專利名稱：用于測(cè)量血清高密度脂蛋白相關(guān)膽固醇的測(cè)定設(shè)備中保留多孔性和生物活性的粘合膜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高密度脂蛋白(HDL)相關(guān)的膽固醇測(cè)定墊，涉及使用所述墊的方法以及進(jìn)行所述方法的診斷測(cè)定設(shè)備。
背景技術(shù)：
已知在血液中存在的膽固醇的數(shù)量與冠狀動(dòng)脈疾病的危險(xiǎn)相關(guān)。膽固醇主要以蛋白交聯(lián)形式在血液中循環(huán)。運(yùn)輸膽固醇的蛋白是根據(jù)其密度可細(xì)分為三類的脂蛋白。極低密度脂蛋白(VLDL)是可在肝中合成并且最終轉(zhuǎn)化成低密度脂蛋白(LDL)的富含甘油三酯的脂蛋白，其中所述低密度脂蛋白會(huì)在人體中運(yùn)輸絕大多數(shù)的血清膽固醇。高密度脂蛋白(HDL)是包含在富含甘油三酸脂脂蛋白的分解代謝過程中，并且包含在從外周組織中去除膽固醇并運(yùn)輸至肝臟的過程中的脂蛋白。血清HDL水平和冠脈疾病的危險(xiǎn)之間存在反比關(guān)系。特別地，如果HDL相關(guān)的血清膽固醇比例低，那么冠脈疾病的危險(xiǎn)就會(huì)增加。
從致動(dòng)脈粥樣硬化疾病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和管理中的相對(duì)血清膽固醇的重要性來看，相當(dāng)大的努力花費(fèi)在篩選正常和高危個(gè)體的大數(shù)量人群中的HDL、LDL以及總膽固醇和甘油三酸脂的血清水平方面。通過對(duì)各種不同種類脂蛋白的膽固醇的血清水平進(jìn)行常規(guī)測(cè)量可以監(jiān)測(cè)出高危個(gè)體治療方面的有效性。
特定HDL膽固醇測(cè)量的一個(gè)方法是基于，典型地，在第二族陽離子，如Mg2+、Mn2+、或Ca2+的存在下，在血清中通過多陰離子化合物，如硫酸鹽葡聚糖、肝素、或磷鎢酸鹽對(duì)非HDL脂蛋白進(jìn)行選擇沉淀。沉淀的特定性和程度取決于眾多因素，包括沉淀試劑的類型和濃度。通常，帶有增加的多陰離子濃度的血清膽固醇的沉淀順序是VLDL、LDL和HDL。盡管少量的HDL的脫脂脂蛋白E(apoE)可以和低密度顆粒共沉淀，但是HDL通常在完全使低密度顆粒沉淀的肝素或硫酸鹽葡聚糖濃度下保持可溶性。根據(jù)低密度顆粒的選擇沉淀，可以確定HDL血清膽固醇。
在典型的脂質(zhì)測(cè)定過程中，提取和離心少量血液來產(chǎn)生澄清的血清或血清樣品液體。然后將樣品液體等分裝入幾個(gè)測(cè)定管中來進(jìn)行(a)總血清膽固醇、(b)甘油三酸脂、和(c)HDL膽固醇的測(cè)量。如上沉淀HDL樣品，且在膽固醇檢測(cè)之前通過過濾和離心來去除低密度顆粒。然后使樣品與酶混合物反應(yīng)，所述酶混合物含有膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過氧化物酶和可以在H2O2存在下被氧化成明顯有色產(chǎn)物的染料。可以根據(jù)分光光度讀取測(cè)量管，并確定所測(cè)的總HDL和LDL膽固醇的數(shù)值。
盡管描述了根據(jù)液相膽固醇的測(cè)定可以達(dá)到的準(zhǔn)確性和可靠性，但是所述測(cè)定在普遍篩選的使用中仍有許多限制。第一，方法使用了靜脈血液樣品，需要專業(yè)技術(shù)人員來提取和分餾血液樣品，并將處理后的血液等分裝入單獨(dú)的測(cè)定管內(nèi)。必須使用沉淀試劑對(duì)至少一個(gè)測(cè)定管(用于確定HDL)進(jìn)行處理并且進(jìn)一步加工來去除沉淀物質(zhì)。盡管這些過程中的一些可以是自動(dòng)的，但是設(shè)計(jì)用于此目的的分析設(shè)備是昂貴的且不會(huì)被在大型醫(yī)院以外廣泛使用。
共有美國(guó)專利Nos.5,213,964、5,213,965、5,316,196和5,451,370(每個(gè)專利均在此引作參考)公開了基本上克服了許多上述與用于測(cè)量血清膽固醇水平的液相測(cè)定過程相關(guān)的問題的方法和測(cè)定設(shè)備。在一個(gè)實(shí)施方案中，設(shè)備設(shè)計(jì)用來測(cè)量血液樣品中HDL相關(guān)的膽固醇濃度，其中血液樣品中還含有LDL和VLDL顆粒。設(shè)備包括一個(gè)過濾基質(zhì)，當(dāng)液體樣品通過基質(zhì)移動(dòng)時(shí)，其可分離可溶的和沉淀的脂蛋白。當(dāng)液體樣品被引入并通過基質(zhì)時(shí)，為了選擇性沉淀LDL和VLDL，設(shè)計(jì)一個(gè)與基質(zhì)結(jié)合的儲(chǔ)器來釋放可溶性沉淀試劑。因?yàn)镠DL通過篩選基質(zhì)的移動(dòng)較快，使HDL從沉淀脂蛋白中分離出來。然后去除了非HDL脂蛋白的液體樣品被轉(zhuǎn)移到測(cè)量表面測(cè)定膽固醇。
上述設(shè)備，雖然優(yōu)于液相測(cè)定，而其也顯示出在帶有沉淀試劑的流動(dòng)運(yùn)輸路徑上發(fā)生污染的可能性。這樣的試劑會(huì)影響HDL的數(shù)量，或影響發(fā)生在多測(cè)定設(shè)備的其它區(qū)域中的其它測(cè)定化學(xué)過程。本發(fā)明將會(huì)指出并克服這些問題。
在EP 0408223和EP 0415298(Rittersdorf等人)中公開了測(cè)量血液樣品中HDL膽固醇的進(jìn)一步方法和設(shè)備，其描述了包含下列步驟和相應(yīng)成分且在試驗(yàn)片上進(jìn)行的連續(xù)測(cè)定方法。將血液樣品放入用于分離血液細(xì)胞組分的分離層。在毛細(xì)管力和重力的驅(qū)動(dòng)下，使樣品流過含有可溶性沉淀試劑的深一層的載體，所述沉淀試劑在溶于血清樣品之后使包含在樣品中的非HDL脂蛋白沉淀。在深一層的載體中，從血清樣品中過濾出上述沉淀成分以防止其對(duì)最終HDL數(shù)量的影響。在相同的載體中，將樣品運(yùn)輸?shù)脚cHDL定量載體鄰接的位置上，并將其儲(chǔ)存直到HDL定量步驟開始為止。最后，將樣品轉(zhuǎn)移到HDL定量層上，在該層上可以通過酶反應(yīng)對(duì)血清樣品中的HDL膽固醇進(jìn)行定量。
