專利名稱：嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌ds4在降解皂素廢水有機污染物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及一種嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DS4在降解皂素廢水有機污染物中的應用。
背景技術：
皂素(如薯蕷皂素)生產過程中產生的廢水色度大、酸度大、有機物污染物濃度高、化學耗氧量(COD)高、可生化性差，是一種非常難處理的廢水?！对硭毓I(yè)水污染物排放標準》(GB 20425-2006)中規(guī)定，自2009年起COD排放量應低于300mg/L，但是，目前皂素水解原液COD濃度達到20000-40000mg/L，綜合廢水COD濃度為4000_12000mg/L，若直接排入水體，會導致水體的有機污染物濃度大幅度增加，從而引起江河湖泊嚴重污染，不僅直接影響了人們的生存環(huán)境，也造成了國民經濟的巨大損失。皂素廢水中含有大量有機污染物，其中部分毒性醛、酮、酚類物質對污水處理系統(tǒng)里污泥中的微生物具有抑制作用，一般微生物不能正常生長。同時，皂素廢水中硫酸根濃度高，約為8000mg/L左右，在高鹽度廢水的生物處理系統(tǒng)中，微生物的細胞膜和菌體內的酶被破壞，致使污泥活性下降。另外，微生物對環(huán)境具有一定的適應能力，在一定鹽度范圍內微生物通過自身的滲透調節(jié)機制平衡細胞內的滲透壓或保護細胞內的原生質，調節(jié)自身新陳代謝以適用鹽度的變化，活性污泥在含鹽環(huán)境中經過一段時間馴化后，將具有一定的耐鹽性。目前對皂素廢水的處理多采用物理或化學的方法，現有技術中還沒有嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4及其應用的報導。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4在降解皂素廢水有機污染物中的應用。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術方案實現的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4在降解皂素廢水有機污染物中的應用。所述的應用，其特征在于挑取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4的單菌落，于LB固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，按培養(yǎng)后的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4與皂素廢水的體積比為O. 5-2 100的比例接種，30-35°C、pH值為6-8條件下恒溫培養(yǎng)，反應48-72小時。所述的LB固體培養(yǎng)基為蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g、蒸餾水lOOOmL， 固體瓊脂15g，pH值為7.0。所述的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO M2010147o本發(fā)明的有益效果是嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4在高濃度硫酸根離子環(huán)境中具有較強的生長能力和良好的去除皂素廢水中有機污染物的能力，該菌株能在72小時之內去除皂素廢水中的COD 2930mg/L，去除效率達到62. 34%。本發(fā)明為降解皂素廢水高濃度有機污染物提供了有用的菌源，拓寬了對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌功能方面的應用，具有較強的應用價值。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。實施例I嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4的篩選方法(一)材料準備I、實驗廢水和池底污泥取自湖北省十堰市某皂素生產廠生產排放廢水的生化處理系統(tǒng)。2、培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基=K2HPO4O. 5g/L, MgSO4 · 7H20 O. 5g/L, NH4Cl I. Og/L, CaCl2O. Olg/L, KH2PO4 0. 5g/L，葡萄糖 0. 5g/L，pH 值 7. 0。篩選培養(yǎng)基=K2HPO40. 5g/L, MgSO4 · 7H20 0. 5g/L, NH4Cl I. Og/L, CaCl2O. Olg/L, KH2PO4 0.5g/L，溶入 IL 皂素廢水，pH 值 7.0。LB液體培養(yǎng)基蛋白胨10. Og/L,酵母提取物5. 0g/L,氯化鈉10. 0g/L,蒸餾水 IOOOmL,ρΗ7·O。LB固體培養(yǎng)基蛋白胨10. 0g/L,酵母提取物5. 0g/L,氯化鈉10. 0g/L,蒸餾水 IOOOmL,瓊月旨 15g/L(固)，ρΗ7· O。LB斜面培養(yǎng)基蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5. 0g/L，氯化鈉10. 0g/L，蒸餾水 IOOOmL,瓊脂 20g/L(固)，ρΗ7· O。3、實驗儀器和設備國華SHA-B恒溫振蕩器、東器SPX生化培養(yǎng)箱、立式壓力蒸汽滅菌器、光學顯微鏡 (Olympus有限公司)，pH計(sarporiusFO-lO)、超凈工作臺、PTC200型PCR儀、電泳儀及電泳槽、UVP凝膠紫外觀測儀。( 二)菌株的篩選分離與純化I、篩選分離(I)稱取2克皂素生產廠廢水處理系統(tǒng)中酸化池尾區(qū)的池底污泥樣品，加入事先滅菌好的裝有IOOmL無菌水的250mL的三角瓶內，30°C恒溫振蕩200rpm，將菌膠團打碎，得泥水混合物，備用；(2)將泥水混合物轉入裝有IOOmL分離培養(yǎng)基的500mL錐形瓶中，30°C恒溫靜置培養(yǎng)至培養(yǎng)基渾濁，得到菌懸液A ；(3)取5mL菌懸液A于裝IOOmL新鮮的篩選培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中培養(yǎng)一周，取菌懸液5mL重復操作5-6次，得到的菌懸液B ；2、純化用無菌移液管吸取0. 5mL菌懸液B，稀釋涂布于LB固體培養(yǎng)基上。37°C 恒溫培養(yǎng)3天，挑取在菌落特征上有明顯差異的單菌，在LB固體培養(yǎng)基上反復劃線培養(yǎng)三次直至獲得單一菌株，并于LB斜面培養(yǎng)基上保存，得到一株菌株，即嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4 菌株。(三)菌落形態(tài)特征以及生理生化特性
