本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，涉及一種具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球及其制備方法與應(yīng)用。技術(shù)背景超順磁性納米顆粒因其具有超順磁性、良好的生物相容性、單分散性、粒徑均一、表面易于功能化等特點，被廣泛應(yīng)用于磁共振顯影、生物分離（細胞分離、蛋白質(zhì)分離等）、藥物傳遞系統(tǒng)、磁熱療及基因治療等生物醫(yī)學方面。由于超順磁性納米顆粒的粒徑很小，在用于生物分離時，在磁場作用下產(chǎn)生的磁作用力也很小，需要在很強的磁場下或作用很長時間才能達到較好的分離效果。目前，有部分研究者通過將超順磁性納米顆粒與聚合物混合制成復(fù)合微球，來增加其在磁場磁場作用下產(chǎn)生的磁作用力，使分離效率得到了提高。公開號為CN102070864A的中國發(fā)明專利公開了一種納米級聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合微球及其制備方法，通過微乳液聚合方法使甲基丙烯酸甲酯包裹超順磁性納米顆粒制得了形狀規(guī)則、大小均一、粒徑分布窄、比飽和磁化強度高的復(fù)合微球，可用于蛋白質(zhì)分離。然而，目前可用于蛋白分離的復(fù)合微球與蛋白質(zhì)的結(jié)合大多是依靠非特異性結(jié)合，蛋白質(zhì)分離的特異性差，很難做到從混合蛋白質(zhì)中用針對性的分離某種特定的蛋白質(zhì)。雖然，目前也有一些在復(fù)合微球接枝特異性基團用于蛋白質(zhì)的選擇性吸附的研究，但其制備工藝復(fù)雜，成本高，且僅適用于某些帶有特定基團和結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，普適性差。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明提供了一種可以對混合蛋白質(zhì)進行選擇性吸附的具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球，包括超順磁性納米顆粒、聚甲基丙烯酸甲酯和聚多巴胺，所述聚甲基丙烯酸甲酯包裹超順磁性納米顆粒構(gòu)成復(fù)合納米球的內(nèi)核，所述聚多巴胺包裹在所述內(nèi)核的外圍構(gòu)成復(fù)合納米球的外殼層，所述外殼層表面含有蛋白質(zhì)分子印記。所述蛋白質(zhì)分子印記是指與某種蛋白分子結(jié)構(gòu)相匹配的空腔。所述蛋白質(zhì)的種類可以靈活選擇。作為可選方式，在上述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述聚甲基丙烯酸甲酯形成形狀規(guī)整、粒徑均勻、單分散性良好的納米球，超順磁性納米顆粒均勻的彌散分布于所述聚甲基丙烯酸甲酯納米球中。作為可選方式，在上述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述復(fù)合納米球的內(nèi)核的外圍具有羥基化改性層。所述羥基化改性層中含有大量的羥基，可以與聚多巴胺外殼、模板蛋白質(zhì)分子之間形成豐富的氫鍵，使聚多巴胺更緊密的包裹在復(fù)合納米球內(nèi)核的外圍，使復(fù)合納米球粒徑更均勻，形狀更規(guī)整，也使得聚多巴胺能夠更緊密的包裹模板蛋白，避免模板蛋白在制備過程中從聚多巴胺外殼中漏掉，使所述外殼層表面含有更多數(shù)量的蛋白分子印記。作為可選方式，在上述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述超順磁性納米顆?？梢允撬难趸F，伽馬三氧化二鐵等具有超順磁性納米粒子中的至少一種，還可以是摻有如錳，鈷或鋅等金屬元素以提高飽和磁化強度的鐵氧磁性納米粒子中的至少一種。作為可選方式，在上述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述超順磁性納米顆粒為Fe3O4磁性納米粒子，優(yōu)選粒徑為4nm～20nm，比飽和磁化強度為48emu/g～65emu/g的Fe3O4磁性納米粒子。作為可選方式，在上述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述聚甲基丙烯酸甲酯包裹超順磁性納米顆粒構(gòu)成的復(fù)合納米球內(nèi)核的粒徑為20nm～100nm，比飽和磁化強度為32emu/g～46emu/g。