這種測(cè)定設(shè)計(jì)的一個(gè)缺點(diǎn)在于作為儲(chǔ)器的載體會(huì)使沉淀組分或可溶性試劑移入樣品中，其會(huì)影響HDL的定量。此外，在血清樣品的保存過程中，HDL可被粘附到載體纖維上、沉淀試劑可以進(jìn)一步導(dǎo)致不所需的反應(yīng)、以及干燥的血清樣品使載體阻塞。
美國(guó)專利No.5,135,716(Thakore)公開了用于對(duì)血液液體樣品中HDL量化進(jìn)行測(cè)量的其它設(shè)備和方法。在這些設(shè)備中，為了進(jìn)行HDL量化，液體樣品通過連續(xù)地非間斷路徑從進(jìn)口孔流入載體。因此，對(duì)控制樣品進(jìn)入HDL測(cè)試載體的量和控制用于HDL測(cè)定的環(huán)境條件的能力是有限的。沒有設(shè)備能夠?qū)σ粋€(gè)液體樣品的各種分析同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種能夠克服上述已有技術(shù)缺點(diǎn)的HDL測(cè)定的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
在一個(gè)方面，本發(fā)明包括通過將一個(gè)HDL測(cè)試墊和一個(gè)試劑墊連接而形成的測(cè)定墊，其中測(cè)定墊會(huì)保持足以使樣品通過試劑墊到達(dá)HDL測(cè)試墊的多孔性。測(cè)定墊進(jìn)一步保持在試劑墊和HDL測(cè)試墊上的試劑的生物活性。
在另一方面，本發(fā)明包括對(duì)在血液液體樣品中高密度脂蛋白相關(guān)(HDL)的血清膽固醇進(jìn)行測(cè)量的測(cè)定設(shè)備和使用所述設(shè)備的方法，所述血液液體樣品含有除HDL以外的其它脂蛋白。所述設(shè)備包括一個(gè)樣品分布列陣、一個(gè)可以測(cè)定HDL濃度的HDL測(cè)試墊；和一個(gè)含有可有效的從體樣品中選擇性結(jié)合并去除非HDL結(jié)合試劑的試劑墊。通過粘合層或通過加熱墊來使HDL測(cè)試墊和試劑墊連接。
在又一方面，本發(fā)明提供制備所述連接的HDL測(cè)試墊和試劑墊的方法。


圖1是多分析物測(cè)定設(shè)備的一個(gè)實(shí)施方案的側(cè)視圖。
圖2根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案裝配的多分析物測(cè)定設(shè)備分解形式的透視圖。
圖3是根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的多分析物測(cè)定設(shè)備的部分側(cè)視圖。
本發(fā)明的詳細(xì)內(nèi)容I.定義除非特別說明，以下術(shù)語具有下列意思。
當(dāng)液體能夠通過毛細(xì)作用和/或重力從一種元件傳遞到另一種元件中時(shí)，這種元件與其它元件是“液體連接”的。元件不需要直接接觸；即，其它元件在所述液體能夠流經(jīng)的地方是可以介入的。
用于文中的“樣品分布?jí)|”、“測(cè)試墊”、“HDL測(cè)試墊”、和“試劑墊”的“墊”表示薄、平墊或墊子，或一片吸水物質(zhì)。墊可以由任何物質(zhì)構(gòu)成，例如多孔膜或纖維帶，其可以含有注入的或固定的試劑，通過它液體可以在毛細(xì)作用和/或重力下移動(dòng)。
II.測(cè)定設(shè)備在圖1-3中說明根據(jù)所述發(fā)明的設(shè)備，將要進(jìn)行如下討論。為了方便起見，將類似的元件編號(hào)保留在圖1-3中來識(shí)別相似的結(jié)構(gòu)特征。特別地所述設(shè)備被設(shè)計(jì)成在使用少量，典型地在10-50μm之間的血液或血清樣品的情況下，測(cè)量與HDL相關(guān)的血清膽固醇(也稱作HDL相關(guān)膽固醇或簡(jiǎn)單地為HDL膽固醇)?？梢詮耐粯悠分型瑫r(shí)進(jìn)行其它測(cè)定，例如總膽固醇、甘油三酸脂、葡萄糖、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)、血液尿素氮(BUN)、或肌氨酸酐。HDL相關(guān)膽固醇的測(cè)定也可以簡(jiǎn)單地稱為HDL或HDL測(cè)定。
參考圖1-3，說明了多分析物測(cè)定設(shè)備的各種實(shí)施方案，圖2顯示此設(shè)備的分解形式。如圖1清晰可見，多分析物測(cè)定設(shè)備14包括一個(gè)主體或支撐體15，其限定了一個(gè)特定尺寸和大小以接收一定量血液樣品的孔16，典型地血液樣品的量在25-50μl之間。所述孔可以任選地與過濾墊22在液體中接觸，該過濾墊可以位于所述支撐上邊緣形成的缺口區(qū)域20內(nèi)。所述液體接觸可以是直接的，或在如圖1所示的設(shè)備中，通過在所述孔底部的盤中形成的毛細(xì)導(dǎo)管提供。優(yōu)選地，所述支撐體是帶有所述孔、缺口區(qū)域和/或通過標(biāo)準(zhǔn)模制或機(jī)制方法形成的毛細(xì)管的塑料盤。
當(dāng)樣品如圖所示按照從底到頂?shù)姆较蛄鬟^墊基質(zhì)時(shí)，包含在區(qū)域20中的過濾墊22用來部分去除大顆粒物質(zhì)(包括血細(xì)胞)。當(dāng)從基質(zhì)中提取血液樣品時(shí)，優(yōu)選地，墊22由玻璃纖維基質(zhì)形成，此設(shè)計(jì)可通過表面濕潤(rùn)來吸取水相液體，以及阻止血細(xì)胞的移動(dòng)。一個(gè)墊的示例是玻璃纖維濾紙，例如Whatman提供的GF/D、PD008、或F145-02濾紙，具有大約0.16g/cm3的組裝密度和大約1mm的厚度。墊的尺寸被設(shè)定以限定吸收樣品液體的體積，優(yōu)選地，在大約15-25μL之間。此外，過濾墊可以包含紅細(xì)胞捕獲試劑，例如植物凝血素、紅細(xì)胞表面膜蛋白的特異性抗體、凝血酶、或離子交換劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述墊包含用于去除非HDL脂蛋白的試劑，如下進(jìn)一步所述。
