專利名稱：用于治療癌癥的脂肪酸類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防癌癥的脂肪酸類似物。具體地說，本發(fā)明涉及脂肪酸類似物在治療和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤中的用途。
背景技術(shù)：
用本發(fā)明改性脂肪酸進(jìn)行治療代表了治療這類疾病的一種新途徑。
EP345038描述了非-β-可氧化的脂肪酸類似物在治療高脂血癥和在降低哺乳動(dòng)物血液中膽固醇和甘油三酯濃度的用途。
PCT/NO95/00195描述了烷基-S-CH2COOR和烷基-SeCH2COOR，它們可用于抑制LDL氧化改變，并可用于減少癌癥細(xì)胞的增殖。然而，這種增殖性作用是細(xì)胞特異性的，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物在其他細(xì)胞體系中對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)或增殖沒有影響。
PCT/NO99/00135、00136和00149描述了脂肪酸類似物在治療肥胖癥、糖尿病和狹窄中的用途。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，上述現(xiàn)有技術(shù)所公開的類似物，即本發(fā)明的非-β-可氧化的脂肪酸具有更為廣泛的用途。研究表明，本發(fā)明化合物能抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移性狀態(tài)，并可提高植入(implanted)腫瘤動(dòng)物的總存活率。癌癥在開發(fā)更有效的用于癌癥治療的新化學(xué)治療劑的過程中，需要考慮諸多因素，例如細(xì)胞毒性、腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。典型地，常規(guī)抗癌劑可單獨(dú)由它們的細(xì)胞毒性而得到確認(rèn)。
當(dāng)在腫瘤細(xì)胞群叢中出現(xiàn)具有選擇性生長(zhǎng)特性的變異細(xì)胞時(shí)，便認(rèn)為有腫瘤發(fā)生，腫瘤發(fā)展的一個(gè)最終階段是出現(xiàn)轉(zhuǎn)移性表現(xiàn)型。在轉(zhuǎn)移期間，腫瘤細(xì)胞會(huì)侵入血管，對(duì)抗循環(huán)的宿主的免疫防御而生存，然后溢出，并植入和生長(zhǎng)于遠(yuǎn)離原發(fā)性腫瘤的部位。腫瘤細(xì)胞侵入附近組織并定居其他器官的能力是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的主要原因。
術(shù)語“轉(zhuǎn)移”包括可導(dǎo)致臨床問題的許多顯型性狀，這些臨床問題常常會(huì)使患者因癌癥死亡。細(xì)胞會(huì)因失去粘著性和在構(gòu)成的組織中的受限位置而進(jìn)入鄰近的部位，逐步形成侵入和溢出血管的能力，并會(huì)在非正常區(qū)域或環(huán)境中增殖。這種生長(zhǎng)模式的變化伴有生化改變的積聚，其能促進(jìn)轉(zhuǎn)移性的進(jìn)程。
迄今為止，對(duì)涉及轉(zhuǎn)移性級(jí)聯(lián)的內(nèi)在機(jī)理知之甚少。在某些情況下，某些腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能性增大可能是由于對(duì)癌基因表達(dá)的增加，這些癌基因在正常時(shí)負(fù)責(zé)控制細(xì)胞的各種功能，包括分化、增殖、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和信息傳遞。另外，研究表明那些能調(diào)制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的物質(zhì)可抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移行為，同時(shí)還推測(cè)具有表面相關(guān)效應(yīng)的化合物例如調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的化合物可能與引起轉(zhuǎn)移的進(jìn)程有關(guān)。
癌癥是組織不適當(dāng)積聚而導(dǎo)致的疾病。當(dāng)腫瘤組織的體積危害重要器官的功能時(shí)，臨床上通常會(huì)出現(xiàn)這種紊亂。與人們通常認(rèn)知相反的是，人的惡性病癥通常并不是由細(xì)胞迅速增殖所導(dǎo)致的疾病。事實(shí)上，大多數(shù)普通癌癥細(xì)胞的增殖比任何正常組織中的細(xì)胞還要緩慢。研究證實(shí)，重要器官中腫瘤組織相對(duì)緩慢的積聚對(duì)大多數(shù)死于癥癌患者而言是致命的。
化學(xué)治療劑均具有一個(gè)特征相對(duì)與正常細(xì)胞而言，它們通常可更有效地殺死或損害惡性細(xì)胞。然而，從其損害正常細(xì)胞這一點(diǎn)來說，它們具有潛在的毒性。
