎn))的未患有心臟病發(fā)作的受試者，考慮所列出的所有生物標(biāo)志物將提供ACS的準(zhǔn)確診斷約94%的準(zhǔn)確度。圖5是患者的相鄰圖的投影，依靠列于右手邊緣的生物標(biāo)志物組檢測(cè)所述患者的流體樣品。所述相鄰圖分析的結(jié)果表明用位于圖左手邊(紅色或淡灰色的點(diǎn))的患有心臟病發(fā)作(或ACS)的受試者和位于圖右手邊(藍(lán)色或深灰色的點(diǎn))的未患有心臟病發(fā)作的受試者，考慮所列出的所有生物標(biāo)志物將提供ACS的準(zhǔn)確診斷約97%的準(zhǔn)確度。具體實(shí)施方式除非另有說(shuō)明，本申請(qǐng)中說(shuō)明的不同范圍中使用的數(shù)值均是指近似值，盡管所述范圍之內(nèi)的最小值和最大值都被詞語(yǔ)"約"先前限定。以這種方式，高于或低于所述范圍的細(xì)微變化可用于像范圍內(nèi)的數(shù)值基本實(shí)現(xiàn)相同的結(jié)果。同時(shí)，公開的所述范圍是指包括最小值和最大值之間的每個(gè)值的連續(xù)范圍。本文提供了用于快速鑒定心臟病發(fā)作的患者的多因素測(cè)定法。某些流體樣品(如血)中分析物或生物標(biāo)志物被下文鑒定為在ACS檢測(cè)和/或診斷中有用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)下述的生物標(biāo)志物在患有或已患有心臟病發(fā)作的患者血中過(guò)表達(dá)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)SG0T在患有或已患有心臟病發(fā)作的患者中弱表達(dá)。以下生物標(biāo)志物也被鑒定為對(duì)患有或已患有心臟病發(fā)作的受試者檢測(cè)或準(zhǔn)確診斷中有用醒P-3、SG0T、IL-18、因子VI工、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、T頂P-1、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-I-P、癌胚抗原、IL-13、TNF-a、IgE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-1-P、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、P-2微球蛋白、脂蛋白(a)、薩P-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素或IL-6。通過(guò)將這些生物標(biāo)志物的正?；?qū)φ昭?優(yōu)選，如血清或血漿)濃度與臨床上確診為已患有或患有心臟病發(fā)作的患者血液濃度統(tǒng)計(jì)上相比較，檢測(cè)為構(gòu)建用于ACS診斷的一個(gè)或多個(gè)生物標(biāo)志物的顯著性的參數(shù)。下文表1所列出的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)鑒定某些平均值和心臟病發(fā)作患者或正常組中上述生物標(biāo)志物的血液濃度的標(biāo)準(zhǔn)偏差。作為評(píng)價(jià)支持ACS陽(yáng)性診斷的顯著性閾值的非限定示例，提供下述的濃度MMP-3(約1ng/mL以上)、SG0T(小于或等于約10ng/mL)、IL-18(約300pg/mL以上)、因子VII(約320ng/mL以上)、ICAM-1(約170ng/mL以上)、肌酸激酶MB(約5ng/mL以上)、MCP-1(約275pg/mL以上)、肌紅蛋白(約30ng/mL以上)、C反應(yīng)蛋白(約11Ug/mL以上)、TIMP-I(約120ng/mL以上)、鐵蛋白(約300ng/mL以上)或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(約2ng/mL以上)。應(yīng)理解所述數(shù)值為近似值。統(tǒng)計(jì)方法可用于限定數(shù)值的臨界范圍。通常，那些近似值的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差以內(nèi)被認(rèn)為是為測(cè)定統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著數(shù)值，優(yōu)選兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差以內(nèi)。為此，詞語(yǔ)"約"用于連接所述的數(shù)值。"統(tǒng)計(jì)分類方法"可用于鑒定可區(qū)分正常患者與ACS患者的生物標(biāo)志物，且可進(jìn)一步用于測(cè)定為區(qū)分這些患者之間的每個(gè)生物標(biāo)志物的臨界血數(shù)值。某些統(tǒng)計(jì)方法可用于鑒定區(qū)分生物標(biāo)志物和其組。所述統(tǒng)計(jì)方法包括但不限于(1)線性回歸；(2)分類樹方法；(3)學(xué)習(xí)使進(jìn)行預(yù)測(cè)的算法的無(wú)偏差數(shù)據(jù)最優(yōu)化的統(tǒng)計(jì)機(jī)器。每個(gè)所述統(tǒng)計(jì)方法對(duì)生物統(tǒng)計(jì)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的，且其在計(jì)算機(jī)中可作為一個(gè)程序來(lái)完成。大量軟件產(chǎn)品商業(yè)上可用于實(shí)施統(tǒng)計(jì)方法，例如，但不限定，從華盛頓州的西雅圖Insightful公司商購(gòu)的S-PLUS。通過(guò)鑒定用于ACS檢測(cè)和/或診斷的生物標(biāo)志物和通過(guò)使用統(tǒng)計(jì)方法鑒定是否生物標(biāo)志物和生物標(biāo)志物組在鑒定有ACS危險(xiǎn)的患者中特別有用，基于本文公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可組成有出眾的選擇性和靈敏度的生物標(biāo)志物組。被包含在組中的可提供優(yōu)秀辨識(shí)能力的生物標(biāo)志物的示例，包括麗P-3、SGOT、IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、TIMP-工、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-1-0、癌胚抗原、IL-13、TNF-a、工gE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-1-P、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、e-2微球蛋白、脂蛋白(a)、應(yīng)P-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素或IL-6。包含從上述列表中選擇的生物標(biāo)志物的特異性組的示例，包括，但不限于(i)CRP、CKMB、因子V工I、鐵蛋白、GST、ICAM-1、IL-18、IL-1B、IL-3、MCP-1、MMP-3、肌紅蛋白、SG0T、T頂P-1和vWF;(ii)CRP、CKMB、因子VII、鐵蛋白、GST、ICAM-1、IL-18、MCP-1、MMP-3、肌紅蛋白、SG0T、TIMP-1、組織因子和vWF;(iii)CRP、CKMB、因子VII、鐵蛋白、GST、ICAM-1、IL-18、MCP-1、MMP-3、肌紅蛋白、SG0T和T頂P-1;(iv)SG0T、CKMB、MMP-3、GST、因子VII、IL-18、IL-3、MCP-1、ICAM-1和IL一1B;(v)SG0T、CKMB、MMP-3、GST和因子VII;(vi)SG0T和醒P-3。生物統(tǒng)計(jì)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到，依賴于生物標(biāo)志物的組合，任何給定的組中的生物標(biāo)志物可不同。以優(yōu)化靈敏度和特異性為目標(biāo)，一個(gè)組可包括2個(gè)生物標(biāo)志物，另一個(gè)組可包括5個(gè)，其他的還可包括12個(gè)或更多，上述組均可產(chǎn)生相同的結(jié)果。本發(fā)明基于血清中至少讓P-3濃度、單一或結(jié)合免疫的SG0T和/或其他生物標(biāo)志物的濃度對(duì)所有階段發(fā)生的急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(不穩(wěn)定的心絞痛、急性心肌梗死、心源性猝死、冠狀動(dòng)脈斑塊破裂或血栓形成)診斷的評(píng)價(jià)。