將樣品接觸到伸長(zhǎng)帶或樣品分布列陣26。在孔16和陣列26之間過濾墊22可以與陣列26液體接觸中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，由液體交流中的三個(gè)或三個(gè)以上的單獨(dú)膜形成陣列26。如圖2所示，在一個(gè)由三個(gè)液體交流的膜形成列陣26的示實(shí)施方案中，中心樣品-加入膜28將樣品液體分布在樣品收集膜30和32上。陣列26可以進(jìn)一步包括沉積于樣品加入膜28和樣品收集膜30之間的一個(gè)或一個(gè)以上的試劑膜，圖中未顯示。試劑膜可含有一種或多種試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，如進(jìn)一步所述，試劑膜可以含有可選擇性去除LDL和VLDL的一種或一種以上試劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑膜可以用作吸取芯(wick)來吸取用于多種測(cè)試的樣品。陣列26還可以被泡沫墊27或其它支撐體支撐，如圖2所示。優(yōu)選地，陣列26是由玻璃纖維的基質(zhì)組成的多重膜?；|(zhì)的組裝密度和厚度要足以吸收并分散加樣到樣品加入膜和樣品收集膜上的樣品液體的體積量，例如10-25μL。基質(zhì)具有在大約0.16g/cm3和4.0g/cm3之間的優(yōu)選組裝密度。一個(gè)示范性的帶形物質(zhì)是Whatman提供的F-165-25A玻璃纖維濾紙，其具有大約0.2gm/cm3的組裝密度和大約0.12mm的厚度。
所述設(shè)備進(jìn)一步包括四個(gè)或四個(gè)以上測(cè)試墊64、66、68和70，其均是可濕潤(rùn)、能吸水的反應(yīng)測(cè)試墊。用于特別測(cè)定的每個(gè)測(cè)試墊都含有分析物-依賴性試劑，其可有效的在所述墊中產(chǎn)生分析物-依賴性變化，如下進(jìn)一步所述，此變化可被已知方法測(cè)得。在特別測(cè)定中可以使用測(cè)試墊的所有或任何完整的亞型。
理想地，測(cè)試墊是多孔聚合物膜，優(yōu)選具有大約100-150μm的厚度和大約3mm的邊緣尺寸。優(yōu)選地，每個(gè)墊的吸收量在大約0.5-1.0μL之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，一些或所有的反應(yīng)墊均是非對(duì)稱的膜；也就是，膜在穿過膜的厚度上具有多孔性梯度。
在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試墊64是HDL測(cè)試墊，其含有對(duì)在所述墊中有HDL存在的情況下產(chǎn)生變化的有效的試劑。在另一實(shí)施方案中，HDL測(cè)試墊64是聚合物膜，其含有測(cè)定HDL水平的試劑。一個(gè)示范性的帶形物質(zhì)是由PallCorporation提供的BTS-83非對(duì)稱聚砜膜(EastHills，NY)。如需要，可以根據(jù)用于酶固定的已知方法，將如過氧化物酶的HDL測(cè)定試劑固定到測(cè)試墊膜上(見，例如美國(guó)專利No.4,999,287；美國(guó)專利No.5,419,902；Blum，L.J.等人，Anal.Lett.20(2)317-26(1987)；Kiang，S.W.等人，Clin.Chem.22(8)1378-82(1976)；Guilbault，G.G.，Ed.，Modern Monographs in Analytical Chemistry，Vol.2Analytical Uses of Immobilized Enzymes(1984)；Torchilin，V.P.，Progress in Clinical Biochemistry and Medicine，Vol.11ImmobilizedEnzymes in Medicine(1991))。
試劑墊74與HDL測(cè)試墊64接觸，且含有用于HDL膽固醇的沉淀的化學(xué)物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑墊是和HDL測(cè)試墊相同的物質(zhì)，即，非對(duì)稱聚砜膜。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，試劑墊74由具有大約1μm或1μm以下的多孔尺寸的多孔聚合物膜組成。在圖1所顯示的設(shè)備中，試劑墊74由單膜組成，但是本發(fā)明還將需要使用多重堆疊的膜，即，最多大約6個(gè)，其中至少一個(gè)或優(yōu)選地，每個(gè)膜均含有用于結(jié)合非HDL脂蛋白的試劑。
優(yōu)選地，試劑墊具有大約100-150μm的厚度，大約3×6mm的邊緣尺寸，以及大約0.5-1.0μL的吸收量。其含有至少一種對(duì)從液體樣品中選擇性去除LDL和VLDL顆粒有效的試劑。例如，所述試劑可以是抗體，或優(yōu)選地，多陰離子LDL-和VLDL結(jié)合劑。在有或沒有第二族陽離子，例如Mg2+、Mn2+或Ca2+存在的情況下，本領(lǐng)域所公知的這樣的試劑包括磺化多糖、肝素、和磷鎢酸鹽。優(yōu)選試劑是磺化多糖，例如硫酸鹽葡聚糖，其具有50,000到500,000道爾頓的典型分子量，任選地，與乙酸鎂或氯化鎂結(jié)合，任選地，進(jìn)行緩沖來保持中性pH。所述試劑可以是對(duì)從液體樣品中結(jié)合以及去除非HDL脂蛋白有效的固定劑。試劑墊對(duì)捕獲試劑墊中的相關(guān)的非HDL脂蛋白以及防止其進(jìn)入HDL測(cè)試墊64是有效的。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以將如過氧化氫酶的試劑固定在試劑墊74中，所述試劑對(duì)分解任何從測(cè)試墊64向下散播的生成的過氧化氫均有效。