作為可選方式，在上述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球中，所述具有蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球呈形狀規(guī)整的球形，粒徑均勻，單分散性良好。作為優(yōu)選，其平均粒徑為80~300nm，比飽和磁化強度為24emu/g～38emu/g。本發(fā)明還提供了一種制備上述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備方法，包括以下步驟：（1）制備聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球（可參照公開號為CN102070864A的中國發(fā)明專利所述的方法）；（2）將步驟（1）中制備的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球均勻分散于緩沖溶液中，加入蛋白質(zhì)作為模板分子，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌0.5~3h；（3）加入多巴胺，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌1-12h，（時間越長，聚多巴胺外殼層越厚）多巴胺在聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球表面自聚合并包裹蛋白質(zhì)模板分子，形成外殼層，得到包裹蛋白質(zhì)模板分子的超順磁性復(fù)合納米球；（4）在外加磁場下，利用復(fù)合納米球的超順磁性進行磁分離，棄去未復(fù)合成功的聚多巴胺和緩沖溶液，再用蛋白洗脫液充分洗滌上述分離步驟中得到的復(fù)合納米球，除去蛋白質(zhì)模板分子，在外殼層中形成與所述蛋白質(zhì)模板分子尺寸相對應(yīng)的空腔，即蛋白分子印記，然后用去離子水充分洗滌即制得所述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球。在上述方法中專門設(shè)計了兩步超聲法，且采用探頭超聲保證超聲具有足夠的強度，使得該方法制備的超順磁性復(fù)合納米球，粒徑均勻，單分散性好，不團聚，不同納米球之間的聚多巴胺外殼層不會相互粘連，形成形狀更規(guī)整的獨立的納米球；使得模版蛋白質(zhì)分子均勻、牢固的分布在聚多巴胺外殼中，有利于提高超順磁性復(fù)合納米球與目標蛋白質(zhì)分子的選擇性結(jié)合能力。同時控制超聲在冰浴條件下進行，有利于保持模版蛋白質(zhì)分子的活性，從而保證形成的印記與活性蛋白相匹配，還可以控制多巴胺自聚合反應(yīng)的速度和程度，避免復(fù)合納米球粒徑過大或相互之間產(chǎn)生粘連。本發(fā)明還提供了另一種制備上述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備方法，包括以下步驟：（1）制備羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球：1）配制磁流體：將超順磁性納米顆粒均勻分散于正己烷中形成磁流體，2）形成微乳液：將富羥基表面活性劑溶解于水中，與所述磁流體和甲基丙烯酸甲酯單體充分混合，超聲振蕩8min以上形成微乳液，3）聚合反應(yīng)：在保護氣氛下將步驟2）中的微乳液攪拌加熱，加入引發(fā)劑（可選過硫酸銨、過硫酸鉀、過硫酸鈉或其它常用引發(fā)劑，以引發(fā)甲基丙烯酸甲酯聚合為目的）進行聚合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)磁分離、去離子水洗滌，獲羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球；（2）將步驟（1）中制備的羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球均勻分散于緩沖溶液中，加入蛋白質(zhì)作為模板分子，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌0.5~3h；（3）加入多巴胺，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌1-12h，多巴胺在聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球表面自聚合并包裹蛋白質(zhì)模板分子，形成外殼層，得到包裹蛋白質(zhì)模板分子的超順磁性復(fù)合納米球；（4）在外加磁場下，利用復(fù)合納米球的超順磁性進行磁分離，棄去未復(fù)合成功的聚多巴胺和緩沖溶液，再用蛋白洗脫液充分洗滌上述分離步驟中得到的復(fù)合納米球，除去蛋白質(zhì)模板分子，在外殼層中形成與所述蛋白質(zhì)模板分子尺寸相對應(yīng)的空腔，即蛋白分子印記，然后用去離子水充分洗滌即制得所述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球。