本發(fā)明也基于至少免疫SGOT的濃度、任選地結(jié)合至少M(fèi)MP-3的濃度的評(píng)價(jià)?；加屑毙怨跔顒?dòng)脈綜合癥的患者處于相當(dāng)大的死亡和嚴(yán)重并發(fā)癥的危險(xiǎn)，但用適當(dāng)?shù)脑\斷和治療能改善此種結(jié)果。因此，快速和準(zhǔn)確診斷主訴胸痛的患者對(duì)于患者治療是極為關(guān)鍵。本文所述結(jié)果證實(shí)血清的麗P-3濃度在不穩(wěn)定的心絞痛和急性心肌梗死時(shí)會(huì)升高。因此，醒P-3可用作于炎性心肌條件下，尤其為急性冠狀動(dòng)脈綜合癥一個(gè)早期的生物標(biāo)志物。出于同樣的原因，SG0T濃度在不穩(wěn)定的心絞痛和急性心肌梗死時(shí)會(huì)降低。因此，SG0T可用作于急性冠狀動(dòng)脈綜合癥一個(gè)早期的生物標(biāo)志物。本文所述方法包括測(cè)定患者的生物學(xué)樣品(如全血、血漿、血清和尿液等)中MMP-3和/或SG0T的濃度；比較各自的濃度與對(duì)照受試者的濃度；和根據(jù)麗P-3或SG0T的濃度相對(duì)于對(duì)照受試者的濃度診斷疾病的階段。如果MMP-3濃度相對(duì)于對(duì)照受試者的濃度升高或如果SG0T濃度相對(duì)于對(duì)照降低，則所述患者被診斷患有ACS。畫P-3的典型對(duì)照值在約0.1-0.8ng/mL的范圍內(nèi)?；颊邩悠分屑s1ng/mL以上的濃度支持陽(yáng)性的診斷。醒P-3升高的數(shù)值的通常范圍為約1.5-20ng/mL。SG0T的典型對(duì)照值在約17-25yg/mL的范圍內(nèi)?；颊邩悠分行∮诨虻扔诩s10yg/mL的免疫濃度支持陽(yáng)性的診斷。時(shí)常用酶催化測(cè)量SGOT。然而，我們目前測(cè)量存在的蛋白質(zhì)用量，其包括無(wú)酶催化活性和酶催化活性的SG0T。免疫SG0T的濃度降低值的通常范圍為約15_1Pg/mL。MMP-3和SG0T可用抗薩P-3和抗SG0T的多克隆抗j本分別或用相應(yīng)的單克隆抗體捕獲。診斷方法也包括測(cè)量一個(gè)或多個(gè)額外的分析物的濃度，所述分析物選自由以下成分構(gòu)成的組IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、TIMP-1、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-I-e、癌胚抗原、IL-13、TNF-ct、IgE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-l-e、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、e-2微球蛋白、脂蛋白(a)、薩P-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素或工L-6;和基于額外分析物的濃度和MMP-3和/或SG0T的濃度相對(duì)于對(duì)照受試者的濃度診斷所述患者的狀況。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>分析物濃度可用免疫測(cè)定法如ELISA或如下文所述的復(fù)用法(multiplexedmethed)來(lái)測(cè)定，詳見(jiàn)Chandleretal.，U.S.5，981，180(Luminex公司)。在不穩(wěn)定心絞痛的患者和心肌梗死的患者中鑒定約1ng/mL以上的畫P-3濃度。相比之下，在不穩(wěn)定的心絞痛中心肌特異性的肌鈣蛋白和C反應(yīng)蛋白的診斷靈敏度低。已發(fā)表的研究中只有22%的患者有肌f丐蛋白T的陽(yáng)性結(jié)果，36%的患者有肌鈣蛋白I的陽(yáng)性結(jié)果，和65%的患者C反應(yīng)蛋白會(huì)升高。見(jiàn)Ha腿etal.，N.Engl.J.Med.，1997，337:1648—1653andLiuzzoetal.，N.Engl.J.Med.，1994，331:417-424。盡管如此，當(dāng)升高時(shí)兩者生物標(biāo)志物都與不利的結(jié)果有關(guān)。因此，當(dāng)肌鈣蛋白和C反應(yīng)蛋白不升高時(shí)，應(yīng)P-3是有價(jià)值的不穩(wěn)定斑塊的生物標(biāo)志物，可潛在地鑒定另外可能保持未確診的高風(fēng)險(xiǎn)患者。沒(méi)有通過(guò)具體的機(jī)理結(jié)合，醒P-3可直接參與急性冠狀動(dòng)脈綜合癥的病理生理學(xué)。在不穩(wěn)定心絞痛的患者和心肌梗死的患者中鑒定低于10ug/mL的SGOT濃度。SGOT在急性冠狀動(dòng)脈綜合癥的病理生理學(xué)中扮演的角色不清楚。用于本發(fā)明的方法的分析物可被檢測(cè)，例如通過(guò)結(jié)合分析法。例如，夾心免疫分析法可通過(guò)從含有對(duì)每個(gè)蛋白質(zhì)具有特異性結(jié)合力的抗體的生物學(xué)樣品中捕獲麗P-3和SGOT來(lái)完成，然后用對(duì)每個(gè)分析物具有特異性結(jié)合力的標(biāo)記抗體檢測(cè)固P-3和SG0T?？蛇x擇地，使用所述抗體，標(biāo)準(zhǔn)免疫組化技術(shù)可用于檢測(cè)薩P-3和SG0T。對(duì)麗P-3和SGOT有親和力的抗體是有用的。術(shù)語(yǔ)"結(jié)合試劑"和相似術(shù)語(yǔ)，是指能特異性或基本上特異性(也就是，限制的交叉反應(yīng)性)結(jié)合另一個(gè)化合物或分子(就免疫識(shí)別而言，其是表位)的任何化合物、組合物或分子。通常，結(jié)合試劑是抗體，優(yōu)選是單克隆抗體，或其衍生物或類似物，也包括但不限于F,片斷、單鏈Fv片斷、Fab，片斷、F(ab')2片斷、人源化抗體和抗體片斷；和上述的多價(jià)形式。多價(jià)結(jié)合試劑也用作于，適合的，包括但不限于單特異性或雙特異性抗體如二硫化穩(wěn)定的Fv片斷、scFv串聯(lián)((SCR)2片斷)、二聚體、三聚體或四聚體，其通常共價(jià)連接或相反穩(wěn)定的(也就是，亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)或螺旋穩(wěn)定的)scFv片斷。"結(jié)合試劑"也包括如本領(lǐng)域所述的配基。制備抗原特異性結(jié)合試劑(包括抗體及其衍生物和類似物和配基)的方法在本領(lǐng)域眾所周知。通過(guò)動(dòng)物的免疫法生成多克隆抗體。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)(雜交瘤)方法學(xué)制備單克隆抗體。包括人源化抗體的抗體衍生物和類似物通過(guò)從DNA中分離DNA片斷來(lái)重組制備，所述DNA根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法編碼單克隆抗體和亞克隆適合的V區(qū)域至適合的表達(dá)載體。如文獻(xiàn)中所述的噬菌體展示和配基技術(shù)允許具有非常親和力和低交叉反應(yīng)性的抗原特異性結(jié)合試劑的體外克隆擴(kuò)增。噬菌體展示試齊ll禾口系統(tǒng)可商貝勾，包括從AmershamPharmaciaBiotech,Inc.ofPiscataway，N.J.商購(gòu)的重組噬菌體抗體系統(tǒng)(RPAS)和從MoBiTec，LLCofMarcoIsland,Fla.商購(gòu)的噬粒展示系統(tǒng)。配基技術(shù)如示例所述，但不限于；U.S.Pat.Nos,5,270,163、5,475,096、5,840,867和6，544，776。下文所述的ELISA和LuminexLabMAP免疫分析法是夾心分析法的示例。術(shù)語(yǔ)"夾心分析法"是指抗原被夾在兩個(gè)結(jié)合試劑之間的免疫分析法，所述結(jié)合試劑通常為抗體。第一結(jié)合試劑/抗體接連在一個(gè)表面上而第二結(jié)合試劑/抗體包含一個(gè)可檢測(cè)的基團(tuán)。可檢測(cè)基團(tuán)的示例包括，例如但不限于熒光染料、酶、結(jié)合第二結(jié)合試劑的表位(例如當(dāng)?shù)诙Y(jié)合試劑/抗體是小鼠抗體時(shí)，該表位通過(guò)一個(gè)熒光標(biāo)記的抗小鼠抗體來(lái)檢測(cè))，例如一個(gè)抗原或結(jié)合對(duì)的一個(gè)成員，如生物素。