如實(shí)施例6所述單獨(dú)使用加熱、或如實(shí)施例1-3所述使用能被熔融的作為熱活化粘合劑的丙烯酸共聚物，將HDL測(cè)試墊64和試劑墊74粘合在一起。合并的HDL測(cè)試墊和試劑墊叫做測(cè)定墊。
設(shè)備14還包括作為伸長(zhǎng)支撐體的反應(yīng)棒60，其可以是透明的或具有窗戶，例如窗戶76(圖2)。透過窗戶可以通過支撐看到測(cè)試墊64、66、68和70。這些窗戶可以是透明物質(zhì)或僅僅在支撐體中開口。通過音波焊接，或其它適合的粘合方法，將測(cè)試墊和測(cè)定墊通過透明或半透明粘合材料附著到反應(yīng)棒上。
通過封固裝置將反應(yīng)棒固定在支撐體15上，此封固裝置可有效地(a)將設(shè)備保持在樣品分布位置上，其中測(cè)試墊和測(cè)定墊與樣品分布陣列、過濾墊或孔隔開，以及(b)將設(shè)備轉(zhuǎn)移到測(cè)試位置，其中測(cè)試墊和測(cè)定墊與樣品分布列陣、過濾墊和孔在液體中連接。此封固裝置還可以在使所需量的樣品流入測(cè)定墊和/或測(cè)試墊之后，和/或在一段特定接觸時(shí)間之后，通過將設(shè)備從測(cè)試位置轉(zhuǎn)移到測(cè)試墊和/或測(cè)定墊不能與樣品孔(其可以與“樣品分布”位置相同)液體連接的位置來阻斷這樣的液體連接?？梢酝ㄟ^監(jiān)測(cè)測(cè)試墊頂表面上的反射作用來控制這樣的轉(zhuǎn)移，其會(huì)反應(yīng)出濕潤(rùn)的程度，如共有美國(guó)專利No.5,114,350所述，該專利的內(nèi)容在此作為參考?；蛘?，當(dāng)已知墊材料對(duì)樣品攝入的吸收量和速率時(shí)，僅僅通過使用預(yù)定接觸時(shí)間就足以精確地控制樣品的數(shù)量。
封固裝置可以包括，例如，一對(duì)回彈組件，例如彈力塊71、72，其可將測(cè)定墊偏向朝向非轉(zhuǎn)移或樣品分布位置，在此位置上將所述墊和樣品分布陣列、過濾墊、毛細(xì)導(dǎo)管或樣品孔隔開。通過回彈組件的壓縮或釋放，如圖3所示，可以選擇性的建立和分離測(cè)定墊之間的液體連接。液體連接可以通過直接接觸或通過中介物實(shí)現(xiàn)。支撐塊可以被彈簧或活塞類活動(dòng)壓縮?；蛘?，將外部機(jī)械設(shè)備用于主體15和/或反應(yīng)棒60并且將一個(gè)移向另一個(gè)。這樣的設(shè)備包括常規(guī)組分，例如夾子、活塞、步進(jìn)馬達(dá)、蝸輪等。一個(gè)示范性系統(tǒng)是Cholestech LDX分析器，其是有利于和此處所述的測(cè)定設(shè)備一起使用的設(shè)備齊全的自動(dòng)分析器。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，HDL測(cè)試墊包括生物傳感器，如PCT公開申請(qǐng)No.WO99/58966(Dobson等人)所述，其內(nèi)容在此處作為參考。該文件公開了小規(guī)模的生物傳感器設(shè)備，包括導(dǎo)電表面、導(dǎo)電表面上的電介質(zhì)材料層和大量延伸穿過電介質(zhì)層的孔。每個(gè)孔含有與導(dǎo)電表面接觸的生物聚合物，并且可作為將化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)化成電信號(hào)的微電極。在使用中，將含有待測(cè)分析物的液體灌入孔中以使其與生物聚合物進(jìn)行接觸。在本發(fā)明的HDL測(cè)定設(shè)備中，當(dāng)通過HDL測(cè)試墊64與樣品液體連接、即圖3所示的測(cè)試位置時(shí)，即可達(dá)到此目的。
典型地，微電極孔中的生物聚合物是酶，例如，用于HDL相關(guān)的膽固醇、膽固醇氧化酶的測(cè)量。由膽固醇氧化酶將膽固醇氧化成相應(yīng)的酮、釋放過氧化氫，而后其可被膽固醇氧化酶轉(zhuǎn)化成水和氧氣。然后對(duì)氧氣或?qū)^氧化氫進(jìn)行電化學(xué)測(cè)量。可以使用的電化學(xué)方法包括電流測(cè)量法，如Clark氧電極，可以測(cè)量由氧氣的還原或過氧化氫的氧化產(chǎn)生的電流，或伏安法。對(duì)在微電極上用于各種分析物測(cè)量(見，例如，R.J.Forster，Chem.Soc.Rev.289-297(1994))，如多巴胺(Pihel等人，Anal.Chem.68(13)2084-9(1996))和富勒烯(Soucaze-Guillous等人，Anal.Chem.65(6)669-72(1993))以及過氧化氫(Horrocks等人，Anal.Chem.65(24)3605-14(1993)；Nowall等人，Electroanalysis9(2)102-9(1997)；Dequaire等人，J.Am.Chem.Soc.124(2)240-53(2002)的循環(huán)伏安法使用進(jìn)行了描述。
III.使用粘合層制備測(cè)定墊如圖1所示，在一個(gè)實(shí)施方案中，如實(shí)施例1-3所述，通過在試劑墊74和HDL測(cè)試墊64之間形成粘合層80來制備測(cè)定墊。通過粘合層80的結(jié)合，試劑墊74和HDL測(cè)試墊64形成一個(gè)復(fù)合結(jié)構(gòu)即測(cè)定墊。值得注意的是所述粘合層僅需要固定相對(duì)的墊，如通過外周密封，或延伸到相對(duì)墊的整個(gè)表面。
