專利名稱：蟾酥類高效液相色譜指紋圖譜鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥指紋圖譜技術(shù)，確切地說它是蟾酥類高效液相色譜指紋圖譜鑒定方法。
背景技術(shù)：
中藥蟾酥《中國藥典》鑒別項(xiàng)下試管反應(yīng)檢蟾毒色胺類和蟾毒配基類，這一方法不能有效地鑒別蟾酥的真?zhèn)危挥钟肨LC法以對照藥材及脂蟾毒配基和華蟾酥毒基對照品進(jìn)行鑒別，這一方法缺乏專屬性和先進(jìn)性。對蟾酥類尚沒有科學(xué)、有效、先進(jìn)的鑒別方法。而科學(xué)、有效、先進(jìn)的鑒別方法對蟾酥的應(yīng)用極為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用高效液相色譜指紋圖譜鑒別蟾酥類的方法，并可將蟾酥高效液相色譜指紋圖譜作為蟾酥質(zhì)量控制及真?zhèn)舞b別的指標(biāo)。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的在大量采集不同來源、不同產(chǎn)地蟾酥樣品的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法，得出了蟾酥類特有的蟾毒色胺類及蟾毒配基類化學(xué)指紋圖譜；方法為利用高效液相色譜儀，UV檢測器，色譜工作站，取待測蟾酥樣品25mg，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.2μm濾膜即得蟾酥類供試品溶液。將待測蟾酥供試品溶液，在分析柱Phenyl-Hexyl(4.6×250mm，5μm)，流動相甲醇(A)-緩沖液(B，一定配比的庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉、檸檬酸、磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液組成)，進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0ml/min，檢測波長296nm，進(jìn)樣量20μl，保留時間90min，即得到蟾酥類各自特有的化學(xué)指紋圖譜(包括蟾毒色胺類和蟾毒配基類特征峰)，并對所有特征峰全部或大部分進(jìn)行化學(xué)歸屬。
本方法能準(zhǔn)確地測出蟾酥類的高效液相色譜指紋圖譜，從而為鑒別蟾酥的真?zhèn)魏椭贫杆炙幉暮腕杆肿⑸湟嘿|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。


圖1為中華蟾酥(中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans耳后腺的干燥分泌物)對照用HPLC指紋圖譜。
A.中華蟾酥北方品；B.中華蟾酥中原品；C.中華蟾酥南方品5-羥色胺(1)，N‘-甲基5-羥色胺(2)，蟾毒色胺(3)，蟾毒色胺內(nèi)鹽(4)，日蟾毒它靈(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，蟾毒它靈(8)，遠(yuǎn)華蟾毒精(9)，華蟾毒它靈(10)，蟾毒靈(11)，脂蟾毒配基(12)，華蟾毒精(13)圖2黑眶蟾酥(黑眶蟾蜍Bufo melanostictus耳后腺的干燥分泌物)對照用HPLC指紋圖譜。
5-羥色胺(1)，N‘-甲基5-羥色胺(2)，蟾毒色胺內(nèi)鹽(4)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，19-羥基蟾毒靈(7’)，蟾毒它靈(8)，蟾毒靈(11)，脂蟾毒配基(12)圖3華西蟾酥(華西大蟾蜍Bufo bufo andrewsi耳后腺的干燥分泌物)對照用HPLC指紋圖譜。
5-羥色胺(1)，N‘-甲基5-羥色胺(2)，蟾毒色胺內(nèi)鹽(4)，日蟾毒它靈(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，蟾毒它靈(8)，遠(yuǎn)華蟾毒精(9)，華蟾毒它靈(10)，蟾毒靈(11)圖4花背蟾酥(花背蟾蜍Bufo raddei耳后腺的干燥分泌物)對照用HPLC指紋圖譜。
蟾毒色胺(3)，蟾毒色胺內(nèi)鹽(4)，日蟾毒它靈(5)，沙蟾毒精(6)，嚏根苷配基(7)，遠(yuǎn)華蟾毒精(9)，南美蟾毒精(9’)，蟾毒靈(11)
具體實(shí)施例方式利用高效液相色譜儀，UV檢測器，色譜工作站，取待測蟾酥樣品25mg，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，加熱回流1hr，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.2μm濾膜即得蟾酥類供試品溶液。將待測供試品溶液，在分析柱Phenyl-Hexyl(4.6×250mm，5μm)，流動相甲醇(A)-緩沖液(B，一定配比的庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉、檸檬酸、磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液組成)，按下表?xiàng)l件梯度洗脫，流速為1.0ml/min，檢測波長296nm，進(jìn)樣量20μl，保留時間90min，即得到蟾酥類各自特有的化學(xué)指紋圖譜(包括蟾毒色胺類和蟾毒配基類特征峰)，并對所有特征峰全部或大部分進(jìn)行化學(xué)歸屬。
梯度洗脫程序

權(quán)利要求
1.蟾酥類高效液相色譜指紋圖譜鑒定方法，使用高效液相色譜儀、UV檢測器以及相應(yīng)的色譜工作站，其特征在于采用4.6×250mm，5μmPhenyl-Hexy分析柱，流動相甲醇做為A-一定配比的庚烷磺酸鈉或辛烷磺酸鈉、檸檬酸、磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液組成的緩沖液做為B，按以下程序梯度洗脫，梯度洗脫程序
流速為1.0ml/min，檢測波長296nm，蟾酥類供試品溶液，精密稱定蟾酥細(xì)粉25mg，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，進(jìn)樣量20μl，保留時間90min，即得到蟾酥類各自特有的化學(xué)指紋圖譜，包括蟾毒色胺類和蟾毒配基類特征峰，并對所有特征峰全部或大部分進(jìn)行化學(xué)歸屬，通過該方法能快速準(zhǔn)確地鑒別不同來源的蟾酥類，可作為蟾酥及蟾酥注射液質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蟾酥類高效液相色譜指紋圖譜鑒定方法，采用高效液相色譜法，得出了蟾酥類特有的蟾毒色胺類及蟾毒配基類化學(xué)指紋圖譜；利用高效液相色譜儀，UV檢測器，色譜工作站，取待測蟾酥樣品25mg，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.2μm濾膜即得蟾酥類供試品溶液。將待測蟾酥供試品溶液，在分析柱，流動相甲醇(A)－緩沖液，進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)樣量20μl，保留時間90min，即得到蟾酥類各自特有的化學(xué)指紋圖譜，并對所有特征峰全部或大部分進(jìn)行化學(xué)歸屬。本方法能準(zhǔn)確地測出蟾酥類的高效液相色譜指紋圖譜，從而為鑒別蟾酥的真?zhèn)魏椭贫杆炙幉暮腕杆肿⑸湟嘿|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。
文檔編號G01N30/02GK1776419SQ20051011955
公開日2006年5月24日 申請日期2005年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月18日
發(fā)明者崔征, 張屏, 王東 申請人:沈陽藥科大學(xué)