所述表面為一平面，如本文所述的關(guān)于典型的網(wǎng)格型陣列(例如但不限于96孔板和平面微陣列)，或者所述表面為一非平面，其用包衣的微珠陣列技術(shù)，每個(gè)"種類"微珠用如熒光染料(如本文所述的Lumi腦技術(shù)和U.S.Pat.Nos,6，599，331、6，592，822和6，268，222中所述)或量子點(diǎn)技術(shù)(例如，如U.S.Pat.No.6,306，610中所述)來(lái)標(biāo)記。下面實(shí)施例中所述的微珠類型免疫分析法中，利用LuminexLabMAP系統(tǒng)。LabMAP系統(tǒng)合并聚苯乙烯微球，該微球用兩種不同光譜的熒光染料內(nèi)部染色。使用這些熒光染料的精確比值構(gòu)建陣列，該陣列包含ioo個(gè)有特異性光學(xué)地址的不同微球套件。每個(gè)微球套件在其表面具有一個(gè)不同的反應(yīng)物。因?yàn)槲⑶蛱准ㄟ^(guò)其光學(xué)地址來(lái)區(qū)分，它們可被結(jié)合，并允許同時(shí)在單反應(yīng)容器中測(cè)定高達(dá)100個(gè)不同分析物。耦合至一個(gè)報(bào)告子分子的第三熒光染料定量發(fā)生在所述微球表面的生物分子的相互作用。當(dāng)微球通過(guò)Lmninex分析器中兩束分離的激光時(shí)，個(gè)別微球被高速射流所干涉。高速數(shù)字信號(hào)程序?qū)谄涔鈱W(xué)地址的微球進(jìn)行分類，且定量每個(gè)樣品幾秒內(nèi)所述表面的反應(yīng)。對(duì)于本文所述的分析法，優(yōu)選微珠類型免疫分析法有許多理由。與EL工SA相比較，其成本和通量更出眾。與典型平面抗體微陣列技術(shù)(從BDBiosciencesClontechofPaloAlto,Calif.商貝勾，本質(zhì)上是BD克隆技術(shù)抗體陣列)相比較，微珠因定量而更出眾，具體是因?yàn)樗鑫⒅榧夹g(shù)不需要血漿和血清樣品的預(yù)處理和滴定程序，其有重現(xiàn)性、成本和技術(shù)人員耗時(shí)等內(nèi)在的困難。因?yàn)檫@個(gè)原因，盡管其他免疫分析法，例如但不限于ELISA、RIA和抗體微陣列技術(shù)能在本發(fā)明的上下文中使用，但它們不是優(yōu)選。本文所用的"免疫分析法"是指免疫分析法，通常是但不限于夾心分析法，其能檢測(cè)和定量期望的血生物標(biāo)志物，即至少一種麗P-3、SG0T、IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-1、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、TIMP-1、鐵蛋白和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶中或上述的任何組合。從一個(gè)分析法中生成以檢測(cè)一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)生物標(biāo)志物的血液濃度的數(shù)據(jù)可用于測(cè)定患有心臟病發(fā)作的患者的可能性，所述的生物標(biāo)志物為醒P-3、SG0T、IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-1、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、T頂P-I、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-1-P、癌胚抗原、IL-11TNF-a、IgR脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-7&IL-1-0、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、e-2微球蛋白、脂蛋白(a)、羅P-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素和IL-6。如本文所示，如果在患者血液中符合任何一個(gè)或更多、兩個(gè)或更多、通常三個(gè)或更多或四個(gè)或更多個(gè)下列條件，匿P-3(約1ng/mL以上)、SG0T(小于或等于約10tig/mL)、IL-18(約300pg/mL以上)、因子VII(約320ng/mL以上)、ICAM-1(約170ng/mL以上)、肌酸激酶MB(約5ng/mL以上)、MCP-I(約275pg/mL以上)、肌紅蛋白(約30ng/mL以上)、C反應(yīng)蛋白(約11ug/mL以上)、T頂P-I(約120ng/mL以上)、鐵蛋白(約300ng/mL以上)或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(約2ng/mL以上)，則該患者已患有或患有心臟病發(fā)作的可能性很高。一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)于正常或?qū)φ栈颊叩娜巳褐兴錾飿?biāo)志物的濃度、升高的醒P-3濃度或降低的SGOT濃度中任何一個(gè)都表明患者中患有ACS有約97-99%的確定性。本文公開的上下文中，"血"包括任何血組成，如血清，其根據(jù)本文所述的方法能被分析。血清是一個(gè)可測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)的血組成，且血清在下面的實(shí)施例中可被測(cè)試。通過(guò)測(cè)量一個(gè)具體生物標(biāo)志物的血濃度，表明測(cè)試任何適合的血組成以檢測(cè)血濃度及數(shù)據(jù)可被報(bào)告作為該組成中的數(shù)值。作為非限定性的示例，一個(gè)生物標(biāo)志物的血濃度可表示為50pg/mL血清。如上文所述，提供了通過(guò)檢測(cè)特異性鑒定的血生物標(biāo)志物的濃度診斷ACS的方法。也提供了檢測(cè)臨床前ACS的方法，該方法包含測(cè)定患者血中特異性鑒定的生物標(biāo)志物的存在和/或速率。通過(guò)速率可表明患者血中所述生物標(biāo)志物的濃度隨時(shí)的變化?？v向數(shù)據(jù)對(duì)為預(yù)測(cè)臨床ACS發(fā)作而檢測(cè)患者血中特異性生物標(biāo)志物的速率是很有價(jià)值的。具有指示臨床前ACS的可證實(shí)速率的生物標(biāo)志物包括畫P-3、IL-18、因子VII、IC細(xì)-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、TDIP-1、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-1-3、癌胚抗原、IL-13、TNF-ci、IgE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-1-P、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、3-2微球蛋白、脂蛋白(a)、MMP-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素和IL-6(上述生物標(biāo)志物的濃度在ACS臨床發(fā)作之前約1-24個(gè)月開始升高)；和SG0T(其濃度在ACS臨床發(fā)作之前約1_24個(gè)月開始降低)。實(shí)施例I患者人群?；贑KMB和肌鈣蛋白升高的濃度選擇患者人群。在醫(yī)院里隨時(shí)跟蹤每個(gè)患者的上述兩種酶直到做出結(jié)論性的ACS診斷。經(jīng)醫(yī)院的允許獲得測(cè)試過(guò)的血樣品。從健康診所選擇正?；?qū)φ栈颊叩娜巳?。上述?duì)照患者沒(méi)有指示患有心血管疾病。在工RB協(xié)議下獲得所有參與者的同意和血試樣。血試樣的收集和貯藏。用標(biāo)準(zhǔn)化的靜脈切開術(shù)程序從受試者中抽取10mL外周血。不加抗凝劑收集血樣至兩個(gè)5mL頂部紅色的vacutainer⑧管。離心分離血清，所有試樣立即冷凍，貯藏至-8(TC的專用冷凍機(jī)。所有血樣計(jì)入日志至研究電腦上以跟蹤信息如貯藏時(shí)間、冷凍/解凍周期和分布。Luminex分析法的開發(fā)。用從跳DSystems(Minneapolis,Mi皿.)、FitzgeraldIndustriesInternational(Concord,Mass.)購(gòu)買或通過(guò)熟知的免疫學(xué)方法制得的抗體對(duì)開發(fā)復(fù)用(multiplex)系統(tǒng)的試劑。