優(yōu)選地，由丙烯酸共聚物形成粘合層。典型地，共聚物將會(huì)，但不必需地，具有低于所使用HDL測(cè)定試劑的變性溫度或低于會(huì)損害HDL測(cè)定試劑的溫度的熔點(diǎn)。一個(gè)示范性的共聚物是乙烯基丙烯酸共聚物(EAA)。EAA作為不同顆粒大小的分散體由Michelman提供(具有大約75℃熔點(diǎn)的Cincinati OH，P/H MP 4990R)。一個(gè)優(yōu)選顆粒大小是30-500nm，且平均顆粒大小為大約90nm。其它聚合物，包括聚乙烯乙二醇、聚乙烯對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、和聚乙烯醇，也可以用作粘合層?？梢詫⑦@些共聚物進(jìn)行交聯(lián)并進(jìn)一步與第二種不同的聚合物進(jìn)行共聚。在另一實(shí)施方案中，由力敏粘合劑或蠟乳劑形成粘合層。在又一實(shí)施方案中，由熱熔性粘合劑形成粘合層，如在美國(guó)專利No.6,596,112所述，其在此處引用作為參考。值得注意的是，在測(cè)定墊保留使樣品從試劑墊流入HDL測(cè)試墊的合適孔的前提下，可以使用任何物質(zhì)作為粘附層。
典型地，通過將共聚物溶于合適的溶劑，通常為水溶液，來制備復(fù)合測(cè)定墊。將共聚物乳液或溶液層涂于試劑墊74?？梢允褂萌魏芜m合涂覆墊的方法，包括將墊浸入乳液或溶液中、噴涂墊或通過吸取芯將聚合物溶液用于墊上?？梢灾煌扛矇|的一面或兩面。通過一段適合的時(shí)間將墊干燥，即50℃下大約20分鐘。然后將沉淀劑分散到非對(duì)稱膜的大孔面(暗面)上。
當(dāng)試劑墊和HDL測(cè)試墊均形成非對(duì)稱膜時(shí)，以使試劑墊的小孔面(亮面)與HDL測(cè)試墊的開孔面(暗面)相接觸方向?qū)⒃噭|和HDL測(cè)試墊定向。
通過對(duì)涂覆的試劑墊74和HDL測(cè)試墊64加熱和/或加壓來形成HDL測(cè)試墊64和試劑墊74之間的共聚物粘合層。由此共聚物與相鄰墊材料形成結(jié)合。在所需溫度和壓力下，可以使用能提供熱量的任何適合的設(shè)備來對(duì)墊進(jìn)行加熱。加熱墊的優(yōu)選溫度為大約80℃?？梢允褂萌魏芜m合的壓層機(jī)。
試劑墊上共聚物的濃度必須足以使測(cè)定墊保留使樣品從試劑墊流到HDL測(cè)試墊的多孔性。共聚物提供粘合性的合適濃度為大約4.0％到大約10.0％乳液。聚合物涂層的優(yōu)選濃度為4％、5％、6％、7％、8％、9％和10％。一個(gè)優(yōu)選乳液是5.5％EAA乳液。
在將測(cè)試墊粘合到試劑墊之前或之后，可以通過任何適合的方法將HDL試劑分散到HDL測(cè)試墊64上。優(yōu)選地，在將測(cè)試墊粘合到試劑墊之后，將HDL試劑分散到測(cè)試墊上。
IV.使用加熱制備測(cè)定墊在一個(gè)實(shí)施方案中，如實(shí)施例6所述，在加熱到足以至少部分熔融試劑墊或HDL測(cè)試墊中的至少一個(gè)的溫度下，將含有試劑的試劑墊74與HDL測(cè)試墊64粘合來制備測(cè)定墊。如美國(guó)專利No.6,596,112所述將試劑墊和HDL墊加熱到大約65℃以上至大約220℃，該專利內(nèi)容引入此處作為參考。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)將試劑墊和HDL測(cè)試墊加熱到大約165℃以上時(shí)，墊之間開始互相粘合。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，將試劑墊和HDL測(cè)試墊加熱到大約93℃、121℃、148℃、165℃、200℃或205℃以上。按如上所述的方向?qū)|定向。在將測(cè)試墊粘合到試劑墊之前或之后，將HDL試劑分散到HDL測(cè)試墊上。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在將測(cè)試墊粘合到試劑墊之后，將HDL試劑分散到HDL測(cè)試墊上和/或?qū)⒂糜诔恋矸荋DL膽固醇的化學(xué)物質(zhì)分散到試劑墊上。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在測(cè)試墊與試劑墊粘合之后，分別將HDL試劑和用于沉淀的化學(xué)物質(zhì)分散到HDL測(cè)試墊和試劑墊上。
V.使用打印工藝將試劑分散到測(cè)定墊上在另一實(shí)施方案中，使用結(jié)合雕刻凹版或網(wǎng)紋圓筒的印刷工藝，將一種或一種以上的試劑加入預(yù)-層疊膜的相對(duì)的面上。在此實(shí)施方案中，使用小于飽和體積的HDL試劑和沉淀劑。通過使用非飽和體積，可以將試劑限制到其各自膜上。大約80ml/1000平方英寸(80ml/0.645平方米)的體積是典型的飽和體積。試劑的體積在25到55ml/1000平方英寸(25到55ml/0.645平方米)的范圍內(nèi)是合適的，然而，在一個(gè)實(shí)施方案中使用了20ml/1000平方英寸(20ml/0.645平方米)的試劑。可以在HDL試劑之前或之后加入沉淀劑。在這個(gè)印刷工藝的其它實(shí)施方案中，可以用與HDL試劑中所述的方法類似的方法將含有兩種必須保持分離的成分的其它試劑加入?；蛘撸梢詫为?dú)的試劑加入到單獨(dú)的非層疊膜上。
VI.測(cè)定方法在操作中，將血液樣品放置在孔16中，并且使其滲過過濾墊22來去除包括紅細(xì)胞的大顆粒并由此浸入樣品分布列陣26。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)設(shè)備處于“樣品分布”階段，如測(cè)定墊不與樣品分布陣列、過濾墊、毛細(xì)導(dǎo)管或樣品孔液體連接時(shí)，進(jìn)行這些步驟樣品孔。