通過該方法可以在制備過程中使聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球表面羥基功能化，從而使所述復(fù)合納米球的內(nèi)核的外圍具有羥基化改性層。在上述制備方法中，所述富羥基表面活性劑既能提供豐富的羥基又能起到表面活性劑的作用，促進形成均勻的微乳液滴，作為可選方式，所述富羥基表面活性劑為三甘醇（TEG）、吐溫-80（tween-80）、司盤（Span）、聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-1OO）中的至少一種。進一步的，所述富羥基表面活性劑為三甘醇（TEG）和吐溫-80（tween-80），更進一步的，所述三甘醇（TEG）和吐溫-80（tween-80）的體積比為8~10:1。作為可選方式，在上述兩種制備方法中，所述探頭超聲的強度為30-60%。高強度的探頭超聲可以使產(chǎn)品粒徑更均勻，形狀更規(guī)整。作為可選方式，在上述兩種制備方法中，所述聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球或羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球在所述緩沖溶液中的濃度為1~5mg/mL，所述蛋白質(zhì)模板分子在所述緩沖溶液中的濃度為0.1~0.8mg/mL，所述多巴胺在所述緩沖溶液中的濃度為0.5~2mg/mL。在上述兩種制備方法中，所述蛋白洗脫液的作用是將復(fù)合納米球上的模板蛋白洗脫從而留下空位，構(gòu)成蛋白質(zhì)分子印記，可以選擇現(xiàn)有的常用的蛋白洗脫液，作為可選方式，所述蛋白洗脫液為十二烷基磺酸鈉（SDS）和冰醋酸的混合溶液，進一步的，其中十二烷基磺酸鈉（SDS）的質(zhì)量體積濃度為1mg/ml，冰醋酸的體積濃度為3%，其余為水。作為可選方式，在上述兩種制備方法中，所述緩沖溶液可以選擇不會讓蛋白質(zhì)變性的常用緩沖溶液，如磷酸緩沖溶液（PBS）、tris緩沖溶液等，進一步的，所述緩沖溶液為pH=8的濃度為10mM的tris緩沖溶液。本發(fā)明還提供了一種上述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的應(yīng)用，將其用于分離特定的蛋白質(zhì)。作為可選方式，上述應(yīng)用的具體方法為：根據(jù)所要分離的目標蛋白的種類制備具有該目標蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球，將所述超順磁性復(fù)合納米球與被分離對象充分混合接觸，使目標蛋白吸附到分子印記中，然后在外加磁場的作用下進行磁分離，得到吸附了目標蛋白的超順磁性復(fù)合納米球，將目標蛋白從超順磁性復(fù)合納米球上洗脫，得到目標蛋白。作為可選方式，在上述應(yīng)用的具體方法中，經(jīng)洗脫操作后的超順磁性復(fù)合納米球還可以重復(fù)使用。本說明書中公開的所有特征，或公開的所有方法或過程中的步驟，除了互相排斥的特征和/或步驟以外，均可以以任何方式組合。本發(fā)明的有益效果：1.本發(fā)明所述超順磁性復(fù)合納米球形狀規(guī)整，粒徑分布窄，比飽和磁化強度高，磁響應(yīng)性好，其表面含有蛋白質(zhì)分子印記可用于選擇性的分離特定種類的蛋白質(zhì)。2.本發(fā)明為蛋白質(zhì)分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備提供了一種新方法，此種方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，不僅工藝簡單易行，而且所制備的復(fù)合納米球可高選擇性的分離目標蛋白質(zhì)。附圖說明：圖1為本發(fā)明所述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備方法示意圖。圖2為本發(fā)明2、3、4中制備的部分材料的粒徑、形貌表征結(jié)果圖。圖3為本發(fā)明實施例2中制備的Fe3O4(圖3a)、Fe3O4/PMMA（圖3b）和實施例3中制備的MIPNs（圖4c）的紅外光譜圖。圖4為本發(fā)明實施例2中制備的Fe3O4(圖4a)、Fe3O4/PMMA（圖4b）和實施例3中制備的MIPNs（圖4c）的熱重曲線圖。