捕獲抗體為單克隆的，而檢測(cè)抗體為多克隆的。捕獲抗體共價(jià)耦合至從Luminex公司(Austin,Tex,)購(gòu)買的羧化聚苯乙烯74號(hào)微球。通過(guò)下述Luminex推薦的程序完成捕獲抗體共價(jià)耦合至微球上o簡(jiǎn)言之，在超聲浴(SonicorInstrumentCorporation,Copiaque,N.Y.)中分散微球的儲(chǔ)備溶液2分鐘。有2.5x106微球的一份等份試樣懸浮在含有o.1M磷酸鈉緩沖鹽、ras.1(磷酸鹽緩沖液)至最終容積80uL的微孔管中。超聲懸浮液直到觀察到微球均勻的分布。在磷酸緩沖液中制備N-羥基-硫琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(Pierce)溶液，都為50mg/mL，且連續(xù)加入10"L每種溶液以穩(wěn)定反應(yīng)物和活化微球。在室溫下培養(yǎng)上述懸浮液10分鐘，然后懸浮在包含50txL抗體的250uLPBS。暗處培養(yǎng)混合物過(guò)夜并持續(xù)地振搖。然后用250uLPBS-0.05%吐溫20培養(yǎng)微球4小時(shí)。抽吸之后用l.mLPBS-1%BSA_0.1%疊氮鈉阻斷微珠。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)微球，且在4"C下暗處以1(f微球/mL的最終濃度貯藏。通過(guò)用PE-共軛的羊抗小鼠IgG(BDBiosciences,SanDiego，Calif.)著色2000個(gè)微球，測(cè)試單克隆抗體的耦合效率。根據(jù)制造商的協(xié)議用EZ-Link硫-NHS-生物素化試劑盒(Pierce,Rockford,Ill.)將檢測(cè)抗體生物素化。用HABA分析法檢測(cè)生物素結(jié)合的程度，其為20摩爾生物素每摩爾蛋白質(zhì)。由于檢測(cè)抗體的濃度和培養(yǎng)的時(shí)間，進(jìn)一步優(yōu)化所述的分析法。用逐級(jí)稀釋的純化蛋白質(zhì)檢測(cè)新開發(fā)的分析法的靈敏度。批內(nèi)變異性用變異系數(shù)來(lái)表示，其基于患者樣品的平均值來(lái)計(jì)算并每?jī)蓚€(gè)不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量?jī)纱?。?fù)制物之內(nèi)的批內(nèi)變異性可用平均變異系數(shù)來(lái)表示。通過(guò)測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品四次，評(píng)價(jià)批間變異性，平均為16.5%(數(shù)據(jù)未列出)。一起復(fù)用新開發(fā)的試劑盒，并根據(jù)Luminex協(xié)議證實(shí)缺乏交叉反應(yīng)性。滿足抗體細(xì)胞因子對(duì)的一些商業(yè)來(lái)源的示例包括MAB636EGF(R&DSystems,Minneapolis,麗)、BAF236G-CSF(R&DSystems)、DY214IL-6(R&DSystems)、DY206IL-8(腿DSystems)、DY208IL-12p40(R&DSystems)、DY1240MCP-1(股DSystems)、DY279VEGF(R&DSystems)、DY293CA-125(M002201,M002203,FitzgeraldIndustriesInternational,Inc.，Concord,MA)。另夕卜，用從FitzgeraldIndustriesInternational(Concord,Mass.)購(gòu)買的抗體對(duì)，開發(fā)復(fù)用系統(tǒng)的CA-125試劑。捕獲抗體為單克隆的，而檢測(cè)抗體為羊多克隆的。根據(jù)制造商的協(xié)議用EZ-Link硫-NHS-生物素化試劑盒(Pierce,Rockford，111.)將捕獲抗體生物素化。用HABA分析法檢測(cè)生物素結(jié)合的程度，其為20摩爾生物素每摩爾蛋白質(zhì)。捕獲抗體共價(jià)耦合至從Luminex公司(Austin,Tex.)購(gòu)買的羧化聚苯乙烯74號(hào)微球。通過(guò)下述的Luminex推薦的程序完成捕獲抗體共價(jià)耦合至微球上。簡(jiǎn)言之，在超聲浴(SonicorInstrumentCorporation,Copiaque，N.Y.)中分散微球的儲(chǔ)備溶液2分鐘。有2.5x106微球的一份等份試樣懸浮在含有0.1M磷酸鈉緩沖鹽、PH6.1(磷酸鹽緩沖液)至最終容積80的微孔管中。超聲懸浮液直到觀察到微球均勻的分布。在磷酸緩沖液中制備N-羥基-硫琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(Pierce)溶液，都為50mg/mL，且連續(xù)加入10uL每種溶液以穩(wěn)定反應(yīng)物和活化微球。在室溫下培養(yǎng)上述懸浮液10分鐘，然后懸浮在包含50uL抗體的250uLPBS。暗處培養(yǎng)混合物過(guò)夜并持續(xù)地振搖。然后用250uLPBS-O.05%吐溫20培養(yǎng)微球4小時(shí)。抽吸之后用1mLPBS-l%BSA_0.1%疊氮鈉阻斷微珠。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)微球，且在4"C下暗處以106微球/mL的最終濃度貯藏。通過(guò)用PE-共軛的羊抗小鼠IgG(BDBiosciences,SanDiego，Calif.)著色2000個(gè)微球，測(cè)試單克隆抗體的耦合效率。由于檢測(cè)抗體的濃度和培養(yǎng)的時(shí)間，進(jìn)一步優(yōu)化所述的分析法。新開發(fā)的分析法的靈敏度如用逐級(jí)稀釋的純化CA-125在Luminex分析法中檢測(cè)，為20IU。批內(nèi)變異性用變異系數(shù)來(lái)表示，其基于患者樣品的平均值來(lái)計(jì)算并至少兩個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量?jī)纱?。?fù)制物之內(nèi)的批內(nèi)變異性可用平均變異系數(shù)來(lái)表示，為8.5%。批間變異性通過(guò)測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和IO個(gè)樣品四次來(lái)評(píng)價(jià)。這些樣品的變異性在10-22%之間，平均為16.5%。下面，用存在的復(fù)用試劑盒組合抗CA-125微球。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。使用S-Plus統(tǒng)計(jì)軟件(Seattle,Wash.:MathSoft,Inc.,1999)處理所有統(tǒng)計(jì)分析物。所述數(shù)據(jù)最初隨機(jī)分裂成培養(yǎng)和測(cè)試套件，如表CLogistic回歸(Hosmer,DW，SLemeshow，AppliedLogisticRegression.NewYork,N.Y.:JohnWiley&Sons,1989)所述，然后該數(shù)據(jù)用于計(jì)算每個(gè)生物標(biāo)志物和隨后成為病例的預(yù)測(cè)概率的優(yōu)化重量。所有預(yù)測(cè)的概率W.5被分類為預(yù)測(cè)的病例；預(yù)測(cè)的概率<0.5被分類為預(yù)測(cè)的對(duì)照。將logistic模型適合培養(yǎng)套件之后，然后為測(cè)試套件計(jì)算疾病狀況的分類。結(jié)果通過(guò)LabMap技術(shù)生物標(biāo)志物的血清濃度。在患有ACS和對(duì)照組的患者血中用LabMap技術(shù)在復(fù)用分析法中評(píng)價(jià)不同血清生物標(biāo)志物的循環(huán)濃度。表1列出了兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的分析物。表2通過(guò)測(cè)試每個(gè)單一分析物和檢測(cè)其作為診斷工具是如何的有用，來(lái)說(shuō)明診斷的準(zhǔn)確度。在CKMB病例(其為我們選擇標(biāo)準(zhǔn)的部分)中，89個(gè)人中有3個(gè)結(jié)果顯示他們患有ACS但實(shí)際上他們是正常的(也就是三個(gè)假陽(yáng)性)。6個(gè)人被送回家而實(shí)際上他們正患有心臟病發(fā)作(也就是假陰性)。如果我們只用從^IP-3的結(jié)果，則只有2個(gè)人診斷不準(zhǔn)確，相比較之下CKMB有9個(gè)人誤診。