血清樣品從樣品加入膜28移動(dòng)到樣品收集膜30和32。當(dāng)血清樣品到達(dá)樣品收集膜時(shí)，將如圖3所示，優(yōu)選地，通過移動(dòng)反應(yīng)棒60來將設(shè)備調(diào)節(jié)到測(cè)量位置以使測(cè)定墊與樣品分布列陣液體連接。在此位置，通過毛細(xì)流動(dòng)將樣品分布列陣中的樣品液體引入試劑墊。再通過毛細(xì)流動(dòng)將樣品液體進(jìn)一步引入HDL測(cè)試墊。使反應(yīng)棒持續(xù)在該位置上直到達(dá)到測(cè)試墊上所需的潤(rùn)濕程度。如需要，在所需量樣品液體浸入測(cè)定墊，和/或一定接觸時(shí)間之后，移去棒以阻斷樣品分布列陣與測(cè)定墊之間的液體連接。
在血清與HDL測(cè)試墊64接觸之前，將樣品血清與含在單獨(dú)試劑墊74中的沉淀劑或結(jié)合劑進(jìn)行接觸，以使非HDL脂蛋白結(jié)合到各自的載體上。因此設(shè)備可有效地從血清中去除非HDL脂蛋白，同時(shí)允許包括液相HDL的樣品液體流至帶有其它元件的HDL測(cè)試墊64(如圖2)。此實(shí)施方案的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是樣品分布列陣和上游元件中不含有非HDL結(jié)合劑；這樣的試劑只存在于試劑墊74中。因此，這些試劑在除HDL以外的分析物的測(cè)定中的干擾可能性將會(huì)被消除。
在操作中，如圖1-3所述的實(shí)施方案中，當(dāng)樣品通過包括墊74和64的HDL測(cè)定路徑時(shí)，其前沿以向上的方向通過墊74，在墊74中使非HDL脂蛋白反應(yīng)以及被捕獲，并且直接通過鄰近的測(cè)試墊64，在墊64上HDL與其中的測(cè)定試劑反應(yīng)，以測(cè)量HDL相關(guān)膽固醇的量。在這段時(shí)間中，樣品的其它部分連續(xù)與墊74接觸，并且以類似的方式從墊74流入墊64，直到墊64的吸收能力飽和為止。由此，在測(cè)試墊64中的HDL相關(guān)膽固醇的定量開始的同時(shí)，在試劑墊74中開始結(jié)合反應(yīng)。優(yōu)選地，從樣品分布基質(zhì)中移入到HDL測(cè)定路徑(包括墊74和64)的樣品液體的體積等于或大于測(cè)試墊64的吸收能力，且小于或等于測(cè)試墊64和試劑墊74合并的吸收能力。
在這些實(shí)施方案中，當(dāng)樣品液體與含有結(jié)合劑的試劑墊74接觸時(shí)，后者會(huì)與HDL測(cè)試墊64直接接觸，由此在HDL測(cè)定反應(yīng)之前限制血液樣品與結(jié)合劑的短暫接觸。因此，樣品制備和HDL評(píng)估要分別進(jìn)行，其中樣品制備包括，例如，過濾血液細(xì)胞成分和，任選地，血液樣品的臨時(shí)存儲(chǔ)以及使血液樣品與如溫度、壓力和大氣壓這樣的測(cè)試需要或條件相適應(yīng)。因?yàn)闇p少了血液樣品與不同試劑的短暫接觸，所以阻止了任何對(duì)HDL評(píng)估的化學(xué)干擾。如需要，在樣品加入和去除細(xì)胞組分之后，而在與結(jié)合劑接觸之前，測(cè)定可被中斷一段的時(shí)間，例如，來調(diào)節(jié)周圍大氣壓或調(diào)節(jié)室溫來支持測(cè)試。通過將設(shè)備保持在樣品分布的位置中來完成上述步驟。在最后，如需要，樣品分布基質(zhì)可被外設(shè)計(jì)成另具儲(chǔ)器的功能。
HDL測(cè)試墊含有用于定量HDL相關(guān)膽固醇的試劑。優(yōu)選地，這些試劑包括用于從HDL中釋放純膽固醇的膽固醇酯酶、用于通過與純膽固醇反應(yīng)產(chǎn)生H2O2的膽固醇氧化酶、過氧化物酶、和一個(gè)在過氧化物酶和H2O2存在的情況下轉(zhuǎn)化成具有明顯有色信號(hào)的反應(yīng)產(chǎn)物的偶合染料系統(tǒng)。如上所述，測(cè)試墊還包括可對(duì)H2O2和/或O2進(jìn)行有效的電化學(xué)定量的生物傳感器。
剩下的測(cè)試墊66、68和70還包括在墊上產(chǎn)生變化的測(cè)定試劑，其可通過已知的肉眼鑒別或指示劑的方法被光學(xué)檢測(cè)。在本發(fā)明設(shè)備和方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，在試劑墊74，而非樣品分布列陣或過濾墊上放置非HDL結(jié)合劑。在此實(shí)施方案中，可以消除在除HDL之外的分析物的測(cè)定中來自這些試劑的干擾的可能性。
優(yōu)選地，每個(gè)測(cè)試墊均含有通過分析物與酶的反應(yīng)產(chǎn)生H2O2的試劑組分；隨后H2O2可將底物試劑轉(zhuǎn)化成具有有色信號(hào)的反應(yīng)產(chǎn)物，或如上所述，其被電化學(xué)測(cè)量。使用了多種底物特異的氧化酶的、用于酶產(chǎn)生H2O2的、以及隨后氧化染料以形成有色的反應(yīng)產(chǎn)物的酶有色反應(yīng)是已知的。
具有四個(gè)或四個(gè)以上測(cè)試墊的設(shè)備可以用于同時(shí)測(cè)量HDL膽固醇(HDL)、葡萄糖、總膽固醇(TC)、甘油三酯脂質(zhì)(TRG)、ALT、AST、BUN、和/或肌氨酸酐。每個(gè)墊均含有上述普通的路徑成分(過氧化物酶和偶合染料系統(tǒng))以使產(chǎn)生的H2O2產(chǎn)生具有明顯有色信號(hào)的反應(yīng)產(chǎn)物。每個(gè)暴露于血清中而非暴露于沉淀劑或結(jié)合劑的總膽固醇測(cè)試墊和HDL測(cè)試墊包括除普通路徑成分以外的膽固醇酯酶、其用于從血清脂蛋白中以純膽固醇形式釋放酯化的膽固醇，所述血清脂蛋白包括HDL、LDL和VLDL顆粒；和膽固醇氧化酶，用來通過與樣品液體中的純膽固醇反應(yīng)產(chǎn)生H2O2，如上所述。葡萄糖測(cè)試墊除了普通路徑成分以外包括葡萄糖氧化酶。甘油三酯墊除普通路徑成分以外還包括脂肪酶、L-甘油激酶、和用于從甘油三酯經(jīng)過中間產(chǎn)物L(fēng)-甘油-3-磷酸產(chǎn)生H2O2的L-甘油-3-磷酸氧化酶。加入到TRG中的血清樣品不暴露于沉淀劑或結(jié)合劑，因此其包含所有的血清甘油三酯，所以TRG信號(hào)代表總血清甘油三酯。