圖5為本發(fā)明實施例2中制備的Fe3O4(圖5a)、Fe3O4/PMMA（圖5b）和實施例3中制備的MIPNs（圖5c）的磁滯回線圖。圖6為本發(fā)明實施例6所述蛋白吸附實驗的結(jié)果圖，其中所述吸附量為單位質(zhì)量的復(fù)合納米球上吸附的蛋白質(zhì)的質(zhì)量。圖7為本發(fā)明所述對比例1中制備的樣品的掃描電鏡照片。圖8為本發(fā)明所述對比例1中制備的樣品的掃描電鏡照片。具體實施方式：以下通過實施例的具體實施方式再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)當將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)做的任何修改，以及根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的等同替換或者改進，均應(yīng)包括在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。以下實施例中所用原料均可以從市場上購得，所述超順磁性納米顆?？梢詮氖袌錾腺徺I，也可以采用高溫法（見JACS2004,126,273-279）、共沉淀法(見Chem.Mater.1996,8,2209-2211)或其它現(xiàn)有的方法制備。實施例1具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備（1）參照公開號為CN102070864A的中國發(fā)明專利所述的方法制備聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球（其中所用的超順磁性納米顆?？梢允撬难趸F，伽馬三氧化二鐵等具有超順磁性納米粒子中的至少一種，還可以是摻有如錳，鈷或鋅等金屬元素以提高飽和磁化強度的鐵氧磁性納米粒子中的至少一種）；（2）將步驟（1）中制備的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球均勻分散于4mLtris緩沖溶液(10mM,pH8)或PBS中，加入蛋白質(zhì)作為模板分子，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌0.5~3h；（3）加入多巴胺，在冰浴下探頭超聲5~15min，然后再室溫下磁力攪拌1-12h，多巴胺在聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球表面自聚合并包裹蛋白質(zhì)模板分子，形成外殼層，得到包裹蛋白質(zhì)模板分子的超順磁性復(fù)合納米球；（4）在外加磁場下，利用復(fù)合納米球的超順磁性進行磁分離，棄去未復(fù)合成功的聚多巴胺和緩沖溶液，再用十二烷基磺酸鈉（SDS）和冰醋酸的混合溶液，充分洗滌上述分離步驟中得到的復(fù)合納米球，除去蛋白質(zhì)模板分子，在外殼層中形成與所述蛋白質(zhì)模板分子尺寸相對應(yīng)的空腔，即蛋白分子印記，然后用去離子水充分洗滌即制得所述具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球。作為可選方式，在上述兩種制備方法中，所述聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球或羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球在所述緩沖溶液中的濃度為1~5mg/mL，所述蛋白質(zhì)模板分子在所述緩沖溶液中的濃度為0.1~0.8mg/mL，所述多巴胺在所述緩沖溶液中的濃度為0.5~2mg/mL。實施例2采用改進的微乳液聚合法制備羥基功能化的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球Fe3O4/PMMA1）按照JACS2004,126,273-279中所述的高溫分解法制備了超順磁性Fe3O4納米粒；2）取69mgFe3O4納米粒均勻分散于正己烷中形成磁流體；3）取130μL三甘醇（TEG）和13μL吐溫-80（tween-80）溶解于5mL水中；4）磁流體和甲基丙烯酸甲酯單體（MMA）以1:2的比例加入上述水溶液中；5）上述混合物探頭超聲10min形成微乳液；6）升溫至80℃，加入過硫酸銨（APS）引發(fā)聚合反應(yīng)。7）在機械攪拌300rpm，80℃下，反應(yīng)5h；8）在外加磁場下，利用Fe3O4/PMMA復(fù)合納米球的超順磁性，棄去殘留引發(fā)劑、單體、未復(fù)合Fe3O4納米粒的PMMA和水；再用去離子水充分洗滌Fe3O4/PMMA復(fù)合納米球。