目前，幾乎所有用途的化學(xué)治療劑均可干擾DNA合成，干擾DNA和RNA合成前體的供給，或干擾有絲分裂。此類藥物可最有效地對(duì)抗循環(huán)細(xì)胞。經(jīng)任何單一藥物或幾種藥物聯(lián)用治療后的細(xì)胞死亡的機(jī)理是復(fù)雜的，并可能包括不止一個(gè)途徑。由于大多數(shù)臨床上可檢測(cè)出的腫瘤主要由非循環(huán)細(xì)胞組成，因此化療并不是總能很有效地根除癌癥。
癌癥治療策略是將腫瘤細(xì)胞由非循環(huán)隔室(compartment)轉(zhuǎn)移至循環(huán)隔室。幾種能促進(jìn)這種轉(zhuǎn)移的方法構(gòu)成組合模式治療的基礎(chǔ)。手術(shù)是用來減小腫瘤大小的最常見手段，這有利于使癌癥細(xì)胞再進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)中。待完全除去原發(fā)性腫瘤后，在遠(yuǎn)端部位仍殘有顯微鏡可見的轉(zhuǎn)移。由于它們體積很小，微轉(zhuǎn)移主要由循環(huán)細(xì)胞組成。仍殘留在原發(fā)性腫瘤部位的少數(shù)細(xì)胞也可能再進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)。這樣，剩余的癌癥細(xì)胞通常對(duì)化療敏感。單用放射療法或化療也可減小腫瘤體積，這樣可使細(xì)胞復(fù)原(recruit)到循環(huán)細(xì)胞隔室。
因此，組合藥物療法是大多數(shù)目前所用化療的基礎(chǔ)。組合化療利用了多種藥物的不同作用機(jī)理和細(xì)胞毒性。
然而，盡管化學(xué)治療劑可更有效地殺死或損害惡性細(xì)胞(相對(duì)于正常細(xì)胞)，但是其對(duì)正常細(xì)胞也有損害的事實(shí)表明它們具有潛在的毒性。因此，為了使化療更優(yōu)效，患者必需具備優(yōu)良的生理狀態(tài)。
癌癥治療需要抑制許多因素，這包括腫瘤細(xì)胞增殖、癌癥細(xì)胞向身體其他部位的轉(zhuǎn)移性播散、侵襲、腫瘤導(dǎo)致的新血管形成，并需要增強(qiáng)宿主免疫應(yīng)答和細(xì)胞毒性。通常，可根據(jù)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性來選擇常規(guī)的癌癥化療劑。然而，一些抗癌劑對(duì)患者的免疫系統(tǒng)有不利效應(yīng)。不幸的是，對(duì)于絕大多數(shù)常規(guī)抗腫瘤劑來說，其有效劑量與毒性劑量的差值(即治療指數(shù))非常低。這樣，如果能開發(fā)出這樣的癌癥療法或治療將是有利的它對(duì)可導(dǎo)致侵襲性癌癥的生長(zhǎng)、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的因素能提供非細(xì)胞毒性保護(hù)作用。
本發(fā)明涉及預(yù)防和/或治療原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤的方法，其中包括用本發(fā)明脂肪酸類似物治療患有癌癥的患者。
癌癥的兩個(gè)本質(zhì)特征是侵襲性和轉(zhuǎn)移性。一個(gè)極端是對(duì)基膜的微侵襲標(biāo)志著瘤轉(zhuǎn)化成為癌癥，而一個(gè)極端是轉(zhuǎn)移通常會(huì)導(dǎo)致死亡。
原發(fā)性腫瘤在一定進(jìn)程時(shí)會(huì)侵襲到底層結(jié)締組織，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的各種介體會(huì)促進(jìn)這種侵襲。未侵入基膜的腫瘤細(xì)胞以及被限制在上皮組織中的腫瘤細(xì)胞被稱為原位癌。
另一方面，當(dāng)附著有淋巴細(xì)胞和血小板的循環(huán)腫瘤細(xì)胞被毛細(xì)血管捕獲并且腫瘤細(xì)胞膜與毛細(xì)內(nèi)皮相互作用時(shí)，可能形成轉(zhuǎn)移。毛細(xì)內(nèi)皮接點(diǎn)縮回，并且腫瘤細(xì)胞配體與內(nèi)皮和基膜上的受體結(jié)合。然后，腫瘤細(xì)胞釋放出膠原酶IV，它能破壞膠原IV，一種底層基膜的主要成分。通過與糖蛋白層粘連蛋白和纖維結(jié)合素結(jié)合，通過釋放破壞基質(zhì)的蛋白酶并分泌能動(dòng)和趨化因子，有助于侵襲亞毛細(xì)管(subcapillary)結(jié)締組織。然后，腫瘤細(xì)胞會(huì)增殖并合成血小板凝集因子，例如血栓素和前凝血質(zhì)，這會(huì)在細(xì)胞周圍沉積纖維蛋白卵袋(cocoon)。這種卵袋可保護(hù)微轉(zhuǎn)移免受宿主免疫系統(tǒng)的攻擊。