還可以使用參考的標(biāo)準(zhǔn)墊；見，例如，共有美國(guó)專利No.5,114,350所描述的系統(tǒng)，其在此處作為參考。
實(shí)施例下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明而非限制本發(fā)明。
實(shí)施例1制備HDL測(cè)試墊將HDL試劑在77μl/in2的加入體積下加入到BTS-83聚砜膜并且在連續(xù)的滾動(dòng)工藝中、在50℃下干燥20分鐘。制備含有下列HDL試劑的測(cè)試墊膽固醇氧化酶36.5單位/ml、膽固醇酯酶215單位/ml、過氧化物酶200單位/ml、4-氨基安替比林1.88mg/ml、和TOOS(3-[乙基(3-甲基苯基)氨基]-2-羥基丙烷磺酸12.05mg/ml?？梢杂眠@個(gè)方法制備例如100尺的長(zhǎng)的墊并進(jìn)行切割以適合測(cè)定設(shè)備。
實(shí)施例2制備帶有結(jié)合試劑的試劑墊在浸漬槽中，將含有EAA分散體的試劑的水溶液以5.5％的濃度加到BTS-83聚砜膜上，并且在連續(xù)滾動(dòng)的工藝中、在50℃下干燥20分鐘。接下來，使用注射泵將含有1-5mg/ml的硫酸鹽葡聚糖(500,000MW)和35mM的Mg(OAc)2分散到相同的膜上以計(jì)量一個(gè)膜表面上的試劑?？梢杂眠@個(gè)方法制備例如100尺的長(zhǎng)的墊并進(jìn)行切割以適合測(cè)定設(shè)備。
實(shí)施例3制備測(cè)定墊分別根據(jù)實(shí)施例1和2制備HDL測(cè)試墊和試劑墊。對(duì)墊進(jìn)行定向以使試劑墊的亮面(小孔尺寸)與HDL測(cè)試墊的暗面或開孔面進(jìn)行接觸。將壓層機(jī)器通過二膜并在連續(xù)滾動(dòng)的工藝中在80℃度下加熱20秒。
實(shí)施例4代表的測(cè)定過程使用基本上如實(shí)施例3所述的測(cè)定墊，在LDX分析器中進(jìn)行典型的測(cè)定。手工切割粘合墊部分至反應(yīng)膜大小并使其與反應(yīng)棒接觸?；蛘?，使用超聲波焊接，在連續(xù)滾動(dòng)的工藝中將層疊的測(cè)定墊連于反應(yīng)棒。將血清樣品加載到樣品孔中。在樣品分布之后，將反應(yīng)棒與粘合墊接觸大約4秒鐘，這段時(shí)間足以將足夠的血清轉(zhuǎn)移到HDL測(cè)試墊上，在其后將棒轉(zhuǎn)回其原來的方向。顯影3分鐘并且用LDX分析器檢測(cè)反應(yīng)。
實(shí)施例5試劑墊上丙烯酸共聚物的濃度改變?cè)噭|上的EAA濃度來確定膜的多孔性?；旧细鶕?jù)實(shí)施例2來制備試劑墊。將從20％濃度開始的EAA的一系列稀釋液加入到試劑墊。根據(jù)實(shí)施例3將試劑墊粘合到HDL測(cè)試墊上。用依文氏藍(lán)的稀釋水溶液測(cè)試試劑墊的暗面以確定通過試劑墊并進(jìn)入HDL測(cè)試墊的有色溶液的滲透和/或擴(kuò)散?？墒谷芤侯A(yù)先滲透和/或散播的EAA的最高濃度為大約10％EAA。
實(shí)施例6使用加熱法制備測(cè)定墊在連續(xù)滾動(dòng)工藝中，將兩層沒有加入任何試劑的BTS 83層壓在一起。膜的方向如實(shí)施例3中所述。使用常規(guī)的凹版印刷涂刷器，將硫酸鹽葡聚糖(500,000MW)和Mg(Oac)2的水溶液涂覆到層壓品的開孔面上。選擇凹版印刷涂刷器將非飽和體積的試劑分散到層壓品的單層上。隨著干燥，以類似的方式將HDL試劑加于相對(duì)的膜。從實(shí)施例1和2所顯示的水平開始濃縮試劑來補(bǔ)償已使用了的減少的體積。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)量除HDL以外還含有其他脂蛋白的血液液體樣品中高密度脂蛋白(HDL)相關(guān)的血清膽固醇的測(cè)定設(shè)備，所述設(shè)備包括樣品分布陣列；HDL測(cè)試墊，其中可以測(cè)定HDL濃度；和試劑墊，其含有從液體樣品中有效地選擇性結(jié)合以及去除非HDL的結(jié)合劑；其中所述HDL測(cè)試墊和所述試劑墊相聯(lián)接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述HDL測(cè)試墊與所述試劑墊通過熱成型結(jié)合劑進(jìn)行連接。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述HDL測(cè)試墊與所述試劑墊通過丙烯酸共聚物粘合劑進(jìn)行連接。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的設(shè)備，其中所述丙烯酸共聚物是乙烯基丙烯酸共聚物。
5.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述HDL測(cè)試墊或所述試劑墊中的至少一個(gè)是由聚砜層組成的。
6.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括一個(gè)在樣品與所述樣品分布陣列接觸之前有效地從血液液體中去除細(xì)胞成分的過濾墊。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括用于容納所述過濾墊的盒式體，所述盒式體包括用于容納所述血液液體樣品的孔并與所述過濾墊液體連接。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，進(jìn)一步包括一個(gè)反應(yīng)棒，其含有可有效地將所述反應(yīng)棒吸附到所述盒式體的封固裝置。
9.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述試劑包括結(jié)合多陰離子試劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的設(shè)備，其中所述結(jié)合多陰離子試劑包括磺化多糖。