因此，我們發(fā)現(xiàn)兩個(gè)新生物標(biāo)志物對(duì)進(jìn)入醫(yī)院的人比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)CKMB更準(zhǔn)確。顯示最好的單一生物標(biāo)志物是薩P-3和SG0T。顯示生物標(biāo)志物的最好組合是圖4中所示的12個(gè)分析物。表2ACS分析物的準(zhǔn)確度<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>相鄰圖分析。用軟件程序處理相鄰圖數(shù)據(jù)分析，該程序通過(guò)分析物濃度模式中的樣品相似性將樣品分組。用每個(gè)樣品中測(cè)量的分析物濃度生成唯一化學(xué)的特征。每個(gè)樣品特征的聯(lián)系在Galaxy投影中可視化。Galaxy為相鄰圖，如在可視化中兩個(gè)目標(biāo)越接近則它們的化學(xué)特征越接近，因此它們相互之間更有相似性。軸是無(wú)量綱的(從主要成分分析衍生的結(jié)果)，因此可視化不是典型的X-Y散射圖，其中沿著軸移動(dòng)表示單個(gè)數(shù)值的增加或減少。通過(guò)最初兩個(gè)主要的成分(一種減少?gòu)?fù)雜數(shù)據(jù)的常用方法)定義Galaxy的兩個(gè)軸。用啟發(fā)式的套件完成目標(biāo)(紅色點(diǎn))的放置，該套件的設(shè)計(jì)使原始數(shù)據(jù)的高維空間中存在的空間關(guān)系的保存最大化，當(dāng)做簡(jiǎn)單的投影時(shí)使產(chǎn)生的重疊最小化。各圖的檢驗(yàn)，顯示從藍(lán)色圈(深灰，對(duì)照)分離紅色圈(淡灰，ACS患者)到不同程度，其中所有的點(diǎn)獲得相當(dāng)好的分離。圖3提供了可能的最好分離。如果對(duì)圖3所列出的分析物測(cè)試未知樣品，然后圖中該患者(其提供未知樣品)的位置指示是否該患者患有心臟病發(fā)作。顯示兩個(gè)集群之間的空間為不確定的區(qū)域。顯示圖3中有一個(gè)ACS患者，其位于對(duì)照人群的中間。這個(gè)結(jié)果可能為假陰性或原始臨床診斷僅僅可能不準(zhǔn)確。然后用10倍交叉驗(yàn)證獲得分類準(zhǔn)確度(區(qū)分ACS患者的對(duì)照組)的比率，并產(chǎn)生ReceiverOperatingCharacteristic(ROC)曲線。所述方法的靈敏度和特異性依賴于用于分類每個(gè)受試者為病例或?qū)φ盏那懈铧c(diǎn)(也就是，從分類樹中預(yù)測(cè)概率)。使用0.5的標(biāo)準(zhǔn)切割點(diǎn)(也就是高于0.5的預(yù)測(cè)概率的人被分類為癌癥病例)達(dá)到100%靈敏度、86%特異性和93。/。準(zhǔn)確分類。固定特異性在91%仍有很高的靈敏度，為95.5%(還是93%準(zhǔn)確分類)?；蛘撸?5.3%的特異性相應(yīng)于84.1%的靈敏度(90.0%準(zhǔn)確分類)。所述ReceiverOperatingCharacteristic(ROC)曲線下的總面積接近1(這表示完美的分類)，即為0.966。對(duì)循環(huán)抗體的LabMap分析法的開發(fā)在過(guò)濾器底板96孔微板(Millipore)中完成分析法。耦合所述純化抗原至為抗體描述的Luminex微珠。用含有4%BSA的阻斷緩沖液在室溫下微孔振蕩器中預(yù)培養(yǎng)耦合抗原的微珠1小時(shí)。在fC用以1:250稀釋的50uL血清培養(yǎng)30分鐘，然后使用真空岐管用沖洗緩沖液(PBS、1°/。BSA、0.05%吐溫20)沖洗微珠三次?；谥把宓味?數(shù)據(jù)未顯示)的抗IL-18IgG回收率選擇這種稀釋液為最佳。下面，重復(fù)如上所述的沖洗程序，暗處用4g/mLPE共軛抗體(比人IgG(JacksonLaboratories)升高)的50UL/孔培養(yǎng)微珠45分鐘并經(jīng)常地振蕩。沖洗孔兩次，加入測(cè)試緩沖液至每個(gè)孔并用Bio-Plex懸浮陣歹係統(tǒng)(Bio-RadLaboratories,Hercules,Calif.)分析樣品。至于標(biāo)準(zhǔn)曲線，用逐級(jí)稀釋的抗特異性抗原的人抗體培養(yǎng)耦合抗原的微珠。單特異性人抗體的純化如上文所述。用5參數(shù)曲線擬合法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。本發(fā)明的另一個(gè)具體方面中，一個(gè)或多個(gè)公開的標(biāo)志物的表達(dá)特征提供了有價(jià)值的分子工具，該工具是為檢測(cè)ACS的藥物反應(yīng)性的分子基礎(chǔ)及為評(píng)價(jià)ACS的藥物或其副作用的效力。從當(dāng)細(xì)胞接觸不同修正條件如接觸藥物或其他活性分子的基線特征，至表達(dá)特征的變化能用作于指示這些反應(yīng)。因此，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)是否患有ACS的患者會(huì)應(yīng)答治療的測(cè)試，其包含以下步驟對(duì)分別從用一種藥學(xué)上可接受的劑治療ACS的人和未診斷出ACS的人中獲得的血樣進(jìn)行上文所述的本發(fā)明方法的診斷步驟，和檢測(cè)藥物治療的反應(yīng)性的步驟。監(jiān)測(cè)制劑(如藥物復(fù)合物)對(duì)本發(fā)明標(biāo)志物的表達(dá)濃度的影響可有利地應(yīng)用于臨床試驗(yàn)中。例如，在接受ACS治療的受試者的臨床試驗(yàn)中監(jiān)測(cè)制劑影響標(biāo)志物表達(dá)的效果。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了為監(jiān)測(cè)用制劑(如激動(dòng)劑、拮抗劑、模擬肽、蛋白質(zhì)、肽、核酸、小分子或其他候選藥物)治療受試者的效力的方法，其包括以下步驟(i)在制劑給藥前從受試者獲得給藥前的樣品；(ii)監(jiān)測(cè)在給藥前的樣品中一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明選擇的標(biāo)志物的表達(dá)濃度；(iii)從所述受試者獲得一個(gè)或多個(gè)給藥后的樣品；(iv)給藥后的樣品中標(biāo)志物(s)的表達(dá)濃度；(v)比較給藥前的樣品中標(biāo)志物(s)的表達(dá)濃度與給藥后的樣品中標(biāo)志物(s)的表達(dá)濃度；(vi)準(zhǔn)確地調(diào)整對(duì)受試者的制劑給藥。例如，調(diào)整制劑給藥比檢測(cè)制劑給藥，能期望增加新的診斷標(biāo)志物(s)的表達(dá)至更高的濃度，也就是增加制劑的效果?？蛇x擇地，增加/減少制劑的給藥能期望分別增加/減少制劑的效果。本文所用的術(shù)語(yǔ)"候選劑"或"候選藥物"可以是天然或合成的分子，例如蛋白質(zhì)或其片斷、抗體、小分子抑制劑或激動(dòng)劑、核酸分子如反義核苷酸、核酶、雙鏈RNAs、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物等。本發(fā)明的另一個(gè)具體方法中，提供一種預(yù)防和治療患有心臟病發(fā)作(或ACS)或有這種危險(xiǎn)的受試者的方法。在心臟病發(fā)作的癥狀特征表現(xiàn)之前，進(jìn)行預(yù)防劑給藥，以至于預(yù)防或延遲ACS的進(jìn)一步發(fā)展。合適的治療劑的示例包括但不限于反義核苷酸、核酶、雙鏈RNAs、配體、小分子和如下面詳述的拮抗劑。一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種在個(gè)體中治療和預(yù)防ACS的方法，其包含對(duì)所述個(gè)體給予一定有效治療量的調(diào)控化合物的步驟，該化合物調(diào)控一個(gè)或多個(gè)基因、基因表達(dá)或基因組醒P-3和/或SG0T的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)或活性，以至于緩解至少一個(gè).ACS癥狀。