本發(fā)明組合物和方法可預(yù)防和/或治療癌癥包括但不限于人肉瘤和癌，例如癌，例如結(jié)腸癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肉瘤，軟骨肉瘤，骨原性肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，內(nèi)皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管內(nèi)皮肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，Ewing氏腫瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，基底細(xì)胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，囊腺癌，髓樣癌，支氣管癌，腎細(xì)胞癌，肝細(xì)胞瘤，膽管癌，絨毛膜癌，精原細(xì)胞瘤，胚胎性癌，Wilm氏腫瘤，子宮頸癌，睪丸腫瘤，肺癌，小細(xì)胞肺癌，膀胱癌，上皮癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，顱咽管瘤，室管膜細(xì)胞瘤，松果體瘤，成血管細(xì)胞瘤，聽神經(jīng)瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦膜瘤，黑素瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤；白血病，例如急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓母細(xì)胞瘤(原粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、myelomonocytic、單核細(xì)胞和紅白血病)；慢性白血病(慢性中幼粒細(xì)胞(粒細(xì)胞)白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病)；和真性紅細(xì)胞增多癥，淋巴瘤(Hodgkin氏病和非Hodgkin氏疾病)，多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥和重鏈病。這類癌癥的特定示例見下面部分的描述。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物能減小各種球狀體(spheroid)的平均直徑，并降低BT4Cn腫瘤的腫瘤體積。另外，植入腫瘤的大鼠經(jīng)TTA治療后基本上提高了其總存活率。
因此，可證實(shí)本發(fā)明脂肪酸類似物對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移具有顯著的效力。
在本發(fā)明化合物中，對(duì)十四烷基硫代乙酸(TTA)進(jìn)行了最為詳盡的研究，并發(fā)現(xiàn)其在各種體外和體內(nèi)試驗(yàn)體系中表現(xiàn)出有益的效應(yīng)。
發(fā)明詳述本發(fā)明公開了能以非細(xì)胞毒性濃度治療和/或預(yù)防癌癥的改性脂肪酸類似物。
本發(fā)明涉及通式(I)脂肪酸類似物或者其鹽、前藥或絡(luò)合物在制備用于預(yù)防和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性轉(zhuǎn)移性腫瘤的藥物組合物中的用途R1-[xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1為-具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的C1-C24鏈烯基，和/或-C1-C24炔基，和/或-C1-C24烷基，或者是被一種或多個(gè)選自下列的取代基在一個(gè)或幾個(gè)位置取代的烷基，所述取代基包括氟、氯、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基硫、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，和-其中R2代表氫或C1-C4烷基，和-其中n為1-12的整數(shù)，和-其中i為奇數(shù)，其表示相對(duì)于COOR2的位置，和-其中Xi彼此獨(dú)立地選自O(shè)、S、SO、SO2、Se和CH2，和-條件是至少一個(gè)Xi不是CH2。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案涉及化合物十四烷基硫代乙酸(TTA)和十四烷基硒代乙酸(TSA)。
具體地說，本發(fā)明涉及上述化合物在抑制腫瘤生長(zhǎng)、侵襲性和轉(zhuǎn)移性中的用途。
本發(fā)明另一方面涉及預(yù)防和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性轉(zhuǎn)移性腫瘤的方法，所述方法包括將有效量的通式(I)脂肪酸類似物或者其鹽、前藥或絡(luò)合物給予有此需要的哺乳動(dòng)物的步驟R1-[xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1為-具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的C1-C24鏈烯基，如/或-C1-C24炔基，和/或-C1-C24烷基，或者是被一種或多個(gè)選自下列的取代基在一個(gè)或幾個(gè)位置取代的烷基，所述取代基包括氟、氯、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基硫、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，和-其中R2代表氫或C1-C4烷基，和-其中n為1-12的整數(shù)，和-其中i為奇數(shù)，其表示相對(duì)于COOR2的位置，和-其中Xi彼此獨(dú)立地選自O(shè)、S、SO、SO2、Se和CH2，和-條件是至少一個(gè)Xi不是CH2。