菌株DS4的菌落形態(tài)為菌落呈淡黃色、不透明、圓形、表面光滑，中心凸出、邊緣整齊；嚴格需氧，革蘭氏陰性直桿菌，極生多鞭毛，氧化酶陰性，DNA酶、蛋白酶、脲酶、賴氨酸脫羧酶陽性，MR、VP陰性，H2S陰性；最適生長pH值6. 5 7. 5，最適生長溫度25-350C0采用BLAST分析法對菌株DS4的16S rRNA基因序列與GenBank數據庫比較分析發(fā)現，菌株DS4與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的同源性高達99.0%。綜合菌株的生理生化以及分子鑒定結果，菌株DS4命名為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4。 查閱有關資料，尚無嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌屬有降解皂素廢水有機污染物能力的報道。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4為新的菌株，已于2010年6月13日送交位于湖北省武漢市武漢大學內的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)保藏，保藏號為CCTCC NO :M2010147。本發(fā)明篩選分離出的這一菌株具有較好的降解皂素廢水中有機污染物的功能，這拓寬了人們對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌功能方面的應用研究思路，并為降解高濃度有機污染物皂素廢水提供了有用的菌源和技術，具有較強的實際應用價值。實施例2嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4的應用挑取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4單菌落，于LB固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，按培養(yǎng)后的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4與皂素廢水(即實驗廢水，取自湖北省十堰市某皂素生產廠排放廢水的生化處理系統(tǒng))的體積比為O. 5-2 100的比例接種，30-35°C恒溫培養(yǎng)，pH值為6-8，反應48-72小時。所述的LB固體培養(yǎng)基為蛋白胨10.(^，酵母提取物5.(^，NaCllO. 0g，蒸餾水 IOOOmL,瓊脂 15g(固)，ρΗ7·0。測出篩選出的微生物對皂素廢水中有機污染物的降解效率。分別挑取單菌落，于分離培養(yǎng)基中前培養(yǎng)過夜，取ImL菌液接種于9mL皂素廢水 (脫酸水初始COD 4700mg/L左右、pHl.28)分別加入試管中，留一支作空白對比。調節(jié)水樣 pH值，置于37°C、150rpm振蕩培養(yǎng)3天，計算菌株對廢水的COD去除情況。該菌株能在72 小時之內去除皂素廢水中的COD 2930mg/L，去除效率達到62. 34%。
權利要求
1.嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)DS4在降解阜素廢水有機污染物中的應用。
2.根據權利要求I所述的應用，其特征在于挑取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4的單菌落， 于LB固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，按培養(yǎng)后的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4與皂素廢水的體積比為O.5-2 100的比例接種，30-35°C、pH值為6-8條件下恒溫培養(yǎng)，反應48-72小時，所述的LB固體培養(yǎng)基為蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g、蒸餾水lOOOmL，固體瓊脂15g，pH值為7.0。
3.根據權利要求I或2所述的應用，其特征在于所述嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO :M2010147。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)DS4在降解皂素廢水有機污染物中的應用，所述嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NOM2010147。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌DS4在高濃度硫酸根離子環(huán)境中具有較強的生長能力和良好的去除皂素廢水中有機污染物的能力，該菌株能在72小時之內去除皂素廢水中的COD 2930mg/L，去除效率達到62.34％。本發(fā)明為降解皂素廢水高濃度有機污染物提供了有用的菌源，拓寬了對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌功能方面的應用，具有較強的應用價值。
文檔編號C02F3/34GK102583780SQ20121006704
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月14日 優(yōu)先權日2012年3月14日
發(fā)明者鄭丹, 鮑建國 申請人:中國地質大學(武漢)