另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在個(gè)體中治療和預(yù)防ACS的方法，其包含對(duì)所述個(gè)體給予一定有效治療量的調(diào)控化合物的步驟，該化合物調(diào)控一個(gè)或多個(gè)基因、或基因組的基因表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)或活性，以至于緩解至少一個(gè)ACS癥狀，該基因組包括工L-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、T頂P-1、鐵蛋白和/或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明的另一個(gè)具體方面，由于本發(fā)明診斷標(biāo)志物的不同表達(dá)，因此可能利用這些標(biāo)志物以提高預(yù)測(cè)患者中具體藥物的治療是否對(duì)治療ACS有效的確定性。因此，本發(fā)明提供了一種為鑒定用于ACS治療的候選劑的方法，其包括以下步驟a)將受毒性支配的組織優(yōu)選心肌組織的樣品與候選劑相接角feb)根據(jù)一個(gè)或多個(gè)選自應(yīng)P-3和/或SG0T的基因，從該組織中檢測(cè)基因或蛋白質(zhì)表達(dá)的濃度至獲得最初數(shù)值的集合；和c)根據(jù)基因表達(dá)的濃度，該濃度在相同的基因(s)和相同的條件下如步驟b)受毒性(不是由所述候選劑引發(fā))支配的組織中進(jìn)行評(píng)價(jià)，將最初數(shù)值集與第二數(shù)值集相比較，其中對(duì)于麗P-3和/或SG0T的表達(dá)第一數(shù)值基本上等于或大于第二數(shù)值，則表明所述候選劑正在緩解ACS癥狀。同樣，對(duì)于至少一個(gè)IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、TIMP-I、鐵蛋白和/或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)，第一數(shù)值基本上等于或小于第二數(shù)值，則表明所述候選劑正在緩解ACS癥狀。本發(fā)明的另一個(gè)具體方面，提供了一種為鑒定用于ACS治療的候選劑的方法，其包括以下步驟a)將受毒性支配的組織優(yōu)選心肌組織的樣品與候選劑相接觸；b)根據(jù)一個(gè)或多個(gè)選自MMP-3、SG0T、IL-18、因子VI工、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-1、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、TIMP-1、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的基因，從該組織中檢測(cè)基因或蛋白質(zhì)表達(dá)的濃度至獲得最初數(shù)值的集合(s);和c)根據(jù)基因表達(dá)的濃度，該濃度在相同的基因(S)和相同的條件下如歩驟b)受毒性(不是由所述候選劑引發(fā))支配的組織中進(jìn)行評(píng)價(jià)，將最初數(shù)值集與第二數(shù)值集相比較，其中對(duì)所述基因的表達(dá)第一數(shù)值基本上等于或大于第二數(shù)值，則表明所述候選劑正在緩解ACS癥狀。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，只有麗P-3和/或SG0T的基因用于分析法。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，檢測(cè)基因表達(dá)的濃度的方式包括與標(biāo)志物基因有特異性的寡核苷酸。特別優(yōu)選選自以下的方法Northern印跡雜交分析法、逆轉(zhuǎn)錄PCR或定時(shí)定量PCR、支鏈DNA、依賴核酸序列的擴(kuò)增(NASBA)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增、核糖核酸酶保護(hù)分析法和微陣列。本文公開的所述標(biāo)志物容易從公眾可接近的基因文庫(kù)可得到，如GENBANK，而為簡(jiǎn)明的目的，本文中未描述。為檢測(cè)本文所公開的從新的標(biāo)志物中獲得的mRNA轉(zhuǎn)錄的濃度特別有用的方法，包括標(biāo)記的mRNA與寡核苷酸的有序陣列的雜交。這樣的方法允許檢測(cè)許多這些基因的轉(zhuǎn)錄濃度，同時(shí)以生成基因表達(dá)特征或形式。另一個(gè)實(shí)施方案中，將從受試者中獲得的樣品衍生得到的基因表達(dá)特征與無(wú)疾病的受試者中獲得的樣品衍生的基因表達(dá)特征相比較，從而檢測(cè)是否受試者有或處于ACS發(fā)展的危險(xiǎn)中。也優(yōu)選以使用RT-PCR的試劑盒形式評(píng)價(jià)標(biāo)志物的基因表達(dá)，所述RT-PCR是一種高通量技術(shù)這個(gè)眾所周知的技術(shù)RT-PCR反應(yīng)開拓了AmpliTaqGoldDNA多聚酶的5，-核酸酶活性使在PCR期間T叫Man探針被切除。所述探針由一個(gè)有5'端的報(bào)告子染料和3'端的淬滅子染料的寡核苷酸(通?！?0mer)組成。熒光報(bào)告子染料如FAM(6-羧酸熒光素)共價(jià)結(jié)合寡核苷酸的5'-末端。該報(bào)告子通過(guò)由位于3'-末端的連接臂連接的TAMRA(6-羧基-N,N,N'，N'-四甲基羅丹明)淬滅。用于每個(gè)標(biāo)志物的寡核苷酸探針應(yīng)從這些標(biāo)志物基因的核酸序列衍生得到，且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員，適合的寡核苷酸序列的選擇現(xiàn)在成為標(biāo)準(zhǔn)路徑技術(shù)的一個(gè)問(wèn)題。詞樣，因?yàn)楸疚乃龅母髯曰虻腄NA序列可自由地得到，本文就未再重復(fù)。除已知的藥物篩選方法之外，無(wú)細(xì)胞分析法也用于鑒定能與通過(guò)本文所述的標(biāo)志物編碼的蛋白質(zhì)相互作用的化合物(例如麗P-3、SG0T)，或用于改變蛋白質(zhì)或其結(jié)合部分(bindingpartner)的活性。無(wú)細(xì)胞分析法也可用于鑒定化合物，該化合物能調(diào)控編碼的蛋白質(zhì)之間的相互作用和它的結(jié)合部分如靶向肽。一個(gè)實(shí)施方案中，不管結(jié)合部分存在與否，用于鑒定這些化合物的無(wú)細(xì)胞分析法包含一種反應(yīng)混合物，該反應(yīng)混合物包含一個(gè)標(biāo)志物蛋白質(zhì)和一個(gè)測(cè)試化合物或許多測(cè)試化合物，例如一個(gè)生物學(xué)上惰性的目標(biāo)肽或一個(gè)小分子。分子之間的相互作用也可通過(guò)用定日寸BIA(BiomolecularInteractionAnalysis,PharmaciaBiosensorAB)來(lái)評(píng)價(jià)，該定時(shí)BIA檢測(cè)表面等離子體共振，光學(xué)現(xiàn)象。通過(guò)使用可檢測(cè)的標(biāo)記蛋白質(zhì)如放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記或酶催化標(biāo)記蛋白質(zhì)或它的結(jié)合部分、通過(guò)免疫分析法或通過(guò)色譜檢測(cè)法來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)之間復(fù)合物的生成和它的結(jié)合部分。另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)反義核苷酸可控制的應(yīng)用可控制地抑制耙RNA(優(yōu)選mRNA)種類的活性，特別是它的翻譯速率。本文所用的"反義"核苷酸是指由于一些序列補(bǔ)充至編碼和/或非編碼區(qū)域，能雜交至所述靶RNA的序列特異性部分(如，非聚A)，例如它的翻譯觸發(fā)區(qū)域。本發(fā)明的反義核苷酸為寡核苷酸，其為雙鏈或單鏈、RNA或DNA、或其修飾或衍生物，該反義核苷酸可直接以可控制的方式給藥至細(xì)胞或通過(guò)外源性的轉(zhuǎn)錄細(xì)胞內(nèi)生成，所述反義核苷酸引進(jìn)足夠多可控制數(shù)量的序列以至微擾靶RNA的翻譯。優(yōu)選，反義核苷酸至少有6個(gè)核苷酸，優(yōu)選為寡核苷酸(從6個(gè)至約200個(gè)寡核苷酸)。如上文所述，反義核苷酸被傳送至細(xì)胞，其通過(guò)不同的技術(shù)體內(nèi)表達(dá)所述的基因，所述技術(shù)如直接注射至心肌組織、包裹該反義核苷酸至脂質(zhì)體、通過(guò)修飾的反義核苷酸給藥、通過(guò)將反義核苷酸與在所述細(xì)胞表面表達(dá)的特異性結(jié)合受體或抗原相連接靶向至心臟細(xì)胞。