所述治療包括將治療有效濃度的藥物給予對(duì)該治療有需要的哺乳動(dòng)物，所給予的脂肪酸類似物在施用期間在哺乳動(dòng)物血液中基本上持續(xù)地保持其治療有效濃度。
附圖簡(jiǎn)述附

圖1表示TTA對(duì)的D-54Mg球狀體的球體直徑的影響。
附圖2表示TTA對(duì)GaMg球狀體的球體直徑的影響。
附圖3表示各種濃度的TTA對(duì)D-54Mg球狀體的球體直徑的影響。
附圖4表示TTA對(duì)皮下植入的BT4Cn腫瘤生長(zhǎng)的影響。
附圖5表示TTA對(duì)顱內(nèi)植入BT4Cn腫瘤的大鼠存活的影響。
施用本發(fā)明化合物可采用適宜的技術(shù)(包括經(jīng)非腸道、鼻內(nèi)、口服或經(jīng)皮膚吸收)，將本發(fā)明化合物以藥用藥物形式直接給予哺乳動(dòng)物?？山?jīng)局部或全身給藥。例如，具體的給藥途徑可取決于動(dòng)物的病史。
示例性非腸道給藥包括經(jīng)皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)和腹膜內(nèi)給藥。
如上所述，需根據(jù)治療上的多種考慮來確定適宜的給藥劑量。通常，每一經(jīng)非腸道施用的劑量中每種化合物的總藥用有效量?jī)?yōu)選約為5-1000mg/kg/天(患者體重)。對(duì)于TTA，其劑量?jī)?yōu)選為100-500mg/kg/天，而對(duì)于TSA，其劑量?jī)?yōu)選為10-100mg/kg/天。
連續(xù)給藥時(shí)，本發(fā)明化合物可典型地每天注射1-4次，或經(jīng)皮下連續(xù)輸注，例如用微型泵。也可采用靜脈內(nèi)用袋裝溶液。
在一個(gè)經(jīng)非腸道給藥的實(shí)施方案中，可將具有所需純度的本發(fā)明化合物與可藥用載體混合，配制成單位劑量的注射形式(溶液、混懸液，或乳劑)，所述載體在其所用的劑量和濃度時(shí)應(yīng)對(duì)接受者無毒性，并應(yīng)與制劑中的其他成分相容。
通常，將本發(fā)明化合物與液體載體和/或細(xì)粉狀固體載體均勻且緊密地接觸，可制得所述制劑。然后，如有必要，可將產(chǎn)品制成所需形狀的制劑。載體優(yōu)選為非腸道載體，更優(yōu)選與接受者血液等滲的溶液。示例性載體賦形劑包括水、鹽水、林格溶液和右旋糖溶液。也可采用非水性賦形劑，例如固定油和油酸乙酯以及脂質(zhì)體。
載體中可適當(dāng)?shù)睾猩倭刻砑觿缈商岣叩葷B性和化學(xué)穩(wěn)定性的材料。這類材料在其所用的劑量和濃度時(shí)應(yīng)對(duì)接受者無毒性，其中包括緩沖劑例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、醋酸和其他有機(jī)酸及其鹽；抗氧化劑例如抗壞血酸；免疫球蛋白；親水性聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸；單糖，二糖，并其他糖類包括纖維素及其衍生物，葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合劑例如EDTA；糖醇例如甘露醇或山梨醇；抗衡離子(counterions)例如鈉；和/或非-離子型表面活性劑例如多乙氧基醚、泊洛沙姆或PEG。
對(duì)于口服藥用組合物，可采用以下載體物質(zhì)例如水、明膠、樹膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、油類、聚烯烴二醇(polyalkeneglycol)、礦脂等。所述藥用制劑可為單位劑型，其中還可含有有治療價(jià)值的其他物質(zhì)或常規(guī)藥用輔料，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、緩沖劑等。藥物制劑可為常規(guī)的固體形式例如片劑、膠囊劑、糖衣丸、安瓿等，常規(guī)的劑型例如干粉針劑(dry ampoule)以及栓劑等。
另外，本發(fā)明化合物可適當(dāng)?shù)嘏c其他療法組合，用于對(duì)抗或預(yù)防癌癥。
參考以下實(shí)施例，將更加充分地理解本發(fā)明。然而，這些實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的范圍并無限制。
實(shí)驗(yàn)部分實(shí)施例1.化合物的制備和表征合成3-取代的脂肪酸類似物按以下基本方法，制備本發(fā)明所用的化合物，其中取代基Xi＝3為硫原子或硒原子X為硫原子按以下基本方法，制備本發(fā)明所用的硫取代化合物硫-化合物，即十四烷基硫代乙酸(TTA)，(CH3-(CH2)13-S-CH2-COOH，按EP-345038方法制備。X為硒原子按以下基本方法，制備本發(fā)明所用的硒代取代化合物1.