11.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述HDL測(cè)試墊含有在HDL膽固醇存在的情況下產(chǎn)生可檢測(cè)到的變化的試劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的設(shè)備，其中可以從光學(xué)上檢測(cè)到所述變化。
13.根據(jù)上述權(quán)利要求中的任何一項(xiàng)所述的設(shè)備，其中所述HDL測(cè)試墊包括生物傳感器。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的設(shè)備，其中所述生物傳感器可有效地通過電化學(xué)方法測(cè)量氧氣或過氧化氫產(chǎn)物。
15.一種制備適用于測(cè)量血清膽固醇的設(shè)備的方法，其包括提供由具有小孔面和開孔面的非對(duì)稱聚砜膜構(gòu)成的試劑墊和HDL測(cè)試墊；用HDL測(cè)試墊對(duì)試劑墊定向以使試劑墊的小孔面與HDL測(cè)試墊的開孔面接觸；加熱以使所述HDL測(cè)試墊與所述試劑墊粘合；和將(i)HDL測(cè)試試劑加入到所述HDL測(cè)試墊以及(ii)可有效地從液體樣品中選擇性結(jié)合和去除非HDL的試劑加入到所述試劑墊以形成所述設(shè)備。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述加熱為大于165℃的溫度。
17.一種制備適用于測(cè)量血清膽固醇的設(shè)備的方法，包括用丙烯酸共聚物涂覆試劑墊；將(i)HDL測(cè)試試劑加入到所述HDL測(cè)試墊以及(ii)可有效地從液體樣品中選擇性結(jié)合和去除非HDL的試劑加入到所述試劑墊；加熱以粘合所述HDL測(cè)試墊和所述試劑墊以形成所述設(shè)備。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述丙烯酸共聚物是乙烯基丙烯酸共聚物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中乙烯基丙烯酸共聚物是大約4.0％到大約10.0％的乳液。
20.根據(jù)權(quán)利要求17-19的任一項(xiàng)所述的方法，在所述涂覆步驟之后進(jìn)一步包括干燥所述試劑墊的步驟。
21.根據(jù)權(quán)利要求17-20的任一項(xiàng)所述的方法，其中每個(gè)所述HDL測(cè)試墊和試劑墊均具有小孔面和開孔面；其進(jìn)一步包括使HDL測(cè)試墊與試劑墊定向的步驟以使試劑墊的小孔面面向HDL測(cè)試墊的開孔面。
22.根據(jù)權(quán)利要求17-21的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述加熱步驟包括使用75℃和90℃之間的溫度。
23.一種測(cè)量除HDL以外還含有其它脂蛋白的血液液體樣品中高密度脂蛋白(HDL)相關(guān)血清膽固醇的方法，其包括使樣品與層壓品接觸，該層壓品包括(i)具有HDL膽固醇的可檢測(cè)指示劑的HDL測(cè)試墊，(ii)含有可有效地從液體樣品中選擇性結(jié)合和去除非HDL試劑的試劑墊；其中所述血液液體樣品通過所述層壓品中的毛細(xì)作用和/或重力通過通過所述層壓品以便進(jìn)行HDL濃度的測(cè)量。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中當(dāng)所需量的樣品被移走時(shí)，所述過濾墊和所述樣品分布?jí)|之間的接觸被阻斷。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中所述試劑包括磺化多糖。
26.根據(jù)權(quán)利要求23-25的任一項(xiàng)所述的方法，其中所HDL測(cè)試墊或所述試劑墊中的至少一個(gè)包括多孔聚合物膜。
27.根據(jù)權(quán)利要求23-26的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述試劑墊包括多堆疊層，其中至少一個(gè)含有可有效地結(jié)合非HDL試劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求23-27的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述HDL濃度的測(cè)量是通過光學(xué)檢測(cè)。
29.根據(jù)權(quán)利要求23-28的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述HDL測(cè)試墊包括生物傳感器。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述生物傳感器可有效地通過電化學(xué)方法測(cè)量氧氣或過氧化氫的產(chǎn)物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于測(cè)量樣品中HDL相關(guān)膽固醇濃度的測(cè)試墊，一種使用所述墊的方法和一種進(jìn)行所述方法的診斷測(cè)定設(shè)備。所述測(cè)定墊包括聚合物粘合劑或熱層壓結(jié)合劑。所述測(cè)定設(shè)計(jì)可以防止用于HDL定量反應(yīng)或在相同樣品中進(jìn)行其它測(cè)定時(shí)用于去除的試劑的干擾性。如需要，可以在不中斷測(cè)定的情況下進(jìn)行非HDL脂蛋白的去除和HDL膽固醇的測(cè)定。
文檔編號(hào)B01D39/00GK1764841SQ200480008009
公開日2006年4月26日 申請(qǐng)日期2004年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月2日
發(fā)明者R·M·瓊斯 申請(qǐng)人:霍萊斯太克公司