假單胞菌及其用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開(kāi)一種假單胞菌及其用途。本發(fā)明的假單胞菌已于2014年9月9日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏名稱(chēng)為：Pseudomonas sp.SY-JF-1，保藏編號(hào)：CCTCC No:M2014401。本發(fā)明的假單胞菌能夠用于降解間甲酚，以及用于處理含有間甲酚的工業(yè)廢水。
CCTCC No.M2014401
20140909
【專(zhuān)利說(shuō)明】假單胞菌及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種假單胞菌及其用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 間甲酚是酚類(lèi)化合物中具有代表性的一種物質(zhì)，是生產(chǎn)一些殺蟲(chóng)劑以及彩色膠 片、樹(shù)脂、増塑劑和香料合成的中間體。間甲酚存在著兩種異構(gòu)體對(duì)甲酚（p-cresol)和 鄰甲酚（o-cresol)。這兩種異構(gòu)體均具有強(qiáng)烈的腐蝕性和毒性，被美國(guó)EPA列入環(huán)境優(yōu) 先控制污染物的黑名單，同時(shí)也是我國(guó)重點(diǎn)控制污染物之一。根據(jù)《污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)》 (GB8978-1996)，一切排污單位的最高允許排放間甲酚的濃度不超過(guò)0. 5mg/L，可見(jiàn)間甲酚 的環(huán)境污染控制非常重要。
[0003] 在處理含甲酚的廢水領(lǐng)域中，生物法與物化法相比較表現(xiàn)出經(jīng)濟(jì)、安全、處理閾 值低、殘留少、無(wú)二次污染等方面的優(yōu)點(diǎn)，在應(yīng)用方面更顯優(yōu)勢(shì)。這方面典型的工作有： Masahiro等在一個(gè)三相生物反應(yīng)器中降解鄰甲酚，初始濃度在30?600mg/L時(shí)都能完全降 解，降解反應(yīng)符合Haldane模型；Christian Kennes等利用UASB反應(yīng)器以對(duì)甲酷和揮發(fā)性 脂肪酸為原料產(chǎn)生甲烷，效果良好;Atagana等從油污污染土壤中篩選出7種非擔(dān)子類(lèi)真菌 及2種擔(dān)子類(lèi)真菌，用它們降解苯酚、間甲酚、鄰甲酚及對(duì)甲酚混合物，并考察了最適環(huán)境 條件。
[0004] 但是，間甲酚的含量過(guò)高會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)，使廢水處理停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，降低處 理效率。目前所報(bào)道的能降解間甲酚的菌種主要有熱帶假絲酵母菌、麥芽糖假絲酵母菌、雜 色云芝和一些厭氧產(chǎn)烷微生物等。采用這些菌種進(jìn)行生物法處理間甲酚的理論濃度一般都 在500mg/L以下。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有生物法無(wú)法處理高濃度間甲酚的技術(shù)缺陷，提供一種新型 假單胞菌，能夠解決現(xiàn)有生物法處理含高濃度間甲酚工業(yè)廢水時(shí)酚降解率低的問(wèn)題。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0007] -方面，本發(fā)明提供一種假單胞菌，保藏名稱(chēng)為：Pseudomonas sp. SY-JF-1，保藏 單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)；保藏日期：2014年9月9 日，保藏號(hào)：CCTCC N〇:M2014401。
[0008] 另一方面，本發(fā)明提供上述假單胞菌的用途，用于降解間甲酚，以及用于處理含有 間甲酚的工業(yè)廢水。
[0009] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的假單胞菌能夠耐受濃度高達(dá)800mg/L的間甲 酷，在濃度為600mg/L的間甲酚中能夠高效降解間甲酷，能夠很好的應(yīng)用于含間甲酚廢水 的生物處理。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1為SY-JF-1菌株對(duì)不同初始濃度間甲酚的降解曲線圖；
[0011] 圖2為SY-JF-1菌株對(duì)濃度為800mg/L的間甲酚酚的降解曲線圖。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及具體實(shí)施 例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā) 明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。
[0013] 本發(fā)明提供一種假單胞菌，保藏名稱(chēng)為：假單胞菌SY-JF-1，Pseudomonas sp. SY-JF-1，保藏單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)；保藏日 期：2014 年 9 月 9 日，保藏號(hào)：CCTCC N〇:M2014401。