重復(fù)上述操作3次以上。將終產(chǎn)物分散于去離子水中保存。實施例3具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備1）取10mg實施例2中制備的羥基功能化的超順磁性Fe3O4/PMMA復(fù)合納米球均勻分散于4mLtris-buffer(10mM,pH8)中；2）加入2mg溶菌酶，作為模板蛋白；3）上述混合物在冰浴下探頭超聲10min，超聲強度為30-60%，然后再室溫下磁力攪拌2h；4）加入4mg多巴胺；5）上述混合物在冰浴下探頭超聲10min，超聲強度為30-60%，然后再室溫下磁力攪拌5h；6）在外加磁場下，利用Fe3O4/PMMA/PDA（記為MIPNs）的超順磁性，棄去未復(fù)合Fe3O4納米粒的聚多巴胺和緩沖溶液；再用十二烷基磺酸鈉（SDS）和冰醋酸(0.1%w/v:3%v/v)的混合溶液充分洗滌Fe3O4/PMMA/PDAMIPNs，除去溶菌酶模板分子。重復(fù)上述操作3次以上。再用去離子水反復(fù)洗滌Fe3O4/PMMA/PDA（記為MIPNs）。將終產(chǎn)物分散于去離子水中保存。對比例1參照實施例3所述的方法，將步驟3）和5）中的冰浴條件改為常溫條件，其余條件與實施例3相同。結(jié)果如圖7所示，所得產(chǎn)品團聚很嚴重，且聚多巴胺相互粘連，產(chǎn)品不能形成規(guī)整的球形，分子印記無法發(fā)揮功能。對比例2參照實施例3所述的方法，將步驟3）和5）中的探頭超聲改為普通超聲，（超聲強度變低）或?qū)⑻筋^超聲的強度改為20%，其余條件與實施例3相同。結(jié)果如圖8所示，所得產(chǎn)品團聚很嚴重，單分散性很差，產(chǎn)品不能形成單個的獨立的微球，分子印記無法發(fā)揮功能。實施例4制備無印跡的Fe3O4/PMMA/PDA超順磁性復(fù)合納米球（NIPNs）1)取10mg實施例2中制備的羥基功能化的超順磁性Fe3O4/PMMA復(fù)合納米球均勻分散于4.5mLtris-buffer(10mM,pH8)中；2)加入4mg多巴胺；3)上述混合物在冰浴下探頭超聲10min，然后再室溫下磁力攪拌5h；4)在外加磁場下，利用Fe3O4/PMMA/PDA（記為NIPNs）的超順磁性，棄去未復(fù)合Fe3O4納米粒的聚多巴胺和緩沖溶液；再用去離子水反復(fù)洗滌Fe3O4/PMMA/PDA（NIPNs）。將終產(chǎn)物分散于去離子水中保存。實施例5具有其它蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的制備參照實施例3所述的方法，將模板蛋白分別換成細胞色素C、牛血清白蛋白、牛血紅蛋白，制備出一系列具有蛋白分子印記的超順磁性復(fù)合納米球。表征方法分別利用透射電鏡（TEM,JEM-2010,Japanelectronic）、掃描電鏡（SEM,HITACHIS4800）和動態(tài)光散射儀（DLS,MalvernNano-ZS）觀察上述各實施例中制備的材料的粒徑、粒徑分布和形貌。其中實施例2、3、4中制備的部分材料的表征結(jié)果如圖2所示，其中實施例2中制備的超順磁性納米顆粒（見圖2a）的粒徑約為4~10納米，成規(guī)整的球形，單分散性良好；聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球的TEM照片（圖2b）和SEM照片（圖2d）顯示所得的聚甲基丙烯酸甲酯磁性復(fù)合納米球也呈規(guī)整的球形，且粒徑均一，平均粒徑約為100納米，單分散性良好，能形成單個的獨立微球；實施例3中制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球的TEM照片（圖2c）和SEM照片（圖2e）顯示所得的復(fù)合納米球也呈規(guī)整的球形，且粒徑均一，平均粒徑約為200納米，單分散性良好，能形成單個的獨立微球；DLS測試結(jié)果顯示實施例3中制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球粒徑（圖2f）主要分布在100~300nm，呈現(xiàn)良好的單分散性；實施例4中制備的無印記的超順磁性復(fù)合納米球粒徑（圖2g）也主要分布在100~300nm，呈現(xiàn)良好的單分散性。利用傅立葉轉(zhuǎn)變紅外光譜儀(FTIR,Perkin-Elmerspectrometer)研究材料的結(jié)構(gòu)。圖3顯示了實施例2中制備的Fe3O4(圖3a)、Fe3O4/PMMA（圖3b）和實施例3中制備的MIPNs（圖4c）的紅外光譜圖，由圖中可以看出Fe3O4、PMMA、PDA已成功復(fù)合在MIPNs中了。