2.
3.小心地從乙醇或甲醇中結(jié)晶，對(duì)該化合物進(jìn)行純化。
BH4-4.
5.
最終的化合物，例如當(dāng)烷基是十四烷基時(shí)，(CH3-(CH2)13-Se-CH2-COOH(十四烷基硒代乙酸(TSA))可通過從乙醚和己烷中結(jié)晶而純化。
可按專利申請(qǐng)PCT/NO99/00135和NO20001123中的方法合成本發(fā)明的其他化合物。
實(shí)施例2TTA的毒性研究按英國(guó)Corning Hazleton(歐洲)執(zhí)行的GLP規(guī)范，對(duì)狗進(jìn)行了為期28天的毒性研究。通常，經(jīng)口服給予高達(dá)500mg/kg/天劑量的TTA是可以耐受的。施用高劑量的動(dòng)物中的一些與脂類相關(guān)參數(shù)降低。這與TTA的藥理學(xué)活性相符。50或500mg/天/kg劑量水平未發(fā)現(xiàn)毒性跡象。
Covance Laboratories有限公司(英國(guó))已進(jìn)行的致突變活性實(shí)驗(yàn)表明，TTA和TSA在鼠傷寒沙門菌和大腸桿菌菌株中未引起突變。另外，TTA在對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞和L5178Y的實(shí)驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)致突變活性。
實(shí)驗(yàn)中，受試化合物在鼠傷寒沙門菌和大腸桿菌中的濃度3-1000mg/平板(TTA)、2-5000mg/平板(TSA)。在小鼠淋巴瘤細(xì)胞和L5178Y的濃度為2.5-50mg/ml。
在這些實(shí)驗(yàn)中，均未發(fā)現(xiàn)TSA和TSA有致突變活性。
在培養(yǎng)的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中，對(duì)TSA和TTA進(jìn)行了染色體畸變實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在實(shí)驗(yàn)劑量水平(12-140mg/ml)未導(dǎo)致畸變。
因此，本發(fā)明化合物潛在地可用作藥物化合物。
實(shí)施例3TTA對(duì)球狀體生長(zhǎng)的影響將3×106細(xì)胞接種到涂有10ml(KB/KJT＝20ml)0.75％-瓊脂DMEM溶液(KB/KJT＝3％)的80cm2組織培養(yǎng)燒瓶底部，獲得多細(xì)胞的腫瘤球狀體。保溫7天后，在立體顯微鏡下用巴斯德吸管挑選出直徑為100-300μm的球狀體。用其目鏡中配有校準(zhǔn)十字線的倒置顯微鏡測(cè)定球狀體的大小。
為了比較不同脂肪酸類似物對(duì)腫瘤球狀體生長(zhǎng)的影響，將D-54Mg和GaMg球狀體分別移至涂有0.5ml 0.75％DMEM-瓊脂的16mm24孔碟中。D-54Mg和GaMg為人細(xì)胞系。D-54Mg細(xì)胞系源于混合性惡性(anaplastic)神經(jīng)膠質(zhì)瘤，由Dr.Darell D.Bigner(Duke大學(xué)，Durham，北卡羅來納州)惠贈(zèng)。GaMg細(xì)胞系由我們實(shí)驗(yàn)室培植(establish)，并有許多詳細(xì)的描述(Bjerkvik等，Anticancerresearch19988卷，797-803頁(yè))。將球狀體分成5組，每組4個(gè)球狀體。其中有4組用不同脂肪酸類似物處理，脂肪酸的終濃度為100或250μM。第五組(對(duì)照)不進(jìn)行任何處理。涂蓋的懸浮液體積為1.0ml。每隔一天，用其目鏡中配有校準(zhǔn)十字線的倒置相差顯微鏡測(cè)定兩個(gè)正交直徑，以確定球狀體的大小。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行14天。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如附圖1-3所示。脂肪酸在14天中一直暴露于球狀體中。未向?qū)φ战M(-▲-)中補(bǔ)充脂肪酸。數(shù)值以平均±SD表示。