[0014] 該假單胞菌屬于革蘭氏陰性菌類(lèi)，簡(jiǎn)稱(chēng)SY-JF-1菌株。SY-JF-1菌株的形態(tài)特 征為：細(xì)胞呈桿狀，菌落乳白色、隆起、邊緣光滑齊整。SY-JF-1菌株在生長(zhǎng)過(guò)程中能耐受 800mg/L的間甲酚，SY-JF-1菌株的最適生長(zhǎng)條件為：pH7. 0,溫度30°C。
[0015] 間甲酚無(wú)機(jī)鹽分離培養(yǎng)基成分為（g/L) :0? 9KH2P04,6. 5Na2HP04 ? 12H20， 0. 4 (NH4) 2S04,0. 2MgS04 ? 7H20 ;每1L培養(yǎng)基加入lmL微量元素溶液（微量元素溶液配制： lg FeS04 ? 7H20, lg MnS04 .H20,0. 25g Na2Mo04 ? 2H20,0. lg H3B04,0. 25g CuCl2 ? 2H20,0. 25g ZnCl2,0. lg NH4 ? V03,0. 25g C〇(N03)2 ? 6H20,0. lg NiS04 ? 6H20,溶解于 900mL 蒸餾水中，加 5mL濃H2S04，補(bǔ)蒸餾水至lOOOmL);間甲酚過(guò)濾滅菌，待無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基高溫高壓滅菌后加入， 終濃度最初為l〇〇mg/L，以后間甲酚濃度每次增加100mg/L。
[0016] SY-JF-1菌株可以高效降解間甲酚，在以間甲酚為碳源（600mg/L)、（NH4) 2S04為氮 源（400mg/L)的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液體培養(yǎng)基中接種SY-JF-1菌株后，30°C，pH為6. 5 - 9. 5范圍 內(nèi)可高效降解間甲酚，48h內(nèi)間甲酚降解率達(dá)到99%以上。
[0017] SY-JF-1菌株分離自遼寧某焦化廠生化好氧池活性污泥，經(jīng)人工富集馴化培養(yǎng)并 分離純化得到。具體包括如下步驟：
[0018] 1、SY-JF-1菌株的分離和純化
[0019] 用250mL三角瓶，裝100mL間甲酚無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基（g/L) (0.9KH2P04， 6. 5Na2HP04 ? 12H20,0? 4 (NH4) 2S04,0? 2MgS04.7H20,每 1L 培養(yǎng)基加入 lmL 微量元素溶液，間甲 酚過(guò)濾滅菌，待無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基高壓滅菌后加入）。微量元素溶液配方（g/L) :lg FeS04*7H20， lg MnS04.H20,0.25g Na2Mo04.2H20,0.1g H3B04,0.25g CuCl2.2H20,0.25g ZnCl2,0.1g NH4 .VC^O. 25g Co (N03)2 .61120,0. lg NiS04 .6H20,溶解于 900mL 蒸餾水中，加 5mL&H2S04， 補(bǔ)蒸餾水至l〇〇〇mL。向培養(yǎng)基中接入5mL從遼寧省某焦化廠采集的生化好氧池活性污泥， 于30°C、轉(zhuǎn)速為150r/min的搖床中振蕩培養(yǎng)3d得到菌液。取5mL菌液接種到100mL新培 養(yǎng)基中，重復(fù)轉(zhuǎn)接7次。間甲酚起始濃度為100mg/L，以后每次轉(zhuǎn)接間甲酚濃度增加100mg/ L，直到800mg/L為止。
[0020] 馴化培養(yǎng)好的菌液按10_3、10_4、10_5、10_ 6和10_7稀釋?zhuān)?. lmL 1(T5稀釋液涂在含 有800mg/L苯酚的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基平板上，30°C倒置培養(yǎng)2?3d，挑取單菌落，進(jìn)行3次劃線 分離純化，得到純化的SY-JF-1菌株。
[0021] 2、SY-JF-1菌株的鑒定
[0022] 采用16S rRNA基因測(cè)序法對(duì)SY-JF-1菌株進(jìn)行分類(lèi)鑒定，具體步驟如下：
[0023] (1)細(xì)菌總DNA的制備：用天根公司基因組提取試劑盒提取SY-JF-1菌株的基因 組DNA，作為PCR反應(yīng)的模板。
[0024] (2) 16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增：擴(kuò)增引物如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種假單胞菌，其特征在于，保藏名稱(chēng)為：Pseudomonas sp. SY-JF-1，保藏單位：中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)；保藏日期：2014年9月9日，保藏 號(hào)：CCTCC N〇:M2014401。
2. 如權(quán)利要求1所述的假單胞菌的用途，其特征在于，用于降解間甲酚。
3. 如權(quán)利要求1所述的假單胞菌的用途，其特征在于，用于處理含有間甲酚的工業(yè)廢 水。
【文檔編號(hào)】C02F101/34GK104450567SQ201410663446
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】朱希坤, 楊德玉, 李小明, 戴速航, 李旭 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)化工研究院有限公司