然而，用上文所述的傳送方法，很難達(dá)到足夠高的細(xì)胞內(nèi)濃度以抑制內(nèi)源性mRNA的翻譯。同時(shí)，一個(gè)具體的實(shí)施方案中，在啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄控制下放置包含一個(gè)反義核苷酸序列的核酸以形成表達(dá)構(gòu)建，該啟動(dòng)子是指觸發(fā)特異性基因的轉(zhuǎn)錄所需要的DNA序列。細(xì)胞內(nèi)通過(guò)轉(zhuǎn)錄形成外源性序列可控制地表達(dá)本發(fā)明的反義核苷酸。如果該表達(dá)被控制至一個(gè)高的水平，則產(chǎn)生飽和微擾或修飾。由此結(jié)論，反義核苷酸可被路徑上設(shè)計(jì)成靶向?qū)嵸|(zhì)上任何mRNA序列，其包括本文中引用的標(biāo)志物基因，且細(xì)胞因可被路徑上轉(zhuǎn)化成或接觸這些反義核苷酸序列的核酸編碼以至于表達(dá)該反義核苷酸有效的和可控制的飽和量。因此，細(xì)胞中實(shí)質(zhì)上任何RNA種類的翻譯可被修飾或微擾。此外，通過(guò)外源性藥物或配體的接觸，以控制的或飽和的方式修飾或微擾標(biāo)志物蛋白質(zhì)的活性。由于本發(fā)明的方法常應(yīng)用于測(cè)試或證實(shí)不同藥物治療心臟疾病的有用性，藥物接觸是修改或微擾細(xì)胞組成(mRNA's和表達(dá)的蛋白質(zhì)兩者)的一種重要的方法。優(yōu)選的病例中，已知的一種藥物與細(xì)胞中唯一的標(biāo)志物蛋白質(zhì)有相互作用，該藥物只改變所述標(biāo)志物蛋白質(zhì)的活性，即增加或減少活性。分次接觸細(xì)胞改變?cè)撍幬镉昧浚瑥亩鹁哂兴鰳?biāo)志物蛋白質(zhì)輸入的網(wǎng)絡(luò)模型的分次微擾。飽和接觸引起飽和調(diào)整/微擾。術(shù)語(yǔ)"拮抗劑"是指當(dāng)與通過(guò)基因編碼的蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)能抑制它的活性的分子。拮抗劑包括，但不限于肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物和小分子。一個(gè)特別有用的實(shí)施方案，所述拮抗劑是對(duì)上述公開的標(biāo)志物(例如MMP-3和/或SG0T)有特異性的抗體。該抗體能單一作為治療的效應(yīng)子或它能吸收其他細(xì)胞以實(shí)質(zhì)上影響細(xì)胞殺傷。一在用反義核苷酸治療的情況下，該方法包含給藥一定治療有效量的孤立的核酸分子，該核酸分子包含從至少一個(gè)上文鑒定的標(biāo)志物中衍生得到的反義核苷酸序列，其中該反義核苷酸能改變至少一個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄/翻譯。在用拮抗劑治療的情況下，該方法包含對(duì)受試者給藥一定治療有效量的拮抗劑，該拮抗劑能抑制或活化通過(guò)至少一個(gè)上文鑒定的標(biāo)志物編碼的蛋白質(zhì)。一定"治療有效量"的孤立的核酸分子是指治療ACS的一種治療劑的足夠的用量，該核酸分子包含反義核苷酸、編碼核酶的核苷酸序列、雙鏈RNA或拮抗劑。治療有效量的檢測(cè)是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。對(duì)于任何治療的，可最初在細(xì)胞培養(yǎng)分析法(如新生細(xì)胞)中或動(dòng)物模型(通常為大鼠、小鼠、兔子、狗或豬)中評(píng)價(jià)該治療有效量。該動(dòng)物模型也用于檢測(cè)適合的濃度范圍和給藥的路徑。然后這些信息可用于檢測(cè)有用的劑量和人中給藥的路徑。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或試驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序，如ED5。(半數(shù)有效量)和LD5。(半數(shù)致死量)，檢測(cè)治療效力和毒性。毒性效應(yīng)與治療效應(yīng)之間的劑量比值為治療指數(shù)，它表示為比值LDs。/ED，優(yōu)選能有較大治療指數(shù)的反義核苷酸、核酶、雙鏈RNA和拮抗劑。從細(xì)胞培養(yǎng)分析法和動(dòng)物研究獲得的數(shù)據(jù)用于制定人用劑量的范圍。優(yōu)選所述組合物包含的劑量處于包括ED5。且極小毒性或沒(méi)有毒性的循環(huán)濃度范圍以內(nèi)。該劑量在這范圍內(nèi)變化，依賴于使用的劑型、患者的敏感性和給藥的路徑。依據(jù)與需要治療的受試者有關(guān)的因素，通過(guò)臨床醫(yī)師檢測(cè)準(zhǔn)確的劑量。調(diào)整劑量和給藥以提供活性部分的足夠濃度或以保持預(yù)期的效應(yīng)。應(yīng)考慮的因素包括疾病狀態(tài)的嚴(yán)重性、受試者的一般健康、年齡、體重和受試者的性別、飲食、給藥的時(shí)間和間隔、藥物合用、反應(yīng)敏感度和治療的耐受性/應(yīng)答。通常劑量從0.1txg至100，000ug變化，直達(dá)約1g的總劑量，這依賴于給藥的路徑。文獻(xiàn)中提供了關(guān)于特殊劑量和給藥方法的指南，這通常對(duì)本領(lǐng)域的臨床醫(yī)師是有用的。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用不同的制劑，其中核苷酸優(yōu)于拮抗劑。為治療應(yīng)用，優(yōu)選給藥反義核苷酸、編碼，核酶的核苷酸序列、雙鏈RNAs(是否被包裹至脂質(zhì)體或被包含于病毒載體中)和抗體作為藥學(xué)組合物，該藥學(xué)組合物包含結(jié)合一種或多種藥學(xué)上可接受載體的治療劑。該組合物單一給藥或結(jié)合至少一種其他物質(zhì)如穩(wěn)定類化合物給藥，其中該組合物在任何無(wú)菌、生物可降解的藥學(xué)載體中給藥，其包括但不限于生理鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖或水。對(duì)患者該組合物單一給藥或結(jié)合其他物質(zhì)、藥物或激素給藥。通過(guò)許多路徑給藥所述藥學(xué)組合物，其中路徑包括但不限于口服、靜脈、肌注、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)、透皮、皮下、腹腔內(nèi)、鼻腔內(nèi)、腸內(nèi)、局部、舌下和直腸方式。除活性成分之外，這些藥學(xué)組合物包含合適的藥學(xué)上可接受的載體，該載體包含能促進(jìn)活性化合物加工成能用于藥學(xué)的制劑的賦形劑和助劑。使用本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受載體配制口服給藥的藥學(xué)組合物成適合口服給藥的劑型。這些載體能使藥學(xué)的組合物配制成供患者攝取的片劑、丸劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿料、懸浮液等。然而本文所述的本發(fā)明具體實(shí)施方案是為了說(shuō)明本發(fā)明，但不是為了限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解所述的細(xì)節(jié)、材料、部分安排的很多變化都在本發(fā)明原則和范圍之內(nèi)，而沒(méi)有脫離附加的權(quán)利要求中所述的本發(fā)明。權(quán)利要求1、一種在疑似患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的人受試者中診斷ACS的方法，所述方法包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中MMP-3的濃度；(c)如果所述流體樣品中MMP-3的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定MMP-3的有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的人受試者主訴胸痛。3.&根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的流體樣品選自全血、血清、血漿或尿液。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的流體樣品中MMP-3約1ng/mL或以上的檢測(cè)濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。