附圖l表示250μMTTA(-■-)和PA(-◆-)對(duì)D-54Mg球狀體平均球體直徑(μm)的影響。
附圖2表示25μMTTA(-■-)和PA(-◆-)對(duì)GaMg球狀體平均球面徑(μm)的影響。
為了研究TTA對(duì)球狀體生長(zhǎng)的劑量依賴效果，將兩種細(xì)胞系的24個(gè)腫瘤球狀體分成6組，給予0、50、100、150、200-250μM的TTA。該實(shí)驗(yàn)在SF-X培養(yǎng)基(來自Costar公司，Mass，美國(guó))中進(jìn)行，結(jié)果見附圖3。
實(shí)施例4細(xì)胞遷移通過測(cè)定已經(jīng)附于塑料表面上的細(xì)胞從球狀體中遷移的能力研究了脂肪酸類似物對(duì)細(xì)胞遷移的影響。將直徑為200-300μm的GaMg和D-54Mg球狀體分別移至16mm24-孔碟中。然后向1.5ml DMEM中加入各種濃度的不同脂肪酸類似物。培養(yǎng)3天后，樣品用4％甲醛固定于PBS中，并用96％乙醇中的2％結(jié)晶紫染色。然后，用Kontron形態(tài)測(cè)定系統(tǒng)(Kontron公司，Eching，德國(guó))測(cè)定生長(zhǎng)暈(outgrowth)的大小。在該分析中，采用了加有血清的培養(yǎng)基(DMEM)，這是由于膠質(zhì)瘤細(xì)胞在SF-X培養(yǎng)基中與塑料表面的附著相對(duì)松散一些。濃度為100μM的TTA強(qiáng)勁地抑制了GaMg和D-54MG細(xì)胞的遷移能力(未給出數(shù)據(jù))。
實(shí)施例5TTA對(duì)皮下植入的BT4Cn腫瘤生長(zhǎng)的影響Mail Norwegian褐家鼠，BD IX，購(gòu)自Gades研究所，Haukeland醫(yī)院，Bergen，挪威。成對(duì)置于鼠籠飼養(yǎng)，并維持12小時(shí)的光-暗循環(huán)，溫度為20±3℃。在實(shí)驗(yàn)期間，體重為250-400 g。褐家鼠飼以商品標(biāo)準(zhǔn)的粒狀食物，并隨意供給自來水。試驗(yàn)組用TTA處理，而對(duì)照組用棕櫚酸鹽和/或羧甲基纖維素(CMC)處理。
口胃(oro-gastric)插管法給予TTA。TTA和PA懸浮于0.5％(w/v)羧甲基纖維素鈉中，最終貯備液濃度為75mg/ml動(dòng)物每天給藥一次，劑量為300mg/kg體重。
大鼠用0.2ml Hypnorm-咪噠唑侖/100g體重麻醉，并經(jīng)皮下在大鼠頸部注射5×106個(gè)腫瘤細(xì)胞(在1ml NaCl中)，以向其體內(nèi)植入腫瘤。3-4周后，取出腫瘤并切成2×2mm的組織切片。組織切片供在腿部植入皮下(s.c.)腫瘤。大鼠用麻醉0.2ml Hypnorm-咪噠唑侖/100g體重麻醉，切一皮膚切口，移入組織切片，并在皮膚切口下約1cm處植入腫瘤。腫瘤生長(zhǎng)2周。對(duì)大鼠的處理包括經(jīng)口胃插管法或直接注入腫瘤。
測(cè)定腫瘤(腿部)的體積。
附圖4表示PA(-◆-)和TTA(-■-)對(duì)皮下植入的BT4Cn腫瘤生長(zhǎng)的影響。
實(shí)施例6TTA對(duì)顱內(nèi)植入BT4Cn腫瘤的大鼠存活的影響按實(shí)施例5的描述飼養(yǎng)和處理Mail Norwegian褐家鼠，BD IX。經(jīng)灌胃插管法給予TTA。
經(jīng)定向移植術(shù)植入腫瘤。
大鼠用0.4ml Equithesin/100g體重麻醉。作一皮膚切口，用H2O2除去血液，并用牙鉆環(huán)鋸頭顱骨(scull)。
鉆孔定位于冠狀縫后的3.3mm和矢狀縫側(cè)的2.5mm處。
按上述方法(部分5.3)收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后用DPBS稀釋成終濃度為20.000細(xì)胞/μl。取2μl細(xì)胞懸浮液，用Hamilton注射器(配有錐尖0.7mm針頭)在2.8mm深處注入。皮膚用鋼環(huán)閉合，然后將動(dòng)物送回各自鼠籠。
附圖5表示PA和TTA對(duì)顱內(nèi)植入BT4Cn腫瘤的大鼠存活的影響。
權(quán)利要求