利用熱重量分析儀(TGA,STA449CJupiter,NETZSCH)定量研究材料組分含量。圖4顯示了實施例2中制備的Fe3O4(圖4a)、Fe3O4/PMMA（圖4b）和實施例3中制備的MIPNs（圖4c）的熱重曲線圖，由圖中可以看出Fe3O4納米顆粒表面的油酸在400oC已被分解，磁含量約為83%。對于Fe3O4/PMMA，在700oC時，F(xiàn)e3O4、Fe2O3和未完全氧化的有機物的總量約為66%。對于實施例3中制備的MIPNs，磁含量約少于57%。利用振動試樣磁力計研究材料的磁性能。圖5顯示了實施例2中制備的Fe3O4(圖5a)、Fe3O4/PMMA（圖5b）和實施例3中制備的MIPNs（圖5c）的磁滯回線，由圖中可以看出上述三種材料都具有超順磁性，包裹PMMA后微球的比飽和磁化強度相對于Fe3O4約降低了25%，MIPNs的比飽和磁化強度約為30emu/g，雖然相對于Fe3O4約降低了50%，但仍具有較高的比飽和磁化強度，能夠滿足磁分離的要求。實施例6蛋白質(zhì)吸附實驗考察材料對蛋白質(zhì)的選擇性吸附溶菌酶、細胞色素C、牛血清白蛋白、牛血紅蛋白分別溶解于10mMtris-buffer(pH8,包含0.01%SDS)中；分別取實施例3中制備的溶菌酶印跡的Fe3O4/PMMA/PDA超順磁性分子印跡復(fù)合納米球或無印跡的Fe3O4/PMMA/PDA超順磁性復(fù)合納米球分別分散于0.5mL1.00mgmL-1的上述不同的蛋白質(zhì)溶液中；將混合物在室溫下磁力攪拌2h。在外加磁場下，吸附了蛋白質(zhì)的材料可在10s內(nèi)從混合溶液中分離。采用蛋白洗脫液對吸附到復(fù)合納米球上的蛋白進行洗脫即可得到需要分離的蛋白。洗脫后的復(fù)合納米球還可重復(fù)使用，且重復(fù)使用的復(fù)合納米球的分離效率未見明顯下降。吸附結(jié)果如圖6所示，具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球（MIPNs）對溶菌酶展現(xiàn)明顯的選擇性，而無印跡的超順磁性復(fù)合納米球（NIPNs）對蛋白的吸附則未見明顯的選擇性。實施例7蛋白質(zhì)吸附對比實驗選取按實施例1中所述方法制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球與實施例2中制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球進行蛋白質(zhì)吸附對比，其余實驗條件保持一致，具體方法與實施例6相同。結(jié)果顯示，雖然按實施例1中所述方法制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球?qū)θ芫敢簿哂忻黠@的選擇性吸附，但同等質(zhì)量的復(fù)合納米球?qū)θ芫傅奈搅棵黠@少于實施例2中制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球?？梢娏u基化改性層的存在有利于增加分子印記的數(shù)量從來提高復(fù)合納米球?qū)δ繕说鞍椎奈搅俊嵤├?參照實施例6所述的方法，分別采用實施例5中制備的分別帶有細胞色素C、牛血清白蛋白、牛血紅蛋白分子印記的復(fù)合納米球進行蛋白吸附實驗，結(jié)果顯示，三種復(fù)合納米球分別對于其分子印記相對應(yīng)的蛋白展現(xiàn)出選擇性吸附。實施例9將溶菌酶、細胞色素C、牛血清白蛋白、牛血紅蛋白混合溶解于10mMtris-buffer(pH8,包含0.01%SDS)中，加入實施例2中制備的具有溶菌酶分子印記的超順磁性復(fù)合納米球，將混合物在室溫下磁力攪拌2h。在外加磁場下，吸附了蛋白質(zhì)的材料可在10s內(nèi)從混合溶液中分離。采用蛋白洗脫液對吸附到復(fù)合納米球上的蛋白進行洗脫即可得到需要分離的蛋白。洗脫后的復(fù)合納米球還可重復(fù)使用，且重復(fù)使用的復(fù)合納米球的分離效率未見明顯下降。在洗脫得到的蛋白中溶菌酶質(zhì)量百分含量在90%以上。說明本發(fā)明所述的超順磁性復(fù)合納米球在混合蛋白的特異性分離中具有較好的應(yīng)用前景。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，對本發(fā)明而言僅是說明性的，而非限制性的；本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解，在本發(fā)明權(quán)利要求所限定的精神和范圍內(nèi)可對其進行許多改變，修改，甚至等效變更，但都將落入本發(fā)明的保護范圍。