5、一種在疑似患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的人受試者中診斷ACS的方法，所述方法包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中SG0T的濃度；(c)如果所述流體樣品中SG0T的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定SG0T的有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的降低濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的人受試者主訴胸痛。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的流體樣品選自全血、血清、血漿或尿液。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的流體樣品中SG0T小于或等于約10ug/mL的檢測(cè)濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。9、一種在疑似患有急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)的人受試者中診斷ACS的方法，所述方法包括(a)從疑似患有ACS的人受試者獲得流體樣品；(b)檢測(cè)所述流體樣品中醒P-3和SG0T的濃度；(c)如果所述流體樣品中畫P-3和SG0T的檢測(cè)濃度與人受試者的對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，從而確定薩P-3有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度和SG0T有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的降低濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中進(jìn)一步包括檢測(cè)所述的流體樣品中至少一種IL-1&因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MRMCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、T工MP-I、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶或其任何組合的濃度。11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中除SGOT之外的所有分析物與對(duì)照濃度相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。12、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中通過(guò)實(shí)施一種或多種免疫分析法檢測(cè)濃度。13、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其進(jìn)一步包括檢測(cè)所述的流體樣品中至少一種IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、TIMP-I、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-癌胚抗原、IL-13、TNF-a、IgE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-1-P、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、0-2微球蛋白、脂蛋白(a)、MMP-9、促甲狀腺激素、a-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素或IL-6或其任何組合的濃度。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中除SGOT之外的所有分析物與對(duì)照濃度相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷。15、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中受試者所述的流體樣品中分析物的檢測(cè)濃度在相鄰圖上標(biāo)示，從而受試者檢測(cè)濃度與其他受試者(之前被診斷為患有ACS)測(cè)定濃度的集群的相鄰性有助于ACS陽(yáng)性的診斷。16、一種試劑盒，所述試劑盒包含用于檢測(cè)流體樣品中分析物組濃度的試劑，該分析物包括應(yīng)P-3、SGOT和一種或更多種IL-18、因子VII、ICAM-I、肌酸激酶MB、MCP-1、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、HMP-1、鐵蛋白或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶。17、根據(jù)權(quán)利要求16所述的試劑盒，所述試劑盒包括抗分析物組的抗體，該分析物包括醒P-3、SG0T、IL-18、因子VII、ICAM-I、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、T頂P-1、鐵蛋白和谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶。18、根據(jù)權(quán)利要求16所述的試劑盒，所述試劑盒包括固定在一個(gè)底物上的溶劑。19、根據(jù)權(quán)利要求18所述的試劑盒，所述底物包括一個(gè)二維陣列、一個(gè)微孔板或多重微珠套件。20、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，所述方法包括應(yīng)用一個(gè)選自包括線性回歸分析法、分類樹分析法或啟發(fā)式輪轂Bayes分析法的組的統(tǒng)計(jì)方法。21、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的流體樣品中一種或多種下述分析物的檢測(cè)濃度支持ACS陽(yáng)性的診斷IL-18(約300pg/mL以上)、因子VII(約320ng/mL以上)、ICAM-1(約170ng/mL以上)、肌酸激酶MB(約5ng/mL以上)、MCP-1(約275pg/mL以上)、肌紅蛋白(約30ng/mL以上)、C反應(yīng)蛋白(約11ug/mL以上)、TIMP-1(約120ng/mL以上)、鐵蛋白(約300ng/mL以上)或谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(約2ng/mL以上)或其任何組合。全文摘要本發(fā)明提供了為檢測(cè)和診斷急性冠狀動(dòng)脈綜合癥或ACS的方法。所述方法基于有危險(xiǎn)的患者樣品流體(通常為血樣)中選擇分析物的異常濃度支持ACS的診斷。因此公開了ACS的至少兩個(gè)新生物標(biāo)志物，即MMP-3和SGOT。共12種分析物的濃度提供了所述患者狀況的靈敏度和特異性描述，即是否所述患者患有心臟病發(fā)作。所述ACS的其他重要的生物標(biāo)志物包括但不限于IL-18、因子VII、ICAM-1、肌酸激酶MB、MCP-I、肌紅蛋白、C反應(yīng)蛋白、血管性血友病因子、TIMP-I、鐵蛋白、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、前列腺特異抗原(游離)、IL-3、組織因子、甲胎蛋白、前列腺酸性磷酸酶、干細(xì)胞因子、MIP-I-β、癌胚抗原、IL-13、TNF-α、IgE、脂肪酸結(jié)合蛋白、ENA-78、IL-1-β、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、載脂蛋白A1、血清淀粉樣蛋白P、生長(zhǎng)激素、β-2微球蛋白、脂蛋白(a)、MMP-9、促甲狀腺激素、α-2巨球蛋白、補(bǔ)體3、IL-7、瘦素或IL-6。也描述了包含有助于流體樣品分析的試劑的試劑盒。文檔編號(hào)G01N33/573GK101268369SQ200680023796公開日2008年9月17日申請(qǐng)日期2006年6月27日優(yōu)先權(quán)日2005年6月29日發(fā)明者喬治·羅杰斯,詹姆斯·馬普斯,邁克爾·D·斯班,馬克·B·錢德勒申請(qǐng)人:儒勒斯貝斯特醫(yī)藥有限公司