1.通式(I)脂肪酸類似物或者其鹽、前藥或絡(luò)合物在制備用于預(yù)防和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤的藥物組合物中的用途R1-[xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1為-具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的C1-C24鏈烯基，和/或-C1-C24炔基，和/或-C1-C24烷基，或者是被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)在一個(gè)或幾個(gè)位置取代的烷基，所述基團(tuán)包括氟、氯、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，和-其中R2代表氫或C1-C4烷基，和-其中n為1-12的整數(shù)，和-其中i為奇數(shù)，其表示相對(duì)于COOR2的位置，和-其中Xi彼此獨(dú)立地選自O(shè)、S、SO、SO2、Se和CH2，和-條件是至少一個(gè)Xi不是CH2。
2.如權(quán)利要求1的用途，其中化合物為十四烷基硫代乙酸。
3.如權(quán)利要求1的用途，其中化合物為十四烷基硒代乙酸。
4.如權(quán)利要求1的用途，用于抑制腫瘤的生長(zhǎng)。
5.如權(quán)利要求1的用途，用于抑制原發(fā)性腫瘤侵襲至結(jié)締組織中。
6.如權(quán)利要求1的用途，用于抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移性，即抑制繼發(fā)性腫瘤的形成。
7.如權(quán)利要求1的用途，用于提高患有腫瘤的哺乳動(dòng)物的總存活率。
8.用于治療和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性轉(zhuǎn)移性腫瘤的方法，所述方法包括將有效量的通式(I)脂肪酸類似物或者其鹽、前藥或絡(luò)合物給予有此需要的哺乳動(dòng)物的步驟R1-[xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1為-具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的C1-C24鏈烯基，和/或-C1-C24炔基，和/或-C1-C24烷基，或者是被一種或多個(gè)選自下列的基團(tuán)在一個(gè)或幾個(gè)位置取代的烷基，所述基團(tuán)包括氟、氯、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基硫、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，和-其中R2代表氫或C1-C4烷基，和-其中n為1-12的整數(shù)，和-其中i為奇數(shù)，其表示相對(duì)于COOR2的位置，和-其中Xi彼此獨(dú)立地選自O(shè)、S、SO、SO2、Se和CH2，和-條件是至少一個(gè)Xi不是CH2。
9.如權(quán)利要求8的方法，其中化合物為十四烷基硫代乙酸。
10.如權(quán)利要求8的方法，其中化合物為十四烷基硒代乙酸。
11.如前述任一權(quán)利要求的方法，其中給予脂肪酸類似物以使在施用期間在哺乳動(dòng)物血液中基本上持續(xù)地保持其治療有效濃度。
12.如前述任一權(quán)利要求的方法，其中所述脂肪酸類似物組合物為單位劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)脂肪酸類似物或者其鹽、前藥或絡(luò)合物在制備用于預(yù)防和/或抑制原發(fā)性和繼發(fā)性轉(zhuǎn)移性腫瘤的藥物組合物中的用途R
文檔編號(hào)E21B21/01GK1441671SQ01812717
公開日2003年9月10日 申請(qǐng)日期2001年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月13日
發(fā)明者R·伯奇 申請(qǐng)人:蒂亞梅迪卡有限公司